Набор реагентов для выявления ДНК Chlamydia trachomatis в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле "АмплиСенс® Chlamydia trachomatis-EPh" по ТУ 9398-041-01897593-2008 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДАЮ Заместитель директора по эпидемиологии - Врио директора Федерального бюджетного учреждения науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для выявления ДНК Chlamydia trachomatis в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле «АмплиСенс® Chlamydia trachomatis- EPh» АмплиСенс® ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Российская Федерация, 111123, город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА IVD --- стр. 2 --- ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ Набор реагентов выпускается в 5 формах комплектации: Форма 1 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100, «ПЦР-комплект» вариант 100 R (пробирки 0,5 мл), «ЭФ» вариант 200. Форма 2 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100, «ПЦР-комплект» вариант 100 R (пробирки 0,2 мл), «ЭФ» вариант 200. Форма 3 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант 100 R (пробирки 0,5 мл). Форма 4 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант 100 R (пробирки 0,2 мл). Форма 5 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант 200. ВНИМАНИЕ! Заявленные аналитические характеристики набора реагентов при работе с формами 3, 4 и 5 гарантируются только в случае применения дополнительных комплектов реагентов «ДНК-сорб-АМ» (или «ДНК-сорб-В») и «ЭФ» производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. В настоящей инструкции применяются следующие термины и сокращения: ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ПЦР - полимеразная цепная реакция вко - внутренний контрольный образец BKO-FL - внутренний контрольный образец для наборов с гибридизационно- флуоресцентной детекцией ПКО - положительный контрольный образец ОКО - отрицательный контрольный образец ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора - федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно- исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека СОСТАВ Комплект реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100 (ТУ 9398-036-01897593-2009) - комплект реагентов для выделения ДНК из клинического материала включает: Реактив Описание Объем (мл) Кол-во Лизирующий раствор Прозрачная жидкость от бесцветного до желтого или розового цвета1 30 1 флакон Отмывочный раствор Прозрачная бесцветная жидкость 100 1 флакон Сорбент универсальный Суспензия от белого до темно-бежевого цвета 1,0 2 пробирки ТЕ-буфер для элюции ДНК Прозрачная бесцветная жидкость 5,0 2 пробирки 1 При хранении лизирующего раствора при температуре от 2 до 8 °С возможно образование осадка в виде кристаллов. стр. 2 --- стр. 3 --- Дополнительно к комплекту реагентов прилагаются следующие реактивы: Реактив Описание Объем (мл) Кол-во Транспортная среда для мазков Прозрачная бесцветная жидкость 30 1 флакон ВКО комплексный2 Прозрачная бесцветная жидкость 1,0 1 пробирка BKO-FL3 Прозрачная бесцветная жидкость 1,0 1 пробирка ОКО Прозрачная бесцветная жидкость 1,2 1 пробирка Комплект реагентов рассчитан на выделение ДНК из 100 проб, включая контроли. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант 100 R или вариант 200 - комплект реагентов для ПЦР-амплификации ДНК Chlamydia trachomatis включает: Реактив Описание «ПЦР-комплект» вариант 100 R «ПЦР-комплект» вариант 200 Объём (мл) Кол-во Объём (мл) Кол-во ПЦР-смесь-1 Chlamydia trachomatis Прозрачная бесцветная жидкость — — U 1 пробирка ПЦР-смесь-1-R Chlamydia trachomatis раскапана под воск Прозрачная бесцветная жидкость 0,005 110 пробирок объемом 0,5 или 0,2 мл — — ПЦР-смесь-2 blue Прозрачная жидкость синего цвета 1,2 1 пробирка 1,2 2 пробирки Воск для ПЦР Твердое вещество белого цвета — — 1,7 2 пробирки Минеральное масло для ПЦР Бесцветная вязкая жидкость 4,0 1 флакон 8,0 1 флакон ПКО ДНК Chlamydia