Набор реагентов для выявления ДНК Gardnerella vaginalis в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле «АмплиСенс® Gardnerella vaginalis-EPh» по ТУ 9398-043-01897593-2008 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДАЮ Заместитель директора по эпидемиологии - Врио директора Федерального бюджетного учреждения науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ ___ Эпидемиологии Акимкин 2018 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для выявления ДНК Gardnerella vaginalis в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле «АмплиСенс Gardnerella vaginalis-E?\i» АмплиСенс 0 ш 1 ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Российская Федерация, 111123, город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА IVD --- стр. 2 --- ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ Набор реагентов выпускается в 5 формах комплектации: Форма 1 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100, «ПЦР-комплект» вариант 100 R (пробирки 0,5 мл), «ЭФ» вариант 200; Форма 2 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100, «ПЦР-комплект» вариант 100 R (пробирки 0,2 мл), «ЭФ» вариант 200; Форма 3 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант 100 R (пробирки 0,5 мл); Форма 4 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант 100 R (пробирки 0,2 мл); Форма 5 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант 200. ВНИМАНИЕ! Заявленные аналитические характеристики набора реагентов при работе с формами 3, 4 и 5 гарантируются только в случае применения дополнительных комплектов реагентов «ДНК-сорб-АМ» и «ЭФ» производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. В настоящей инструкции применяются следующие термины и сокращения: ДНК - Дезоксирибонуклеиновая кислота. ПЦР - Полимеразная цепная реакция вко - Внутренний контрольный образец BKO-FL - Внутренний контрольный образец для наборов с гибридизационно- флуоресцентной детекцией ПКО - Положительный контрольный образец ОКО - Отрицательный контрольный образец ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора - Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно- исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека СОСТАВ Комплею- реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100 (ТУ 9398-036-01897593-2009) - компле реагентов для вьщеления ДНК из юшнического материала включает: Р е а к т и в О п и с а н и е О б ъ е м (м л ) К о л - в о Лизирующий раствор Прозрачная жидкость от бесцветного до желтого или розового цвета' 30 1 флакон Отмывочный раствор Прозрачная бесцветная жидкость 100 1 флакон Сорбент универсальный Суспензия от белого до темно бежевого цвета 1,0 2 пробирки ТЕ-буфер для элюции ДНК Прозрачная бесцветная жидкость 5,0 2 пробирки При хранении лизирующего раствора при температуре от 2 до 8 °С возможно образование осадка в виде кристаллов. стр. 2 --- стр. 3 --- Дополнительно к комплекту реагентов «ДНК-сорб-АМ» прилагаются следующие реактивы: Р е а к т и в О п и с а н и е О б ъ е м (м л ) К о л - в о Транспортная среда дли мазков Прозрачная бесцветная жидкость 30 1 флакон ВКО комплексный^ Прозрачная бесцветная жидкость 1,0 1 пробирка BKO-FL^ Прозрачная бесцветная жидкость 1,0 1 пробирка ОКО Прозрачная бесцветная жидкость 1,2 1 пробирка Комплект реагентов рассчитан на выделение ДНК из 100 проб, включая контроли. