Набор реагентов для выявления генетических полиморфизмов в генах GSТТ1 и GSTM1 человека методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле "АмплиСенс® GSТТ1/GSTM1-EPh" по ТУ 9398-165-01897593-2011 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
№от
УТВЕРЖДАЮ
Директор Федерального
государственного учреждения
науки «Центральный научно-
исследовательский институт
[емиологии» Федеральной
надзору в сфере
IB потребителей и
1 я чепадека
Покровский
2 0 1 1 г.
и н с т р у к ц и я
п о п р и м е н е н и ю н а б о р а р е а г е н т о в
д л я в ы я в л е н и я г е н е т и ч е с к и х п о л и м о р ф и з м о в в г е н а х
G S T T 1 и G S T M 1 ч е л о в е к а м е т о д о м п о л и м е р а з н о й ц е п н о й
р е а к ц и и ( П Ц Р ) с э л е к т р о ф о р е т и ч е с к о й д е т е к ц и е й
п р о д у к т о в а м п л и ф и к а ц и и в а г а р о з н о м г е л е
« А м п л и С е н с ® G S T T 1 / G S T M 1 -ЕРЬ»
--- стр. 2 ---
С П ИСО К С О К Р А Щ Е Н И Й .........................................................................................................................3
Н А ЗН АЧ ЕН И Е............................................................................................................................................... 3
ПРИНЦИП М Е Т О Д А ...................................................................................................................................3
ВАРИАНТЫ И ФО РМ Ы В Ы П УС КА Н АБО РА Р Е А ГЕ Н Т О В
.......................................................4
МЕРЫ П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И ........................................................................................................... 4
Д О П О Л Н И ТЕЛ ЬН Ы Е М АТЕ РИ АЛЫ И О Б О Р У Д О В А Н И Е .........................................................5
ВЗЯТИЕ. ТР А Н С П О Р ТИ Р О В А Н И Е И Х Р АН ЕН И Е И С С ЛЕД УЕМ О ГО М АТЕРИАЛА.... 6
ПО ДГО ТО ВКА И С С ЛЕ Д УЕ М О ГО М А ТЕ РИ АЛА К Э КС ТРА КЦ И И Д Н К................................6
С О С Т А В .......................................................................................................................................................... 7
ПРО ВЕДЕН ИЕ П Ц Р -И С С Л Е Д О В А Н И Я .............................................................................................7
ЭКСТРАКЦИЯ Д Н К ИЗ И С С ЛЕ Д УЕ М Ы Х О Б Р А З Ц О В................................................................ 7
ПРО ВЕДЕНИЕ А М П Л И Ф И КА Ц И И ........................................................................................................7
А. Подготовка пробирок для ам плиф икации..............................................................................8
Б. Проведение ам пл иф и кац и и .........................................................................................................8
ЭЛЕКТРО Ф О РЕТИЧЕС КАЯ ДЕТЕКЦ И Я ПРО ДУКТО В А М П Л И Ф И К А Ц И И ........................9
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ Р Е З У Л Ь Т А Т О В .................................................................................................... 9
СРОК ГО ДНОСТИ. УСЛО ВИЯ ТРАН С П О РТИ РО ВАН И Я И Х Р А Н Е Н И Я ..........................11
ОГЛАВЛЕНИЕ
--- стр. 3 ---
с п и с о к С О К Р А Щ Е Н И Й
В настоящ ей инструкции применяю тся следую щ ие сокращ ения и обозначения:
ОКО - отрицательны й контрольный образец выделения
ПКО - положительны й контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ФГУН ЦНИИЭ
Роспотребнадзо
ра
- ф едеральное государственное учреж дение науки
«Ц ентральны й научно-исследовательский институт
эпидем иологии» Ф едеральной службы по надзору в сф ере
защ иты прав потребителей и благополучия человека
EPh - электроф оретическая детекция
Н А З Н А Ч Е Н И Е
Набор реагентов «АмплиСенс® G S T T 1 / G S T M 1 -E P h » предназначен для
выявления делеционны х полиморф измов в генах глутатион-8-трансф ераз G S T T 1 и
G S T M 1 человека методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с
электроф оретической детекцией продуктов ам плиф икации в агарозном геле.
