Реагент ДНК-полимераза "ДиаТак-полимераза" по ТУ 9398-067-01897593-2008 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2008/03088 от 30.07.2008 · класс риска 2а

Производитель: ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (Россия)

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА 
Приказом Росздравнадзора
от №
(,Ь
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального
государственного учреждения 
науки «Центральный научно- 
исследовательский институт
эпидемиологии» .Федеральной 
службы по надзору в сфере 
защтЬ! прав' потребителей и 
благополучия человека :
' 'В.И,Покровский 
«С^» : У 2008 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению реагента ДНК-полимеразы
«ДиаТ ак-полимераза»


--- стр. 2 ---
Реагент «ДиаТак-полимераза» из термофильной бактерии Thermus aquaticus, 
модифицированная, выпускаемая в буфере для хранения. Прозрачная бесцветная жидкость 
без опалесценции и посторонних включений. Препарат имеет молекулярную массу 94 ± 2 
кДа и обладает ДНК-полимеразной активностью, т.е. способностью полимеризовать дНТФ в 
комплементарную цепь на ДНК-матрицах.
ФОРМА ВЫПУСКА.
Реагент выпускается в 4 формах комплектации;
Форма 1 включает реагент «ДиаТак-полимераза» с активностью 500 ед. (объем 0,1 мл; 1 
пробирка), 5-кратный ПЦР-буфер (объем 1,0 мл; 1 пробирка).
Форма 2 включает реагент «ДиаТак-полимераза» с активностью 1000 ед. (объем 0,2 мл; 1 
пробирка), 5-кратный ПЦР-буфер (объем 1,0 мл; 1 пробирка).
Форма 3 включает реагент «ДиаТак-полимераза» с активностью 5000 ед. (объем 1,0 мл; 1 
пробирка).
Форма 4 включает реагент «ДиаТак-полимераза» с активностью 25000 ед. (объем 5,0 мл; 1 
пробирка).
НАЗНАЧЕНИЕ.
ДиаТак-полимераза - ДНК-полимераза, предназначена для полимеризации 
дезоксирибонуклеозидтрифосфатов на ДНК-матрицах, в частности, для использования в 
наборах реагентов для диагностики инфекционных заболеваний, основанных на методе 
полимеразной цепной реакции.
СПЕЦИФИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ.
2,5 единицы фермента ДиаТак-полимеразы (0,5 мкл препарата с концентрацией 5 ед/мкл 
или 0,25 мкл препарата с концентрацией 10 ед/мкл) позволяют выявлять не менее 10 молекул
о
ДНК в исследуемой пробе (1x10 копий/мл) после проведения 40 циклов ПЦР при объеме 
реакционной смеси 25 мкл.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.
1. Необходимо строго соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, 
производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при 
работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений 
системы здравоохранения СССР», Москва, 1981 г.
2


--- стр. 3 ---
6^
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, ТРЕБУЕМЫЕ ДЛЯ 
ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР-АМПЛИФИКАЦИИ.
(с указанием фирм-производителей/поставщиков):
1. Амплификатор (например, «Терцик», «ДНК-Технология», Россия).
2. ПЦР-бокс (например, «БАВ-ГЩР-«Ламинар-С»», «Ламинарные системы», Россия).
3. Вортекс (например, «ТЭТА-2», «Биоком», Россия).
4. Отдельный набор автоматических пипеток переменного объема (например, «Ленпипет», 
Россия).
5. Одноразовые полипропиленовые микропробирки для ПЦР на 0,5 мл (например, 
«Axygen», США).
6. Штативы для микропробирок (например, «ИнтерЛабСервис», Россия).
7. Одноразовые наконечники с аэрозольным барьером до 200 мкл (например, «Axygen», 
США).
8. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой не выше минус 16 °С.
9. Отдельный халат и одноразовые перчатки.
10. Емкость с дезинфицирующим раствором.
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-АМПЛИФИКАЦИИ.
(проводится в ЗОНЕ 2 - помещении для проведения ПЦР-амплификации).
Оптимальные условия (время инкубации, температура, концентрация фермента, объем 
пробы ДНК, праймеры, Mg^"^) зависят от исполъзуемой системы и определяются 
индивидуально. Оптимальная концентрация Mg - (2 - 10) ммоль/л.
В реакцию в объеме 50 мкл берут 5 ед. фермента. В стерильную микропробирку на 0,5 мл 
типа «Эппендорф» вносят:
- ПЦР-буфер 5-кратный (трис-НС1 340 ммоль/л, сульфат аммония 84 ммоль/л, магния 
сульфат 15 ммоль/л, ксиленцианол 0,02%, pH 8,3) - 10 мкл;
- Нуклеозидтрифосфаты 10 ммоль/л - по 1 мкл;
- Праймеры - по 5-25 пмоль/л каждого;
- ДиаТак-полимераза 5 ед./мкл - 5 ед./50 мкл;
- Проба ДНК - менее 0,1 мкг в 10 мкл.
Смесь перемешивают, сверху наслаивают минеральное масло (25 мкл), чтобы избежать 
испарения. Пробирку помещают в амплификатор и проводят обычно 35-45 циклов 
денатурации-отжига праймеров-полимеризации.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ.
Учёт результатов ПЦР-анализа проводится по наличию или отсутствию на
3


--- стр. 4 ---
6 7
электрофореграмме специфических полос амплифицированной ДНК.
ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЕ.
1. Обеззараживание следует проводить, помещая одноразовую пластиковую посуду 
(пробирки, наконечники), на 20-24 ч в специальные контейнеры, содержащие 
дезинфицирующий 0,2 % раствор ДП-2Т.
ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ. При температуре от 2 до 8 °С в не более 5 сут.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ. При температуре не выше минус 16 °С.
СРОК годности. 2 года. Реагент с истекшим сроком годности применению не подлежит.
Реклаглации на качество реагента «ДиаТак-полимераза» направлять в адрес ФГУП ГИСК 
им. Л.А. Тарасевича Роспотребнадзора (119002, г. Москва, пер. Сивцев Вражек, д. 41, тел. 
(495) 241-39-22, факс (495) 241-92-38), в адрес предприятия-изготовителя ФГУП ЦНИИЭ 
Роспотребнадзора (111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, д. За, тел. (495) 305-39-39, факс