Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс® Dengue virus-FL по ТУ 9398-239-01897593-2016 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
V
iк
к
кV
VV
кV
к
«УТВЕРЖДАЮ»
Зам. директора Федерального
бюджетного учреждения науки
«Центральный научно-
исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
кV
к к
кS
V
V
V ч
4
набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® Dengue virus-fL
кк
к
кккк
кi
к
\ккк,
к
АмплиСенс
®
ш 1
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА IVD
--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ...........................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ..............................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА....................................................................................................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ........................................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.................................................................................6
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ............................................................................8
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ..................................9
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ ................................................12
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА. 15
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ РНК .........................17
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ
ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА .................................................................................18
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ................................................................................19
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ .......................................................19
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F)................................21
СОСТАВ..................................................................................................................................21
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ
«РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ».................................................................................................21
A. Подготовка пробирок для ОТ-ПЦР ........................................................................22
Б. Проведение ОТ-ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» ..............23
B. Анализ и интерпретация результатов...................................................................24
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L) .....................................27
СОСТАВ..................................................................................................................................27
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ
«РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ».................................................................................................27
A. Подготовка пробирок для ОТ-ПЦР.........................................................................27
Б. Проведение ОТ-ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» ..............28
B. Анализ и интерпретация результатов...................................................................29
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ ......................32
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ...........................................34
стр. 2 из 34
--- стр. 3 ---
I
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:
ВКО /CZ-гес - экзогенный внутренний контрольный образец
ДНК -дезоксирибонуклеиновая кислота
кДНК - комплементарная ДНК, получаемая в реакции обратной
транскрипции на матрице РНК
К+ - положительный контроль ОТ-ПЦР
К- - отрицательный контроль ОТ-ПЦР
ОК - отрицательный контроль экстракции
ОКО - отрицательный контрольный образец
ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией
ПК - положительный контроль экстракции
пко - положительный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РНК - рибонуклеиновая кислота
РУ - регистрационное удостоверение
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
DV
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
-Dengue virus, вирус денге
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс® Dengue virus-FL, далее ~
набор реагентов, предназначен для качественного определения РНК вируса денге
(1-4 типов) в биологическом материале (плазма крови, тканевой (аутопсийный,
биопсийный) материал (ткани мозга и внутренних органов), моча, слюна, комары
(гомогенат)) методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов
амплификации. Набор реагентов используется в клинической лабораторной
диагностике. Материалом для проведения ОТ-ПЦР служат пробы РНК,
экстрагированной из исследуемого материала.
В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011 Nq 323-ФЗ «Об основах
охраны здоровья граждан в Российской Федерации» ПЦР-исследование является
одним из методов всестороннего обследования пациента, на основании которых
лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия по лечению
пациента.
Показания и противопоказания к применению набора реагентов
Набор реагентов используется для исследования биологического материала,
полученного от лиц с подозрением на лихорадку денге.
По литературным данным диагностическая чувствительность метода ПЦР,
использующегося для определения РНК вируса денге, обладает наибольшими
стр. 3 из 34
--- стр. 5 ---
I»
флуоресцентного сигнала. Детекция флуоресцентного сигнала осуществляется
непосредственно в ходе ПЦР с помощью амплификатора с системой детекции
флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени».
На этапе ОТ-ПЦР одновременно в одной пробирке проводятся 2 реакции -
амплификация кДНК Dengue virus, а также амплификация последовательности кДНК
ВКО /CZ-rec. Результаты амплификации кДНК Dengue virus и кДНК ВКО /CZ-rec
регистрируются по 2 различным каналам флуоресцентной детекции;
Таблица 1
Канал для флуорофора FAM JOE
кДНК-мишень кДНК ВКО /CZ-rec кДНК Dengue virus
Область амплификации искусственная нуклеотидная
последовательность З’-UTR
9
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Набор реагентов вылускается в 2 формах комплектации:
Форма 1 >
Включает комллект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F
Форма 2
Включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
Формы комплектации 1 и 2 предназначены для проведения обратной
транскрипции РНК и амплификации кДНК с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией в режиме «реального времени» и позволяют выявлять РНК в
качественном формате. Для проведения полного ПЦР-исследования необходимо
использовать комплекты реагентов для экстракции РНК, рекомендованные
Производителем. Форма комплектации 1 рассчитана на проведение 55 реакций
обратной транскрипции и амплификации, включая контроли. Форма комплектации 2
рассчитана на лроведение 48 реакций обратной транскрилции и амплификации,
включая контроли.
Ф
стр. 5 из 34
--- стр. 6 ---
@
Для данного набора реагентов применимы следующие характеристики:
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Таблица 2
Вид
исследуемого
материала
Объем
образца для
экстракции,
мкл
Комплект для
экстракции
РНК
Комплект для
амплификации
Аналитическая
чувствительность
(предел
обнаружения),
копий /мл
Плазма крови 100
«РИБО-преп»
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-50 F,
FRT-L
1000
Комары
(гомогенат) 100
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-50 F,
FRT-L
1000
Моча 100
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-50 F,
FRT-L
1000
Слюна 100
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-5P F,
FRT-L
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-50 F,
FRT-L
1000
5000
Тканевой
(аутопоийный,
биопсийный)
материал
100
Плазма крови
200
«МАГНО-сорб»
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-50 F,
FRT-L
1000
1000
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-50 F,
FRT-L
100
Моча 1000
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-50 F,
FRT-L
100
i
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении правил, указанных в
разделах «Взятие, транспортирование и хранение исследуемого материала» и
«Подготовка исследуемого материала к экстракции РНК»,
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает фрагменты РНК заявленных вирусов: вируса
денге 1 типа (штамм DENV-1/8/Tailand/01/2013), вируса денге 2 типа (штамм DENV-
2/131/Philippines/12/2013), вируса денге 3 типа (штамм DENV-3/25/Thailand/01/2013);
вируса денге 4 типа (штамм DENV-4/122/Vietnam/11/2013).
