Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс® Rickettsia conorii-FL по ТУ 21.20.23.110-274-01897593-2017 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Заместитель директора по
эпидемиологии - Врио директора
Федерального бюджетного учреждения
науки «Центральный научно-
исследовательский институт
З^^^Федеральной службы
защиты прав
благополучия
". Акимкин
2018 г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® Rickettsia conohi-FL
АмплиСенс’
m l
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА IVD
--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ....................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ......................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА............................................................................................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ.................................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ............................................................................5
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.......................................................................7
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ................................7
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ.............................................11
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 14
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАЦИИ ДНК...........................16
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.......................................................................................18
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ...........................................................................18
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ...................................................19
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN)............................20
СОСТАВ........................................................................................................................20
АМПЛИФИКАЦИЯ ДНК С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» .. 20
A. Подготовка пробирок для амплификации........................................................20
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени» .. 21
B. Анализ и интерпретация результатов..................................................................23
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)...................................26
СОСТАВ........................................................................................................................26
АМПЛИФИКАЦИЯ ДНК С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» .. 26
A. Подготовка пробирок для амплификации........................................................26
Б. Проведение ПЦР с детекцией в режиме «реального времени»....................27
B. Анализ и интерпретация результатов..................................................................28
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ....................31
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ........................................33
ПРИЛОЖЕНИЕ 1........................................................................... 34
стр. 2 из 35
--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:
BKO-FL - экзогенный внутренний контрольный образец
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксирибонуклеотидтрифосфат
К+ - положительный контроль ПЦР
К- - отрицательный контроль ПЦР
ОК - отрицательный контроль экстракции
ОКО - отрицательный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РУ - регистрационное удостоверение
УДГ - урацил-ДНК-гликозилаза
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс® Rickettsia conorii-FL, далее -
набор реагентов, предназначен для качественного определения ДНК Rickettsia conorii
в биологическом материале (кровь, тканевой (аутопсийный, биопсийный) материал,
смывы с очага первичного аффекта, ликвор, клещи) методом ПЦР с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации. Набор
реагентов используется в клинической лабораторной диагностике.
Материалом для проведения ПЦР служат пробы ДНК, экстрагированной из
исследуемого материала.
В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011 № 323-ФЗ «Об основах
охраны здоровья граждан в Российской Федерации» ПЦР-исследование является
одним из методов всестороннего обследования пациента, на основании которых
лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия по лечению
пациента.
Показания и противопоказания к применению набора реагентов
Набор реагентов используется для исследования биологического материала,
полученного от лиц с подозрением на клещевую пятнистую лихорадку (клещевой
риккетсиоз) вне зависимости от формы и наличия манифестации заболевания, и
клещей.
Противопоказания отсутствуют, за исключением случаев, когда забор материала
не может быть осуществлен по медицинским показаниям.
стр. 3 из 35
--- стр. 4 ---
Потенциальные пользователи медицинского изделия
К работе с набором реагентов допускаются только медицинские работники,
обученные методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-
диагностической лаборатории в установленном порядке (СП 1,3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней»),
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип тестирования основывается на экстракции ДНК из образцов
исследуемого материала с экзогенным внутренним контрольным образцом (BKO-FL)
и одновременной амплификации участков ДНК R.conorii и ДНК BKO-FL с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией. BKO-FL позволяет контролировать все
этапы ПЦР-исследования для каждого образца и оценивать влияние ингибиторов на
результаты ПЦР-исследования.
С полученными на этапе экстракции пробами ДНК проводится реакция
амплификации участков ДНК при помощи специфичных к этим участкам праймеров и
фермента Taq-полимеразы. В составе реакционной смеси присутствуют
флуоресцентно-меченые олигонуклеотиды, которые гибридизуются с
комплементарным участком амплифицируемой ДНК-мишени, в результате чего
происходит нарастание интенсивности флуоресценции. Это позволяет
регистрировать накопление специфического продукта амплификации путем
измерения интенсивности флуоресцентного сигнала с системой детекции
флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени».
Набор реагентов содержит систему защиты от контаминации ампликонами за счет
применения фермента урацил-ДНК-гликозилазы (УДГ) и дезоксиуридинтрифосфата.