Данный набор реагентов позволяет обнаруживать гом озиготны е варианты по
делециям в генах G S T T 1 и G S T M 1 .
М атериалом для проведения ПЦР служат пробы ДН К, вы деленны е из образцов
периф ерической крови. Для экстракции Д Н К и электроф оретической детекции
продуктов ам плиф икации в агарозном геле использую тся наборы реагентов,
рекомендованные ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора.
В Н И М А Н И Е ! Результаты П Ц Р-исследования учиты ваю тся в комплексной
диагностике заболевания^
П Р И Н Ц И П М Е Т О Д А
Выявление делеционны х полиморф измов в генах G S T T 1 и G S T M 1 методом
полимеразной цепной реакции (ПЦР) с электроф оретической детекцией включает в
себя три этапа: экстракция (выделение) Д Н К из образцов клинического материала.
П Ц Р-амплиф икация участков генов G S T T 1 и G S T M 1 человека, и
электроф оретическая детекция продуктов ам плиф икации в агарозном геле. С
пробами выделенной Д Н К проводится реакция ам плиф икации ф рагментов генов
G S T T 1 и G S T M 1 , содерж ащ их делеционны е полиморф измы , при помощи
специф ических прайм еров и ф ермента Тад-полимеразы . В качестве внутреннего
контроля используется ген альбумина (после ам плиф икации ф рагмент присутствует
всегда). О пределение размеров ам плиф ицированны х ф рагм ентов осущ ествляется
после окончания ПЦР с помощ ью электроф оретической детекции продуктов
амплиф икации в агарозном геле.
^ в соответствии с Директивой Европейского Союза 98/79/ЕС.
--- стр. 4 ---
В А Р И А Н Т Ы И Ф О Р М Ы В Ы П У С К А Н А Б О Р А Р Е А Г Е Н Т О В
Ф о р м а 1 вклю чает ком плект реагентов «П Ц Р-комплект» вариант 50 R (пробирки
0,5 мл),
Ф о р м а 2 вклю чает ком плект реагентов «П Ц Р-комплект» вариант 50 R (пробирки
0,2 мл).
Формы комплектации 1 и 2 предназначены для проведения амплиф икации
участков генов G S T T 1 и G S T M 1 человека. Для проведения полного ПЦР-
исследования необходим о использовать комплекты реагентов для экстракции
РНК/ДНК и электроф оретической детекции продуктов амплиф икации,
рекомендованные ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора.
М Е Р Ы П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
Работа долж на проводиться в лаборатории, вы полняю щ ей молекулярно
биологические (ПЦР) исследования клинического материала на наличие
возбудителей инф екционны х болезней, с соблю дением санитарно-эпидемических
правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмам и III-IV групп
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарны х болезней», СП 2 .1 .7 7 2 8 -
99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-проф илактических
учреждений» и м етодических указаний М У 1.3.2569-09 «О рганизация работы
лабораторий, использую щ их методы ам плиф икации нуклеиновы х кислот при работе
с материалом, содерж ащ им микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе всегда следует выполнять следующие требования:
- Следует рассм атривать исследуемы е образцы как инф екционно-опасные,
организовы вать работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с м икроорганизмам и III-IV групп патогенности
(опасности) и возбудителями паразитарны х болезней».
- Убирать и дезинф ицировать разлиты е образцы или реактивы, используя
дезинф ицирую щ ие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с м икроорганизм ам и III-1V групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарны х болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в
отдельных помещ ениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Выделения,
продолжать в Зоне Амплиф икации и Детекции. Не возвращать образцы,
оборудование и реактивы в Зону, в которой была проведена предыдущая стадия
процесса.
- Н еиспользованны е реактивы, реактивы с истекш им сроком годности, а также
использованны е реактивы (включая буф ер и гели) следует удалять в
соответствии с требованиями СП 2 .1 .7 7 2 8 -9 9 «П равила сбора, хранения и
--- стр. 5 ---
удаления отходов лечебно-проф илактических учреждений».