Аналитическая специфичность набора реагентов доказана при исследовании
образцов, содержащие геномную кДНК гетерологичных штаммов флавивирусов,
которые могут присутствовать в исследуемых образцах и давать
ложноположительные результаты на флавивирусы: WNV {West Nile virus, вирус
стр. 6 из 34
--- стр. 7 ---
Западного Нила, ВЗН; штаммы Ед-101 и LEIV-Vlg99-27889-human), JEV {Japanese
encephalitis virus, вирус японского энцефалита, ВЯЭ, штамм Накаяма), TBEV {Tick-
borne encephalitis virus, вирус клещевого энцефалита, ВКЭ; штаммы Айна, Обор-4,
Абсеттаров), LGT {Langat virus, вирус Лангат; штамм ТР-21), POWV {Powassan virus,
вирус Повассан; штамм Баере), USUV {Usutu virus, вирус Усуту), LIV {Louping ill virus,
вирус шотландского энцефаломиелита овец, ШЭО; штамм Адра-7), OHFV {Omsk
hemorrhagic fever virus, вирус Омской геморрагической лихорадки, ОГЛ; штаммы
Голошубин, Крутинка-73/640, Веселовка-752).
А также были исследованы образцы, содержащие кДНК/ДНК микроорганизмов,
способных вызывать заболевания со сходной клинической симптоматикой, и
которые могут встречаться на тех же территориях, где циркулирует вирус денге;
CCHFV {Сптеап-Сопдо hemorrhagic fever virus, вирус Крым-Конго геморрагической
0 лихорадки, ККГЛ; штамм 1ЬАг10200), CHIKV {Chikungunya virus, вирус Чикунгунья,
1 штамм Ross late), Leptospira spp (серогруппа grippotyphosa - штамм MV5; серогруппа
f ?
bataviae - штамм HS26, серогруппа sejroe - штамм 3705), риккетсии группы
клещевых пятнистых лихорадок {Rickettsia sibirica (штамм Нецветаев), R. сопогИ
(штамм М-1), R. raoultii (Еланда 23/95, Кызыл-Орда 7/14), R. heilongjiangensis (штамм
Приморье 25/81), R. slovaca (штамм Карпунине 19/69), R. canadensis (штамм 2678),
A.phagocytophillum (образец из клеща l.ricinus), Babesia microti (изолят ДНК из
грызунов), Bartonella henselae (изолят ДНК из клещей l.persulcatus) , Yersinia pestis
(вакцинный штамм ЕВ НИИЭГ).
Геномная ДНК человека, выделенная из плаценты, образцов плазмы крови,
слюны и мочи, и образцы ДНК комаров Aedes albopictus были использованы для
^ доказательства отсутствия перекрёстных реакций с ДНК-материалом пациента и
комаров.
При тестировании образцов РНК штаммов вируса денге 1-4 типов во всех
случаях был получен положительный результат.
При тестировании кДНК/ДНК вышеперечисленных организмов, ДНК человека и
комаров неспецифических реакций выявлено не было.
Информация об известных интерферирующих соединениях указана в разделе.
«Интерферирующие вещества и ограничения по использованию проб исследуемого
материала».
стр. 7 из 34
--- стр. 8 ---
Таблица 3
Результаты тестирования набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® Dengue virus-fL в сравнении с референтным методом и набором
реагентов методом ПЦР
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
У
? Тип образцов
г . _
Результаты исследования
набора реагентов для
диагностики in vitro
АмплиСенс®Оелдае virus-FL
Результаты сравнения
с референтным
методом^
Результаты сравнения
с набором реагентов
методом ПЦР''
положи
тельных
отрица
тельных
положи
тельных
отрица
тельных
Плазма крови
Всего иссле
довано 179
образцов
положительных 124 0 122 2
отрицательных 5 50 1 54
3
Моча
Всего иссле
довано 110
образцов
положительных 48 0 45
отрицательных 12 50 0 62
1
Слюна
Всего после-
довано 90
образцов
положительных 33 0 32
отрицательных 7 50 0 57
Комары (гомогенат)
Всего иссле
довано 50
образцов
положительных
отрицательных
- - 252__
0
0
25
Тканевой
(аутопсийный,
биопсийный)
материал, а именно
ткани мозга и
внутренних органов
Всего иссле
довано 50
образцов
положительных - - 25 0
отрицательных - - 0 25
9
Были использованы:
Образцы плазмы крови - 179 образцов от пациентов с лихорадками различной
этиологии. Для 129 образцов диагноз «лихорадка денге» подтвержден по
наличию сероконверсии специфических антител к вирусу денге с использованием
набора реагентов для диагностики in vitro вирусных инфекций методом непрямой
иммунофлуоресценции, варианты исполнения: Mosaic Dengue virus types 1-4 IIFT
(IgG), Mosaic Dengue virus types 1-4 IIFT (IgM) (EUROIMMUN AG («Евроиммун
АГ»), Германия), РУ № ФСР 2010/07322.
Моча - 110 образцов от пациентов с лихорадками различной этиологии. Для 60
образцов диагноз «лихорадка денге» подтвержден, как описано выше, а также 50
образцов мочи от пациентов с диагнозами, исключаюгцими лихорадку денге.
I
^ в качестве референтного метода использовался набор реагентов для диагностики in vitro вирусных
инфекций методом непрямой иммунофлуоресценции, варианты исполнения: Mosaic Dengue virus
types 1-4 IIFT (IgG), Mosaic Dengue virus types 1-4 IIFT (IgM) (EUROIMMUN AG («Евроиммун AF»),
Германия), РУ № ФСР 2010/07322.
“ В качестве набора сравнения использовался набор реагентов для выявления и идентификации РНК
вирусов денге и желтой лихорадки методом полимеразной цепной реакции в реальном времени ОМ-
Скрин-денге/ЖЛ-РВ (ЗАО «Синтол», Россия), РУ № РЗН 2016/4879.
стр. 8 из 34
--- стр. 9 ---
- Слюна - 90 образцов от пациентов с лихорадками различной этиологии. Для 40
образцов диагноз «лихорадка денге» подтвержден, как описано выше, а также 50
образцов мочи от пациентов с диагнозами, исключающими лихорадку денге.