trachomatis Прозрачная бесцветная жидкость 0,2 1 пробирка 0,2 1 пробирка ДНК-буфер Прозрачная бесцветная жидкость 0,5 1 пробирка 0,5 1 пробирка Комплект реагентов вариант 100 R рассчитан на проведение 110 реакций амплификации, включая контроли. Комплект реагентов вариант 200 рассчитан на проведение 220 реакций амплификации, включая контроли. Комплект реагентов «ЭФ» вариант 200 (ТУ 9398-070-01897493-2008) - комплект реагентов для электрофоретической детекции продуктов амплификации в агарозном геле включает: Реактив Описание Объем (мл), Кол-во Реагент ВКО комплексный используется для выделения ДНК при работе с наборами с электрофоретической детекцией. Реагент BKO-FL используется для выделения ДНК при работе с наборами с гибридизационно- флуоресцентной детекцией. стр. 3 --- стр. 9 --- 1. Камера для горизонтального электрофореза объёмом не более 400 мл (например, «SE-2», «Хеликон», Россия). 2. Источник постоянного тока с напряжением 150-460 В (например, «Эльф-4», «ДНК- Технология», Россия). 3. Ультрафиолетовый трансиллюминатор с кабинетом для просмотра гелей (например, «Биоком», Россия). 4. Гель-документирующая система GelDoc-It (например, UVP, LLC. («ЮВиПи, ЛЛС»), США). 5. Аквадистиллятор. 6. Холодильник от 2 до 8 °С. 7. Микроволновая печь для плавления агарозы. 8. Колба коническая из термостойкого стекла (ГОСТ 21400-75) для плавления агарозы на 250 мл. 9. Мерный цилиндр на 1 л (ГОСТ 1770-74). 10. Штатив для микропробирок на 0,5 (0,2) мл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные). 11. Отдельный механический или электронный дозатор объемом 10-40 мкл (например, «Ленпипет», Россия). 12. Одноразовые наконечники до 200 мкл в штативе (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные). 13. Пластиковая ёмкость на 5 л для сбора буфера и гелей, содержащих бромид этидия. 14. Отдельный халат и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09. 15. Емкость для наконечников. ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-АНАЛИЗА ЭТАП 1. ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ ПРОБ. (проводится в ЗОНЕ 1 - помещении для обработки проб). Объем пробы, необходимый для выделения ДНК, - 0,1 мл. Порядок работы. 1. Лизирующий раствор (если он хранился при температуре от 2 до 8 °С) прогреть, перемешивая при температуре 65 °С до полного растворения кристаллов. 2. Добавление реагентов. Способ 1 - отобрать необходимое количество одноразовых пробирок 1,5 мл (включая отрицательный контроль выделения) и, используя наконечник с аэрозольным барьером, внести в каждую пробирку по 10 мкл ВКО комплексного. стр. 9 --- стр. 10 --- - ресуспендировать сорбент универсальный до гомогенной консистенции, внести в каждую пробирку по 20 мкл сорбента универсального и по 300 мкл лизирующего раствора, используя наконечники с аэрозольным барьером. Промаркировать пробирки. Способ 2 - перед началом работы во флакон с лизирующим раствором добавить весь объем (2 мл на 30 мл лизирующего раствора) предварительно гомогенизированного сорбента универсального и необходимый объем (1 мл на 30 мл лизирующего раствора) ВКО комплексного и перемешать. Допускается хранение полученной смеси в течение 2 сут при комнатной температуре. Перед применением тщательно перемешать. - отобрать необходимое количество одноразовых пробирок 1,5 мл (включая отрицательный контроль выделения) и, используя наконечник с аэрозольным барьером, внести в каждую пробирку по 320 мкл подготовленной смеси лизирующего раствора, сорбента универсального и ВКО комплексного. Промаркировать пробирки. 3. В пробирки согласно маркировке внести по 100 мкл пробы, используя для каждой пробы отдельный наконечник с аэрозольным барьером. В пробирку отрицательного контроля выделения внести 100 мкл ОКО, используя наконечник с аэрозольным барьером. 