Набор реагентов для выявления РНК вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки (ККГЛ, CCHFV - Crimean-Congo hemorrhagic fever virus) в биологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле "АмплиСенс® CCHFV-EPh" по ТУ 9398-064-01897593-2012 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 3 --- список СОКРАЩЕНИИ В настоящей инструкции применяю тся следую щ ие сокращ ения и обозначения; ВКО - внутренний контрольный об разец кДНК - ком плем ентарная Д Н К К+ - положительны й контроль П Ц Р К - - отрицательны й контроль П Ц Р ОКО - отрицательны й контрольный образец ОК - отрицательны й контроль экстракции ПКО - положительны й контрольный образец ПК - положительны й контроль экстракции ПЦР - полим еразная цепная реакция ФБУН Ц Н И И Эпидемиологии Роспотребнадзора - ф ед еральное бю джетное учреж д ение науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Ф едеральной службы по надзору в сф ере защиты прав потребителей и благополучия человека_______________________ EPh - электроф оретическая детекция Н А З Н А Ч Е Н И Е Набор реагентов « А м п л и С е н с ® CCHFV-EPh» предназначен для выявления РНК вируса Кры мской-Конго геморрагической лихорадки (CCHFV) в клещ ах, сыворотке и плазме крови м етодом П Ц Р с электроф оретической детекцией продуктов амплификации. Для выделения Р Н К и проведения реакции обратной транскрипции используются наборы, рекомендованны е Ф Б УН Ц Н И И Эпидемиологии Роспотребнадзора. В Н И М А Н И Е ! Результаты ПЦ Р-исследования учитываются в комплексной диагностике забо лев ани я^ П Р И Н Ц И П М Е Т О Д А Выявление Р Н К CCHFV методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (О Т -П Ц Р ) и электроф оретической детекцией включает ^ себя 4 этапа: экстракцию Р Н К из образцов биологического м атериал а, получение кДНК в ходе реакции обратной транскрипции, амплиф икацию участка кДНК CCHFV и электроф оретическую детекцию . Экстракция Р Н К из биологического материала проводится в присутствии внутреннего контрольного образца (ВКО-1 CCHF-rec или ВКО-2 CCHF-rec), который позволяет контролировать выполнение процедуры исследования для каж дого образца. Затем с полученными пробами Р Н К проводится реакция обратной транскрипции, в ходе которой получаю т кДНК. Пробы кДНК используются для ам плиф икации участка кД Н К CCHFV при помощи специфичных к этому участку кД Н К прайм еров и ф ерм ента T a q F -полимеразы . Специфический ' В соответствии с директивой Европейского Союза 98/79/ЕС . --- стр. 4 --- ФОРМАТЫ И Ф О Р М Ы В Ы П У С К А Н А Б О Р А Р Е А Г Е Н Т О В Набор реагентов вы пускается в 5 ф ормах комплектации: Форма 1 вклю чает комплекты реагентов «Р И Б О -со рб» вариант 50. «РИБО -золь-С» вариант 50, « Р Е В Е Р Т А -L» вариант 50, «П Ц Р -ком пл ект» вариант 50 R (пробирки 0,5 мл), «ЭФ » вариант 200. Форма 2 вклю чает комплекты реагентов «Р И Б О -со рб» вариант 50, «РИБО -золь-С» вариант 50, « Р Е В Е Р Т Л -L» вариант 50, «П Ц Р -ком пл ект» вариант 50 R (пробирки 0,2 мл), «ЭФ » вариант 2 00. Ф орм а 3 вклю чает ком плект реагентов «П Ц Р -ком пл ект» вариант 50 R (пробирки 0,5 мл); Ф орм а 4 вклю чает ком плект реагентов «П Ц Р -ком пл ект» вариант 50 R (пробирки 0,2 мл); Форма 5 вклю чает наборы реагентов оптом, расф асованны е по отдельным реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой ф асовке. Формы ком плектации 1 и 2 предназначены для проведения полного П Ц Р - исследования, вклю чая экстракцию Р Н К из биологического м атериала, проведение реакции обратной транскрипции, амплиф икации кД Н К и электрофоретической детекции. Формы комплектации 3 и 4 предназначены для ам плиф икации кДНК CCHFV. Для проведения полного П Ц Р -исследования необходимо дополнительно