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант 100 R или вариант 200 - комплект реагентов для ПЦР-амплификации ДНК G a r d n e r e lla v a g in a lis включает: Р е а к т и в О п и с а н и е « П Ц Р - к о м п л е к т » в а р и а н т 1 0 0 R « П Ц Р - к о м п л е к т » в а р и а н т 2 0 0 О б ъ ё м (м л ) К о л - в о О б ъ ё м (м л ) К о л - в о ПЦР-смссь-1 G a r d n e r e lla v a g in a lis Прозрачная бесцветная жидкость — — 1,1 1 пробирка ПЦР-смесь-1-R G a r d n e r e lla v a g in a lis Прозрачная бесцветная жидкость 0,005 110 пробирок . . . — ПЦР-смесь-2 blue Прозрачная жидкость синего цвета 1,2 1 пробирка 1,2 2 пробирки Воск для ПЦР Твердое вещество белого цвета — — 1,7 2 пробирки Минеральное масло для ПЦР Бесцве тная вязкая жидкость 4,0 1 флакон 8,0 1 флакон ПКО ДНК G a r d n e r e lla v a g in a lis Прозрачная бесцветная жидкость 0,2 1 пробирка 0,2 1 пробирка ДНК-буфер Прозрачная бесцветная жидкость 0,5 1 пробирка 0,5 1 пробирка ¥ Комплект реагентов вариант 100 R рассчитан на проведение ПО реакций амплификации, включая контроли. Комплект реагентов вариант 200 рассчитан на проведение 220 реакций амплификации, включая контроли. Комплект реагентов «ЭФ» вариант 200 - комплект реагентов для электрофоретической детекции продуктов амплификации в агарозном геле включает: " Препарат ВКО комплексный используется для выделения ДНК при работе с наборами с электрофоретической детекцией. ^ Препарат BKO-FL используется для выделения ДНК при работе с наборами с гибридизационно- флуоресцентной детекцией. стр. 3 --- стр. 10 --- 1. Камера для горизонтального электрофореза объёмом не более 400 мл (например, «SE-2», «Хеликои», Россия). 2. Источник постоянного тока с напряжением 150 - 460 В (например, «Эльф-4», «ДНК- Технология», Россия). 3. Ультрафиолетовый трансиллюминатор с кабинетом для просмотра гелей (например, «Биоком», Россия). 4. Гель-документируюнщя система GelDoc-It (например, UVP, LLC. («ЮВиПи, ЛЛС»), США). 5. Аквадистиллятор. 6. Холодильник от 2 до 8 °С. 7. Микроволновая печь для плавления агарозы. 8. Колба коническая из термостойкого стекла (ГОСТ 21400-75) для плавления агарозы на 250 мл. 9. Мерный цилиндр на 1 л (ГОСТ 1770-74). 10. Штатив для микропробирок на 0,5 (0,2) мл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные). 11. Отдельный механический или электронный дозатор объемом 10-40 мкл (например, «Ленпипет», Россия). 12. Одноразовые наконечники до 200 мкл в штативе (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные). 13. Пластиковая ёмкость на 5 л для сбора буфера и гелей, содержащих бромид этидия. 14. Отдельный халат и одноразовые перчатки но МУ 1.3.2569-09. 15. Емкость для сброса наконечников ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-АНАЛИЗА ЭТАП 1. ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ ПРОБ. (проводится в ЗОНЕ 1 - помещении для обработки проб). Объе.м пробы (клинического материала в транспоргной ереде для мазков), необходимый для выделения ДНК, - 0,1 мл. Порядок работы. 1. Лизируюпщй раствор (если он хранился при температуре от 2 до 8 °С) прогреть, перемешивая при температуре 65 °С до полного растворения кристаллов. 2. Добавление реагентов. Способ 1 стр, 10 --- стр. 11 --- J я - отобрать необходимое количество одноразовых пробирок 1,5 мл (включая отрицательный контроль выделения) и, используя наконечник с аэрозольным барьером, внести в каждую пробирку по 10 мкл ВКО комплексного. - ресуспендировать сорбент универсальный до гомогенной консистенции, внести в каждую пробирку по 20 мкл сорбента универсального и по 300 мкл лизирующего раствора, используя наконечники с аэрозольным барьером. Промаркировать пробирки. Способ 2 - перед началом работы во флакон с лизирующим раствором добавить весь объем (2 мл на 30 мл лизирующего раствора) предварительно гомогенизированного сорбента универсального и необходимый объем (1 мл на 30 мл лизирующего раствора) ВКО комплексного, и перемещать. Допускается хранение полученной смеси в течение 2 сут при комнатной температуре. Перед применением тщательно перемешать. - отобрать необходимое количество одноразовых пробирок 1,5 мл (включая отрицательный контроль выделения) и, используя наконечник с аэрозольным барьером, внести в каждую пробирку по 320 мкл подготовленной смеси лизирующего раствора, сорбента универсального и ВКО комплексного. Промаркировать пробирки. 3. В пробирки согласно маркировке внести но 100 мкл пробы, используя для каждой пробы отдельный наконечник с аэрозольным барьером. В пробирку отрицательного контроля выделения внести 100 мкл ОКО, используя наконечник с аэрозольным барьером. 