4. Содержимое пробирок тщательно перемешать на вортексе и инкубировать 5 мин при температуре 65 °С в термостате. После окончания инкубации перемешать на вортексе и поставить в штатив на 2 мин. 5. Осадить сорбент универсальный в пробирках центрифугированием при 10 тыс об/мин в течение 30 с. Не захватывая сорбент универсальный, удалить надосадочную жидкость в колбу-ловушку с помощью вакуумного отсасывателя, используя для каждой пробы отдельный наконечник без аэрозольного барьера. 6. Добавить в пробы по 1 мл отмывочного раствора, перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента универсального. 7. Повторить п. 5. 8. Поместить пробирки в термостат с температурой 65 °С на 5-10 мин для подсушивания сорбента универсального. При этом крышки пробирок должны быть открыты. 9. В пробирки добавить по 100 мкл ТЕ-буфера для элюции ДНК. Перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента универсального. Поместить в термостат с температурой 65 °С на 5 мин. 10. Перемешать на вортексе. Центрифугировать пробирки при 12 тыс об/мин в течение 1 мин на микроцентрифуге. Надосадочная жидкость содержит очищенную ДНК (ДНК-проба). Указанный материал готов к постановке ПЦР. ДНК-пробы можно хранить в течение 1 нед при температуре от 2 до 8 °С и в течение стр. 10 --- стр. 11 --- года - при температуре не выше минус 16 °С. Пробирки с ДНК-пробами переносят в зону ПЦР-амплификации аккуратно, не взмучивая сорбент. Если сорбент взмутился, необходимо осадить его на центрифуге. ЭТАП 2. ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-АМПЛИФИКАЦИИ. (проводится в ЗОНЕ 2 - помещении для проведения ПЦР-амплификации). Общий объем реакции - 25 мкл, объем ДНК-пробы - 10 мкл. В комплекте реагентов применяется «горячий старт», который обеспечивается разделением нуклеотидов и Taq-полимеразы прослойкой воска. Плавление воска и перемешивание реакционных компонентов происходит только при установке пробирок в амплификатор, нагретый до 95 °С, что значительно снижает количество неспецифически затравленных реакций. А. Подготовка пробирок для проведения ПЦР. При использовании комплекта реагентов «ПЦР-комплект» вариант 100 R пункты 1 и 2 выполнять не нужно. 1. Пробирку с воском для ПЦР прогреть в термостате при температуре 95 °С до полного расплавления. 2. Раскапать на дно микропробирок для амплификации по 5 мкл ПЦР-смеси-1 Chlamydia trachomatis. Сверху добавить по капле (примерно 10-15 мкл) расплавленного воска так, чтобы он полностью накрыл жидкость, закрыть крышки пробирок, подписать на каждой сокращенное название инфекции. Пробирки с разлитой ПЦР-смесью-1 Chlamydia trachomatis и воском можно хранить при температуре от 2 до 8 °С в течение 1 нед. 3. Отобрать необходимое количество подготовленных в п. 2 пробирок, или пробирок с ПЦР-смесыо-1-R Chlamydia trachomatis для амплификации ДНК исследуемых и контрольных проб. 4. На поверхность воска внести по 10 мкл ПЦР-смеси-2 blue, при этом она не должна проваливаться под воск и смешиваться с содержимым пробирки под воском. 5. Сверху добавить по капле минерального масла для ПЦР (примерно 25 мкл). При использовании амплификатора с термостатируемой крышкой, минеральное масло можно не добавлять. Б. Проведение амплификации. 1. Взять подготовленные для ПЦР пробирки. Под масло или непосредственно на масло, используя наконечники с аэрозольными барьерами, внести по 10 мкл ДНК-проб, выделенных из исследуемых или контрольных проб этапа выделения ДНК (ОКО). 2. Поставить контрольные реакции амплификации: стр. 11 --- стр. 13 --- ПРОВОДИТЬСЯ В ОТДЕЛЬНОЙ КОМНАТЕ СОТРУДНИКОМ ЛАБОРАТОРИИ, НЕ ПРОИЗВОДЯЩИМ МАНИПУЛЯЦИЙ В ЗОНЕ 1 И ЗОНЕ 2. Приготовление рабочих растворов и агарозного геля. 1. Приготовить рабочий электрофорезный буфер. В мерный цилиндр влить 25 мл трис- боратного буфера (ТБЕ) концентрированного с бромидом этидия, довести дистиллированной водой до 500 мл, закрыть цилиндр парафильмом и перемешать. ВНИМАНИЕ! Бромид этидия — соединение, обладающее репродуктивной и острой токсичностью, поэтому при работе с ним следует соблюдать правила безопасности: работать только в перчатках, избегать попадания на кожу и слизистые, при попадании на кожу или слизистые тщательно промыть соответствующий участок водой. 