Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс® FiloA-скрин-FL по ТУ 21.20.23-278-01897593-2017 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖ ДАЮ »
Заместитель директора
Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в сфере защиты
прав потребителей и благополучия
человека (ФБУН ЦНИИ
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® FiloA-CKpnH-FL
АмплиСенс ©
mJ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА IVD
--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ....................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ.....................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА............................................................................................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ.................................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ...........................................................................5
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ................................6
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ...:...... ..................................8
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА. 10
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАЦИИ РНК..........................10
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ
ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА............................................................................11
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ...........................................................................11
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ...................................................11
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)...................................13
СОСТАВ.........................................................................................................................13
РЕАКЦИЯ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ РНК И АМПЛИФИКАЦИЯ кДНК С
ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»..............................................13
A. Подготовка пробирок для проведения ОТ-ПЦР..............................................13
Б. Проведение ОТ-ПЦР с детекцией в режиме «реального времени»............14
B. Анализ и интерпретация результатов...................................................................15
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ.....................18
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ..............................................19
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ........................................20
--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:
BKO-FL - экзогенный внутренний контрольный образец
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
кДНК - комплементарная ДНК, получаемая в реакции обратной
транскрипции на матрице РНК
К+ - положительный контроль ОТ-ПЦР .
К- - отрицательный контроль ОТ-ПЦР
ОК - отрицательный контроль экстракции
ОКО - отрицательный контрольный образец
ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией
ПК - положительный контроль экстракции
пко - положительный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РНК - рибонуклеиновая кислота
РУ - регистрационное удостоверение
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
EBOV Zaire - вирус Эбола, вариант Заир
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
MARV - вирус Марбург
SUDV - вирус Эбола, вариант Судан
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс® FiloA-CKpnH-FL, далее -
набор реагентов, предназначен для качественного определения РНК вируса Эбола
вариант Заир {EBOV Zaire), РНК вируса Эбола вариант Судан {SUDV) и РНК вируса
Марбург {MARV), принадлежащих к семейству Filoviridae, в биологическом
материале, полученном от человека (цельная кровь либо её компоненты: лейкоциты
и плазма) методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов
амплификации. Набор реагентов используется в клинической лабораторной
диагностике.
Материалом для проведения ОТ-ПЦР служат пробы РНК, экстрагированные из
исследуемого материала.
В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011 № 323-ФЗ «Об основах
охраны здоровья граждан в Российской Федерации» ПЦР-исследование является
одним из методов всестороннего обследования пациента, на основании которых
лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия по лечению
пациента.
--- стр. 4 ---
Показания и противопоказания к применению набора реагентов
Набор реагентов используется для исследования биологического материала,
полученного от лиц с подозрением на геморрагические лихорадки, вызванные
филовирусами, вне зависимости от формы и наличия манифестации заболевания.
Противопоказания отсутствуют, за исключением случаев, когда забор материала
не может быть осуществлен по медицинским показаниям.
Потенциальные пользователи медицинского изделия
К работе с набором реагентов допускается только медицинские работники,
обученные методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-
диагностической лаборатории в установленном порядке (СП 1.3.3118-13
«Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)»).
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип тестирования основывается на экстракции РНК из образцов
исследуемого материала с экзогенным внутренним контрольным образцом (BKO-FL)
и одновременном проведении реакции обратной транскрипции РНК и амплификации
участков кДНК выявляемых вирусов и кДНК BKO-FL с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией. BKO-FL позволяет контролировать все этапы ПЦР-
исследования для каждого образца и оценивать влияние ингибиторов на результаты
ПЦР-исследования.
С полученными на этапе экстракции пробами РНК проводится обратная
транскрипция РНК с помощью фермента ТМ-Ревертазы и амплификация участков
кДНК при помощи специфичных к этим участкам праймеров и фермента Taq-
полимеразы. В составе реакционной смеси присутствуют флуоресцентно-меченые
олигонуклеотиды, которые гибридизуются с комплементарным участком
амплифицируемой кДНК-мишени, в результате чего происходит нарастание
интенсивности флуоресценции. Это позволяет регистрировать накопление
специфического продукта амплификации путем измерения интенсивности
флуоресцентного сигнала. Детекция флуоресцентного сигнала осуществляется
непосредственно в ходе ПЦР с помощью амплификатора с системой детекции
флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени».