использовать комплекты реагентов для экстракции Р Н К «Р И Б О -со р б » и «РИБО -золь-С», для проведения реакции обратной транскрипции комплект реагентов «PEBEPTA-L>^n для электроф оретической д етекц и и комплект реагентов «Э Ф » производства ФБУН Ц НИ И Эпидемиологии Роспотребнадзора. Форма комплектации 5 предназначена для производственных целей для последующей маркировки на языке заказчика и комплектации по наборам. В Н И М А Н И Е ! Ф орм а комплектации 5 используется только в соответствии с регламентом, утвержденны м Ф БУН Ц Н И И Эпидемиологии Роспотребнадзора. продукт амплификации имеет определенный размер и детектируется методом электрофореза в агарозном геле. --- стр. 5 --- Ф О РМ АТЫ И Ф О Р М Ы В Ы П У С К А Н А Б О Р А Р Е А Г Е Н Т О В Набор реагентов вы пускается в 5 ф ормах комплектации: Форма 1 вклю чает комплекты реагентов «Р И Б О -со рб» вариант 50, «РИБО-золь-С» вариант 50, « Р Е В Е Р Т А -L» вариант 50, «П Ц Р -ком пл ект» вариант 50 R (пробирки 0,5 мл), «ЭФ » вариант 200. Ф орма 2 вклю чает комплекты реагентов «Р И Б О -со рб» вариант 50, «РИБО-золь-С» вариант 50, « Р Е В Е Р Т А -L» вариант 50, «П Ц Р -ком пл ект» вариант 50 R (пробирки 0,2 мл), «ЭФ » вариант 200. Ф орм а 3 вклю чает ком плект реагентов «П Ц Р -ком пл ект» вариант 50 R (пробирки 0,5 мл); Ф орм а 4 вклю чает ком плект реагентов «П Ц Р -ком пл ект» вариант 50 R (пробирки 0,2 мл); Ф орма 5 вклю чает наборы реагентов оптом, расф асованны е по отдельным реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой ф асовке. Формы ком плектации 1 и 2 предназначены для проведения полного ПЦ Р- исследования, вклю чая экстракцию Р Н К из биологического м атериала, проведение реакции обратной транскрипции, амплиф икации кД Н К и электрофоретической детекции. Формы комплектации 3 и 4 предназначены для ам плиф икации кДНК CCHFV. Для проведения полного П Ц Р -исследования необходимо дополнительно использовать комплекты реагентов для экстракции Р Н К «Р И Б О -со рб» и «РИБО -золь-С», для проведения реакции обратной транскрипции комплект реагентов «РЕВЕРТА-В5 и для электроф оретической детекции комплект реагентов «Э Ф » производства ФБУН Ц НИ И Эпидемиологии Роспотребнадзора. Форма ком плектации 5 предназначена для производственных целей для последующей маркировки на языке заказчика и комплектации по наборам. В Н И М А Н И Е ! Ф орм а комплектации 5 используется только в соответствии с регламентом, утвержденны м Ф БУН Ц Н И И Эпидемиологии Роспотребнадзора. продукт амплификации имеет определенный размер и детектируется методом электрофореза в агарозном геле. --- стр. 6 --- АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Аналитическая чувствительность Вид биологиче ского мате- риала Комплект для выде- 1: ления РНК Комплект для ам- плифика- ции pbifinfiKt ‘для ш рат- ной транс- К ^и^Ц йи Анаи11ити- ческая чувстви тельность Комплект г ДЛЯ детекции 1робоподготовка материала С ы в о р о тка и п л азм а к р о в и «РИ Б О - сорб» «П Ц Р - комплект» «РЕВЕРТА-L» Ю" ГЭ/мл^ «ЭФ» 200 Иксодовые к л ещ и «Р И Б О - золь-С» «П Ц Р - комплект» «РЕВЕРТА-L» 3x10“ ГЭ/мл «ЭФ» 200 Данная чувствительность достигается при соблюдении нижеизложенных правил пробоподготовки биоматериала и рекомендуемом исследуемом объеме пробы Аналитическая специфичность Аналитическая специф ичность изучена на: - флавивирусах; вирус Западного Нила, Л ангат, Повассан, Японского энцеф алита, Омской гем оррагической лихорадки; - герпесвирусах; H H VI, II типов, EBV, CMV, HHV\/\ типа; - риккетсиях группы пятнистых лихорадок: Rickettsia conorii sub caspia, R.heilongiangensis; Coxiella burnetii] - Д Н К человека, Д Н К кл ещ ей 1 4 .marginatum marginatum, H.scupense, D.marginatus, D.reticulatus, R.rossicus, R.sanguineus, 1 4 .punctata, l.ricinus. При исследовании вы ш еперечисленны х Д Н К не выявлено ложноположительных результатов. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Работа долж на проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно биологические (П Ц Р ) исследования клинического м атериала на наличие возбудителей инф екционны х болезней, с соблю дением санитарно-эпидемических правил СП 1 .3 .2 3 2 2 -0 8 «Безопасность работы с м икроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарны х болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10 «С анитарно-эпидем иологические требования к обращению с медицинскими отходам и» и методических указаний М У 1 .3 .2 56 9 -0 9 "Организация работы лабораторий, использую щ их методы ам плиф икации нуклеиновых кислот при работе с м атериалом , содерж ащ им микроорганизмы I- IV групп патогенности". При работе всегда следует выполнять следующие требования: ^ Количество геномных эквивалентов микроорганизма (ГЭ) в 1 мл образца клинического материала. --- стр. 7 --- - Следует рассм атривать исследуемы е образцы как инфекционно-опасные, организовывать работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами 1 1 1 — IV групп патогенности (опасности) и возбудителям и паразитарны х б олезней». - Убирать и дезинф ицировать разлиты е образцы или реактивы, используя дезинф ицирую щ ие средства в соответствии С П 1 .3 .2 3 2 2 -0 8 «Безопасность работы с м икроорганизмам и III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарны х болезней». - Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в отдельных пом ещ ениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Выделения, продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы, оборудование и реактивы в зону, в которой была проведена предыдущая стадия процесса. - Неиспользованны е реактивы, реактивы с истекш им сроком годности, а также использованны е реактивы (включая буф ер и гели) следует удалять в соответствии с требованиями С ан П и Н 2 .1 .7 .2 7 9 0 -1 0 «Санитарно- эпидемиологические требования к обращ ению с медицинскими отходами». ВНИМАНИЕ! При уд алении отходов после ам плиф икации (пробирок, содержащих продукты П Ц Р ) недопустим о откры вание пробирок и разбры згивание содержимого, поскольку это м ож ет привести к контаминации продуктами П Ц Р лабораторной зоны, оборудования и реагентов. - Применять набор строго по назначению , согласно данной инструкции. - Допускать к раб оте с набором только специально обученный персонал. - Не использовать набор по истечении срока годности. ^ - Использовать одноразовы е перчатки, лабораторны е халаты, защ ищ ать глаза во время работы с образцам и и реактивами. Тщ ател ь н о вымыть руки по окончании работы. - Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. При контакте немедленно промыть пораж енное место водой и обратиться за медицинской помощью. - Листы безопасности м атериалов (M S D S - m aterial safety data sheet) доступны по запросу. При работе с биологическим материалом следует соблюдать следующие меры предосторожности: --- стр. 8 --- I - в случае работы с клещ ом с высокой степенью напитанности рекомендуется перед гомогенизацией кл ещ а в ступке проколоть его одноразовой иглой для выхода крови и предупреждения разбры згивания м атериала при растирании. ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЕ I. Посуда и инструменты (иглы), использованны е для гомогенизации клещей, выдерживаются в 0 ,2 % растворе Д П -2 Т в течен ие 1 сут, после чего фарфоровая посуда моется водопроводной водой, затем на 30 мин погружается в раствор хромовой смеси и после отмывания в проточной и деионизованной воде высушивается в сухожаровом ш каф у в течение 4 ч при тем пературе 180 °С. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ 1. 0,15 М N aC I или ф осф атны й буферный раствор (P B S буф ер) и 96% этиловый спирт для проведения пробоподготовки клещ ей. 2. Комплект реагентов для выделения Р Н К из сыворотки и плазмы крови - «РИБ О - сорб» (Т У 9 3 9 8 -0 0 4 -0 1 8 9 7 5 9 3 -2 0 0 8 ) и комплект реагентов для выделения РНК из суспензий кпещ ей - «Р И Б О -зо л ь-С » (Т У 9 3 9 8 -0 7 4 -0 1 8 9 7 5 9 3 -2 0 0 8 ) при работе с ф ормами ком плектации 3,4. 3. Дополнительны е материалы и оборудование для экстракции Р Н К - согласно инструкции к ком плекту реагентов для выделения РН К. 4. Комплект реагентов для проведения реакции обратной транскрипции «РЕВЕРТА-L» (ТУ 9 3 9 8 -0 0 5 -0 1 8 9 7 5 9 3 -2 0 0 8 ) или другие рекомендованные ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора при работе с ф ормами комплектации 3, 4. 5. Комплект реагентов для электрофоретической детекции продуктов амплификации в агарозном геле - «Э Ф » (Т У 9 3 9 8 -0 7 0 -0 1 8 9 7 5 9 3 -2 0 0 8 ) или ^другие рекомендованны е Ф Б УН Ц Н И И Эпидемиологии Роспотребнадзора при работе с формами ком плектации 3, 4. 6. Дополнительные материалы и оборудование для электроф оретической детекции -с о гл а с н о инструкции к комплекту реагентов для электроф оретической детекции. 7. Бокс абактериальной воздушной среды (П Ц Р -бокс). В. Центриф уга/вортекс. 9. Автоматические дозаторы переменного объема (от 5 до 20 мкп и от 20 до 200 мкл). 10.Одноразовые наконечники с фильтром до 100 мкл в ш тативах. I I . Штативы для пробирок объемом 0,2 мл или 0 ,5 мл (в соответствии с используемыми ком плектам и реагентов). --- стр. 9 --- 12.Холодильник от 2 до 8 “С с морозильной кам ерой не выше минус 16 °С для выделенных проб Р Н К. 13.Амплификатор для пробирок 0,5 мл (например, «Терцик», «ДНК-Технология», Россия, или эквивалентны й); для пробирок 0,2 мл (наприм ер, G eneAm p PCR System 2 700, Applied Biosystems, СШ А, или M axyG en e, Axygen, СШ А или эквивалентный). 14.Отдельный халат, ш апочки, обувь и одноразовы е перчатки по М У 1.3.2569-09. 15.Емкость для сброса наконечников. ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА Перед началом работы следует ознакомиться с м етодическим и рекомендациями «Взятие, транспортировка, хранение клинического м атериала для П Ц Р - I диагностики», разработанны м и Ф ГУН Ц Н И И Э Р оспотребнадзора, Москва, 2008 г. ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ РНК М атериалом для исследования служат: образцы сыворотки и плазмы крови, суспензии клещ ей. Получение плазмы крови. Взятие крови производится натощ ак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0 ,8-1,1 мм) в одноразовы й шприц объем ом 5 мл или специальную вакуумную систем у типа Venoject (с Э Д ТА ), Vacuette® (сиреневы е крышки - 6 % ЭДТА). При взятии в ш приц кровь из него аккуратно (без образования пены) переносится в одноразовую пластиковую пробирку с антикоагулянтом (6 % раствор ЭДТА в соотнош ении 1:20 или 3,8 % раствор цитрата натрия в соотношении 1:9). Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя! ^ Пробирка закры вается крышкой и переворачивается несколько раз (для перемешивания с антикоагулянтом ). Плазму крови получаю т центриф угированием цельной крови при 800-1600 g в течение 20 мин. Затем отбираю т плазму отдельными наконечниками с фильтром в стерильные пробирки типа «Эппендорф » на 1,5 мл. Для экстракции Р Н К используют 100 мкл образца плазмы. Получение сыворотки крови. Возможно использование сыворотки в качестве м атериал а для обнаружения Р Н К вируса CCHF. В зятие крови производится натощ ак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0 ,8-1,1 мм) в одноразовый ш приц объемом 5 мл или