В Н И М А Н И Е ! При удалении отходов после ам плиф икации (пробирок, содержащ их
продукты ПЦР) недопустим о откры вание пробирок и разбры згивание содержимого,
поскольку это м ож ет привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны,
оборудования и реагентов.
- Применять набор строго по назначению, согласно данной инструкции.
- Д опускать к работе с набором только специально обученны й персонал.
- Не использовать набор по истечении срока годности.
- Использовать одноразовы е перчатки, лабораторны е халаты , защ ищ ать глаза во
время работы с образцами и реактивами. Тщ ательно вымыть руки по окончании
работы.
- Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. При контакте
немедленно промы ть пораженное место водой и обратиться за медицинской
помощ ью.
- Листы безопасности м атериалов (M SDS - m aterial safety data sheet) доступны по
запросу.
Д О П О Л Н И Т Е Л Ь Н Ы Е М А Т Е Р И А Л Ы И О Б О Р У Д О В А Н И Е
1. Комплект реагентов для выделения РН К/ДН К - «Д Н К-сорб-В» (ТУ 9398-003-
01897593-2009), «Р И Б О -преп» (ТУ 9398-071-01897593-2008) или другие,
реком ендованны е ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора.
2. Д ополнительны е м атериалы и оборудование для экстракции РН К/ДН К - согласно
инструкции к комплекту реагентов для вы деления РНК/ДНК.
3. Комплект реагентов для электрофоретической детекции продуктов амплиф икации в
агарозном геле - «ЭФ» (ТУ 9398-070-01897593-2008) или другие
реком ендованны е ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора.
4. Д ополнительны е материалы и оборудование для электроф оретической детекции
- согласно инструкции к комплекту реагентов для электроф оретической детекции.
5. Гемолитик (ТУ 9398-097-01897593-2010).
6. Бокс абактериальной воздуш ной среды (ПЦР-бокс).
7. Ц ентриф уга/вортекс.
8. А втом атические дозаторы переменного объема (от 5 до 20 и от 20 до 200 мкл).
9. О дноразовые наконечники с ф ильтром до 10 мкл и 200 мкл в штативах.
10. Ш тативы для пробирок объемом 0,2 мл или 0,5 мл (в соответствии с
используемыми комплектами реагентов).
11. Х олодильник от 2 до 8 ‘'С с морозильной камерой не выш е минус 16 °С.
12. Термостат для пробирок типа Э ппендорф от 25 до 100 ""С.
13.О тдельный халат, ш апочки, обувь и одноразовы е перчатки по М У 1.3.2569-09.
--- стр. 6 ---
14. Емкость для сброса наконечников.
15. П рограммируемы й амплиф икатор. Например, «Терцик» («ДНК-Технология»,
Россия) или аналогичны й для пробирок 0,5 мл; G radient Palm Cycler, (Corbett
Research, Австралия), M axyG ene (Axygen, СШ А) или аналогичны й для пробирок
0,2 мл.
В З Я Т И Е , Т Р А Н С П О Р Т И Р О В А Н И Е И Х Р А Н Е Н И Е И С С Л Е Д У Е М О Г О М А Т Е Р И А Л А
Перед началом работы следует ознаком иться с м етодическими рекомендациями
«Взятие, транспортировка, хранение клинического м атериала для ПЦР-
диагностики», разработанны м и ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Москва, 2008 г.
М атериалом для исследования служит цельная периф ерическая кровь.
Взятие цельной периф ерической крови проводится в пробирку с 3 % раствором
ЭДТА из расчета 1:20. Закры тую пробирку с цельной периф ерической кровью
несколько раз переворачиваю т для равномерного перемеш ивания с ЭДТА.