Фермент УДГ распознает и катализирует разрушение цепей ДНК, содержащих
дезоксиуридин, но не ДНК, содержащей дезокситимидин. Дезоксиуридин отсутствует
в природной ДНК, но всегда присутствует в ампликонах, поскольку
дезоксиуридинтрифосфат входит в состав смеси дНТФ в реагентах для
амплификации. Дезоксиуридин делает контаминирующие ампликоны
восприимчивыми к разрушению ферментом УДГ до начала амплификации ДНК-
мишени, и, следовательно, они не могут быть в дальнейшем амплифицированы.
Фермент УДГ термолабилен и инактивируется при нагревании выше 50 °С и
поэтому не разрушает ампликоны мишени, нарабатываемые в процессе ПЦР.
стр. 4 из 35
--- стр. 5 ---
На этапе амплификации одновременно в одной пробирке проводятся 2 реакции -
амплификация ДНК R.conorii, а также амплификация последовательности BKO-FL.
Результаты амплификации ДНК R.conorii, а также ДНК BKO-FL регистрируются по 2
различным каналам флуоресцентной детекции:
Таблица 1
Канал для флуорофора FAM JOE f
ДНК-мишень ДНК BKO-FL ДНК R.conorii
Область амплификации искусственная нуклеотидная
последовательность ompA ген
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN
Форма 2: «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
Формы комплектации 1 и 2 предназначены для проведения амплификации ДНК с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» и
позволяют выявлять ДНК в качественном формате. Для проведения полного ПЦР-
исследования необходимо использовать комплекты реагентов для экстракции ДНК,
рекомендованные Производителем.
Форма комплектации 1 рассчитана на проведение 55 реакций амплификации,
включая контроли. Форма комплектации 2 рассчитана на проведение 48 реакций
амплификации, включая контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие характеристики:
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
Таблица 2
Вид
исследуемого
материала
Объем образца
для экстракции,
мкл
Комплект для
экстракции ДНК
Комплект для
амплификации
Аналитическая
чувствительность
(предел
обнаружения);
копий /мл
Кровь Осадок+100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-50 FN, FRT-L
10^
Тканевой
(биопсийный,
аутопсийный)
материал
100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-50 FN, FRT-L
10"
Ликвор Осадок+100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-50 FN, FRT-L
10"
стр. 5 из 35
--- стр. 6 ---
Вид
исследуемого
материала
'
Объем образца
для экстракции,
мкл
Компле|Ф для
экстракции ДНК
Комплект для
амплификации
Аналитическая
чувствительность
(предел
обнаружения),
копий/мл
Смыв с
первичного
аффекта
100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-50 FN, FRT-L
10^
Клещи 100 «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-50 FN, FRT-L
10^
Клещи 100 «МАГНО-сорб»
«ПЦР-комплект»
вариант
FRT-50 FN, FRT-L
10^
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении правил, указанных в
разделах «Взятие, транспортирование и хранение исследуемого материала» и
«Подготовка исследуемого материала к экстракции ДНК».
Аналитическая специфичность
Аналитическая специфичность набора реагентов доказана при исследовании
следующих штаммов микроорганизмов; флавивирусов: WNV (вирус Западного
Нила), JEV (вирус японского энцефалита), OHFV (вирус омской геморрагической
лихорадки), TBEV (вирус клещевого энцефалита), Bartonella henselae, Anaplasma
phagocytophlllum, Babesia microti, Leptospira kirschneri, L. borgpetersenii. Shigella
sonne, S. flexneri. Salmonella typhi, S. enteritidis, Klebsiella pneumonia, Esherichia coll
NCTC 9001, Enterococcus faecalis. Staphylococcus aureus, S. saprophyticus.
Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae. Yersinia pestis, a
также геномной ДНК человека. При тестировании образцов ДНК
вышеперечисленных микроорганизмов, а также ДНК человека, ДНК клещей и ДНК
грызунов неспецифических реакций выявлено не было.