специальную --- стр. 10 --- вакуумную систем у типа V enoject, Vacuette® без Э Д ТА . При взятии в шприц кровь из него аккуратно (без образования пены) переносится в одноразовую пластиковую пробирку без антикоагулянта. Кровь отстаиваю т при комнатной температуре в течение 30 мин до полного образования сгустка. Затем центриф угирую т при 800- 1600 g в течен ие 10 мин. П ереносят сыворотку отдельны ми наконечниками с фильтром в стерильны е пробирки на 1,5 мл с завинчиваю щ ейся крышкой. Для экстракции Р Н К использую т 100 мкл образца сыворотки крови. Хранить плазм у и сыворотку крови можно не более 3 сут при тем пературе от 2 до 8 °С, в течение 1 м ес при тем пературе не выше минус 16 °С, в течение года при температуре не выше минус 6 8 °С. Допускается только однократное зам ораж ивание-оттаивание материала. При замораживании клинического м атериала его транспортировка должна проводиться в замороженном состоянии. Подготовка суспензий клещей. Предварительно ф орм ирую т пулы клещей: голодных объединяю т по 5-7 особей, полунапитавшихся - по 2-3; полностью напитавш ихся - по 1. Исследуемых клещей помещают в пробирки типа «Эппендорф », добавляю т 1 мл 96 % этанола и встряхивают на вортексе. Пробирку центриф угирую т в течен ие 3-5 с при 5 тыс об/мин на м икроцентриф уге для удаления капель с внутренней поверхности крышки пробирки, после чего жидкость аккуратно удаляю т с помощью ваккумного отсасывателя. З атем в эту ж е пробирку с клещ ам и добавляют 1 мл физиологического раствора (0 ,1 5 М раствора хлорида натрия), встряхивают на вортексе, центриф угирую т в течение 5 с при 5 тыс об/мин на микроцентрифуге для удаления капель с внутренней поверхности крышки пробирки, после чего жидкость аккуратно удаляю т с помощью ваккумного отсасы вателя. Для приготовления суспензий клещ ей использую т стерильную ф арф оровую чаш ку и стерильный пестик. В случае гомогенизации напитавш ихся клещ ей их предварительно прокалывают стерильной одноразовой иглой в нескольких м естах для выхода крови. Клещей растирают в 70 0 мкл ф изиологического раствора (0 ,1 5 М раствора хлорида натрия), смешивая раствор с клещ ам и небольшими объем ами, затем полученную суспензию центрифугируют 1 мин при 13 тыс об/мин и отбираю т 150 мкл надосадочной жидкости для экстракции РНК. --- стр. 14 --- ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ Реакцию обратной транскрипции провести в соответствии с инструкцией к используемому ком плекту реагентов для обратной транскрипции («Р Е В Е Р Т А -L» или другие комплекты реагентов, рекомендованны е Ф Б УН Ц Н И И Эпидемиологии Роспотребнадзора). ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем пробы кДНК- 1 0 мкл. А . Подготовка пробирок для амплификации 1. Для проведения N реакций смеш ать в отдельной пробирке 10*(N+1) мкл 2,5х ПЦР-буфер blue и 0,5*(N+1) мкл полимеразы (TaqF). 2. П ерем еш ать смесь на вортексе и раскапать по 10 мкл в пробирки с ПЦР- смесью-1-R CCHF для проведения П Ц Р . 3. Сверху добавить по 1 капле минерального масла для ПЦР (примерно 25 мкл). Б . Проведение амплификации 1. Взять подготовленны е для П Ц Р пробирки. Под м асло или непосредственно на масло, используя наконечники с ф ильтром, внести по 10 мкл кДНК-проб, полученных в реакции обратной транскрипции РНК. 2. Поставить контрольные реакции амплификации; а) отрицательный контроль ПЦР (К-) - вместо кДНК-пробы внести в подготовленную пробирку 10 мкл ТЕ-буфера; б) положительный контроль ПЦР (К+) - внести в пробирку 10 мкл ПКО кДНК CCHF. ^ 3. Запустить на ам пл иф икаторе нужную программу (см. табл. 1). 4. Когда тем п ература в ячейках достигнет 95 °С (реж им паузы), поставить пробирки в ячейки ам пл иф икатора и нажать кнопку продолжения программы. Рекомендуется перед постановкой в ам плиф икатор осадить капли со стенок пробирок кратким центриф угированием на вортексе (1 -3 с). 