Набор реагентов для выявления ДНК Candida albicans в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле "АмплиСенс® Candida albicans-EPh" по ТУ 9398-068-01897593-2008 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДАЮ Заместитель директора по эпидемиологии - Врио директора Федерального бюджетного учреждения науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотре^й^^Брй^^Чк — ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для выявления ДНК Candida albicans в клиническом материале методом полимеразной ценной реакции (ПЦР) с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле «АмплиСенс® Candida albicans-EVh» АмплиСенс ® ш1 ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Российская Федерация, 111123, город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА IVD --- стр. 2 --- ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ Набор реагентов выпускается в 5 формах комплектации; Форма 1 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100, «ПЦР-комплект» вариант 100 R (пробирки 0,5 мл), «ЭФ» вариант 200; Форма 2 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100, «ПЦР-комплект» вариант 100 R (пробирки 0,2 мл), «ЭФ» вариант 200; Форма 3 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант 100 R (пробирки 0,5 мл); Форма 4 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант 100 R (пробирки 0,2 мл); Форма 5 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант 200. ВНИМАНИЕ! Заявленные аналитические характеристики набора реагентов при работе с формами 3, 4 и 5 гарантируются только в случае применения дополнительных комплектов реагентов «ДНК-сорб-АМ» и «ЭФ» производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. В настоящей инструкции применяются следующие термины и сокращения: ДНК - Дезоксирибонуклеиновая кислота. ПЦР - Полимеразная цепная реакция в к о - Внутренний контрольный образец BKO-FL - Внутренний контрольный образец для наборов с гибридизационно- флуоресцентной детекцией ПКО - Положительный контрольный образец ОКО - Отрицательный контрольный образец ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора - Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно- исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека СОСТАВ Комплект реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100 (ТУ 9398-036-01897593-2009) - комплект реагентов для вьщеления ДНК из клинического материала включает: Реактив Описание Объем (мл) Кол-во Лизирующий раствор Прозрачная жидкость от бесцветного до желтого или розового цвета' 30 1 флакон Отмывочный раствор Прозрачная бесцве тная жидкость 100 1 флакон Сорбент универсальный Суспензия от белого до темно бежевого цвета 1,0 2 пробирки ТЕ-буфер для элюции ДНК Прозрачная бесцветная жидкость 5,0 2 пробирки ' При хранении лизирующего раствора при температуре от 2 до 8 °С возможно образование осадка в виде кристаллов. стр. 2 --- стр. 3 --- Дополнительно к комплекту реагентов «ДНК-сорб-АМ» прилагаются следующие реактивы: Реактив Описание Объем (мл) Кол-во Транспортная среда для мазков Прозрачная бесцветная жидкость 30 1 флакон 2ВКО комплексный Прозрачная бесцветная жидкость 1,0 1 пробирка BKO-FL^ Прозрачная бесцветная жидкость 1,0 1 пробирка ОКО Прозрачная бесцветная жидкость 1,2 1 пробирка А V \_/ iTX X 4 ^ 4 W X V X VCX W X л X v^ 4_Х W X X X X W -V X X X X W X X X Х _ Х Х ^ _ ^ ■ / X X X X X ^^ X XXV X X — X А. \У \У XX ^ N xX V X ^ Х хХ Х Х аХ XX V -* х Х хХ Х X X X X X XXX J-X W V X X X ■ Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант 100 R или вариант 200 - комплект реагентов для ПЦР-амплификации ДНК Candida albicans включает: Реактив Описание «ПЦР-комплект» вариант 100 R «ПЦР-комплект» вариант 200 Объём (мл) Кол-во Объём (мл) Кол-во ПЦР-смесь-1 Candida albicans Прозрачная бесцветная жидкость . . . — 1,1 1 пробирка ПЦР-смесь-1-R Candida albicans Прозрачная бесцветная жидкость 0,005 110 пробирок — — ПЦР-смесь-2 blue Прозрачная жидкость синего цвета 1,2 1 пробирка 1,2 2 пробирки Воск для ПЦР Твердое