стр. 6 из 35
--- стр. 7 ---
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Таблица 3
Результаты тестирования набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® Rickettsia conoriV-FL в сравнении с референтными методами
Тип
образцов
Результаты исследования
набора реагентов АмплиСенс*
Rickettsia conorii- FL
Результат сравнения с
референтным методом
выявления специфических
антител
Результат сравнения с
референтным методом
секвенирования^
положительных отрицательных положительных отрицательных
Кровь
Всего
исследовано
198 образцов
положительных 132 0 132 0
отрицательных 66 0 0 66
Смыв с
первичного
аффекта
Всего
исследовано
52 образца
положительных 44 0 44 0
отрицательных 8 0 0 8
Для оценки диагностической чувствительности были использованы:
- 198 образцов бактериального осадка крови от пациентов с диагнозом
«Астраханская риккетсиозная лихорадка». Диагноз был подтвержден на
основании клинических симптомов: лихорадка, сыпь, первичный аффект,
регионарный лимфаденит, и наличия сероконверсии специфических антител,
определенных с помощью набора реагентов для диагностики in vitro IgG/IgM-
антитела к Rickettsia conorii («Вирсел, Л.С.», Испания).
- 52 образца смывов с первичного аффекта, полученных от 52 пациентов из
вышеописанной группы.
Таблица 4
Результаты тестирования набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® Rickettsia conor//-FL при исследовании материала от пациентов с
иной этиологией заболевания и клещей, собранных с неэндемичной по
:Ш.., , ■
Тип образцов
Результаты исследования набора
реагентов для диагностики in
vitro АмплиСенс" Rickettsia
conorii-FL
Материал от пациентов с иной
этиологией заболевания и клещей,
собранных с неэндемичной по
R.conorii территории
положительных отрицательных
Кровь
Всего
исследовано
25 образцов
положительных 0 0
отрицательных 0 25
Смыв с
первичного
аффекта
Всего
исследовано
25 образцов
положительных 0 0
отрицательных 0 25
Ликвор
Всего
исследовано
25 образцов
положительных 0 0
отрицательных 0 25
^ в качестве референтного метода использовался набор реагентов для диагностики in vitro IgG/IgM-
антитела к R ickettsia co n o rii («Вирсел, Л.С.», Испания) РУ № ФСЗ 2009/05430 от 29 октября 2014 года
^ Проведено секвенирования методом Сэнгера участка ДНК длиной 170-176 н.п. из биологических
проб на приборе ABIPrism 3100.
--- стр. 8 ---
Тип образцов
Результаты исследования набора
. ^ реагентов диагностики in
’ vitro АмплиСенс® Rickettsia
cononi-FL
. j i i____Li_________________
Материал от пациентов с иной
этиологией заболевания и клещей,
собранных с неэндемичной по
R.conohi территории
положительных отрицательных
Тканевой
(биопсийный,
аутопсийный)
материал
Всего
исследовано
25 образцов
положительных 0 0
отрицательных 0 25
Клещи
Всего
исследовано
25 образцов
положительных 0 0
отрицательных 0 25
Для оценки диагностической специфичности были использованы образцы
осадков крови, ликвора, тканевого (биопсийного, аутопсийного) материала, смывов с
первичного аффекта, полученных от пациентов с иной этиологией заболевания (по
25 образцов каждого вида биологического материала), а также на 25 образцах
клещей D.reticulatus, собранных на неэндемичной по Rconor/7 территории.
Таблица 5
Результаты анализа модельных образцов ликвора, аутопсийного материала,
В и д g-'
исследуем<ф
материала
Объем
исследуе
мого
образца,
мкл
Концентрация
ДНК R.conorii
М-1 в образце,
копий/мл
i Комп|[ 1ект
speareni^ для
Ькстрак^и ДНК
Число конта-
минйрованных
об'разцов
...
Число
положительных
резульУ1тов
%
Аутопсийный
материал 100 1x10^ «РИБО-преп» 20 20 100
Ликвор 100 1x10" «РИБО-преп» 20 20 100
Клещи
100 1х10" «РИБО-преп» 20
40 100
100 1x10^ «МАГНО-сорб» 20
Для оценки диагностической чувствительности набора реагентов при
исследовании видов материалов, для которых нет репрезентативной выборки от
больных риккетсиозом, вызванным R.conohi, а также при исследовании клещей
испытание проводили с использованием модельных образцов биологического
материала, контаминированного штаммом R.conohi в концентрации 10 коп/мл.