П О Д Г О Т О В К А И С С Л Е Д У Е М О Г О М А Т Е Р И А Л А К Э К С Т Р А К Ц И И Д И К
В случае использования комплектов реагентов «Р И Б О -преп» и «ДНК-сорб-В»
производства Ф ГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора для экстракции РНК/ДНК
необходимо провести пробоподготовку с помощ ью реагента «Гемолитик»
(производство Ф ГУН Ц Н ИИЭ Роспотребнадзора). В пробирку объемом 1,5 мл типа
Эппендорф внести отдельны м наконечником 1,0 мл гем олитика и 0,25 мл цельной
крови. Аккуратно перем еш ать содержимое пробирки на вортексе и оставить на 10
мин, периодически перемеш ивая. Ц ентриф угировать пробирки на микроцентриф уге
при 8 ты с об/мин в течение 2 мин. Н адосадочную ж идкость отобрать с помощью
вакуумного отсасы вателя, не задевая осадка. После отмы вки осадок клеток должен
быть белым, допускается наличие только небольш ого налета розоватого цвета над
осадком (остатки разруш енны х эритроцитов). При необходим ости можно повторить
отмывку гемолитиком.
Полученный осадок лейкоцитов должен быть использован для экстракции ДН К
(при работе с комплектом реагентов «РИБО -преп», добавить 300 мкл лизирую щ его
раствора и в последую щ ем выделить Д Н К в соответствии с инструкцией к комплекту
«РИБО-преп», не добавляя лизирую щ ий раствор повторно) или заморожен при
температуре не выш е минус 68 °С на длительное время.
--- стр. 7 ---
С О С Т А В
К о м п л е к т р е а г е н т о в « П Ц Р > к о м п л е к т » в а р и а н т 5 0 R - комплект реагентов для
PeaKtnue О п исание О бъ ем , м л Кол-во
ПЦР-смесь-1 - R G S T T I / G S T M 1 / ALB^
раскапана под воск
Прозрачная бесцветная
жидкость 0,005
55 пробирок
объемом 0,5
или 0,2 мл
ПЦР-смесь-2 red Прозрачная жидкость
красного цвета 0,6 1 пробирка
М инеральное масло для ПЦР Бесцветная вязкая
жидкость 2,0 1 пробирка
ПКО ДНК человека Прозрачная бесцветная
жидкость 0,1 1 пробирка
ТЕ-буфер Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 55 реакций амплиф икации, включая
контроли.
К комплекту реагентов прилагается контрольный образец этапа экстракции:
Р еакт ив О п и сан и е О бъ ем , м л Кол-во
ОКО Прозрачная бесцветная
жидкость 0.5 1 пробирка
П Р О В Е Д Е Н И Е П Ц Р -И С С Л Е Д О В А Н И Я
П Ц Р-исследование состоит из следую щ их этапов:
- Экстракция Д Н К из исследуем ы х образцов.
- Проведение амплиф икации.
- Э лектроф оретическая детекция продуктов ам плиф икации и интерпретация
результатов.
Э К С Т Р А К Ц И Я Д Н К И З И С С Л Е Д У Е М Ы Х О Б Р А З Ц О В
Экстракцию Д Н К из клеток периф ерической крови проводят в соответствии с
инструкцией к используем ом у комплекту для вы деления РН К/ДН К («ДНК-сорб-В»,
«РИБО-преп» или другие комплекты реагентов, реком ендованны е ФГУН ЦНИИЭ
Р оспотребнадзора).
О птимальная концентрация Д Н К для проведения ПЦР составляет 1-3 нг/мкл (10-
30 нг ДН К на ПЦ Р-реакцию ).
П Р О В Е Д Е Н И Е А М П Л И Ф И К А Ц И И
О б щ и й о б ъ е м р е а к ц и о н н о й с м е с и - 2 5 м к л , в к л ю ч а я о б ъ е м п р о б ы Д Н К -
1 0 м к л .
Ген альбумина {ALB) используется в качестве внутреннего контроля.
--- стр. 8 ---
А . П о д г о т о в к а п р о б и р о к д л я а м п л и ф и к а ц и и
Д л я в н е с е н и я в п р о б и р к и р е а г е н т о в , п р о б Д Н К и к о н т р о л ь н ы х о б р а з ц о в
и с п о л ь з у ю т с я о д н о р а з о в ы е н а к о н е ч н и к и с ф и л ь т р а м и .
