Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс® Borrelia miyamotoi-FL по ТУ 21.20.23.110-279-01897593-2017 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Заместитель директора по
эпидемиологии - Врио директора
Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в сфере защиты
прав потребителей и благополучия
человека (ФБУН. ЦНИИ
Эпиде.Л^!^^^Й№ с7(о^еенадзора)
В.Г. Акимкин
2018 г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® Borrelia miyamotoi-FL
АмплиСенс
®
iJ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом За IVD
--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.....................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ.......................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА.............................................................................................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ .................................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.............................................................................5
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ........................................................................6
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ ................................7
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ................................................9
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 12
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАЦИИ ДНК...........................13
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА........................................................................................16
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ...........................................................................16
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ....................................................16
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN)............................18
СОСТАВ.........................................................................................................................18
АМПЛИФИКАЦИЯ ДНК С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» .. 18
A. Подготовка пробирок для амплификации.........................................................18
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» ..19
B. Анализ и интерпретация результатов...............................................................21
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L) ...................................24
СОСТАВ.........................................................................................................................24
АМПЛИФИКАЦИЯ ДНК С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» .. 24
A. Подготовка пробирок для амплификации.........................................................24
Б. Проведение ПЦР с детекцией в режиме «реального времени».....................25
B. Анализ и интерпретация результатов...............................................................26
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ.....................29
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ........................................31
ПРИЛОЖЕНИЕ 1.................................................................................................................32
стр. 2 из 33
--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:
BKO-FL - экзогенный внутренний контрольный образец
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксирибонуклеотидтрифосфат
К+ - положительный контроль ПЦР
К- - отрицательный контроль ПЦР
НК - нуклеиновые кислоты
ОК - отрицательный контроль экстракции
ОКО - отрицательный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РУ - регистрационное удостоверение
УДГ - урацил-ДН1К-гликозилаза
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс® Borrelia miyamotoi-FL,
далее - набор реагентов, предназначен для качественного определения ДНК Borrelia
miyamotoi в биологическом материале (кровь, тканевой (аутопсийный, биопсийный)
материал, ликвор, клещи) методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией продуктов амплификации. Набор реагентов используется в клинической
лабораторной диагностике.
Материалом для проведения ПЦР служат пробы ДНК, экстрагированной из
исследуемого материала.
В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011 № 323-ФЗ «Об основах
охраны здоровья граждан в Российской Федерации» ПЦР-исследование является
одним из методов всестороннего обследования пациента, на основании которых
лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия по лечению
пациента.
Показания и противопоказания к применению набора реагентов
Набор реагентов используется для исследования биологического материала,
полученного от лиц с подозрением на иксодовый клещевой боррелиоз вне
зависимости от формы и наличия манифестации заболевания, и клещей.
Противопоказания отсутствуют, за исключением случаев, когда забор материала
не может быть осуществлен по медицинским показаниям.
стр. 3 из 33
--- стр. 4 ---
Потенциальные пользователи медицинского изделия
К работе с набором реагентов допускаются только медицинские работники,
обученные методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-
диагностической лаборатории в установленном порядке (СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней»).
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип тестирования основывается на экстракции ДНК из образцов
исследуемого материала с экзогенным внутренним контрольным образцом (BKO-FL)
и одновременной амплификации участков ДНК Borrelia miyamotoi и ДНК BKO-FL с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией. BKO-FL позволяет контролировать все
этапы ПЦР-исследования для каждого образца и оценивать влияние ингибиторов на
результаты ПЦР-исследования.
С полученными на этапе экстракции пробами ДНК проводится реакция
амплификации участков ДНК при помощи специфичных к этим участкам праймеров и
фермента Taq-полимеразы. В составе реакционной смеси присутствуют
флуоресцентно-меченые олигонуклеотиды, которые гибридизуются с
комплементарным участком амплифицируемой ДНК-мишени, в результате чего
происходит нарастание интенсивности флуоресценции. Это позволяет
регистрировать накопление специфического продукта амплификации путем
измерения интенсивности флуоресцентного сигнала с системой детекции
флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени».
Набор реагентов содержит систему защиты от контаминации ампликонами за счет
применения фермента урацил-ДНК-гликозилазы (УДГ) и дезоксиуридинтрифосфата.
Фермент УДГ распознает и катализирует разрушение цепей ДНК, содержащих
дезоксиуридин, но не ДНК, содержащей дезокситимидин. Дезоксиуридин отсутствует
в природной ДНК, но всегда присутствует в ампликонах, поскольку
дезоксиуридинтрифосфат входит в состав смеси дНТФ в реагентах для
амплификации. Дезоксиуридин делает контаминирующие ампликоны
восприимчивыми к разрушению ферментом УДГ до начала амплификации ДНК-
мишени, и, следовательно, они не могут быть в дальнейшем амплифицированы.