4. Содержимое пробирок тщательно перемещать на вортексе и инкубировать 5 мин при температуре 65 °С в термостате. После окончания инкубации перемешать на вортексе и поставить в штатив на 2 мин. 5. Осадить сорбент универсальный в пробирках центрифугированием при 10 тыс об/мин в течение 30 с. Не захватывая сорбент универсальный, удалить надосадочную жидкость в колбу-ловушку с помощью вакуумного отсасыватсля, используя для каждой пробы отдельный наконечник без аэрозольного барьера. 6. Добавить в пробы по 1 мл отмывочного раствора, перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента универсального. 7. Повторить п. 5. 8. Поместить пробирки в термостат с температурой 65 °С на 5-10 мин для подсушивания сорбента универсального. При этом крышки пробирок должны быть открыты. 9. В пробирки добавить по 100 мкл ТЕ-буфера дли элюции ДИК. Перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента универсального. Поместить в термостат с температурой 65 °С на 5 мин, периодически встряхивая на вортексе. стр. 11 --- стр. 12 --- т 10. Перемешать на вортексе. Центрифугировать пробирки при 12 тыс об/мин в течение 1 мин на микроцентрифуге. Надосадочная жидкость содержит очигценную ДНК (ДНК-проба). Указанный материал готов к постановке ПЦР. ДНК-пробы можно хранить в течение 1 нед при температуре от 2 до 8 °С и в течение года при температуре не выше минус 16 °С. Пробирки с ДНК-пробами переносят в зону ПЦР-амплификации. ЭТАП 2. ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ЛМПЛИФИКАЦИИ. (проводится в ЗОНЕ 2 - помещении для проведения ПЦР-амплификации). Общий объем реакции - 25 мкл, объем ДНК-пробы -1 0 мкл. В комплекте реагентов применяетея «горячий етарт», который обеенечивается разделением нуклеотидов и Taq-нолимеразы прослойкой воска. Плавление воска и перемешивание реакционных компонентов происходит толъко при установке пробирок в амплификатор, нагретый до 95 °С, что значителъно енижает количество неспецифически затравленных реакций. А. Подготовка пробирок для проведения ПЦР. При исполъзовапии комплекта реагентов «ПЦР-комплект» вариант 100 R пункты 1 и 2 выполнятъ не нужно. 1. Пробирку с воском дли ПЦР прогреть в термостате при температуре 95 °С до полного расплавления. 2. Раскапать на дно микропробирок для амплификации по 5 мкл ПЦР-смеси-1 G a r d n e r e lla v a g in a lis . Сверху добавить по капле (примерно 10-15 мкл) расплавленного воска так, чтобы он полностью накрыл жидкость, закрыть крышки пробирок, подписать на каждой сокращенное название инфекции. Пробирки с разлитой ПЦР-смесью-1 Gardnerella vaginalis и воском можно хранить при температуре от 2 до 8 °С в течение 1 нед. 3. Отобрать необходимое количество подготовленных в п. 2 пробирок, или пробирок с ПЦР-смесъю-1-R G a r d n e r e lla v a g in a lis , для амплификации ДНК исследуемых и контрольных проб. 4. На поверхность воска внести но 10 мкл ПЦР-смсси-2 blue, при этом она не должна проваливаться под воск и смешиваться с содержимым пробирки под воском. 5. Сверху добавить по капле минерального маела для ПЦР (примерно 25 мкл). При использовании амплификатора с термостатируемой крышкой, минеральное масло можно не добавлять. Б. Проведение амплификации. стр. 12 --- стр. 14 --- ЭТАП 3. ДЕТЕКЦИЯ ПРОДУКТОВ ПЦР-АМПЛИФИКАЦИИ МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА В АГАРОЗНОМ ГЕЛЕ. (проводится в ЗОНЕ 3 - помещении для детекции продуктов ПЦР-амплификации). ВНИМАНИЕ! РАБОТА С АМПЛИФИЦИРОВАИИОЙ ДНК ДОЛЖ НА ПРОВОДИТЬСЯ В ОТДЕЛЬНОЙ КОМНАТЕ СОТРУДНИКОМ ЛАБОРА ГОРИИ, НЕ ПРОИЗВОДЯЩ ИМ МАНИПУЛЯЦИЙ В ЗОНЕ 1 И ЗОНЕ 2. Приготовление рабочих растворов и агарозного геля. 1. Приготовить рабочий электрофорезный буфер. В мерный цилиндр влить 25 мл трис- боратного буфера (ТБЕ) концентрированного с бромидом этидия, довести дистиллированной водой до 500 мл, закрыть цилиндр парафильмом и перемешать. ВНИМАНИЕ! Бромид этидия - соединение, обладающее репродуктивной и острой токсичностью, поэтому при работе с ним следует соблюдать правила безопасности: работать только в перчатках, избегать попадания на кожу и слизистые, при попадании на кожу или слизистые тщательно промыть соо тветствующий участок водой. 