1. О тобрать необходим ое количество пробирок с П Ц Р - с м е с ь ю - 1 -R G S T T 1 / G S T M 1 /
A L B для ам плиф икации Д Н К исследуемы х и контрольны х проб.
2. В пробирки с П Ц Р - с м е с ь ю - 1 -R G S T T 1 / G S T M 1 / A L B на поверхность застывш его
воска внести по 1 0 м к л П Ц Р -с м е с и - 2 re d , при этом она не долж на проваливаться
под воск и см еш иваться с содержимы м пробирки под воском.
3. Сверху добавить каплю м и н е р а л ь н о г о м а с л а д л я П Ц Р .
4. Используя наконечники с ф ильтрами, в подготовленны е пробирки внести по
1 0 м к л п р о б Д Н К , полученны х в результате экстракции из исследуемых или
контрольных образцов.
5. Поставить контрольны е реакции:
а) о т р и ц а т е л ь н ы й к о н т р о л ь П Ц Р (К -) - внести в пробирку 1 0 м к л Т Е -б у ф е р а ;
б) п о л о ж и т е л ь н ы й к о н т р о л ь П Ц Р (К + ) - внести в пробирку 1 0 м к л П К О Д Н К
ч е л о в е к а .
Рекомендуется перед постановкой в ам плиф икатор осадить капли со стенок
пробирок кратким центриф угированием на центриф уге/вортексе (1-3 с).
Б . П р о в е д е н и е а м п л и ф и к а ц и и
1. Запустить на ам плиф икаторе соответствую щ ую програм му термоциклирования
(см. табл. 1).
2. Когда тем пература в ячейках достигнет 95 ''С (режим паузы), поставить пробирки
в ячейки ам плиф икатора и нажать кнопку продолжения программы.
Таблица 1
П рограмма ам плиф икации Д Н К
GeneAmp PCR System 2400 (Perkin
Elmer),
«Терцик» («ДНК-Технология»)
GeneAmp PCR System 2700 (Applied
Biosystems) Gradient Palm Cycler
(Corbett Research)
MaxyGene (Axygen)
цикл температура, ® С время циклы температура, время циклы
0 95 пауза 95 па^ра
1 95 5 мин 1 95 5 мин 1
2
95 Ю с
45
95 15с
4560 Ю с 60 15с
72 15с 72 20 с
3 72 2 мин 1 72 2 мин 1
4 4 хранение 4 хранение
3. После окончания реакции собрать пробирки в ш татив и отправить в помещ ение
для детекции продуктов ам плиф икации (ЗО Н У 3).
Пробы после ам плиф икации можно хранить 16 ч при комнатной температуре, в
течение 1 нед при тем пературе от 2 до 8 “ С (однако, перед проведением
--- стр. 9 ---
электроф ореза необходим о нагреть пробирки до комнатной температуры для
размягчения воска).
Анализ продуктов ам плиф икации проводится разделением ф рагментов Д Н К в
агарозном геле.
Э Л Е КТ Р О Ф О Р Е Т И Ч Е С КА Я Д Е ТЕ КЦ И Я П Р О Д У КТО В А М П Л И Ф И КА Ц И И
Детекцию провести в соответствии с инструкцией к используем ому комплекту
реагентов для электроф оретической детекции продуктов амплиф икации («ЭФ» или
другие комплекты реагентов, реком ендованны е ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора).
Разделение ф рагм ентов рекомендуется проводить в агарозном геле толщиной
около 0,6 см, концентрацией агарозы 1 ,7 % , расстоянием между гребенками не
менее 6 см. Количество продукта амплиф икации, вносимого в лунку - 5 мкл. В
ка ж д о м ряду д орож ек геля должен обязательно присутствовать п о л о ж и те л ь н ы й
к о н т р о л ь ПЦР (К+) и м а р ке р м о л е ку л я р н ы х м а сс Д Н К. О птимальная
напряженность электрического поля составляет 10 В/см. Продолжительность
электроф ореза долж на быть достаточной для четкого разделения всех трех
ам плиф ицируемы х ф рагментов.