Фермент УДГ термолабилен и инактивируется при нагревании выше 50 °С и
поэтому не разрушает ампликоны мишени, нарабатываемые в процессе ПЦР.
На этапе амплификации одновременно в одной пробирке проводятся 2 реакции -
амплификация ДНК Borrelia miyamotoi, а также амплификация последовательности
стр. 4 из 33
--- стр. 5 ---
BKO-FL. Результаты амплификации ДНК Borrelia miyamotoi, а также ДНК BKO-FL
регистрируются по 2 различным каналам флуоресцентной детекции:
Таблица 1
Канал для флуорофора FAM ROX
ДНК-мишень ДНК BKO-FL ДНК Borrelia miyamotoi
Область амплификации искусственная нуклеотидная
последовательность gIpQ ген
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN
Форма 2: «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
Формы комплектации 1 и 2 предназначены для проведения амплификации ДНК с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» и
позволяют выявлять ДНК в качественном формате. Для проведения полного ПЦР-
исследования необходимо использовать комплекты реагентов для экстракции ДНК,
рекомендованные Производителем.
Форма комплектации 1 рассчитана на проведение 55 реакций амплификации,
включая контроли. Форма комплектации 2 рассчитана на проведение 48 реакций
амплификации, включая контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие характеристики;
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
Таблица 2
Вид
исследуемого
материала
Объем образца
для экстракции,
мкл
Комплект для
экстракции ДНК
Комплект для
амплификации
Аналитическая
чувствительность
(предел
обнаружения),
копий /мл
кровь Осадок+100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-50 FN, FRT-L
10^
тканевой
(биопсийный и
аутопсийный)
материал
100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-50 FN, FRT-L
10'
ликвор Осадок+100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-50 FN, FRT-L
10'
клещи 100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-50 FN, FRT-L
10'
стр. 5 из 33
--- стр. 6 ---
Вид
исследуемого
материала
Объем образца
для экстракции,
мкл
Комплект для
экстракции ДНК
Комплект для
амплификации
Аналитическая
чувствительность
(предел
обнаружения),
копий/мл
клещи 100 «МАГНО-сорб»
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-50 FN, FRT-L
10®
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении правил, указанных в
разделах «Взятие, транспортирование и хранение исследуемого материала» и
«Подготовка исследуемого материала к экстракции ДНК».
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает фрагменты ДНК заявленных микроорганизмов.
Аналитическая специфичность набора реагентов доказана при исследовании
следующих штаммов микроорганизмов: Borrelia afzelii, В. garinii, В. burgdorferi sensu
stricto, Leptospira interrogans, Coxiella burnetii, Bartonella quintana, B. henselae,
Rickettsia conorii, R. sibirica,, Babesia microti. Treponema pallidum, a также геномной
ДНК человека.
При тестировании образцов ДНК вышеперечисленных микроорганизмов, а также
ДНК человека, ДНК клещей и ДНК грызунов неспецифических реакций выявлено не
было.
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для оценки диагностических характеристик были использованы:
- 131 образец крови, полученный от пациентов Ижевской областной из
инфекционной больницы и «Новой больницы» г. Екатеринбурга с подозрением на
заболевание иксодовым клещевым боррелиозом и 50 образцов крови, взятых в
межэпидемический период по иксодовым клещевым инфекциям от пациентов
инфекционных больниц № 1 и № 2 г. Москвы с заболеваниями иной этиологии.
- 200 проб клещей l.hcinus собранных в г. Москве и Московской области;
- по 50 образцов ликвора и аутопсийного материала, взятых от пациентов
инфекционных больниц № 1 и № 2 г. Москвы с заболеваниями иной этиологии;
- по 20 модельных образцов ликвора, аутопсийного материала и клещей,
контаминированных штаммом Borrelia miyamotol lzh-4 из Государственной
коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-Оболенск».
В качестве набора сравнения использовался набор реагентов для выявления
ДНК Borrelia miyamotoi методом полимеразной цепной реакции в режиме
стр. 6 из 33
--- стр. 7 ---
реального времени (РеалБест ДНК Borrelia miyamotoi) производства АО «Вектор-
Бест», Россия, регистрационное удостоверение № РЗН 2014/1405.