В качестве набора сравнения для тех же исследуемых образцов использовался
набор реагентов для выявления и идентификации РНК вирусов денге и желтой
лихорадки методом полимеразной цепной реакции в реальном времени ОМ-Скрин-
денге/ЖЛ-РВ (ЗАО «Синтол», Россия) РУ № РЗН 2016/4879.
Диагностические характеристики набора реагентов
для диагностики in vitro АмплиСенс® Dengue virus-fL
Таблица 4
^|Тип образцов
В сравнении с набором реагентов
методом ПЦР® В сравнении с референтным методом^
Диагностическая
чувствительность
(с доверительной
вероятностью 90 %),
в интервале, %
Диагностическая
специфичность
(с доверительной
вероятностью 90 %),
в интервале,%
Диагностическая
чувствительность
(с доверительной
вероятностью 90 %),
в интервале, %
Диагностическая
специфичность
(с доверительной
вероятностью 90 %),
в интервале,%
Плазма крови 97-99 90-96 93-96 . 95-100
Моча 96-100 90-95 73-80 95-100
Слюна 93-100 92-98 71-83 95:100
Тканевой
(аутопсийный,
биопсийный)
материал, а
именно ткани
мозга и
внутренних
органов
91-100 91-100
Комары
(гомогенат) 91-100 91-100 - -
Таблица 5
Диагностическая чувствительность набора реагентов
для диагностики in vitro АмплиСенс® Dengue virus-FL при исследовании
биологического материала в зависимости от сроков его взятия
от начала заболевания
В первые 7 дней заболевания С 8-го-по 15-й день заболевания
Тип
образцов Исследовано
образцов
Положи
тельные
В интервале (с
доверительной
вероятностью
90 %), %
Исследовано
образцов
Положи
тельные
В интервале (с
доверительной
вероятностью
90 %), %
Плазма крови 103 102 97-99 26 22 67-84
Моча 38 33 78-87 22 15 53-68
Слюна 25 22 74-88 15 11 53-73
< ь
Набор реагентов для выявления и идентификации РНК вирусов денге и желтой лихорадки методом
полимеразной цепной реакции в реальном времени ОМ-Скрин-денге/ЖЛ-РВ (ЗАО «Синтол», Россия),
РУ № РЗН 2016/4879.
® Набор реагентов для диагностики in vitro вирусных инфекций методом непрямой
иммунофлуоресценции, варианты исполнения: Mosaic Dengue virus types 1-4 IIFT (IgG), Mosaic
Dengue virus types 1-4 IIFT (IgM) (EUROIMMUN AG («Евроиммун АГ»), Германия), РУ № ФОР
2010/07322.
стр. 9 из 34
--- стр. 10 ---
На первой неделе заболевания основным материалом для исследования
является плазма крови, дополнительно можно исследовать мочу и/или слюну
пациента, на второй неделе заболевания рекомендуется исследовать два типа
исследуемого материала; плазму крови и мочу для повышения диагностической
чувствительности набора реагентов.
€
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно
биологические (ПЦР) исследования биологического материала на наличие
возбудителей инс}зекционных болезней, с соблюдением санитарно-
эпидемиологических правил СП 1.3.3118-13 «Безопасность работ с
микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)»^ СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами II1-IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-
эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» и
методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий,
использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с
материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе необходимо всегда выполнять следующие требования:
- Рассматривать исходные исследуемые образцы биологического материала как
инфекционно-опасные.
- Инактивировать исходные исследуемые образцы биологического материала в
соответствии с методическими указаниями МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при
работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-1V групп патогенности».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в
отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Экстракции,
продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы.
А
’ в соответствии с п.2.1.6 СП 1.3.3118-13, диагностика молекулярно-генетическими методами (без
накопления возбудителя) по детекции в кпиническом материале возбудителей инфекционных
болезней могут проводиться в лабораториях, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение о
возможности проведения работ с микроорганизмами III группы патогенности в соответствии с
требованиями санитарных правил "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп
патогенности и гельминтами", утвержденных постановлением Главного государственного врача
Российской Федерации от 28.01.2008 N 4 (зарегистрировано Минюстом России 21 февраля 2008 г. N
11197). Исследования по детекции нуклеиновых кислот проводятся в боксированных помещениях,
оборудованных системами приточной и вытяжной вентиляции или боксах микробиологической
безопасности II класса. Материал для исследований подлежит предварительной обработке в
соответствии методическими указаниями МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий,
использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
стр. 10 из 34
--- стр. 17 ---
4
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ РНК
Образцы плазмы крови, а также образцы прозрачной мочи не требуют
предварительной подготовки.
Образцы мочи требуют предварительной подготовки, если на исследование
предоставлены образцы мутной мочи, В этом случае в пробирки объемом 1,5 мл
отобрать по 1200 мкл мочи. Центрифугируют пробы при 10 000 g (например,
12 000 об/мин для микроцентрифуги типа «Эппендорф») в течение 1 мин. 100 мкл
полученной осветленной мочи используют для экстракции РНК с использованием
комплекта реагентов «РИБО-преп» или 1000 мкл осветленной мочи используют для
экстракции РНК с использованием комплекта реагентов «МАГНО-сорб». Если
материал будет исследован позже, чем через 1 сутки после забора, необходимо
перенести по 1100 мкл мочи в несколько пробирок объемом 1,5 мл. Если
предполагается экстракция РНК с использованием комплекта реагентов «РИБО-
преп», в пробирки с 1100 мкл мочи внести глицерин в объеме 10 % от объема пробы
(120 мкл), перемешать на вортексе для равномерного распредёления глицерина. Если
предполагается экстракция РНК с использованием комплекта реагентов «МАГНО-
сорб», глицерин в мочу не вносить, моча замораживается без глицерина.
Допускается хранение образцов материала с глицерином и без глицерина:
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение 1 недели;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается лишь однократное замораживание-оттаивание материала.
Образцы тканевого (аутопсийного, биопсийного) материала (тканей мозга и
внутренних органов) требуют предварительной подготовки. Для экстракции РНК
берут 30-50 мг (мкл) материала и гомогенизируют его растиранием с
использованием предварительно охлаждённых стерильных фарфоровых ступок и
пестиков или с помогцью гомогенизатора. Из растёртой ткани готовят 10% суспензию
на охлаждённом стерильном физиологическом растворе или фосфатном буфере.