вещество белого цвета — — 1,7 2 пробирки Минеральное масло для ПЦР Бесцветная вязкая жидкость 4,0 1 флакон 8,0 1 флакон ПКО ДНК Candida albicans Прозрачная бесцветная жидкость 0,2 1 пробирка 0,2 1 пробирка ДНК-буфер Прозрачная бесцветная жидкость 0,5 1 пробирка 0,5 1 пробирка Комплект реагентов вариант 100 R рассчитан на проведение 110 реакций амплификации, включая контроли. Комплект реагентов вариант 200 рассчитан на проведение 220 реакций амплификации, включая контроли. Комплеюг реагентов «ЭФ» вариант 200 - комплект peai'CHTOB для электрофоретической детекции продуктов амплификации в агарозном геле включает: ^ Препарат ВКО комплексный используется для выделения ДНК при работе с наборами с электрофоретической детекцией. ^ Препарат BKO-FL используется для выделения ДНК при работе с наборами с гибридизационно- флуоресцентной детекцией. стр. 3 --- стр. 9 --- 8. Штативы для наконечников и микропробирок на 0,5 (0,2) мл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные). 9. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24 до минус 16 °С. 10. Отдельный халат и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09. 11. Емкость для сброса наконечников. ЗОНА 3. Для детекции продуктов ПЦР-амплификации методом электрофореза в агарозном геле требуются: 1. Камера для горизонтального электрофореза объёмом не более 400 мл (например, «SE-2», «Хеликон», Россия). 2. Источник постоянного тока с напряжением 150-460 В (например, «Эльф-4», «ДНК- Технология», Россия). 3. Ультрафиолетовый трансиллюминатор с кабинетом для просмотра гелей (например, «Биоком», Россия). 4. Гель-документирующая система GelDoc-It (например, UVP, EEC. («ЮВиПи, ЛЛС»), США). 5. Аквадистиллятор. 6. Холодильник от 2 до 8 °С. 7. Микроволновая печь для плавления агарозы. 8. Колба коническая из термостойкого стекла (ГОСТ 21400-75) для плавления агарозы на 250 мл. 9. Мерный цилиндр на 1 л (ГОСТ 1770-74). 10. Штатив для микропробирок на 0,5 (0,2) мл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные). 11. Отдельный механический или электронный дозатор объемом 10-40 мкл (например, «Ленпипет», Россия). 12. Одноразовые наконечники до 200 мкл в штативе (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные). 13. Пластиковая ёмкость на 5 л для сбора буфера и гелей, содержащих бромид этидия. 14. Отдельный халат и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09 15. Емкость для сброса наконечников. ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-АНАЛИЗА ЭТАП 1. ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ ПРОБ. (проводится в ЗОНЕ 1 - помещении для обработки проб). стр. 9 --- стр. 10 --- т i Объем пробы (клинического материала в транспортной среде для мазков), необходимый для выделения ДНК, - 0,1 мл. Порядок работы. 1. Лизирующий раствор (если он хранился при температуре от 2 до 8 °С) прогреть, перемешивая при температуре 65 °С до полного растворения кристаллов. 2. Добавление реагентов. Способ 1 - отобрать необходимое количество одноразовых пробирок 1,5 мл (включая отрицательный контроль выделения) и, используя наконечник с аэрозольным барьером, внести в каждую пробирку по 10 мкл ВКО комплексного. - ресуспендировать сорбент универсальный до гомогенной консистенции, внести в каждую пробирку по 20 мкл сорбента универсального и по 300 мкл лизирующего раствора, используя наконечники с аэрозольным барьером. Промаркировать пробирки. Способ 2 - перед началом работы во флакон с лизирующим раствором добавить весь объем (2 мл на 30 мл лизирующего раствора) предварительно гомогенизированного сорбента универсального и необходимый объем (1 мл на 30 мл лизирующего раствора) ВКО комплексного, и перемешать. Допускается хранение полученной смеси в течение 2 сут при комнатной температуре. Перед применением тшательно перемешать. - отобрать необходимое количество одноразовых пробирок 1,5 мл (включая отрицательный контроль выделения) и, используя наконечник с аэрозольным барьером, внести в каждую пробирку по 320 мкл подготовленной смеси лизирующего раствора, сорбента универсального и ВКО комплексного. Промаркировать пробирки. 