Набор реагентов для выявления ДНК трематод рода Schistosoma в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "АмплиСенс® Schistosoma spp.-FL" по ТУ 9398-211-01897593-2012 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2013/884 от 16.07.2013 · класс риска 2б

Производитель: ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (Россия)

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
Приказом Росздравнадзора УТВЕРЖДАЮ
от__________№ _________ Директор Федерального
бюджетного учреждения науки 
«Центральный научно- 
исследовательский институт 
йщо ГИИ» Феде рал ь н о й
в сфере
' ’ 3 прав" потребителей и
бЛагс^рл^р] человека
— ВтШТОкровский 
2012 г .
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов  
для выявления Д Н К трематод рода Schistosoma  
в клиническом материале методом полимеразной цепной  
реакции (П Ц Р ) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
«АмплиСенс® Schistosoma  spp.-FL»
АмплиСенс'’’
ш 1
Федеральное бюджетное учреждение науки 
«Центральный научно-исследовательский 
институт эпидемиологии»,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом За IVD


--- стр. 2 ---
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ........................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ....................................................................................................... 3
ПРИНЦИП МЕТОДА............................................................................................... 3
ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ .........................................4
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ .................................................................. 5
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ..............................................................................5
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ .........................................7
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА .  ..8
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК.......................8
ФОРМАТ F R T ........................................................................................................ 9
СОСТАВ................................................................................................................ 9
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ ................................................................... 9
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ.................... .........................10
ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ».......................................................................................................... 10
А. Подготовка пробирок для амплификации
....................................................... 10
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» .......10
АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ.......................................................11
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ ..................14
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ...................................15
ОГЛАВЛЕНИЕ
Г


--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения;
BKO-FL - Внутренний контрольный образец
В- - Отрицательный контроль экстракции
К + - Положительный контроль ПЦР
К- - Отрицательный контроль ПЦР
ОКО - Отрицательный контрольный образец
ПКО - Положительный контрольный образец
ПЦР - Полимеразная цепная реакция
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный 
научно-исследовательский институт эпидемиологии» 
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав 
потребителей и благополучия человека__________________
FRT - Флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиСенс® S c h i s t o s o m a spp.-FL» предназначен для 
выявления ДНК трематод рода S c h is to s o m a  {S c h . h a e m a to b iu m , S c h . m a n so n i, S ch . 
intercalatum , S c h . ja p o n ic u m , S c h . m e k o n g f) в клиническом материале (фекалии, моча) 
методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов 
амплификации.
ВНИМАНИЕ! Результаты ПЦР-исследования учитываются в комплексной 
диагностике заболевания\
ПРИНЦИП МЕТОДА
Выявление ДНК трематод рода S c h is to s o m a методом полимеразной цепной 
реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией включает в себя два 
этапа: экстракцию ДНК из образцов клинического материала и амплификацию 
участка ДНК данного микроорганизма с гибридизационно-флуоресцентной детекцией, 
которая производится непосредственно в ходе ПЦР, Экстракция ДНК из клинического 
материала проводится в присутствии внутреннего контрольного образца (BKO-FL), 
который позволяет контролировать выполнение процедуры исследования для 
каждого образца. Затем с полученными пробами ДНК проводится реакция 
амплификации участка ДНК шистосом при помощи специфичных к этому участку ДНК 
праймеров и фермента Taq-полимеразы.
В составе реакционной смеси присутствуют флуоресцентно-меченые 
олигонуклеотидные зонды, которые гибридизуются с комплементарным участком 
амплифицируемой ДНК-мишени, в результате чего происходит нарастание 
интенсивности флуоресценции. Это позволяет регистрировать накопление
’ в соответствии с Директивой Европейского Союза 98/79/ЕС.


--- стр. 4 ---
специфического продукта амплификации путем измерения интенсивности 
флуоресцентного сигнала. Детекция флуоресцентного сигнала осуществляется 
непосредственно в ходе ПЦР с помощью амплификатора с системой детекции 
флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени».
В наборе реагентов применяется «горячий старт», что значительно снижает 
количество неспецифических реакций. «Горячий старт» обеспечивается 
использованием химически модифицированной Тац-полимеразы. Химически 
модифицированная полимераза (TaqF) активируется при прогреве реакционной 
смеси при 95 °С в течение 15 мин.
ФОРМАТЫ И  ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ 
Набор реагентов выпускается в 1  формате.
Формат FRT
^  Набор реагентов выпускается в 2 формах комплектации:
Форма 1  включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F.
Форма 2  включает наборы реагентов оптом, расфасованные по отдельным 
реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой фасовке.
Форма комплектации 1  предназначена для проведения амплификации ДНК 
трематод рода S c h is to s o m a с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в 
режиме «реального времени». Для проведения полного ПЦР-исследования 
необходимо использовать комплекты реагентов для экстракции ДНК, 
рекомендованные ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.
Форма комплектации 2 предназначена для производственных целей для 
последующей маркировки на языке заказчика и комплектации по наборам. 
ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 2 используется только в соответствии с 
регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.