2. Агарозу для электрофореза ДНК из одного флакона пересыпать в стеклянную колбу из термостойкого стекла на 250 мл. Налить 100 мл рабочего буфера, перемешать вращением колбы и плавить в микроволновой печи до полного растворения агарозы. Время плавления агарозы в микроволновой печи мощностью 800 Вт при ее загруженности 1 колбой - 1,5 мин. Если в микроволновую печь мощностью 800 Вт ставится 5 колб с агарозой, время плавления увеличивается до 5 мин. Вынуть колбу с расплавленной агарозой из микроволновой печи, аккуратно перемешать, врашая колбу. После этого вновь поместить колбу с агарозой в микроволновую печь на 1,5 мин (при мощности 800 Вт), довести агарозу до кипения. Вынуть колбу из микроволновой печи и остудить агарозу, вращая колбу, до температуры 65-70 °С. 3. Выровнять столик для заливки гелей, залить расплавленный гель в форму камеры для горизонтального электрофореза. Толщина геля должна быть около 0,6 см. Установить гребенки, не касаясь дна формы, на расстоянии не менее 5 см друг от друга. 4. После полного застывания геля (30 мин при комнатной температуре), осторожно вынуть из него гребенки, не повредив лунки. Поместить подложку с гозовым гелем в камеру для горизонтального электрофореза, лунки должны располагаться ближе к отрицательному электроду (ДНК будет двигаться к положительному). Залить в камеру для горизонтального электрофореза готового буфера столько, чтобы он покрывал гель на 5 мм сверху. Порядок работы. 1. Пробирки с продуктами амплификации выставить в штатив последовательно, отобрать из- стр. 14 --- стр. 15 --- под слоя масла по 10-15 мкл пробы и внести в лунки геля (если для нанесения разных проб используется один и тот же наконечник, то его необходимо промывать буфером из камеры поеле нанесения каждого образца). В каждом ряду лунок геля должен быть обязательно представлен К+ и, желательно, маркер молекулярных масс (с набором не поетавляется). 2. Подключить камеру к иеточнику тока, соблюдая полярность (ДНК движется к положительному электроду), и включить источник. Оптимальное напряжение электрического поля 10 В/см. При использовании камеры «SE-2» («Хеликон») и источника питания «Эльф-4» («ДНК-1'ехнология») параметры источника следующие: напряжение 250 В, стабилизация по напряжению, время элекзрофореза - 18-20 мин. 3. Когда краситель пройдет примерно половину длины геля (не менее 1,5 см), вьжлючить источник тока, перенести гель на трансиллюминатор, расположив полосы горизонтально лунками вверх. Получить изображение геля на компьютере с помощью видеосистемы, отмечая порядок нанееения проб, занести в базу данных. ВНИМАНИЕ! При просматривании геля и фотографировании глаза и лицо должны быть защищены маской или стеклянной пластиной; i УЧЕ Г РЕЗУЛЬТАТОВ Учёт результатов ПЦР-анализа проводится по наличию или отсутствию на электрофореграмме специфических полос амплифицированной ДНК (см. табл. 2). Длина специфических полос амплифицироваииых фрагментов ДНК: G a r d n e r e lla v a g in a lis - 355 иль ВКО комплексный - 640 пль Таблица 2. Результаты постановки коптролей различных этапов ПЦР-анализа Контроль Контролируемый этап ПЦР-анализа Специфическая полоса на электрофореграмме полоса 355 пль полоса 640 плз. «ОК» Выделение ДНК Нет Есть «К-» ПЦР Нет Нет «К+» 11ЦР Есть Нет 1. В дорожке, соответствующей отрицательному контролю этапа выделения (ОК), должна быть только полоса внутреннего контроля на уровне 640 иль 2. В дорожке, соответствующей положительному контролю этапа ПЦР (К+), должна быть полоса положительного контроля - 355 иль, полоса внутреннего контроля 640 пль должна отсутствовать. Возможно присутствие полос праймер-димеров, находящихся ниже уровня 100 п.