ВН И М А Н И Е! Р а бота с а м п л и ф и ц и р о в а н н о й Д Н К д о л ж н а п р о в о д и ть с я в
о тд е л ь н о м п о м е щ е н и и с о т р у д н и ко м л а б о р а т о р и и , не п р о и зв о д я щ и м
м а н и п у л я ц и й в ЗО Н Е 1 и ЗО Н Е 2.
И Н ТЕ РП РЕТАЦ И Я Р Е З У Л Ь Т А Т О В
И нтерпретация результатов П Ц Р-исследования проводится по наличию или
отсутствию на электроф ореграм м е специф ических полос амплиф ицированной ДНК.
Д л и н а с п е ц и ф и ч е с ки х п о л о с а м п л и ф и ц и р о в а н н ы х ф р а гм е н то в ДН К:
G S T T 1 - 459 п.н.
G S T M 1 - 2 1 9 п.н.
A L B - 350 п.н.
Р е зул ь та ты а н а л и за п о л и м о р ф и з м а в ге н а х G S T T 1 и G S T M 1 (см. рис.1)
1. О тсутствие в дорож ке полосы 459 п.н. при наличии полосы 350 п.н. - д е л е ц и я в
гене G S T T 1 в го м о з и го т н о м с о с т о я н и и (см. рис. 1; образцы 9, 10).
2. Наличие в дорож ке полосы 459 п.н. при наличии полосы 350 п.н. - не о б н а р уж е н о
д е л е ц и и в ген е G S T T 1 в го м о з и го тн о м с о с т о я н и и (см. рис. 1; образцы 1-8).
3. О тсутствие в дорож ке полосы 219 п.н. при наличии полосы 350 п.н. - д е л е ц и я в
гене G S T M 1 в го м о з и го т н о м с о с т о я н и и (см. рис. 1; образцы 5-9).
4. Наличие в д орож ке полосы 219 п.н. при наличии полосы 350 п.н. - не о б н а р уж е н о
д е л е ц и и в ген е G S T M 1 в го м о з и го тн о м с о с т о я н и и (см. рис. 1; образцы 1-4, 10).
--- стр. 10 ---
5. В д о р о ж ке , с о о т в е т с т в у ю щ е й п о л о ж и т е л ь н о м у к о н т р о л ю этапа ПЦР (К+),
должны быть три полосы на уровне 459, 350 и 219 п.н. (см. рис. 1; образец 12).
6. П о л о са 350 п.н. долж на быть во всех пробах, содерж ащ их Д Н К человека.
7. В д о р о ж ка х , с о о т в е т с т в у ю щ и х о т р и ц а т е л ь н о м у к о н т р о л ю э кс тр а кц и и (ОК) и
о тр и ц а те л ь н о м у к о н т р о л ю эта па ПЦР (К-), не долж но быть никаких полос: (см.
рис.1, образцы 11, 13).
Кроме полос 459, 350 и 219 п.н. в дорож ках могут наблю даться нечеткие размытые
полосы праймер-дим еров, которы е располагаю тся ниже уровня 100 нуклеотидных
пар.
Р е зул ь та т П Ц Р -и с с л е д о в а н и я с ч и та е тс я д о с т о в е р н ы м , е сл и п о л у ч е н ы
п р а в и л ь н ы е р е з у л ь т а ты д л я п о л о ж и т е л ь н о го и о т р и ц а те л ь н о го ко н тр о л ей
а м п л и ф и ка ц и и и о т р и ц а т е л ь н о го ко н т р о л я э к с т р а кц и и Д Н К, в с о о тв е тс тв и и с
табл . 2.
Таблица 2
Р е зул ьта ты д л я ко н тр о л е й р а зл и ч н ы х э та п о в П Ц Р -иссл ед ования
Контроль* Контролируемый этап Специфическая полоса на злекгрофореграмме
ПЦР-исследования 219 п.н. 350 п.н. 459 п.н.