На этапе ОТ-ПЦР одновременно в одной пробирке проводятся 4 реакции -
амплификация кДНК EBOV Zaire, кДНК SUDV, кДНК MARV, а также амплификация
последовательности кДНК BKO-FL. Результаты амплификации кДНК EBOV Zaire,
кДНК SUDV, кДНК MARV, а также кДНК BKO-FL регистрируются по 4-м различным
каналам флуоресцентной детекции:
--- стр. 5 ---
Таблица 1
Канал для
флуорофора FANl JOE ROX Cy5 '
кДНК-мишень кДНК EBOV
Zaire кДНК SUDV кДНК MARV кДНК BKO-FL
Область
амплификации Polymerase Transcription
Factor Nucleoprotein
искусственная
нуклеотидная
последовательность
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
Форма комплектации 1 предназначена для проведения обратной транскрипции
РНК и амплификации кДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени» и позволяет выявлять РНК в качественном формате. Для
проведения полного ПЦР-исследования необходимо использовать комплекты
реагентов для экстракции РНК, рекомендованные Производителем.
Форма комплектации 1 рассчитана на проведение 96 реакций обратной
транскрипции и амплификации, включая контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие характеристики:
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
Таблица 2
Вид
исследуемого
материала
Объем
исследуемого
образца для
экстракции,
мкл
Комплект для
экстракции РНК
Комплект для
обратной
транскрипции,
амплификации
и детекции
Аналитическая
чувствительность
(предел
обнаружения),
копий/мл
Цельная кровь
либо её
компоненты
100 «РИБО-золь-В»,
«РИБО-преп» «ПЦР-
комплект»
вариант FRT-L
10^
100 QIAGEN QIAamp
MinElute Virus kit
Данный достигается предел обнаружения при соблюдении правил, указанных в
разделах «Взятие, транспортирование и хранение исследуемого материала» и
«Подготовка исследуемого материала к экстракции РНК».
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает фрагменты РНК заявленных вирусов. Для
подтверждения аналитической специфичности набора реагентов были исследованы
образцы, содержащие геномную ДНК/РНК вирусов/микроорганизмов, способных
вызывать заболевания, схожие по клиническим проявлениям с филовирусными
лихорадками:
• Буньявирусы (сем. Bunyaviridae): CCHFV.
--- стр. 6 ---
• Флавивирусы (сем. Flaviviridae): Yellow fever virus, Dengue virus, WNV, TBE, JEV.
• Тогавирусы (сем. Togaviridae): Chikungunya virus.
• Рабдовирусы (сем. Rhabdoviridae): Rabies virus.
• ДНК риккетсий (R. prowazekii, R. canadensis, R. sibirica).
A также были исследованы образцы, содержащие ДНК/РНК вирусов,
вызывающие острые и хронические инфекции, которые могут присутствовать в
исследуемых образцах и давать ложноположительные результаты на филовирусы:
• Флавивирусы (сем. Flaviviridae): HCV.
• Ретровирусы (сем. Retrovoridae): HIV.
• Г епаднавирусы (сем. Hepadnaviridae): HBV.
Геномная ДНК человека была использована для доказательства отсутствия
перекрёстных реакций с ДНК-материалом пациента.
При тестировании образцов ДНК/РНК вышеперечисленных организмов и ДНК
человека неспецифических реакций выявлено не было. Информация об известных
интерферирующих соединениях указана в разделе. «Интерферирующие вещества и
ограничения по использованию проб исследуемого материала».
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно
биологические (ПЦР) исследования биологического материала на наличие
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-
эпидемиологических правил СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с
микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)», СанПиН 2.1.7.2790-10
«Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими
отходами» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе
с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности» и СП 1.2.036-
95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV
групп патогенности».
При работе необходимо всегда выполнять следующие требования:
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С, относительная влажность
от 15 до 75%.
- Рассматривать исследуемые образцы биологического материала как
инфекционно-опасные.
- Инактивировать исходные исследуемые образцы биологического материала в
соответствии с методическими указаниями МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
--- стр. 10 ---
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Материалом для исследования служат образцы цельной крови либо её
компонентов.