3. В пробирки согласно маркировке внести по 100 мкл пробы, используя для каждой пробы отдельный наконечник с аэрозольным барьером. В пробирку отрицательного контроля (ОК) выделения внести 100 мкл ОКО, используя наконечник с аэрозольным барьером. 4. Содержимое пробирок тщательно перемешать на вортексе и инкубировать 5 мин при температуре 65 °С в термостате. После окончания инкубации перемешать на вортексе и поставить в штатив на 2 мин. 5. Осадить сорбент универсальный в пробирках центрифугированием при 10 тыс об/мин в течение 30 с. Не захватывая сорбент универсальный, удалить надосадочную жидкость в колбу-ловушку с помощью вакуумного отсасывателя, используя для каждой пробы отдельный наконечник без аэрозольного барьера. 6. Добавить в пробы по 1 мл отмывочного раствора, перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента универсального. стр. 10 --- стр. 11 --- 7. Повторить п. 5. 8. Поместить пробирки в термостат с температурой 65 °С на 5-10 мин для подсушивания сорбента универсального. При этом крышки пробирок должны быть открыты. 9. В пробирки добавить по 100 мкл ТЕ-буфера для элюции ДНК. Перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента универсального. Поместить в термостат с температурой 65 °С на 5 мин. 10. Перемешать на вортексе. Центрифугировать пробирки при 12 тыс об/мип в течение 1 мин на микроцентрифуге. Надосадочная жидкость содержит очищенную ДНК (ДНК-проба). Указанный материал готов к постановке ПЦР. ДНК-нробы можно хранить в течение 1 нед при температуре от 2 до 8 °С и в течение года при температуре не выше минус 16 °С. Пробирки с ДНК-пробами переносят в зону ПЦР-амплификации. i ЭТАП 2. ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-АМПЛИФИКАЦИИ. (проводится в ЗОНЕ 2 - помещении для проведения ПЦР-амплификации). Общий объем реакции - 25 мкл, объем ДИК-пробы - 10 мкл. В комплекте реагентов применяется «горячий старт», который обеспечивается разделением нуклеотидов и 3’aq-пoлимepaзы прослойкой воска. Плавление воска и перемешивание реакционных компонентов происходит только при установке пробирок в амплификатор, нагретый до 95 °С, что значительно снижает количество неспецифически затравленных реакций. А. Подготовка пробирок для проведения ПЦР. При использовании комплекта реагентов «ПЦР-комплект» вариант 100 R пункты 1 и 2 выполнять не нужно. 1. Пробирку с воском для ПЦР прогреть в термостате при температуре 95 °С до полного расплавления. 2. Раскапать на дно микропробирок для амплификации по 5 мкл ПЦР-смеси-1 Candida albicans. Сверху добавить по капле (примерно 10-15 мкл) расплавленного воска так, чтобы он полностью накрыл жидкость, закрыть крышки пробирок, подписать на каждой сокрашенное название инфекции. Пробирки с разлитой ПЦР-смесью-1 Candida albicans и воском можно хранить при температуре от 2 до 8 °С в течение 1 нед. 3. Отобрать необходимое количество подготовленных в п. 2 пробирок, или пробирок с ПЦР-смесыо-1-R Candida albicans, для амплификации ДНК исследуемых и контрольных проб. 4. На поверхность воска внести по 10 мкл ПЦР-смеси-2 blue, при этом она не должна стр. 11 --- стр. 13 --- Образцы после амплификации можно хранить в течение 16 ч при комнатной температуре, в течение 1 нед при температуре от 2 до 8 °С и длительно при температуре не выше минус 16 °С (однако перед проведением электрофореза необходимо нагреть пробирки до комнатной температуры для размягчения воска). Анализ продуктов амплификации проводится разделением фрагментов ДНК в агарозном геле. i ЭТАП 3. ДЕТЕКЦИЯ ПРОДУКТОВ ПЦР-АМПЛИФИКАЦИИ МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА В АГАРОЗНОМ ГЕЛЕ. (проводится в ЗОНЕ 3 - помещении для детекции продуктов ПЦР-амплификации). ВНИМАНИЕ! РАБОТА С АМПЛИФИЦИРОВАИИОЙ ДНК ДОЛЖНА ПРОВОДИТЬСЯ В ОТДЕЛЬНОЙ КОМНАТЕ СОТРУДНИКОМ ЛЛЬОРАТОРИИ, НЕ ПРОИЗВОДЯЩИМ МАНИПУЛЯЦИЙ В ЗОНЕ 1 И ЗОНЕ 2. Приготовление рабочих растворов и агарозного геля. 1. Приготовить рабочий электрофорезный буфер. В мерный цилиндр влить 25 мл трис- боратного буфера (ТБЕ) концентрированного с бромидом этидия, довести дистиллированной водой до 500 мл, закрыть цилиндр парафильмом и перемешать. ВНИМАНИЕ! Бромид этидия - соединение, обладающее репродуктивной и острой токсичностью, поэтому при работе с ним следует соблюдать правила безопасности: работать только в перчатках, избегать попадания на кожу и слизистые, при попадании на кожу или слизистые тщательно промыть соответствующий участок водой. 