Для этого на 1 объём растёртой ткани добавляют 9 объёмов физиологического
раствора или фосфатного буфера. 100 мкл полученной суспензии используют для
экстракции РНК.
Допускается хранение предварительно обработанных образцов биопсийного
материала до проведения ПЦР-исследования:
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение 1 недели;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Комары требуют предварительной подготовки.
стр 17 из 34
--- стр. 18 ---
« i
Предварительно формируют пулы комаров (не более 50 особей). Комаров
гомогенизируют в стерильном физиологическом растворе или фосфатном буфере
из расчета 1 комар - 30 мкл раствора. Центрифугируют пробы при 10 000 g
(например, 12 000 об/мин для микроцентрифуги типа «Эппендорф») в течение
1 мин. Затем отбирают 100 мкл надосадочной жидкости для экстракции РНК.
Для приготовления суспензий комаров используют стерильную фарфоровую
чашку и стерильный пестик. При наличии автоматического гомогенизатора
(например, Tissue Lyser LT) применяют следующие параметры для гомогенизации
комаров: диаметр шариков - 5 мм, частота - 50 Гц/с, время гомогенизации 5 мин,
объем буфера 700 мкл (пул из 25 комаров), объем буфера 1500 мкл (пул из 50
комаров).
Допускается хранение предварительно обработанных комаров до проведения
ПЦР-исследования:
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение 1 недели;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно. *
Допускается лишь однократное замораживание-оттаивание материала.
Образцы слюны требуют предварительной подготовки. Перед экстракцией
нуклеиновых кислот необходимо провести разжижение слюны, используя реагент
«МУКОЛИЗИН». В емкость со слюной добавляют «МУКОЛИЗИН» в соотношении 1:3
(1 часть слюны к 3 частям «МУКОЛИЗИНА»), ориентируясь по градуировке емкости.
В случае, если слюна очень густая, проводят ее разжижение реагентом
«МУКОЛИЗИН» в соотношении 1:5. В процессе разжижения слюны (10 минут)
емкость периодически встряхивают на вортексе. Для экстракции РНК используют
100 мкл разжиженной слюны.
Допускается хранение предварительно разжиженной слюны до проведения ПЦР-
исследования:
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение 1 недели;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается лишь однократное замораживание-оттаивание материала.
4
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ
ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Для исследования непригодны образцы плазмы крови, взятые в пробирки с
гепарином в качестве антикоагулянта. Гепарин является ингибитором ПЦР («МУ
1.2.2741-10. 1.2. Гигиена, токсикология, санитария. Порядок отбора проб для
стр. 18 из 34
--- стр. 19 ---
выявления и идентификации наноматериалов в лабораторных животных.
Методические указания»).
Сведения о других интерферирующих веществах при условии соблюдения
правил взятия и предварительной подготовки исследуемого материалах, указанных
в инструкции, отсутствуют.
Для снижения риска получения ложноотрицательного результата из-за наличия в
пробе интерферирующих веществ в наборе реагентов предусмотрено
использование внутреннего контрольного образца (ВКО /CZ-rec), который
добавляется в каждый биологический образец на этапе экстракции нуклеиновых
кислот. По окончании реакции амплификации наличие сигнала, свидетельствующего
о накоплении фрагментов кДНК ВКО /CZ-rec, говорит о достаточной эффективности
экстракции нуклеиновых кислот и отсутствии ингибиторов ПЦР.
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
- экстракция РНК из исследуемых образцов,
- обратная транскрипция РНК и амплификации кДНК с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени»,
- анализ и интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые
пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку «RNase-
free», «Dnase-free».
Для экстракции РНК из разных видов исследуемого материала используются
комплекты реагентов:
- «РИБО-преп» для экстракции РНК из плазмы крови, тканевого (аутопсийного,
биопсийного) материала (тканей мозга и внутренних органов), мочи, слюны,
комаров в соответствии с инструкцией к используемому комплекту реагентов;
- «МАГНО-сорб» для экстракции РНК из плазмы крови, мочи в соответствии с
инструкцией и методическими рекомендациями к используемому комплекту
реагентов.
Объемы реагентов при экстракции с помощью комплекта реагентов «РИБО-преп»:
Экстракция РНК из каждого исследуемого образца и контролей проводится в
присутствии внутреннего контрольного образца - ВКО /CZ-rec
Объем ВКО /CZ-rec - 10 мкл в каждую пробирку.
е
стр. 19 из 34
--- стр. 20 ---
«
t
«I
Объем исследуемого образца - 100 мкл,
В пробирку отрицательного контроля экстракции (ОК) внести 100 мкл ОКО.
В пробирку положительного контроля экстракции (ПК) внести 90 мкл ОКО и
10 мкл ПКО ОУ.
Объем элюции - 50 мкл.
Объемы реагентов и образцов при экстракции с помощью комплекта реагентов
«МАГНО-сорб» для 200 мкл образца:
Экстракция РНК из каждого исследуемого образца и контролей проводится в
присутствии внутреннего контрольного образца - ВКО /CZ-rec.
Объем ВКО /CZ-rec - 10 мкл в каждую пробирку.
Объем исследуемого образца - 200 мкл.
В пробирку отрицательного контроля экстракции (ОК) внести 200 мкл ОКО.
В пробирку положительного контроля экстракции (ПК) внести 190 мкл ОКО и
10 мкл ПКО ОУ.
Объем элюции - 50 мкл. ’
Объем элюции - 100 мкл (при использовании автоматических станций для
экстракции РНК).
Объемы реагентов и образцов при экстракции с помощью комплекта реагентов
«МАГНО-сорб» для 1000 мкл образца:
Экстракция РНК из каждого исследуемого образца и контролей проводится в
присутствии внутреннего контрольного образца - ВКО /CZ-rec.
Объем ВКО /CZ-rec - 10 мкл в каждую пробирку.