Взятие цельной периферической крови у людей проводится утром натощак в
пробирку с 6 % раствором ЭДТА в соотношении 1:20. После взятия крови пробирку
следует несколько раз плавно перевернуть вверх дном, чтобы кровь в пробирке
тщательно перемешалась с антикоагулянтом. (В противном случае кровь свернется
и экстракция РНК станет невозможной!). После плавного перемешивания пробирку
поместить в штатив. Экстракцию РНК проводить из 100 мкл цельной крови (в случае
экстракции из 200 мкл - объём до 200 мкл доводится ОКО).
Допускается хранение образцов крови до ПЦР-исследования или проведения
предобработки:
- при температуре от 20 до 25 °С - в течение 2 часов;
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 12 часов.
Недопустимо замораживание образца цельной крови!
В случае необходимости провести исследование компонентов крови -
лейкоцитов и плазмы, следует осуществить дополнительную пробоподготовку (см.
раздел «Подготовка исследуемого материала к экстракции РНК»).
Подготовку образцов провести не позднее указанного выше времени.
Допускается транспортирование материала при температуре от 2 до 8 °С в
течение 12 часов.
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАЦИИ РНК
Образцы цельной крови не требуют предварительной подготовки.
Для получения лейкоцитов и плазмы крови требуется предварительная
подготовка образцов крови.
Перенести 1,5 мл крови с раствором ЭДТА, используя наконечник с фильтром, в
стерильную одноразовую пробирку объемом 2,0 мл. Центрифугировать 10 минут при
40 g (например, 800 об/мин для микроцентрифуги MiniSpin, Eppendorf Manufacturing
Corporation). He захватывая осадок эритроцитов, перенести 500-600 мкл
супернатанта (плазмы с лейкоцитами) отдельным наконечником с фильтром в
стерильную одноразовую пробирку объемом 1,5 мл.
Супернатант, содержащий плазму и лейкоциты, можно использовать для
проведения процедуры экстракции РНК из 100 мкл (в случае экстракции из 200 мкл -
объём до 200 мкл доводится ОКО).
Для разделения плазмы и лейкоцитов необходимо пробирки с отобранным
10
--- стр. 11 ---
супернатантом отцентрифугировать 5 мин при 7 тыс g (например, 10 тыс об/мин для
микроцентрифуги MiniSpin, Eppendorf Manufacturing Corporation). Нижняя фракция
содержит лейкоциты крови, верхняя фракция содержит плазму крови. Экстракцию
РНК проводить из 100 мкл суспензии лейкоцитов крови или из 100 мкл плазмы (в
случае экстракции из 200 мкл - объём до 200 мкл доводится ОКО).
Допускается хранение плазмы и/или лейкоцитов кровм (осадка) до проведения
ПЦР-исследования:
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение 1 недели;
- при температуре не вьше минус 68 °С - длительно.
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ
ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Для контроля эффективности экстракции РНК и возможного ингибирования ПЦР
в наборе реагентов предусмотрено использование внутреннего контрольного
образца (BKO-FL), который добавляется в каждый биологический образец на этапе
экстракции нуклеиновых кислот. По окончании реакции амплификации наличие
сигнала, свидетельствующего о накоплении фрагментов кДНК BKO-FL, говорит о
достаточной эффективности экстракции нуклеиновых кислот и отсутствии
ингибиторов ПЦР.
Непригодными для исследования являются:
- образцы цельной крови, взятые в пробирки с гепарином в качестве
антикоагулянта;
- образцы цельной крови, содержащие кровяной сгусток или подвергшиеся
заморозке.
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
- экстракция РНК из исследуемых образцов,
- обратная транскрипция РНК и амплификации кДНК с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
- анализ и интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые
пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку «RNase-
free», «DNase-free».
Для экстракции РНК используются комплекты реагентов для экстракции РНК -
11
--- стр. 12 ---
«РИБО-золь-В», «РИБО-преп», QIAGEN QIAamp MinElute Virus kit и другие
комплекты, рекомендованные Производителем. Порядок работы с комплектом
реагентов смотрите в инструкции к соответствующему комплекту для экстракции.
Объемы реагентов и образцов пои экстракции с помощью комплектов реагентов
«РИБО-преп», «РИБО-золь-В»
Экстракция РНК из каждого исследуемого образца и контролей проводится в
присутствии внутреннего контрольного образца - BKO-FL.