2. Агарозу для электрофореза ДНК из одного флакона пересыпать в стеклянную колбу из термостойкого стекла на 250 мл. Налить 100 мл рабочего буфера, перемешать вращением колбы и плавить в микроволновой печи до полного растворения агарозы. Время плавления агарозы в микроволновой печи мощностью 800 Вт при ее загруженности 1 колбой — 1,5 мин. Если в микроволновую печь мощностью 800 Вт ставится 5 колб с агарозой, время плавления увеличивается до 5 мин. Вынуть колбу с расплавленной агарозой из микроволновой печи, аккуратно перемешать, вращая колбу. После этого вновь поместить колбу с агарозой в микроволновую печь на 1,5 мин (при мощности 800 Вт), довести агарозу до кипения. Вынуть колбу из микроволновой печи и остудить агарозу, вращая колбу, до температуры 65-70 °С. 3. Выровнять столик для заливки гелей, залить расплавленный гель в форму камеры для горизонтального электрофореза. Толщина геля должна быть около 0,6 см. Установить гребенки, не касаясь дна формы, на расстоянии не менее 3 см друг от друга. 4. После полного застывания геля (30 мин при комнатной температуре), осторожно вынуть из него гребенки, не повредив лунки. Поместить подложку с готовым гелем в камеру для горизонтального электрофореза, лунки должны располагаться ближе к отрицательному электроду (ДНК будет двигаться к положительному). Залить в камеру для горизонтального электрофореза готового буфера столько, чтобы он покрывал гель на 5 мм сверху. Порядок работы. 1. Пробирки с продуктами амплификации выставить в штатив последовательно, отобрать из-под слоя масла по 10-15 мкл пробы и внести в лунки геля (если для нанесения разных проб используется один и тот же наконечник, то его необходимо промывать буфером из камеры после нанесения каждого образца). В каждом ряду лунок геля должен быть обязательно представлен К+ и, желательно, маркер молекулярных масс (с набором не поставляется). стр. 13 --- стр. 14 --- 2. Подключить камеру к источнику тока, соблюдая полярность (ДНК движется к положительному электроду), и включить источник. Оптимальное напряжение электрического поля 10 В/см. При использовании камеры «SE-2» («Хеликон») и источника питания «Эльф-4» («ДНК-Технология») параметры источника следующие: напряжение 250 В, стабилизация по напряжению, время электрофореза - 18-20 мин. 3. По завершении времени электрофореза (краситель ксиленцианол при этом пройдет примерно половину длины геля — 1,5 см) выключить источник тока, перенести гель на трансиллюминатор, расположив полосы горизонтально лунками вверх. Получить изображение геля на компьютере с помощью видеосистемы, отмечая порядок нанесения проб, занести в базу данных. ВНИМАНИЕ! При просматривании геля и фотографировании глаза и лицо должны быть защищены маской или стеклянной пластиной! УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ Учёт результатов ПЦР-анализа проводится по наличию или отсутствию на электрофореграмме специфических полос амплифицированной ДНК (см. табл. 2 и приложение 1). Длина специфических полос амплифицированных фрагментов ДНК: Chlamydia trachomatis - 330 иль ВКО комплексный - 740 иль Аналитическая чувствительность набора реагентов - не менее 5*101 2 3 ГЭ в мл клинической пробы. Таблица 2. Результаты постановки контролей различных этапов ПЦР-анализа Контроль Контролируемый этап ПЦР-анализа Специфическая полоса на электрофореграмме полоса 330 п.н. полоса 740 п.н. «ОК» Выделение ДНК Нет Есть «К-» ПЦР Нет Нет «к+» ПЦР Есть Нет 1. В дорожке, соответствующей отрицательному контролю этапа выделения (ОК), должна быть только полоса внутреннего контроля на уровне 740 п.н. 2. В дорожке, соответствующей положительному контролю этапа ПЦР (К+), должна быть полоса положительного контроля - 330 п.н., полоса внутреннего контроля 740 п.н. должна отсутствовать. Возможно присутствие полос праймер-димеров, находящихся ниже уровня 100 п.