Объем исследуемого образца - 1000 мкл.
В пробирку отрицательного контроля экстракции (ОК) внести 1000 мкл ОКО.
В пробирку положительного контроля экстракции (ПК) внести 990 мкл ОКО и
10 мкл ПКО ОУ.
Объем элюции - 50 мкл.
Объем элюции - 100 мкл (при использовании автоматических станций для
экстракции РНК).
ВНИМАНИЕ! Реакцию ОТ рекомендуется проводить сразу после получения проб
РНК. Допускается хранение проб РНК при температуре от 2 до 8 °С не более 30 мин,
при температуре от минус 24 до минус 16 °С не более недели и при температуре не
выше минус 68 °С до года. Допускается только однократное замораживание-
оттаивание проб РНК.
стр. 20 из 34
--- стр. 21 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1, КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F)
СОСТАВ
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F для обратной
транскрипции РНК и амплификации фрагмента кДНК Dengue virus с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени»
позволяет проводить ПЦР-исследование в качественном формате. Комплект
реагентов включает:
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь-FL DV Прозрачная бесцветная
жидкость 0,6 1 пробирка
ПЦР-буфер-С Прозрачная бесцветная
жидкость 0.3 1 пробирка
Полимераза (TaqF) Прозрачная бесцветная
жидкость 0,03 1 пробирка
ТМ-Ревертаза (MMIv)
Прозрачная бесцветная
жидкость ^),015 1 пробирка
RT-G-mix-2
Прозрачная бесцветная
жидкость 0,015 1 пробирка
К+ D V nC Z Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
К-
Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
ПКО DV Прозрачная бесцветная
жидкость 0,1 1 пробирка
ВКО /CZ-rec
Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
ОКО
Прозрачная бесцветная
жидкость 1,2 7 пробирок
f ii
Комплект реагентов рассчитан на проведение 55 реакций обратной транскрипции и
амплификации, включая контроли.
Реагенты комплекта упакованы раздельно в соответствии с температурой хранения
(см. раздел «Хранение»), Комплект реагентов состоит из 2-х частей: 1) температура
хранения от 2 до 8 °С; 2) температура хранения от минус 24 до минус 16 °С.
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ
«РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку
Rnase-free, Dnase-free.
Выбор пробирок для проведения ОТ-ПЦР зависит от используемого
амплификатора с системой детекции в режиме «реального времени».
стр. 21 из 34
--- стр. 22 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
Для внесения в пробирки реагентов, проб РНК и контрольных образцов
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
А. Подготовка пробирок для ОТ-ПЦР
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем пробы РНК - 10 мкл.
1. Рассчитать количество каждого реагента, требующееся для приготовления
реакционной смеси. На одну реакцию требуется 10 мкл ПЦР-смеси-FL DV, 5 мкл
ПЦР-буфера-С, 0,5 мкл полимеразы (TaqF), 0,25 мкл ТМ-Ревертазы (MMIv),
0,25 мкл RT-G-mix-2. Смесь готовить на общее число исследуемых и контрольных
образцов (количество контрольных образцов см. в пункте 7) плюс запас на одну
реакцию.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смещивать непосредственно
перед проведением ПЦР-исследования.
2. Разморозить пробирку с ПЦР-смесью-FL DV Перемешать содержимое всех
реагентов ПЦР-комплекта, осадить капли на вортексе.
3. В отдельной пробирке подготовить реакционную смесь. Смещать необходимое
количество ПЦР-смеси-FL DV, ПЦР-буфера-С, полимеразы (TaqF), ТМ-
Ревертазы (MMIv), RT-G-mix-2, осадить капли на вортексе
4. Отобрать необходимое количество пробирок или стрипов для ОТ-ПЦР РНК
исследуемых и контрольных проб.
5. Внести в каждую пробирку по 15 мкл приготовленной реакционной смеси.
Неиспользованные остатки реакционной смеси выбросить.
6. В подготовленные пробирки внести по 10 мкл проб РНК, полученных в
результате экстракции из исследуемых образцов.
ВНИМАНИЕ! При добавлении проб РНК, экстрагированных с помощью комплектов
реагентов для проведения экстракции методом магнитной сепарации, необходимо
избегать попадания сорбента в реакционную смесь.
ВНИМАНИЕ! Содержимое пробирок необходимо тщательно перемешать
пипетированием, не допуская появления пузырьков воздуха.
7. Поставить контрольные реакции.
а) положительный контроль ОТ-ПЦР (К+) - в пробирку с реакционной смесью
внести 10 мкл К+ DVIICZ
б) отрицательный контроль ОТ-ПЦР (К-) - в пробирку с реакционной смесью
внести 10 мкл К-.
в) отрицательный контроль экстракции (ОК) - в пробирку с реакционной
смесью внести 10 мкл пробы, экстрагированной из ОКО.
стр. 22 из 34
--- стр. 25 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
‘ Отсутствие сигнала по каналу для флуорофора РАМ несущественно, если РНК
Dengue virus обнаружена.
** В случае получения невалидного результата необходимо провести повторное
ПЦР-исследование соответствующего исследуемого образца, начиная с этапа
экстракции РНК.
*** В случае получения сомнительного результата необходимо провести повторное
ПЦР-исследование соответствующего исследуемого образца, начиная с этапа
экстракции. В случае повторения аналогичного результата образец считать
положительным. При получении отрицательного результата в повторной постановке
образец считать сомнительным и рекомендовать повторное взятие материала для
анализа.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше, прилагаемом к набору
реагентов. ,
Результат ПЦР-исследования считается достоверным, если получены
правильные результаты для контролен этапов экстракции и ОТ-ПЦР РНК в
соответствии с табл. 10 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 10
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследования
Конт
роль
Контр оли руем ы й этап
П Ц Р -иссл ед ов ания
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора (Ct)
РАМ JOE
ПК Экстракция РНК определено меньше
граничного
определено меньше
граничного
ОК Экстракция РНК определено меньше
граничного отсутствует
К- ОТ-ПЦР отсутствует отсутствует
к+ ОТ-ПЦР определено меньше
граничного
определено меньше
граничного .