--- стр. 5 ---
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 
Аналитическая чувствительность
Вид клинического)  
материала
Фекалии
.  Комплект для, г  
экстракции ДНК ,
«РИБО-преп»
t .  Ком плект^ для 
■ )  ампли4)икации и 
детекции
«ПЦР-комплект» 
вариант FRT-50 F
Аналитическая  
нувЬтвительность,  
ГЭ/мл ^_____
1x10^
Моча «РИБО-преп» «ПЦР-комплект» 
вариант FRT-50 F 1x10^
Аналитическая специфичность
Специфичность набора реагентов проверялась на следующих штаммах 
микроорганизмов: A stro v iru s, N o ro v iru s II, R o ta v ir u s А, C h la m yd ia  trachom atis, 
E n te ro b a c te r c lo a c a e , E n te r o c o c c u s  fa e c a lis ГИСК 29212, E s c h e ric h ia  coli A T C C 25922, 
K lebsiella p n e u m o n ia e , L e p to sp ira  in te rro g a n s. M y c o p la s m a  g en ita liu m , M yco p la sm a 
hom inis, N e is se r ia  g o n o r r h o e a e , P a n to e a  a g g lo m e r a n s, P r o te u s  m irabilis. P s e u d o m o n a s 
aeru g in isa ATCC 27853, S a lm o n e lla  e n teritid is ГИСК 11137, S a lm o n e lla  typ h i Central 
Public Health Laboratory (London) 5715, S a lm o n e lla  D ublin, S h ig e lla  s o n n e i ГИСК 9090, 
Sh ig ella  fle x n e ri 2 a ГИСК 1270, S ta p h y lo c o c c u s  a u r e u s ATCC 25923, S ta p h y lo c o c c u s 
sa p ro p h y tic u s ATCC 15305, T ric h o m o n a s va g in a lis, Y e rsin ia  en tero co litica , Yersinia 
p s e u d o tu b e r c u lo s is, U re a p la sm a  p a rv u m , U re a p la sm a  u re a ly tic u m , a также ДНК A sc a ris 
su is, Dirofilaria im m itis, ДНК человека.
При проведении тестирования данной панели неспецифических реакций 
выявлено не было.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно­
биологические (ПЦР) исследования клинического материала на наличие 
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-эпидемических 
правил СП 1.3,2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами lll~IV групп 
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», 
СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с 
медицинскими отходами» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация 
работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при 
работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе всегда следует выполнять следующие требования;
- Следует рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные.
Количество геномных эквивалентов микроорганизма (ГЭ) в 1  мл образца клинического материала.


--- стр. 6 ---
организовывать работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08 
«Безопасность работы с микроорганизмами 111-IV групп патогенности 
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя 
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность 
работы с микроорганизмами IM-IV групп патогенности (опасности) и  
возбудителями паразитарных болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в 
отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Выделения, 
продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы, 
оборудование и реактивы в зону, в которой была проведена предыдущая стадия 
процесса.
- Неиспользованные реактивы, реактивы с истекшим сроком годности, а также 
использованные реактивы следует удалять в соответствии с требованиями 
СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к  
обращению с медицинскими отходами».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих 
продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, 
поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, 
оборудования и реагентов.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для 
автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду 
необходимо сбрасывать в специальный контейнер, содержащий 
дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для 
обеззараживания медицинских отходов.
- Поверхности столов, а также помещения, в которых проводится постановка 
ПЦР, до начала и после завершения работ необходимо подвергать 
ультрафиолетовому облучению в течение 30 мин.
- Применять набор строго по назначению, согласно данной инструкции.
- Допускать к работе с набором только специально обученный персонал.
' Не использовать набор по истечении срока годности.
- Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза во 
время работы с образцами и реактивами. Тщательно вымыть руки по окончании 
работы.
- Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. При контакте 
немедленно промыть пораженное место водой и обратиться за медицинской