стр. 8 из 35
--- стр. 9 ---
Таблица 6
Диагностические характеристики набора реагентов для диагностики
in vitro АмплиСенс® Rickettsia conorii-FL
■ 7 : ■ • ■ ■ ■ . . ••
- ■;!;
Тип образцо в i
;■
В ср ав н ен и и с s
.{э ^ е р е н т н ы м м етодом
вы явл ения
” с п ец и ф и ч ески х
; " а н ти тел ’
П ри иссл едовании м атериала
от бо л ьн ы х с иной этиол о гией
заб ол евания и от клещ ей,
соб ран ны х на неэнд ем ично й
территории
В ср авн ении с
реф ерен тн ы м
м ето до м
с екв ен и р о в ан и я ’
П ри иссл едовании
м од ел ьны е
о бр азцо в’; ’
Я .' if * ! ! . ! ' ■ ' : S ! * s
Д и агн о сти ческая ,
3, ч ув ствител ьн ость
(с д о в ер и тел ь н о й I s
в е р о я т н о с т ь ю 9 5 % ) м
Щ ‘ и н тер вал е, % В
Д иагн ости ческая
специф ичность
(с д овер ител ьн ой
веро ятн остью 95 %) в
интервал е, %
Д и агн о сти ческая
чувствител ьн ость
(с д о в ер и тел ь н о й
в ер о я тн о сть ю 95 % )
в интер вал е, %
Д и агн ости ческая
чувствител ьность
(с д овер ител ьн ой
веро ятностью 95 %)
в интервале, %
Кровь 59,6-73,2 86,3-100 97,2-100 —
Смывы с
первичного
аффекта
71,9-93,1 86,3-100 92-100 —
Ликвор — 86,3-100 — 84,6-100
Тканевой
(аутопсийный,
биопсийный)
материал.
— 86,3-100 — 84,6-100
Клещи — 86,3-100 — 84,6-100
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно
биологические (ПЦР) исследования биологического материала на наличие
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-
эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами» и методических указаний МУ
1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе необходимо всегда выполнять следующие требования:
- Температура в помещении лаборатории должна быть от 20 до 28 °С,
относительная влажность - от 15 до 75%.
Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать
работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
^ в качестве референтного метода использовался набор реагентов для диагностики in vitro IgG/IgM-
антитела к R ickettsia co n o rii («Вирсел, Л.С.», Испания) РУ № ФСЗ 2009/05430 от 29 октября 2014 года
'' Проведено секвенирования методом Сэнгера участка ДНК длиной 170-176 н.п. из биологических
проб на приборе ABIPrism 3100.
^ Модельные образцы ликвора, аутопсийного материала и клещей, контаминированных штаммом
R .c o n o riiM -^ в концентрации 10^ коп/мл
стр. 9 из 35
--- стр. 10 ---
паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы, используя дезинфицирующие
средства в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
паразитарных болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в
отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Экстракции,
продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы,
оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена предыдущая стадия
процесса.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также
использованные реагенты, упаковку®, биологический материал, включая
материалы, инструменты и предметы, загрязненные биологическим материалом,
следует удалять в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10
«Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими
отходами».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих
продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого,
поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны,
оборудования и реагентов.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для
автоматических дозаторов с фильтром^. Одноразовую пластиковую посуду
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер,
содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для
обеззараживания медицинских отходов.
Поверхности столов, а также помещения, в которых проводится постановка ПЦР,
до начала и после завершения работ необходимо подвергать
ультрафиолетовому облучению в течение 30 мин.
- Набор реагентов предназначен для одноразового применения для проведения
ПЦР-исследования указанного количества проб (см. раздел «Состав»).
- Набор реагентов готов к применению согласно данной инструкции. Применять
набор строго по назначению.
^ Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использованные реагенты,
упаковка относятся к классу опасности медицинских отходов Г.
' Для удаления надосадочной жидкости в процессе экстракции используются одноразовые наконечники
без фильтра.
стр. 10 из 35
--- стр. 13 ---
надосадочной жидкости (например, «ОМИ», ООО «Утес», Россия, или
аналогичный).
18, Автоматические дозаторы переменного объема (например, ООО «Биохит»,
Россия, или аналогичные).
19. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24 до минус 16 °С.
20.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09.
21 .Одноразовые пластиковые контейнеры для сброса и инактивации материалов.
Экстракция ДНК из исследуемых образцов
22. Комплект реагентов для экстракции ДНК - «РИБО-преп» (РУ № ФОР
2008/03147), «МАГНО-сорб» (РУ № ФОР 2010/07265) или другие
рекомендованные Производителем.