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ОТ-ПЦР (К+) значение порогового цикла (СО по
каналам для флуорофоров РАМ и/или JOE отсутствует или превышает граничное
значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех образцов,
в которых не обнаружена специфическая РНК.
2. Для положительного контроля экстракции (ПК) значение порогового цикла (СО по
каналу для флуорофора JOE отсутствует или превышает граничное значение.
Необходимо повторить ПЦР-исследование, начиная с этапа экстракции РНК, для
всех образцов.
стр. 25 из 34
--- стр. 26 ---
3. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналу для флуорофора JOE
определено значение порогового цикла (Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая РНК, начиная с этапа экстракции РНК.
4. Для отрицательного контроля ОТ-ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров FAM
и/или JOE определено значение порогового цикла {Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая РНК. »
5. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или
параметров расчета базовой линии. Если результат получен при правильном
уровне пороговой линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 1. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ____________________
стр. 26 из 34
--- стр. 27 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)
СОСТАВ
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L для обратной транскрипции
РНК и амплификации фрагмента кДНК Dengue virus с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» позволяет проводить
ПЦР-исследование в качественном формате. Комплект реагентов включает:
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь DV-Lyo Порошок белого цвета -
48 пробирок
объемом
0,2 мл
К+ D V IIC Z Прозрачная беоцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
ПКО DV Прозрачная бесцветная
жидкость 0,1 1 пробирка
В КО /CZ-rec Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
ОКО Прозрачная бесцветная
жидкость 1,2 7 пробирок
Комплект реагентов рассчитан на проведение 48 реакций обратной транскрипции и
амплификации, включая контроли.
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ
«РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку
Rnase-free, Dnase-free.
Для внесения в пробирки реагентов, проб РНК и контрольных образцов
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
А. Подготовка пробирок для ОТ-ПЦР
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем пробы РНК - 25 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок для амплификации с готовой
лиофилизированной реакционной ПЦР-смесью DV-Lyo для проведения ОТ-ПЦР
РНК исследуемых и контрольных образцов (количество контрольных образцов см. в
пункте 3.
2. В подготовленные пробирки внести по 25 мкл проб РНК, полученных в
результате экстракции из исследуемых образцов.
ВНИМАНИЕ! При добавлении проб РНК, экстрагированных с помощью комплектов
стр. 27 из 34
--- стр. 28 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
^ реагентов для проведения экстракции методом магнитной сепарации, необходимо
избегать попадания сорбента в реакционную смесь.
ВНИМАНИЕ! Содержимое пробирок необходимо тщательно перемешать
пипетированием, не допуская появления пузырьков воздуха.
3. Поставить контрольные реакции.
а) положительный контроль ОТ-ПЦР (К+) - в пробирку с реакционной смесью
внести 25 мкл К+ DVIICZ
ь
б) отрицательный контроль ОТ-ПЦР - в пробирку с реакционной смесью
внести 25 мкл К-.
в) отрицательный контроль экстракции (ОК) - в пробирку с реакционной
смесью внести 25 мкл пробы, экстрагированной из ОКО.
I г) положительный контроль экстракции (ПК) - в пробирку с реакционной
смесью внести 25 мкл пробы, экстрагированной из ПКО DV
ВНИМАНИЕ! Содержимое пробирок необходимо тщательно перемешать
пипетированием, не допуская появления пузырьков воздуха.
ВНИМАНИЕ! Провести ОТ-ПЦР сразу после соединения реакционной смеси и РНК-
пробы и контролей. Время внесения проб в реакционную смесь и запуск реакции на
приборе не должно превышать 10-15 минут.
Б. Проведение ОТ-ПЦР с детекцией в режиме «реального времени»
1. Запрограммировать амплификатор с системой детекции в режиме «реального
времени» для выполнения соответствующей программы амплификации и
детекции флуоресцентного сигнала (см. табл.11, 12)^^
^ Таблица 11
Единая программа амплификации и детекции флуоресцентного сигнала
«АмплиСенс» для приборов роторного^" и планшетного^® типа
Цикл Температура, °С Время
Детекция
флуоресцентного
сигнала по каналам
для флуорофоров
Количество
циклов
1 50 15 мин - 1
2 95 15 мин - 1
3
95 10 с -
45
60 20 с РАМ, JOE
Г 13 Используйте программу амплификации в таблице 12, если нет необходимости использовать
единую программу амплификации.
Например, Rotor-Gene Q (QIAGEN) и другие рекомендованные Производителем.
Например, CFX 96 (Bio-Rad) и другие рекомендованные Производителем.
стр. 28 из 34
--- стр. 30 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
Таблица 14
Интерпретация результатов анализа исследуемых образцов
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора (Ct)
Результат
__________РАМ JOE
Определено меньше
граничного Отсутствует РНК Dengue virus
НЕ обнаружена
Определено или отсутствует* Определено меньше
граничного
РНК Dengue virus
Обнаружена
Отсутствует или определено
больше граничного
Отсутствует или определено
больше граничного Невалидный**
Определено меньше
граничного
Определено больше
граничного Сомнительный***
* Отсутствие сигнала по каналу для флуорофора РАМ несущественно, если РНК
Dengue virus обнаружена.
** В случае получения невалидного результата необходимо провести повторное
ПЦР-исследование соответствующего исследуемого образца, начиная с этапа
f
экстракции РНК.
*** В случае получения сомнительного результата необходимо провести повторное
ПЦР-исследование соответствующего исследуемого образца, начиная с этапа
экстракции. В случае повторения аналогичного результата образец считать
положительным. При получении отрицательного результата в повторной постановке
образец считать сомнительным и рекомендовать повторное взятие материала для
анализа.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше, прилагаемом к набору
реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным, если получены
правильные результаты для контролей этапов экстракции и ОТ-ПЦР РНК в
соответствии с табл. 15 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 15
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследования
Конт- Контролируемы й этап
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора (Ct)
роль ПЦР-исследования
FAM JOE
ПК Экстракция РНК определено меньше
граничного
определено меньше
граничного
ок Экстракция РНК определено меньше
граничного отсутствует
к- ОТ-ПЦР отсутствует отсутствует
к+ ОТ-ПЦР определено меньше
граничного
определено меньше
граничного
€
стр. 30 из 34
--- стр. 31 ---
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ 2. КАЧЕСТВЕННЫЙ ФОРМАТ
Возможные ошибки;
1. Для положительного контроля ОТ-ПЦР (К+) значение порогового цикла (Ct) по
каналам для флуорофоров FAM и/или JOE отсутствует или превышает граничное
значение. Необходимо повторить амплификацию и детекцию для всех образцов,
в которых не обнаружена специфическая РНК.