н. 3. В дорожке, соответствующей отрицательному контролю этапа ПЦР (К-), не должно быть никаких полос, за исключением возможных праймер-димеров, находящихся ниже стр. 14 --- стр. 15 --- уровня 100 п.н. 4. Положительными считаются образцы, которые содержат специфическую светящуюся полосу на уровне 330 п.н. большей или меньшей интенсивности независимо от наличия полосы внутреннего контроля. Полоса внутреннего контроля может отсутствовать в пробах с высокой концентрацией ДНК Chlamydia trachomatis. 5. Отрицательными считаются образцы, которые содержат только полосу 740 п.н. большей или меньшей интенсивности и не содержат полосу 330 п.н. 6. Кроме полос 330 п.н. и 740 п.н. в дорожках могут наблюдаться нечеткие размытые полосы праймер-димеров, которые располагаются ниже уровня 100 нуклеотидных пар. Результаты анализа не подлежат учету в следующих случаях: 1. Если результаты анализа контрольных точек не совпадают с приведенными в табл. 2, то соответствующий этап анализа следует переделать. 2. Если в дорожке какой-либо из исследуемых проб отсутствуют обе полосы, и 330 п.н. и 740 п.н. Результат анализа по данной пробе считается недействительным, необходимо повторить исследование этой пробы с этапа выделения ДНК. Возможная причина: ошибка в процедуре подготовки исследуемого материала, приведшая к потере ДНК или ингибированию ПЦР. 3. В дорожках появляются неспецифические полосы на разных уровнях. Возможные причины: отсутствие «горячего старта» или неверный температурный режим в ячейках амплификатора. 4. Если в отрицательном контроле (OK, К-) выявляется специфическая полоса 330 п. н., значит, произошла контаминация реактивов или образцов. Результаты анализа считают недействительными. Требуется повторить анализ проб, а также предпринять меры по выявлению источника контаминации. стр. 15 --- стр. 16 --- СРОК ГОДНОСТИ, УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ Срок годности. 9 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежит. Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых транспортных средств. При получении разукомплектовать в соответствии с указанными температурами хранения. Хранение. Комплект реагентов «ДНК-сорб-АМ» (кроме транспортной среды для мазков, ВКО комплексного, BKO-FL и ОКО) хранить при температуре от 2 до 25 °С. Транспортную среду для мазков, ВКО комплексный, BKO-FL, ОКО и комплект реагентов «ПЦР-комплект» хранить при температуре от 2 до 8 °С. Комплект реагентов «ЭФ» хранить при температуре от 18 до 25 °С в защищенном от света месте. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ Изготовитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик набора реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и применения. Медицинское изделие техническому обслуживанию и ремонту не подлежит. Рекламации по качеству набора реагентов направлять по адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail: cs@pcr.ru6. При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим законодательством. Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы м сайге: www.amplisens.ru . Главный врач ФГБУ «Поликлиника №1» Управления делами Президента Российской Федер< Заведующий НПЛ ОМДиЭ ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора Гкету потребителя на Е.Н. Родионова . Ржевская стр. 16 --- стр. 17 --- Приложение 1. Электрофореграмма результатов анализа клинического материала на наличие ДНК Chlamydia trachomatis с помощью набора реагентов «АмплиСенс® Chlamydia trachomatis-EPh». OK 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 K+ К- М - - .-«* — *s — t y :' г -я- С** П СГ> <т> **—; ’ 'Д' Й ‘ ^ " - ■ в ; * Г * ' п м ш М У М м м м I - 4, 6 - 10, 12-15, 17-20 - ДНК возбудителя не обнаружена; 5 - ДНК возбудителя обнаружена; II - рекомендуется провести повторную амплификацию ДНК; 16 - Результат анализа учитывать нельзя - отсутствует полоса ВКО, повторить исследование пробы начиная с этапа выделения ДНК; М - маркер молекулярных масс (сверху вниз 1200, 670, 550 и 330 п.н.). стр. 17