ОК Экстракция РНК/ДНК Нет Нет Нет
К - ПЦР Нет Нет Нет
К+ ПЦР Есть Есть Есть
* См. рис. 1 , образцы 11, 13, 12, соответствую щ ие контролям ОК, К - ,К+ .
ВН И М А Н И Е!
1. Если в д орож ке какого-либо из клинических образцов, при прохождении
положительного контроля амплиф икации, отсутствует полоса 350 п.н.,
необходимо повторить исследование этого клинического образца с первого этапа
анализа (экстракция ДН К). Возможны е причины; ош ибка в процедуре обработки
клинического материала, приведш ая к потере ДНК, или ингибирование ПЦР.
2. Если в дорож ке какого-либо из образцов отсутствую т полосы 350, 459 и 219 п.н., и
присутствую т неспециф ические полосы на разных уровнях, результат анализа по
данном у образцу считается недействительны м. Н еобходимо повторить
исследование этого клинического образца со второго этапа анализа
(амплиф икация). Возм ожны е причины: отсутствие «горячего старта» или
неверный температурны й режим в ячейках амплиф икатора.
3. Появление хотя бы одной из полос 350, 459 и 219 п.н. в отрицательном контроле
ПЦР (К-) и/или отрицательном контроле экстракции Д Н К (ОК) указы вает на
контам инацию реактивов или проб. Требуется повторить анализ проб с первого
этапа анализа (экстракция ДНК), а также предпринять меры по выявлению
источника контаминации.
10
--- стр. 11 ---
Рисунок 1 - пр им еры результатов анализа полиморф изма в генах G S T T 1 и G S T M 1 .
800 п.н.
500 п.н. — ^
400 п.н. -----►
300 п.н.-----►
200 п.н. — ►
100 п.н.
459 п.н.
350 п.н.
219 п.н.
Ш 11 12 13
Обозначения: 1, 2, 3, 4 - делеций в генах G S T T 1 и G S T M 1 в гомозиготном состоянии
не обнаружено: 5, 6, 7, 8 - делеция в гене G S T M 1 в гомозиготном состоянии; 9 -
делеции в генах G S T T 1 и G S T M 1 в гомозиготном состоянии; 10 - делеция в гене
G S T T 1 в гом озиготном состоянии; 11 - отрицательны й контроль экстракции; 12 -
положительный контроль; 13 - отрицательный контроль ПЦР; М - маркер
молекулярных масс.
И
--- стр. 12 ---
СРОК г о д н о с т и . У С Л О В И Я Т Р А Н С П О Р ТИ Р О В А Н И Я и Х Р А Н Е Н И Я
С р о к го д н о с ти . 9 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не
подлежит.
Т р а н с п о р ти р о в а н и е . Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до
8 °С не более 5 сут.
Х ранение. Набор реагентов хранить при тем пературе от 2 до 8 °С.
У с л о в и я о тп у с ка . Для лечебно-проф илактических и санитарно-проф илактических
учреждений.
Ф
Рекламации на качество набора реагентов «А м пл иС е нс® G S T T 1 / G S T M 1 -E P h »
направлять на предприятие-изготовитель ФГУН Ц Н ИИЭ Роспотребнадзора (111123
г. Москва, ул. Н овогиреевская, д. За) в отдел по работе с рекламациями и
организации обучения (тел. (495) 974-96-46, ф акс (495) 916-18-18, e-mail:
products@ pcr.ru)^.
Заведующий НПЛ
ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора
Е.Н. Родионова
Заведующ ий каф едрой клинич|^|
лабораторной диагностики
ГОУ ДПО «РМАПО Росздрава>Л%%!^^
д.м.н. В.В.Долгов
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте; www.amplisens.ru. ^ ^
--- стр. 13 ---
Пронумеровано, прошнурован^ и скреплено
печатью / 3 -______ли ст< $ > о
^Зш.;4иректора
ФГУН ЬЩИИЭ Роспотребнадзора
^^б^!М алеев