2. Агарозу для электрофореза ДНК из одного флакона пересыпать в стеклянную колбу из термостойкого стекла на 250 мл. Налить 100 мл рабочего буфера, перемешать вращением колбы и плавить в микроволновой печи до полного растворения агарозы. Время плавления агарозы в микроволновой печи мощностью 800 Вт при ее загруженности 1 колбой - 1,5 мин. Если в микроволновую печь мощностью 800 Вт ставится 5 колб с агарозой, время плавления увеличивается до 5 мин. Вынуть колбу с расплавленной агарозой из микроволновой печи, аккуратно перемешать, вращая колбу. После этого вновь поместить колбу с агарозой в микроволновую печь на 1,5 мин (при мощности 800 Вт), довести агарозу до кипения. Вынуть колбу из микроволновой печи и остудить агарозу, вращая колбу, до температуры 65-70 °С. 3. Выровнять столик для заливки гелей, залить расплавленный гель в форму камеры для горизонтального элекзрофореза. Толщина геля должна бьггь около 0,6 см. Установить гребенки, не касаясь дна формы, на расстоянии не менее 5 см друг от друга. 4. После полного застывания геля (30 мин при комнатной температуре), осторожно вынуть из него гребенки, не повредив лунки. Поместить подложку с готовым гелем в камеру для стр. 13 --- стр. 14 --- горизонтального электрофореза, лунки должны располагаться ближе к отрицательному электроду (ДНК будет двигаться к положительному). Залить в камеру для горизонтального электрофореза готового буфера столько, чтобы он покрывал гель на 5 мм сверху. Порядок работы. 1. Пробирки с продуктами амплификации выставить в штатив последовательно, отобрать из- под слоя масла по 10-15 мкл пробы и внести в лунки геля (если для нанесения разных проб используется один и тот же наконечник, то его необходимо промывать буфером из камеры после нанееения каждого образца). В каждом ряду лунок геля должен быть обязательно представлен К+ и, желательно, маркер молекулярных масс (с набором не поставляется). 2. Подключить камеру к источнику тока, соблюдая полярность (ДНК движется к положительному электроду), и включить источник. Оптимальное напряжение электрического поля 10 В/см. При использовании камеры «SE-2» («Хеликон») и источника питания «Эльф-4» («ДНК-Технология») параметры источника следующие: напряжение 250 В, стабилизация по напряжению, время элекзрофореза - 18-20 мин. 3. Когда краситель пройдет примерно половину длины геля (не менее 1,5 см), вьпслючить источник тока, перенести гель на трансиллюминатор, расположив полосы горизонтально лунками вверх. Получить изображение геля на компьютере с помощью видеосистемы, отмечая порядок нанесения проб, занести в базу данных. ВНИМАНИЕ! При просматривании геля и фотографировании глаза и лицо должны быть защищены маской или стеклянной плаетиной! УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ Учёт результатов ПЦР-анализа проводится по наличию или отсутствию на ^ электрофореграмме специфических полос амплифицированной ДНК (см. табл. 2). Длина специфических полос амплифицированиых фрагментов ДНК: Candida albicans - 370 п.н. ВКО комплексный - 730 п.н. Таблица 2. Результаты постановки контролей различных этапов ПЦР-анализа Контроль Контролируемый этап ПЦР-анализа Специфическая полоса на электрофореграмме полоса 370 п.н. полоса 730 п.н. «ОК» Выделение ДНК Нет Есть «К-» ПЦР Нет Нет «К+» ПЦР Есть Нет 1 В дорожке, соотвегствующей огрицательиому кошролю этана выделения (ОК), должна быть только полоса внутреннего контроля на уровне 730 п.н. стр. 14 --- стр. 15 --- i 2. В дорожке, соответствующей положительному контролю этапа ПЦР (К+), должна быть полоса положительного контроля - 370 п.