Объем BKO-FL - 10 мкл в каждую пробирку.
Объем исследуемого образца - 100 мкл.
В пробирку отрицательного контроля экстракции (ОК) внести 100 мкл ОКО.
В пробирку положительного контроля экстракции (ПК) внести 90 мкл ОКО и
10 мкл ПКО FiloA.
Объем элюции - 50 мкл.
Объемы реагентов и образцов при экстракции с помощью комплектов реагентов
QIAGEN QIAamp MinElute Virus kit:
Экстракция РНК из каждого исследуемого образца и контролей проводится в
присутствии внутреннего контрольного образца - BKO-FL.
Объем BKO-FL - 10 мкл в каждую пробирку.
Объем образца для экстракции - 200 мкл (100 мкл исследуемого материала и
100 мкл ОКО).
В пробирку отрицательного контроля экстракции (ОК) внести 190 мкл ОКО.
В пробирку положительного контроля экстракции (ПК) внести 190 мкл ОКО и
10 мкл ПКО FiloA.
Объем элюции - 50 мкл.
ВНИМАНИЕ! Реакцию ОТ рекомендуется проводить сразу после получения проб
РНК. Допускается хранение проб РНК при температуре от 2 до 8 °С не более 30 мин,
при температуре от минус 24 до минус 16 °С не более недели и при температуре не
выше минус 68 °С до года. Допускается только однократное замораживание-
оттаивание проб РНК.
12
--- стр. 13 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)
СОСТАВ
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L для обратной транскрипции
РНК и амплификации фрагментов кДНК вируса Эбола, вариант Заир {EBOV Zaire),
РНК вируса Эбола, вариант Судан {SUDV) и РНК вируса Марбург (MARV) с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени»
позволяет проводить ПЦР-исследование в качественном формате. Комплект
реагентов включает:
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь FiloA-Lyo Порошок белого цвета - 96 пробирок
объёмом 0,2 мл
К+ FiloA Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
ПКО FiloA Прозрачная бесцветная
жидкость 0,1 1 пробирка
BKO-FL Прозрачная бесцветная
жидкость 1.0 1 пробирка
ОКО Прозрачная бесцветная
жидкость 1,2 8 пробирок
Комплект реагентов рассчитан на проведение 96 реакций обратной транскрипции и
амплификации, включая контроли.
РЕАКЦИЯ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ РНК И АМПЛИФИКАЦИЯ кДНК С
ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку
RNase-free, DNase-free.
Для внесения в пробирки реагентов, проб РНК и контрольных образцов
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
А. Подготовка пробирок для проведения ОТ-ПЦР
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем пробы РНК - 25 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок с готовой лиофилизированной
реакционной ПЦР-смесью FiloA-Lyo для проведения ОТ-ПЦР РНК исследуемых
и контрольных образцов (количество контрольных образцов см. в пункте 3).
2. В подготовленные пробирки внести по 25 мкл проб РНК, полученных в
результате экстракции из исследуемых образцов.
13
--- стр. 14 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
ВНИМАНИЕ! Содержимое пробирок необходимо тщательно перемешать
пипетированием, не допуская появления лузырьков воздуха.
3. Поставить контрольные реакции.
а) положительный контроль ОТ-ПЦР (К+) - в пробирку с реакционной смесью
внести 25 мкл К+ Filo А.
б) отрицательный контроль ОТ-ПЦР (К-) - внести в пробирку 25 мкл К-.
в) отрицательный контроль экстракции (ОК) - в пробирку с реакционной
смесью внести 25 мкл пробы, экстрагированной из ОКО.
г) положительный контроль экстракции (ПК) - в пробирку с реакционной
смесью внести 25 мкл пробы, экстрагированной из ПКО Filo А
ВНИМАНИЕ! Содержимое пробирок необходимо тщательно перемешать
пипетированием, не допуская появления пузырьков воздуха.
ВНИМАНИЕ! Провести ОТ-ПЦР сразу после соединения реакционной смеси и РНК-
пробы и контролей. Время внесения проб в реакционную смесь и запуск реакции на
приборе не должно превышать 10-15 минут.
Б. Проведение ОТ-ПЦР с детекцией в режиме «реального времени»
1. Запрограммировать амплификатор с системой детекции в режиме «реального
времени» для вылолнения соответствующей лрограммы амплификации и
детекции флуоресцентного сигнала (см. табл. 3).