23. Дополнительные материалы и оборудование для экстракции ДНК - согласно
инструкции к комплекту реагентов для экстракции ДНК.
При использовании автоматических станций для экстракции нуклеиновых кислот:
24. Автоматическая станция для экстракции НК (например. Neon 100 (Xiril AG (Ксирил
АГ), Швейцария) и другие, рекомендованные Производителем).
25. Набор реагентов (например, «МАГНО-сорб» (РУ № ФОР 2010/07265)) и набор
расходных материалов к автоматической станции.
Амплификация с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов
амплификации
26.Одноразовые полипропиленовые пробирки при работе с «ПЦР-комплектом»
вариант FRT-50FN:
а) завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки объемом 1,5 мл
(например, Ахудеп, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные) для
приготовления реакционной смеси.
б) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с выпуклой или плоской
оптически прозрачной крышкой или пробирки объемом 0,2 мл в стрипах по
8 шт. с прозрачными крышками (например, Ахудеп, Inc. («Эксиджен, Инк»),
США, или аналогичные) - при использовании прибора планшетного типа;
в) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с плоской крышкой
(например. Ахудеп, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные) или
пробирки для ПЦР к Rotor-Gene объемом 0,1 мл в стрипах по 4 шт. с крышками
(например, QIAGEN GmbH («Киаген ГмбХ»), Германия, или аналогичные) - при
использовании прибора роторного типа.
27.Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фильтром до
стр. 13 из 35
--- стр. 14 ---
200 мкл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные).
28. Штативы для пробирок объемом 0,2 мл или 0,1 мл (в соответствии с
используемыми комплектами реагентов) (например, Axygen, Inc. («Эксиджен,
Инк»), США, или аналогичные).
29. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс) (например, «БАВ-ПЦР-
«Ламинар-С», ЗАО «Ламинарные системы», Россия, или аналогичный).
30. Вортекс (например, SIA Biosan, Латвия, или аналогичный).
31 .Автоматические дозаторы переменного объема (например, ООО «Биохит»,
Россия, или аналогичные).
32. Программируемый амплификатор с системой детекции флуоресцентного сигнала
в режиме «реального времени», имеющий 2 или более независимых каналов
флуоресцентной детекции (например, Rotor-Gene О (QIAGEN GmbH («Киаген
ГмбХ»), Германия), CFX96 (Bio-Rad Laboratories, Inc. («Био-Рад Лабораториз,
Инк.»), США) и другие рекомендованные Производителем).
33. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24 до минус 16 °С.
34.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09.
35.Емкость для сброса наконечников.
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Материалом для исследования служат:
- кровь,
- тканевой (аутопсийный, биопсийный) материал,
- ликвор,
- смывы с первичного аффекта,
- клещи.
Кр о в ь
Для получения бактериального осадка крови взятие крови следует производить
натощак или через 3 часа после приема пищи одноразовой иглой диаметром 0,8-1,1
мм в пробирку (специальную вакуумную систему) с 6 % раствором ЭДТА (конечная
концентрация после забора крови составляет 0,3 %) или 3,2 % раствором цитрата
натрия в качестве антикоагулянта. После взятия крови пробирку следует несколько
раз плавно перевернуть вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно
перемешалась с антикоагулянтом. (В противном случае кровь свернется и
экстракция ДНК станет невозможной!). После плавного перемешивания пробирку
поместить в штатив.
стр. 14 из 35
--- стр. 15 ---
Допускается хранение образцов крови до получения и подготовки лейкоцитов к
экстракции ДНК;
- при температуре от 20 до 25 °С - в течение 2 часов;
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 12 часов.
Недопустимо замораживание образца цельной крови!
Подготовку образцов провести не позднее указанного времени.
Тканевой (аутопсийный, биопсийный) материал
Материал отбирают из зоны предполагаемого местонахождения возбудителя
инфекции, из поврежденной ткани или из участка, пограничного с поврежденным
местом, стерильным инструментом (например, пинцет) в стерильный пластиковый
контейнер объемом 50 мл с плотно закрывающейся крышкой или пробирку объёмом
2 мл. Пробирку плотно закрывают крышкой.