13 --- стр. 15 --- Программа амплификации кДНК CCHFV Таблица 1 Амплификаторы с активным регулированием (по раствору в пробирке): «Терцик» («ДНК-Технология») GeneAmp PCR System 2700 (Applied Biosystems) MaxyGene (Axygen) ц и к лтемпература время циклы температура время циклы температура время циклы 95 “С пауза 93 °С пауза пауза 95 “С 15 мин 94 °С 15 мин 95 °С 15 мин 95 °С Ю с 94 °С Ю с 15с 60 “С Ю с 42 60 °с 30 с 42 60 °с 30 с 42 1 5 с 72 °С 35 с 72 X 30 с 72 X 2 мин 1 72 X 2 мин 1 72 X 2 мин 1 10 X хранение 4 Х хранение 4 Х хранение 4. После окончания реакции пробирки отправить в пом ещ ение для детекции продуктов ам плиф икации (ЗОНУ 3). Пробы после амплиф икации можно хранить 16 ч при комнатной тем пературе, в течение 1 нед при тем пературе от 2 до 8 °С (однако, перед проведением электроф ореза необходим о нагреть пробирки до комнатной тем пературы для размягчения воска). Анализ продуктов ам плиф икации проводится разд ел ением ф рагментов кДНК в агарозном геле. ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКАЯ ДЕТЕКЦИЯ ПРОДУКТОВ АМПЛИФИКАЦИИ Детекцию провести в соответствии с инструкцией к используемому комплекту реагентов для электроф оретической детекции продуктов амплиф икации «ЭФ» вариант 50. ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ Интерпретация результатов П Ц Р-исследования проводится по наличию или ч- отсутствию на электроф ореграм м е специф ических полос амплиф ицированной кДНК (см. табл.2). Длина специфических полос амплифицированных фрагментов кДНК: CCHFV ВКО -281 П.Н., - 504 п.н. 14 --- стр. 16 --- Таблица 2 Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследования Контроль ПК ок к- к+ Контролируемый этап ПЦР-анализа Экстракция РНК Экстракция РНК ПЦР ПЦР Специфическая полоса на элекгрофореграмме полоса 281 п.н. Есть Нет Нет Есть полоса 504 п.н. Есть Есть Нет Нет 1. В дорожке, соответствующей положительному контролю этапа выделения (ПК), должны быть д ве яркие светящ иеся оранжевы е полосы: специф ическая - на уровне 281 п.н. и полоса внутреннего контроля - на уровне 504 п.н. 2. В дорожке, соответствующей отрицательному контролю этапа выделения (ОК), долж на быть только полоса ВКО на уровне 504 п.н. 3. В дорожке, соответствующей положительному контролю этапа ПЦР (К+), должна быть яркая специф ическая светящ аяся оранж евая полоса на уровне 281 п.н. 4. В дорожке, соответствующей отрицательному контролю этапа ПЦР (К-) не должно быть никаких полос. 5. Положительными считаются образцы, которые сод ерж ат специфическую светящуюся полосу на уровне 281 п.н. больш ей или меньш ей интенсивности, независимо от наличия или отсутствия полосы внутреннего контроля. Полоса внутреннего контроля м ож ет отсутствовать в пробах с высокой концентрацией РНК вируса CCHF. 6. Отрицательными считаются образцы, которы е содерж ат только полосу 504 п.н. больш ей или м еньш ей интенсивности (за исклю чением отрицательного контроля этапа П Ц Р - (К -)). ^ 7. Кроме полос 281 п.н. и 504 п.н., в дорожках могут наблюдаться нечеткие размытые полосы прайм ер-дим еров, которые располагаю тся ниже уровня 100 нуклеотидных пар. Результаты анализа не подлежат учету в следующих случаях: 1. Если результаты ан ал и за контрольных точек не совпадаю т с приведенными в табл. 2, то соответствую щ ий этап анализа следует переделать. 2. Если в дорожке какой-либо из исследуемых проб отсутствую т обе полосы длиной 281 п.н. и 50 4 п.н. результат анализа по данной пробе считается недействительным, необходимо повторить исследование этой пробы с этапа экстракции Р Н К. Причиной могла явиться ош ибка в процедуре обработки 15