Таблица 3
Диагностические характеристики набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® Borrelia miyamotoi-FL
Тип образцов
Диагностическая
чувствительность^
(с доверительной
вероятностью 95 %),
в интервале (%)
Диагностическая
специфичность^,
(с доверительной
вероятностью 95 %),
в интервале (%)
Кровь 91,2-100,0 94,0-99,8
Клещи 87,1 - 100,0 98,1 - 100,0
Ликвор 83,9- 100,0 92,9- 100,0
Аутопсийный материал 83,9- 100,0 92,9- 100,0
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ
Работа должна проводиться в лаборатории, вылолняющей молекулярно
биологические (ПЦР) исследования биологического материала на наличие
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-
эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами» и методических указаний МУ
1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе необходимо всегда выполнять следующие требования:
- Температура в помещении лаборатории должна быть от 20 до 28 °С,
относительная влажность - от 15 до 75%.
- Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать
работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы, используя дезинфицирующие
средства в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
’ Диагностическая чувствительность в сравнении с набором реагентов методом ПЦР.
^Диагностическая специфичность в сравнении с набором реагентов методом ПЦР.
стр. 7 из 33
--- стр. 8 ---
микроорганизмами lll-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
паразитарных болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в
отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Экстракции,
продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы,
оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена предыдущая стадия
процесса.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также
использованные реагенты, упаковку^, биологический материал, включая
материалы, инструменты и предметы, загрязненные биологическим материалом,
следует удалять в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10
«Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими
отходами».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих
продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого,
поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны,
оборудования и реагентов.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для
автоматических дозаторов с фильтром"^. Одноразовую пластиковую посуду
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер,
содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для
обеззараживания медицинских отходов.
- Поверхности столов, а также помещения, в которых проводится постановка ПЦР,
до начала и после завершения работ необходимо подвергать
ультрафиолетовому облучению в течение 30 мин.
- Набор реагентов предназначен для одноразового применения для проведения
ПЦР-исследования указанного количества проб (см. раздел «Состав»).
- Набор реагентов готов к применению согласно данной инструкции. Применять
набор строго по назначению.
- К работе с набором реагентов допускается только персонал, обученный методам
молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической
лаборатории в установленном порядке (СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
^ Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использованные реагенты,
упаковка относятся к классу опасности медицинских отходов Г.
^ Для удаления надосадочной жидкости в процессе экстракции с помощью вакуумного отсасывателя
используются одноразовые наконечники без фильтра.
стр. 8 из 33
--- стр. 11 ---
18.Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24 до минус 16 °С.
19.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09.
20.Одноразовые пластиковые контейнеры для сброса и инактивации материалов.
Экстракция ДНК из исследуемых образцов
21. Комплект реагентов для экстракции ДНК - «РИБО-преп» (РУ № ФОР 2008/03147),
«МАГНО-сорб» (РУ № ФОР 2010/07265) или другие рекомендованные
Производителем.
22. Дополнительные материалы и оборудование для экстракции ДНК - согласно
инструкции к комплекту реагентов для экстракции ДНК.
При использовании автоматических станций для экстракции нуклеиновых кислот:
23. Автоматическая станция для экстракции НК (например. Neon 100 (Xiril AG (Ксирил
АГ), Швейцария) и другие, рекомендованные Производителем).
24. Набор реагентов и расходных материалов к автоматической станции (например,
«МАГНО-сорб» (РУ № ФОР 2010/07265)).
Амплификация с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов
амплификации
25.Одноразовые полипропиленовые пробирки при работе с «ПЦР-комплектом»
вариант FRT-50FN:
а) завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки объемом 1,5 мл
(например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные) для
приготовления реакционной смеси.
б) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с выпуклой или плоской
оптически прозрачной крышкой или пробирки объемом 0,2 мл в стрипах по
8 шт. с прозрачными крышками (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»),
США, или аналогичные) - при использовании прибора планшетного типа;
в) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с плоской крышкой
(например. Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные) или
пробирки для ПЦР к Rotor-Gene объемом 0,1 мл в стрипах по 4 шт. с крышками
(например, QIAGEN GmbH («Киаген ГмбХ»), Германия, или аналогичные) - при
использовании прибора роторного типа.
26.Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фильтром до
200 мкл (налример, /\xygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные).
27.Штативы для пробирок объемом 0,2 мл или 0,1мл (в соответствии с
используемыми комплектами реагентов) (например, Axygen, Inc. («Эксиджен,
стр. 11 из 33
--- стр. 12 ---
Инк»), США, или аналогичные).
28. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс) (например, «БАВ-ПЦР-
«Ламинар-С», ЗАО «Ламинарные системы», Россия, или аналогичный).