н. 3. В дорожке, соответствующей отрицательному контролю этапа ПЦР (К -), не должно стр. 15 --- стр. 16 --- быть никаких полос, за исключением возможных праймер-димеров, находящихся ниже уровня 100 п.н. 4. Положительными считаются образцы, которые содержат специфичеекую еветящуюся полосу на уровне 355 иль большей или меньшей интенсивности независимо от наличия полосы внутреннего контроля. Полоса внутреннего контроля может отсутствовать в пробах с высокой концентрацией ДНК G a r d n e r e lla v a g in a lis. 5. Отрицательными считаются образцы, которые содержат только полосу 640 п.н. большей или меньшей интенсивности и не содержат полосу 355 и.и. 6. Кроме полос 355 п.н. и 640 п.н. в дорожках могут наблюдаться нечеткие размытые полосы праймер-димеров, которые располагаются ниже уровня 100 нуклеотидных пар. Результаты анализа не подлежат учету в следующих случаях: 1. Если результаты анализа конзрольных точек не совпадают с приведенными в табл. 2, то соответствующий этап анализа следует переделать. 2. Если в дорожке какой-либо из исследуемых проб отсутствуют обе полосы, и 355 п.н. и 640 п.н. Результат анализа по данной пробе считается недействительным, необходимо повторить исследование этой пробы с этапа выделения ДНК. Возможная причина: ощибка в процедуре подготовки исследуемого материала, приведшая к потере ДНК или ингибированию ПЦР. 3. В дорожках появляются неспецифические полосы на разных уровнях. Возможные причины: отсутствие «горячего старта» или неверный температурный режим в ячейках амплификатора. 4. Если в отрицательном контроле (ОК, К-) выявляется специфическая полоса 355 п. н., значит, произошла контаминация реактивов или образцов. Результаты анализа считают недействительными. Требуется повторить анализ проб, а также предпринять меры по выявлению источника контаминации. стр. 16 --- стр. 17 --- СРОК годности, УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ Срок годности. 9 мес. Набор реагентов е иетекшим сроком годности применению не подлежит. Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых транспортных средств. При получении разукомплектовать в соответствии с указанными температурами хранения. Хранение. Комплект реагентов «ДНК-сорб-АМ» (кроме транспортной среды для мазков, ВКО комплексного, BKO-FL и ОКО) хранить при температуре от 2 до 25 °С. Транспортную среду для мазков, ВКО комплексный, BKO-FL, ОКО и комплект реагентов «ПЦР-комплект», хранить при температуре от 2 до 8 °С. Комплект реагентов «ЭФ» хранить при температуре от 18 до 25 °С в защищенном от света месте. г а р а н т и й н ы е о б я з а т е л ь с т в а и з г о т о в и т е л я Изготовитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик набора реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и применения. Медицинское изделие техническому обслуживанию и ремонту не подлежит. Рекламации по качеству набора реагентов направлять по адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail: cs(@pcr.ru^. При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному выще, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим законодательством. Заведующий ННЛ ОМДиЭ ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора Главный врач ФГБУ «Поликлиника №1» Управления делами Президента Российской Федерации Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете о сайте: www.amplisens.ru . Е.Н. Родионова .В. Ржевская потребителя на стр. 17 --- стр. 18 --- сим волы , ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ REF LOT IVD VER I m i Номер по каталогу Код партии Медицинское изделие для диагностики in vitro Дата изменения Температурный диапазон Изготовитель А Осторожно! Обратитесь к инструкции по применению V |~ 1 Содержимого достаточно для проведения п- количества тестов 2 Использовать до Обратитесь к инструкции по применению Не допускать воздействия солнечного света гО Дата изготовления стр. 18