н., полоса внутреннего контроля 730 п.н. должна отсутетвовать. Возможно приеутетвие полос праймер-димеров, находящихся ниже уровня 100 п.н. 3. В дорожке, соответствующей отрицательному контролю этапа ПЦР (К— ), не должно быть никаких полое, за иеключением возможных праймер-димеров, находящихея ниже уровня 100 п.н. 4. Положительными считаются образцы, которые содержат специфическую светящуюся полосу на уровне 370 пль большей или меньшей интенсивности независимо от наличия полосы внутреннего контроля. Полоса внутреннего контроля может отсутствовать в пробах с высокой концентрацией ДНК Candida albicans. 5. Отрицательными считаются образцы, которые содержат только полосу 730 п.н. большей или меньшей интенсивности и не содержат полосу 370 п.н. 6. Кроме полос 370 п.н. и 730 п.н. в дорожках могут наблюдаться нечеткие размытые полосы праймер-димеров, которые располагаются ниже уровня 100 нуклеотидных пар. Результаты анализа не подлежат учеэу в следующих случаях: 1. Если результаты анализа контрольных точек не совпадают с приведенными в табл. 2, то соответствующий этап анализа следует переделать. 2. Если в дорожке какой-либо из исследуемых проб отсутствуют обе полосы, и 370 п.н. и 730 п.н. Результат анализа по данной пробе считается недействительным, необходимо повторить исследование этой пробы с этапа выделения ДНК. Возможная причина: ошибка в процедуре подготовки исследуемого материала, приведшая к потере ДНК или ингибированию ПЦР. 3. В дорожках появляются неспецифические полосы на разных уровнях. Возможные причины: отсутствие «горячего старта» или неверный температурный режим в ячейках амплификатора. 4. Если в о'грицательном кошроле (ОК, К-) выявляется специфическая полоса 370 п. и., значит, произошла контаминация реактивов или образцов. Результаты анализа считают недействительными. Требуется повторить анализ проб, а также предпринять меры по выявлению источника контаминации. стр. 15 --- стр. 16 --- СРОК годности, УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ Срок годности. 9 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежит. Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых транспортных средств. При получении разукомплектовать в соответствии с указанными температурами хранения. Хранение. Комплект реагентов «ДНК-сорб-АМ» (кроме транспортной среды для мазков, ВКО комплексного, BKO-FL и ОКО) хранить при температуре от 2 до 25 °С. Транспортную среду для мазков, ВКО комплексный, BKO-FL, ОКО и комплект реагентов «ПЦР-комплект», хранить при температуре от 2 до 8 °С. Комплект реагентов «ЭФ» хранить при температуре от 18 до 25 °С в защищенном от света месте. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ Изготовитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик набора реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и применения. Медицинское изделие техническому обслуживанию и ремонту не подлежит. Рекламации по качеству набора реагентов направлять по адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail: cs(@pcr.ru^. При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере здравоохране}шя) в соответствии с действующим законодательством. Заведующий НПЛ ОМДиЭ ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора Е.Н. Родионова Главный врач ФГБУ «Поликлиника №1» Управления делами Президента Российской Федерацир^ Д/^^С Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы может» рфп сайте: www.amplisens.ru . Е.В. Ржевская кету потребителя на стр. 16 --- стр. 17 --- символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ REF LOT IVD VER I Mil Номер по каталогу Код партии Медицинское изделие для диагностики in vitro Дата изменения Т емпературный диапазон Изготовитель А Осторожно! Обратитесь к инструкции по применению V 1 1 Содержимого достаточно для проведения п- количества тестов Использовать до т Обратитесь к инструкции по применению Не допускать воздействия солнечного света Дата изготовления стр. 17