29. Вортекс (например, SIA Biosan, Латвия, или аналогичный).
30. Автоматические дозаторы переменного объема (например, ООО «Биохит»,
Россия, или аналогичные).
31. Программируемый амплификатор с системой детекции флуоресцентного сигнала
в режиме «реального времени», имеющий 3 или более независимых каналов
флуоресцентной детекции (например, Rotor-Gene О (QIAGEN GmbH («Киаген
ГмбХ»), Германия), CFX96 (Bio-Rad Laboratories, Inc. («Био-Рад Лабораториз,
Инк.»), США) и другие рекомендованные Производителем).
32. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24 до минус 16 °С.
33.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09.
34.Емкость для сброса наконечников.
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Материалом для исследования служат:
- кровь,
- тканевой (аутопсийный, биопсийный) материал,
- ликвор,
- клещи.
Кровь
Для повышения чувствительности метода исследуется бактериальный осадок
крови. Для его получения взятие крови следует производить натощак или через 3
часа после приема пищи одноразовой иглой диаметром 0,8-1,1 мм в пробирку
(специальную вакуумную систему) с раствором ЭДТА или цитрата натрия в качестве
антикоагулянта. После взятия крови пробирку следует несколько раз плавно
перевернуть вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с
антикоагулянтом. (В противном случае кровь свернется и экстракция ДНК станет
невозможной!). После плавного перемешивания пробирку поместить в штатив.
Допускается хранение образцов крови до получения и подготовки бактериального
осадка к экстракции ДНК:
- при температуре от 20 до 25 °С - в течение 2 часов;
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 12 часов.
Недопустимо замораживание образца цельной крови!
стр. 12 из 33
--- стр. 13 ---
Подготовку образцов провести не позднее указанного времени.
Тканевой (аутопсийный, биопсийный) материал
Материал отбирают из зоны предполагаемого местонахождения возбудителя
инфекции, из поврежденной ткани или из участка, пограничного с поврежденным
местом, или из неизмененных участков тканей органов: мозга, сердца, легких,
печени, селезенки, почек, стерильным инструментом (например, пинцет) в
стерильный пластиковый контейнер объемом 50 мл с плотно закрывающейся
крышкой или пробирку объёмом 2 мл. Пробирку плотно закрывают крышкой.
Допускается хранение образцов тканевого материала:
- при комнатной температуре - в течение 6 часов;
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 3 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение 1 недели;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Ликвор (спинномозговая жидкость)
Спинномозговую жидкость в количестве не менее 1 мл собирают, используя
одноразовые иглы, в одноразовые пробирки объемом 2,0 мл.
Допускается хранение образцов ликвора до проведения ПЦР-исследования:
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 1 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение 1 недели;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание материала.
Клеши
Собранный материал разбирают в лаборатории по видам, полу, местам и датам
сбора и помещают в сухие чистые пробирки объемом 2,0 мл. При объединении
клещей в пулы число особей в одном пуле не должно превышать 10.
Допускается хранение материала после разбора и формирования проб:
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение 1 месяца;
- при температуре не выше минус 68°С или в сосуде Дюара с жидким азотом -
длительно.
Допускается лишь однократное замораживание-оттаивание материала.
Допускается транспортирование вышеперечисленного материала при
температуре от 2 до 8 °С в течение 1 суток.
стр. 13 из 33
--- стр. 22 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
образец считать сомнительным и рекомендовать повторное взятие материала для
анализа.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше, прилагаемом к набору
реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным, если получены
правильные результаты для контролей этапов экстракции и амплификации
ДНК в соответствии с табл. 8 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 8
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследования
Конт
роль
Контролируемый этап
ПЦР-исследования
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора {Ct)
РАМ ROX
ОК Экстракция ДНК определено меньше
граничного отсутствует
К- ПЦР отсутствует отсутствует
К+ ПЦР определено меньше
граничного
определено меньше
граничного
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение порогового цикла {Cf) по
каналам для флуорофоров РАМ и/или ROX отсутствует или превышает
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех
образцов, в которых не обнаружена специфическая ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналу для флуорофора ROX
определено значение порогового цикла (Cf). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
принять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить
ПЦР-исследование для всех образцов, в которых обнаружена специфическая
ДНК, начиная с этапа экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров РАМ и/или
ROX определено значение порогового цикла (Cf). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
принять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая ДНК.