Допускается хранение образцов тканевого материала:
- при комнатной температуре - в течение 6 часов;
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 3 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение 1 недели;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Ликвор (спинномозговая жидкость)
Спинномозговую жидкость в количестве не менее 1 мл собирают, используя
одноразовые иглы, в одноразовые пробирки объемом 2,0 мл.
Допускается хранение образцов ликвора до проведения ПЦР-исследования:
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 1 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение 1 недели;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание материала.
Смывы с первичного аффекта
Материал забирают нестерильным ватным тампоном на пластиковой основе
(зонд). Тампон предварительно смачивают в физиологическом растворе и проводят
движением с легким нажимом по участку кожи с первичным аффектом. Затем
рабочую часть зонда с ватным тампоном помещают в одноразовую пробирку с
защелкивающейся или завинчивающейся крышкой, содержащей 300 мкл
физиологического раствора, и аккуратно обламывают пластиковый стержень на
расстоянии не более 0,5 см от рабочей части зонда так, что тампон вместе с
материалом остается в пробирке в физиологическом растворе. Пробирку плотно
закрывают.
стр. 15 из 35
--- стр. 24 ---
Ф О РМ А КОМ ПЛЕКТАЦИИ 1. КАЧЕСТВЕН Н Ы Й Ф О РМ АТ
образец считать сомнительным и рекомендовать повторное взятие материала для
анализа.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше, прилагаемом к набору
реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным, если получены
правильные результаты для контролей этапов экстракции и амплификации
ДНК в соответствии с табл. 10 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 10
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследования
Конт
роль Щ
контрол»^К|@^тап;
ПЦР-исследования
1^,'' *
Значение порогового
Ф луорос!
| | | Р | | | | | | | Р | й ^ ^
цикла по каналу для
bopa<Ct)
JOE
ОК Экстракция ДНК опоеделено меньше
граничного отсутствует
К- ПЦР отсутствует отсутствует
К+ ПЦР опоеделено меньше
граничного
опоеделено меньше
граничного
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение порогового цикла {Ct) по
каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE отсутствует или превышает граничное
значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех образцов,
в которых не обнаружена специфическая ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналу для флуорофора JOE
определено значение порогового цикла (Cf). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
принять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить
ПЦР-исследование для всех образцов, в которых обнаружена специфическая
ДНК, начиная с этапа экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров РАМ и/или
JOE определено значение порогового цикла {Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
принять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая ДНК.
стр. 24 из 35
--- стр. 25 ---
Ф О РМ А КОМ ПЛЕКТАЦИИ 1. КАЧЕСТ ВЕН Н Ы Й Ф О РМ АТ
4. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или
параметров расчета базовой линии. Если результат получен при правильном
уровне пороговой линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
стр. 25 из 35
--- стр. 26 ---
Ф О РМ А КОМ ПЛЕКТАЦИИ 2. КАЧЕСТ ВЕН Н Ы Й Ф О РМ АТ
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)
СОСТАВ
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L амплификации фрагмента
ДНК Rickettsia conorii с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени» позволяет проводить ПЦР-исследование в качественном
формате. Комплект реагентов включает;
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь Rickettsia conorii-Lyo Порошок белого цвета -
48 пробирок
объемом
0,2 мл
К+ Rickettsia conorii Прозрачная бесцветная
жидкость 0.2 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
BKO-FL Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
ОКО Прозрачная бесцветная
жидкость 1.2 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 48 реакций амплификации, включая
контроли.
АМПЛИФИКАЦИЯ ДНК С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
А. Подготовка пробирок для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем пробы ДНК - 25 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок для амплификации с готовой
лиофилизированной реакционной ПЦР-смесью Rickettsia conorii-Lyo для
амплификации ДНК исследуемых и контрольных образцов (количество контрольных
образцов см. в пункте 3).
2. В подготовленные пробирки внести по 25 мкл проб ДНК, полученных в
результате экстракции из исследуемых образцов.
ВНИМАНИЕ! При добавлении проб ДНК, экстрагированных с помощью комплектов
реагентов для проведения экстракции методом магнитной сепарации, необходимо
избегать попадания сорбента в реакционную смесь.
ВНИМАНИЕ! Содержимое пробирок необходимо тщательно перемешать
пипетированием, не допуская появления пузырьков воздуха.
3. Поставить контрольные реакции.