2. Для положительного контроля экстракции (ПК) значение порогового цикла {Ct) по
каналу для флуорофора JOE отсутствует или превышает граничное значение.
Необходимо повторить ПЦР-исследование, начиная с этапа экстракции РНК, для
всех образцов.
3. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналу для флуорофора JOE
определено значение порогового цикла {Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая РНК, начиная с этапа экстракции РНК.
4. Для отрицательного контроля ОТ-ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров РАМ
и/или JOE определено значение порогового цикла {Ct). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая РНК.
5. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или
параметров расчета базовой линии. Если результат получен при правильном
уровне пороговой линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
стр. 31 из 34
--- стр. 32 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению
не подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности,
указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано
иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до
8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми
видами крытых транспортных средств. Допускается транспортирование при
температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F при получении
разукомплектовать в соответствии с указанными температурами хранения.
Хранение.
Форма комплектации 1. Комплект реагентов «ПЦР-комллект» вариант FRT-50 F
хранить в холодильной камере при температуре от 2 Д 0;8 °С. ПЦР-смесь-FL DV,
ПЦР-буфер-С, полимеразу (TaqF), ТМ-Ревертазу (MMIv), RT-G-mix-2 хранить в
морозильной камере при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL
DV хранить в защищенном от света месте.
Форма комплектации 2. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь DV-Lyo
хранить в пакетах с влагопоглотителем в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный температурный режим.
i
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
Производитель гарантирует соответствие основных параметров и
характеристик набора реагентов, требованиям, указанным в технической и
эксплуатационной документации, в течение указанного срока годности при
соблюдении всех условий транспортирования, хранения и применения.
Рекламации на качество набора реагентов направлять в отдел рекламаций,
организации обучения и контроля качества по адресу 111123, г. Москва,
ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail; cs@pcr.ru .
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению
набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amplisens.ru .
стр. 32 из 34
--- стр. 33 ---
обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение в отдел по работе с рекламациями по адресу, указанному
выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в РФ -
Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с
действующим законодательством.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
Е.Н, Родионова
аксютов
стр, 33 из 3^
--- стр. 36 ---
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
ВКЛАДЫШ
К набору реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс'^ Dengue virus-FL
«ni4P-KOMruieKT» вариант FRT-50 F, FRT-L
Форма 1: R239(1); Форма 2; R239(2)Ly
Ilot"116.05.1^
Настройки для приборов роторного типа
Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000, Rotor-Gene Q
Канал
Calibrate / Gain
Optimisation... /
Опт.уровня сигн
More Settings/ Outlier
Removal/Устранение
выбросов
Slope Correct /
Коррект.
уклона
Threshold /
Порог
Eliminate Cycles
before / Исключить
циклы
FAM/Green OtSFU o IOFI 5% включена 0,03 5
JOE/Yellow от5Р1до10Р1 5% включена 0,03 5
Примечание - В том случае, если кривые флуоресценции по каналу FAM и JOE не соответствуют
экспоненциальному росту, установить значение порога отрицательных проб (NTC threshold /Порог Фона - ПФ)
равным 10 %.
Образец Канал для флуорофора
РАМ JOE
К+ <32 < 32
OK <30 отсутствует
ПК <30 <32
к- отсутствует отсутствует
Исследуемые образцы <32 <42
Настоойки для поибооов планшетного типа
CFX96
В программе амплификации для каждого шага этапа циклирования задать скорость нагревания/охлаждения
Ramp Rate 2,5 °C/sec (функция Step Options)
Канал Threshold/Порог
РАМ Установить пороговую линию на уровне 10% от максимального уровня
флуоресценции образцов К+ в последнем цикле амплификации.
HEX Установить пороговую линию на уровне 5 % от максимального уровня
флуоресценции образцов К+ в последнем цикле амплификации.
Примечание - кривая флуоресценции ПКО должна пересекать пороговую линию на участке характерного
экспоненциального подъема флуоресценции, переходящего в линейный подъем.
«ДТ-96»
Канал
Критерий
положительного
результата ПЦР
Величина
Treshold
Нижняя граница /
порог положительного
результата
Верхняя граница /
порог нормализации
данных
Pam, Hex 90% 10StD 10 % Р(Ср) 10 % Р(Ср)
Канал Threshold/Порог
Pam Установить пороговую линию на уровне 5% от максимального уровня
флуоресценции образцов К+ в последнем цикле амплификации.
Hex Установить пороговую линию на уровне 3 % от максимального уровня
флуоресценции образцов К+ в последнем цикле амплификации.
Примечание - кривая флуоресценции ПКО должна пересекать пороговую линию на участке характерного
экспоненциального подъема флуоресценции, переходящего в линейный подъем.
Граничные значения порогового цикла СГ для приборов планшетного типа
Образец Канал для флуорофора
РАМ JOE
К+ < 36 <36
ок <33 отсутствует
ПК <33 <36
к- отсутствует отсутствует
Исследуемые образцы <36 < 43
--- стр. 37 ---
ФБУН «ЦЕНТРАЛЬНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия
человека
111123, Москва. ¥л. Новогиреевская ЗА тел. М95) 974-96-46. Факс : (495) 305-54-23. e-mail: obtk@pcr.ru
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
Набора реагентов для диагностики in vitro
_______________________________АмплиСенс® Dengue virus-FL _________________________
Ф орм а 1 LOT 16.05.17
|w f|2017-05-16
2018-05-16
ТУ 9398-239-01897593-2016.
Комплектность, упаковка и маркировка набора указанной серии соответствуют требованиям ТУ.