стр. 22 из 33
--- стр. 23 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
4. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или
параметров расчета базовой линии. Если результат получен при правильном
уровне пороговой линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
стр. 23 из 33
--- стр. 24 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)
СОСТАВ
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L для амплификации
фрагмента ДНК Borrelia miyamotoi с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в
режиме «реального времени» позволяет проводить ПЦР-исследование в
качественном формате. Комплект реагентов включает:
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь Borrelia miyamotoi-
Lyo Порошок белого цвета -
48 пробирок
объемом
0,2 мл
К+ Borrelia miyamotoi Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
BKO-FL Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
ОКО Прозрачная бесцветная
жидкость 1,2 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 48 реакций амплификации, включая
контроли.
АМПЛИФИКАЦИЯ ДНК С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
А. Подготовка пробирок для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем пробы ДНК - 25 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок для амплификации с готовой
лиофилизированной реакционной ПЦР-смесью Borrelia miyamotoi-Lyo для
амплификации ДНК исследуемых и контрольных образцов (количество контрольных
образцов см. в пункте 3).
2. В подготовленные пробирки внести по 25 мкл проб ДНК, полученных в
результате экстракции из исследуемых образцов.
ВНИМАНИЕ! При добавлении проб ДНК, экстрагированных с помощью комплектов
реагентов для проведения экстракции методом магнитной сепарации, необходимо
избегать попадания сорбента в реакционную смесь.
3. Поставить контрольные реакции.
стр. 24 из 33
--- стр. 27 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
Таблица 12
Интерпретация результатов анализа исследуемых образцов
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора (Ct)
Результат
FAM ROX
определено меньше
граничного отсутствует ДНК Borrelia miyamotoi
НЕ обнаружена
определено
или отсутствует
опоеделено меньше
граничного
ДНК Borrelia miyamotoi
обнаружена
отсутствует или определено
больше граничного
отсутствует или определено
больше граничного Невалидный*
определено меньше
граничного
определено больше
граничного Сомнительный**
* В случае получения невалидного результата необходимо провести повторное
ПЦР-исследование соответствующего исследуемого образца, начиная с этапа
экстракции ДНК.
** В случае получения сомнительного результата необходимо провести повторное
ПЦР-исследование соответствующего исследуемого образца, начиная с этапа
экстракции. В случае повторения аналогичного результата образец считать
положительным. При получении отрицательного результата в повторной постановке
образец считать сомнительным и рекомендовать повторное взятие материала для
анализа.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Cf указаны во вкладыше, прилагаемом к набору
реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным, если получены
правильные результаты для контролей этапов экстракции и амплификации
ДНК в соответствии с табл. 13 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 13
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследования
Конт
роль
Контролируемый этап
ПЦР-исследования
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора (Ct)
FAM ROX
ОК Экстракция ДНК определено меньше
граничного отсутствует
К- ПЦР отсутствует отсутствует
к+ ПЦР определено меньше
граничного
определено меньше
граничного
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение порогового цикла (Cf) по
каналам для флуорофоров РАМ и/или ROX отсутствует или превышает
стр. 27 из 33
--- стр. 28 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех
образцов, в которых не обнаружена специфическая ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналу для флуорофора ROX
определено значение порогового цикла (Cf). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая ДНК, начиная с этапа экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров РАМ и/или
ROX определено значение порогового цикла {Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или
параметров расчета базовой линии. Если результат получен при правильном
уровне пороговой линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
стр. 28 из 33
--- стр. 29 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не
подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности,
указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано
иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до
8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами
крытых транспортных средств. Допускается транспортирование при температуре от 2
до 25 °С не более 3 сут.
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN при получении
разукомплектовать в соответствии с указанными температурами хранения.
Хранение.
Форма комплектации 1. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN
хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-смеси-FL
Borrelia miyamotoi и ПЦР-буфера-Н. ПЦР-смесь-FL Borrelia miyamotoi, ПЦР-буфер-Н
хранить в морозильной камере при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-
смесь-FL Borrelia m/yamoto/хранить в защищенном от света месте.
Форма комплектации 2. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить
в холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь Borrelia miyamotoh
Lyo хранить в пакетах с влагопоглотителем в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать регламентированный
температурный режим.
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
Производитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик
набора реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуатационной
документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий
транспортирования, хранения и применения.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по адресу 111123, г.Москва,
ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail: cs@pcr.ru^\
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению
набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и
обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amplisens.ru.
стр. 29 из 33
--- стр. 30 ---
работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную
государственную регулирующую организацию (в РФ - Федеральная служба по
надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора
Главный врач ФГБУ «Поликлиника
Управления делами Президента
Российской Федерации
Е.Н. Родионова
Е.В. Ржевская
стр. 30 из 33