стр. 26 из 35
--- стр. 29 ---
Ф О РМ А КОМ ПЛЕКТАЦИИ 2. КАЧЕСТ ВЕН Н Ы Й Ф О РМ АТ
Таблица 14
Интерпретация результатов анализа исследуемых образцов
Значение порогового
флуорос
цикла по каналу для
t)opa (Cf) ^_________ Результат
‘ FAM . , JOE
определено меньше
граничного отсутствует ДНК Rickettsia conorii
НЕ обнаружена
определено
или отсутствует
опоеделено меньше
граничного
ДНК Rickettsia conorii
обнаружена
отсутствует или
определено больше
граничного
отсутствует или
определено больше
граничного
Невалидный*
определено меньше
граничного
определено больше
граничного Сомнительный**
* В случае получения невалидного результата необходимо провести повторное
ПЦР-исследование соответствующего исследуемого образца, начиная с этапа
экстракции ДНК.
** В случае получения сомнительного результата необходимо провести повторное
ПЦР-исследование соответствующего исследуемого образца, начиная с этапа
экстракции. В случае повторения аналогичного результата образец считать
положительным. При получении отрицательного результата в повторной постановке
образец считать сомнительным и рекомендовать повторное взятие материала для
анализа.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше, прилагаемом к набору
реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным, если получены
правильные результаты для контролей этапов экстракции и амплификации
ДНК в соответствии с табл. 15 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 15
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследования
Конт
роль
Контрол и|Э^мый этап
ПЦР-исс1^ования
Значение порогового
флуорос
цикла по каналу для
^ора (Ct)
FAM JOE 1
ОК Экстракция ДНК опоеделено меньше
граничного отсутствует
К- ПЦР отсутствует отсутствует
к+ ПЦР опоеделено меньше
граничного
опоеделено меньше
граничного
стр. 29 из 35
--- стр. 30 ---
Ф О РМ А КОМ ПЛЕКТАЦИИ 2. КАЧЕСТ ВЕН Н Ы Й Ф О РМ АТ
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение порогового цикла (Ct) по
каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE отсутствует или превышает граничное
значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех образцов,
в которых не обнаружена специфическая ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналу для флуорофора JOE
определено значение порогового цикла (Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая ДНК, начиная с этапа экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров РАМ и/или
JOE определено значение порогового цикла {Cf). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или
параметров расчета базовой линии. Если результат получен при правильном
уровне пороговой линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
стр. 30 из 35
--- стр. 31 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не
подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности,
указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано
иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до
8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами
крытых транспортных средств. Допускается транспортирование при температуре от 2
до 25 °С не более 3 сут.
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN при получении
разукомплектовать в соответствии с указанными температурами хранения.
Хранение.
Форма комплектации 1. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 FN
хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 С, кроме ПЦР-смеси-FL
Rickettsia conori и ПЦР-буфера-Н. ПЦР-смесь-FL Rickettsia conorii, ПЦР-буфер-Н
хранить в морозильной камере при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-
смесь-FL Rickettsia conor/7 хранить в защищенном от света месте.
Форма комплектации 2. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить
в холодильной камере при температуре от 2 до 8 “С. ПЦР-смесь Rickettsia conorii-Lyo
хранить в пакетах с влагопоглотителем в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать регламентированный
температурный режим.
стр. 31 из 35
--- стр. 32 ---
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
Производитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик
набора реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуатационной
документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий
транспортирования, хранения и применения.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по адресу 111123, г.Москва,
ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail: cs@pcr.ru^^.
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению
набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и
обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение в отдел по работе с рекламациями по адресу, указанному
выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в РФ -
Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с
действующим законодательством.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ Е.Н. Родионова
Е.В. Ржевская
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.annplisens.ru.
стр. 32 из 35
--- стр. 33 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫ Е В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF
LOT
IVD
VER
ш1
ж
Номер по каталогу
V
Код партии
Медицинское изделие •
для диагностики in vitro ^ 1 ^
Дата изменения
Температурный
диапазон гО
Изготовитель
f
Осторожно! Обратитесь
к инструкции по
применению
Содержимого
достаточно для
проведения п-
количества тестов
Использовать до
Обратитесь к
инструкции по
применению
Не допускать
воздействия
солнечного света
Дата изготовления
Беречь от влаги
стр. 33 из 35