Наименование показателя Норма Результаты контроля
Разведение СОП ПКО DlZ-rec до
концентрации 5x10^ копий/мл
Определены значения Ct менее граничных по
каналам для флуорофоров FAM и JOE
соответствует
Разведение СОП ПКО DV-rec до
концентрации 1x10^ колий/мл
Определены значения Ct менее граничных по
каналам для флуорофоров FAM и JOE
соответствует
Разведение СОП ПКО DV-rec до
концентрации 50 копий/мл
Определено значение Ct менее граничного по
каналу для флуорофора FAM. Значение Ct по
каналу для флуорофора JOE определено
менее граничного или отсутствует
соответствует
ПКООУ Определены значения Cf менее граничного по
каналам для флуорофоров FAM и JOE
соответствует
ОК
Отсутствует значение Ct по каналу для
флурофора JOE, определено значение Ct,
менее граничного по каналу для флуорофора
FAM
соответствует
К- Отсутствуют значения Ct по всем каналам
детекции
соответствует
К+ (К+ DVIICZ) Определены значения Cf менее граничных по
каналам для флуорофоров FAM и JOE
соответствует
2. Состав, внешний вид:
Наименование реагента / комплекта
реагентов
Характеристика и нормы Результаты
контроля
В составе формы
комплектации
ПЦР-смесь-FL DV Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
ПЦР-смесь DV-Lyo Порошок белого цвета соответствует 2
ПЦР-буфер-С Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
Полимераза(TaqF) Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
ТМ-Ревертаза (MMIv) Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
RT-G-mix-2 Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
K+DV/ICZ Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
К- Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ПКО DV Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ВКО ICZ-rec Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ОКО Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
3. Условия транспортирования и хранения:
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут. в
термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых транслортных средств. Допускается
транспортирование при температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F лри получении разукомплектовать в соответствии с
указанными температурами хранения.
Форма 1:|REF| R239(1); Форма 2: |REF| R239(2)Ly
--- стр. 38 ---
Форма комплектации 1. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F хранить в холодильной камере при
температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь-FL DV. ПЦР-буфер-С, полимеразу (TaqF), ТМ-Ревертазу (MMIv), RT-G-mix-2
хранить в морозильной камере при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL DV хранить в
защищенном от света месте.
Форма комплектации 2. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в холодильной камере при
температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь DV-Lyo хранить в пакетах с влагопоглотителем в защищенном от света
месте.
Холодильные и
Хранение.
амеры должны обеспечивать регламентированный температурный режим.
Дата выда
Руковод
/
(Наумкина Е.М.)
(Ф.И.О.)
Форма 1: |REF| R239(1); Форма 2: |REF| R239(2)Ly
--- стр. 39 ---
'----------------- -
i T
--- стр. 40 ---
ФБУН « центральны й научно -исследо вательский и нсти тут э п и д ем и о л о ги и»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия
человека
111123. Москва, ул. Новогиреевская ЗА тел. (495) 974-96-46. Факс : М95) 305-54-23. e-mail: obtktSpcr.ru
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
Набора реагентов для диагностики in vitro
_______АмплиСенс® Dengue virus-FL ________
Ф орм а 2 LOT 16.05.17
d ] 2017-05-16
2018-05-16
ТУ 9398-239-01897593-2016.
Комплектность, упаковка и маркировка набора указанной серии соответствуют требованиям ТУ.
Наименование показателя Норма Результаты контроля
Разведение СОП ПКО ОУ-гес до
концентрации 5x10^ копий/мл
Определены значения С/ менее граничных по
каналам для флуорофоров FAM и JOE
соответствует
Разведение СОП ПКО DV-rec до
концентрации 1x10^ копий/мл
Определены значения Ct менее граничных по
каналам для флуорофоров FAM и JOE
соответствует
Разведение СОП ПКО ОУ-гес до
концентрации 50 копий/мл
Определено значение С/менее граничного по
каналу для флуорофора FAM. Значение Ct по
каналу для флуорофора JOE определено
менее граничного или отсутствует
соответствует
ПКО DV Определены значения Ct менее граничного по
каналам для флуорофоров FAM и JOE
соответствует
ОК
Отсутствует значение Ct по каналу для
флурофора JOE, определено значение Ct,
менее граничного по каналу для флуорофора
FAM
соответствует
К- Отсутствуют значения Ct по всем каналам
детекции
соответствует
К+ (K+DV/ICZ) Определены значения Ct менее граничных по
каналам для флуорофоров FAM и JOE
соответствует
L 2. Состав, внешний вид:
Наименование реагента / комплекта
реагентов
Характеристика и нормы Результаты
контроля
В составе формы
комплектации
ПЦР-смесь-FL DV Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
ПЦР-смесь DV-Lyo Порошок белого цвета соответствует 2
ПЦР-буфер-С Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
Полимераза(TaqF) Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
ТМ-Ревертаза (MMIv) Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
RT-G-mix-2 Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1
К+ DVnCZ Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
К- Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
mODV Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ВКО /CZ-гес Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
ОКО Прозрачная бесцветная жидкость соответствует 1 2
3. Условия транспортирования и хранения:
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в
термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых транспортных средств. Допускается
транспортирование при температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F при получении разукомплектовать в соответствии с
указанными температурами хранения.
Форма 1: IREFI R239(1); Форма 2: |REF| R239(2)Ly
--- стр. 41 ---
Форма комплектации 1. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F хранить в холодильной камере при
температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь-FL DV, ПЦР-буфер-С, полимеразу (TaqF), ТМ-Ревертазу (MMIv), RT-G-mix-2
хранить в морозильной камере при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL DV хранить в
защищенном от света месте.
Форма комплектации 2. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в холодильной камере при
температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь D\ALyo хранить в пакетах с влагопоглотителем в защищенном от света
месте.
Холодильные и MopoewreRb^^ должны обеспечивать регламентированный температурный режим.
Дата выда
Хранение.
Руковод , --уцНаумкина Е.М.)
/ (Ф.И.О.)
а
Форма 1: IREFI R239(1); Форма 2: |REF| R239(2)Ly