Таблица 3
Программа амплификации и детекции флуоресцентного сигнала
для приборов роторного^ типа
Цикл Температура, °С Время
Детекция
флуоресцентного
сигнала по каналам
для флуорофоров
Количество
циклов
1 50 15 мин - 1
2 95 15 мин - 1
3
95 Ю с -
42
60 20 с FAM, JOE, ROX, Су5
2. Установить пробирки в ячейки реакционного модуля прибора.
3. Запустить выполнение программы амплификации с детекцией флуоресцентного
сигнала.
4. По окончании выполнения программы приступить к анализу и интерпретации
результатов.
Например, Rotor-Gene Q (QIAGEN) и другие рекомендованные Производителем.
14
--- стр. 16 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше, прилагаемом к набору
реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным, если получены
правильные результаты для контролей этапов экстракции и ОТ-ПЦР РНК в
соответствии с табл. 6 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 6
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследования
Конт
роль
Контролируе-
мый этап ПЦР-
исследования
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора (Ct)
FAM JOE ROX Су5
ПК Экстракция
РНК
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
ОК Экстракция
РНК отсутствует отсутствует отсутствует
определено
меньше
граничного
К- ОТ-ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует
К+ ОТ-ПЦР
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
определено
меньше
граничного
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ОТ-ПЦР (К+) значение порогового цикла (Cf) по
любому из указанных каналов для флуорофоров (см. табл.6) отсутствует или
превышает граничное значение. Необходимо повторить амплификацию и
детекцию для всех образцов.
2. Для положительного контроля экстракции (ПК) значение порогового цикла (Cf) по
каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE и/или ROX отсутствует или
превышает граничное значение. Необходимо повторить ПЦР-исследование,
начиная с этапа экстракции РНК, для всех образцов.
3. Для отрицательного контроля экстракции (ОК)
а) По какому-либо из каналов для флуорофоров РАМ и/или JOE и/или ROX
определено значение порогового цикла (Cf). Вероятна контаминация
лаборатории фрагментами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая РНК, начиная с этапа экстракции РНК.
16
--- стр. 17 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
б) По каналу для флуорофора Суб значение порогового цикла (Cf) отсутствует
или определено больше граничного. Это означает, что образец ОК не
выполнил функцию контроля контаминации. Требуется повторное ПЦР-
исследование всех образцов, в которых обнаружена специфическая РНК,
начиная с этапа экстракции РНК.
4. Для отрицательного контроля ОТ-ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров РАМ
и/или JOE и/или ROX определено значение порогового цикла {Ct). Вероятна
контаминация лаборатории фрагментами амплификации или контаминация
реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования.
Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника
контаминации и повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в
которых обнаружена специфическая РНК.
5. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или
параметров расчета базовой линии. Если результат получен при правильном
уровне пороговой линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
17
--- стр. 18 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не
подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности,
указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано
иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до
8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами
крытых транспортных средств. Допускается транспортирование при температуре от 2
до 25 °С не более 3 сут.
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L при получении
разукомплектовать в соответствии с указанными температурами хранения.
Хранение.
Форма комплектации 1. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить
в холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь FiloA-Lyo хранить в
пакетах с влагопоглотителем в защищенном от света и влаги месте.
Холодильная камера должна обеспечивать регламентированный температурный
режим.
18
--- стр. 19 ---
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
Производитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик
набора реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуатационной
документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий
транспортирования, хранения и применения.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по адресу 111123,
г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail: cs@pcr.ru)^.
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению
набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и
обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную
государственную регулирующую организацию (в РФ - Федеральная служба по
надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотртенадзора
Е.Н. Родионова
^ Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте; www.amDlisens.ru .
19
--- стр. 20 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF Номер по каталогу
V
LOT Код партии
и
IVD Медицинское изделие
для диагностики in vitro □ 5
VER Дата изменения
1
Температурный
диапазон
ш 1
Изготовитель
f
Содержимого
достаточно для
проведения п-
количества тестов
Использовать до
Обратитесь к
инструкции по
применению
Не допускать
воздействия
солнечного света
Дата изготовления
Беречь от влаги
20