Набор реагентов для выявления ДНК микроорганизмов рода Shigella (Shigella spp.) и энтероинвазивных Е.coli (EIEC) в объектах окружающей среды и клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле "АмплиСенс® Shigella spp. и EIEC-EPh" по ТУ 9398-010-01897593-2008 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 3 ---
ния реакции собрать пробирки в сггециальный штатив и отправить в комнату
тродуктов ИЦР (ЗОНУ 3). Пробы после амплификации можно хранить 16 ча-
1атпой температуре, в течение педели при температуре от 2 до 8 °С (однако,
ением электрофореза необходимо нагреть пробирки до комнатной температу-
гчения воска).
одуктов амплификации проводится разделением фрагментов ДНК в агарозном
:ТРОФОРЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ АМПЛИФИЦИРОВАННОЙ ДНК
ЮНЕ 3 - помещении для анализа продуктов амплификации).
РАБОТА С АМПЛИФИЦИРОВАННОЙ ДНК ДОЛЖНА ПРОВОДИТЬСЯ
3 ОТДЕЛЬНОЙ КОМНАТЕ СОТРУДНИКОМ ЛАБОРАТОРИИ, НЕ
[1РОИЗВОДЯЩИМ МАНИПУЛЯЦИЙ В ЗОНЕ 1 И ЗОНЕ 2.
е рабочих раетворов и агорозиого геля.
. рабочий электрофорезный буфер. В мерный цилиндр влить 25 мл Трие-
('фера (ТБЕ) коицеитрированиого с бромидом зтидия, довести диети.тлиро-
Д1 до 500 мл, закрыть цилиндр нарафильмом и перемешать.
1ИЕ! Этндия бромид - канцерогенное соединение, поэтому при работе с ним
;ать правила безопасности: рабогать только в перчатках, избегать попадания на
ые. при попадании на кожу или слизистые тщательно промыть соответствую-
дой.
тты, содержащие этидия бромид, перед утилизацией следует подвергать специ-
ке (см. раздел «Обеззараживание»).
электрофореза из одного флакона псрссынагь в стеклянную колбу из термо-
кла на 250 мл. Налить 100 мл готового рабочего буфера, перемешать вращени-
злавить в микроволновой печи (или па электроплитке) до полного растворения
эльзуется электроплитка, содержимое колбы необходимо периодически нере-
1ЯНИОЙ палочкой, чтобы предотвратить пригорапие агарозы), после этого дове-
кипепия еще два раза и остудить, вращая колбу, до температуры 65-70 °С.
авления агарозы в микроволновой печи мощностью 800 Вт при ее загружепно-
1,5 мин. Если в микроволновую печь мощностью 800 Вт ставится 5 колб с ага-
лавления увеличивается до 5 мин. После этого вновь поместить колбу с агаро-
лновую печь на 1,5 мин (при мощности 800 Вт), довести агарозу до кипения,
из микроволновой печи и остудить агарозу, вращая колбу, до температуры 65-
--- стр. 4 ---
ь столик для заливки гелей, залить расплавленный гель в форму камеры, уста
ли. не касаясь дна формы, на расстоянии ие менее 3 см друг от друга,
еля должна быть около 6 мм.
юго застывания геля (30 мин при комнатной температуре), осторожно вынуть из
нки, ие повредив лунки. Поместить подложку с готовым гелем в камеру, лунки
сиолагаться ближе к отрицательному электроду. ДНК, соответственно, движется
гльному. Залить в камеру готового буфера столько, чтобы он покрывал гель на
У -
эты.
: продуктами амплификации последовательно выставить в штатив, отобрать из-
асла по 10-15 мкл пробы и внести в лунки геля (если для нанесения разных
[ьзуется один и тот же наконечник, то его необходимо промывать буфером из
;лс наиесеиия каждой пробы). В каждом ряду лунок геля должен быть обяза-
1ставлен К+ и. желательно, маркер молекулярных масс.
ть камеру к источнику тока, соблюдая полярность (ДИК движется к положи-
)лектроду), и включить источник. Если нет нарушения контактов, то при нрохо-
)ка от электродов должны подниматься пузырьки. Оптимальное напряжение
:кого ноля 10 В/см. При использовании камеры SE-2 («Хеликои») и источника
)льф-4» («ДНК-техиология») параметры источника следующие: напряжение 250
зация но напряжению, время электрофореза - 18-20 минут.
итель пройдет примерно половину длины геля (не менее 1,5 см), выключить ис-
(а, перенести гель на трансиллюмииатор, расположив полосы горизотггально
?срх. 11олучить изображение геля на компьютере с помощью видеосистемы, от-
док нанесения проб, занести в базу данных.
(ИЕ! При просматривании геля и фотографировании глаза и лицо должны
[пцеигл стеклянной пластиной!
ЬТАТОВ.
дультатов 1 ПДР-анализа проводится ио наличию или отсутствию на электрофо-
ифических полос амплифицированной ДНК (см. табл. 2 и рис.1).
|шцироваииы\ спсиифических фрагментов ДНК:
тикрооргаиизмов Shigella species и EIEC - 400 и.и.
fici о контрольною образна - 800 и.и.
--- стр. 5 ---
Таблица 2.
Оценка результатов анализа контрольных точек.
I Какой этап
11ЦР-анализа
контролируется
Специфические полосы на электрофоре-
грамме
11олоса 400 н.н. Полоса 800 п.н.
Выделение ДИК Есть Есть
Выделение ДНК Нет Есть
НЦР Нет Нет
ПНР Есть Нет
КС, соответствующей отрицательному кош ролю этапа выделения (ОК), долж-
голько полоса внутреннего контроля на уровне 800 иль
ке положительного контроля этапа ПЦР (К+) должна быть голько полоса поло-
эго контрольного образца - 400 нл1., и должна отсутствовать полоса внутреннего
>ного образца 800 пль
:ке, соогветствующсй отрицательному кошролю этана ПЦР (К-), не должно
:аких полос, за исключением праймер-димеров, находящихся ниже уровня 100 п.н.
гельными счи'гаются образцы, которые содержат специфическую светящуюся по-
фовне 400 II.н. большей или меньшей интенсивносги независимо от наличия поло-
)еннего контрольного образца. Полоса внутреннего контрольного образца может
.1вать в пробах с высокой концентрацией ДНК Shigella sp.
СЛЫ1ЫМН считаются образцы, которые содержат только полосу 800 и.и. большей
шей интенсивности и не содержат полосу 400 н.н.
|Дос 400 н.н. и 800 н.н. в дорожках могут наблюдаться нечеткие размытые полосы
димеров, которые располагаются ниже уровня 100 нуклеотидных нар.
I ана.энза не нодлежаг учету в е.!1едующих случаях:
льтаты анализа контрольных точек не совпадают с приведенными в таблице 2, то
гвующий этан анализа следует неределагь.
•рожке какой-либо из исследуемых проб отсутствуют обе полосы, и 400 п.н. и 800
льтат анализа но данной пробе считается недействительным, необходимо иовто-
юдование этой клинической пробы с самого начала. Возможная причина: ошибка в
> е подготовки клинического материала, приведшая к потере ДНК или ингибирова-
ах появляются несиецифические полосы на разных уровнях. Возможные причины:
le «горячего старта» или неверный темнерагурный режим в ячейках амплификато-