Набор реагентов для выявления и дифференциации генотипов (1а, 1b, 2, 3a) вируса гепатита… — инструкция и характеристики, РУ ФСР 2011/12732 | TenderMatch

Набор реагентов для выявления и дифференциации генотипов (1а, 1b, 2, 3a) вируса гепатита С (HCV) в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле "АмплиСенс® HCV-генотип-EPh" по ТУ 9398-012-01897593-2011 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/12732 от 29.12.2006 · класс риска 3

Производитель: ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (Россия)

Вид изделия: Вирус гепатита С генотипирование ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ

Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.

Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 12 ---
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант 50 Р - комплект реагентов для 
амплификации и дифференциации кДНК генотипов (1а, 1Ь, 2, За) НСУ - включает:
Реактив Описание Объем, мл Кол-во
ПЦР-смесь-1-R НС\/генотипы 1а/1Ь
раскапана под воск
Прозрачная 
бесцветная жидкость 0,01
55 пробирок 
объемом 0,5 
или 0,2 мл
ПЦР-смесь-1-R WC\/генотипы 2/За
раскапана под воск
Прозрачная 
бесцветная жидкость 0,01
55 пробирок 
объемом 0,5 
или 0,2 мл
ПЦР-смесь-2 red Прозрачная жидкость 
красного цвета 1.2 1  пробирка
Минеральное масло для ПЦР Бесцветная вязкая 
жидкость 4,0 1 флакон
ПКО кДНК HCV генотип 1а Прозрачная 
бесцветная жидкость 0,1 1  пробирка
ПКО кДНК HCVгенотип 1Ь Прозрачная 
бесцветная жидкость 0,1 1  пробирка
ПКО кДНК генотип 2 Прозрачная 
бесцветная жидкость 0,1 1  про|^рка
ПКО кДНК HCV генотип За Прозрачная 
бесцветная жидкость 0.1 1 пробирка
ДНК-буфер Прозрачная 
бесцветная жидкость 0,5 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 55 реакций амплификации, включая
контроли.
к комплекту реагентов прилагается контрольный образец этапа выделения РНК:
Реактив Описание Объем, мл Кол-во
ОКО Прозрачная 
бесцветная жидкость 1,2 1 пробирка
Комплект реагентов «ЭФ» вариант генотип-200 - комплект реагентов для 
электрофоретической детекции продуктов амплификации в агарозном геле - 
включает;
Реактив Описание Объем, мл 
Масса, г Кол-во
Трис-боратный буфер (ТБЕ) 
концентрированный с бромидом 
этидия
Прозрачная жидкость 
оранжевого цвета 50 мл 1  флакон
Агароза для электрофореза ДНК с 
высоким разрешением Порошок белого цвета 3,0 г 2 флакона
Комплект реагентов рассчитан на электрофоретический анализ 14^ образцов (из
расчета 100 мл геля - 3 ряда по 24 лунки). Входит в состав форм комплектации 1 и 2.
12


--- стр. 13 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
- Экстракция РНК из исследуемых образцов.
- Проведение реакции обратной транскрипции.
- Проведение амплификации.
- Электрофоретическая детекция продуктов амплификации и интерпретация 
результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
Для экстракции РНК используется комплект реагентов «РИБО-сорб», порядок 
работы с которым см. в Приложении 1 - «Экстракция РНК с использованием 
комплекта реагентов «РИБО-сорб».
ВНИМАНИЕ! Полученный препарат РНК хранению не подлежит, реакцию обратной 
транскрипции следует проводить сразу после получения РНК-пробы.
ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ И АМПЛИФИКАЦИИ
I. Проведение реакции обратной транскрипции
Общий объем реакционной смеси - 20 мкл, включая объем пробы РНК -  
10 мкл.
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые 
пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку «RNase- 
free», «DNase-free».
А. Подготовка пробирок для обратной транскрипции
Для внесения в пробирки реагентов и проб РНК используются одноразовые  
наконечники с фильтрами.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно 
перед проведением реакции обратной транскрипции.
1. До начала работы разморозить, тщательно перемешать на вортексе RT-mix и RT- 
G-mix-1. Осадить капли с крышек пробирок.
2. Отобрать необходимое количество пробирок объемом 0,2 или 0,5 мл (в 
зависимости от модели используемого термостата или амплификатора) для 
проведения реакции обратной транскрипции с учетом количества исследуемых 
образцов и одного контроля экстракции (ОК). Промаркировать пробирки.
13


--- стр. 14 ---
3. При проведении обратной транскрипции для 10-12 образцов:
а) Приготовить реакционную смесь на 12 реакций. Для этого в пробирку с RT-mix 
внести 5 мкл РТ-С-т1х-1, тщательно перемешать на вортексе и осадить капли 
с крышки пробирки.
б) К полученному раствору добавить 6 мкл ревертазы (MMIv), пипетировать 
5 раз, перемешать на вортексе. Осадить капли с крышки пробирки 
кратковременным центрифугированием.
4. При проведении обратной транскрипции менее чем для 10 образцов:
Для приготовления реакционной смеси необходимо в отдельной пробирке 
смешать реагенты из расчета на 1 реакцию в следующем порядке: 10 мкл КТ-т1х,  
0,4 мкл RT-G-mix-1 и 0,5 мкл ревертазы (ММ1у) (см. также табл. 1). При внесении в 
смесь RT-G-m¡x-1 и ревертазы (ММ1у) пипетировать каждый реагент не менее 5 
раз. Тщательно перемешать смесь на вортексе и осадить капли с крышки пробирки. 
ВНИМАНИЕ! Ревертаза (ММ1у) термочувствительна! Не оставляйте *ее при 
комнатной температуре в течение длительного времени! Сразу после использования 
убирайте в морозильную камеру холодильника!
Таблица 1
Схема приготовления реакционной смеси
Объем реагента 
на одну реакцию (мкл) 10,0 0,4 0,5
Число
клинических образцов РТ-т!х РТ-0-т!х-1 Ревертаза
(ММ1у)
4 60® 2,4 3,0
5 70 2,8 3,5
6 80 3,2 4,0
7 90 3,6 4,5
8 100 4,0 5,0
5. Внести в приготовленные пробирки по 10 мкл готовой реакционной смеси.
6. В пробирки с реакционной смесью внести по 10 мкл РНК-проб, выделенных из 
клинических и контрольных образцов, согласно маркировке. Осторожно 
перемешать на вортексе и осадить капли с крышки пробирки.
ВНИМАНИЕ! При добавлении РНК-проб необходимо избегать попадания сорбента в 
реакционную смесь.
^ Объемы вносимых реагентов приведены с учетом количества исследуемых образцов (клинические 
образцы и 1 контроль этапа экстракции РНК) и запаса на 1 образец.
14


--- стр. 15 ---
t
Б. Проведение реакции обратной транскрипции
1. Поставить пробирки в амплификатор (термостат) на 37 °С на 30 мин.
2. После окончания реакции добавить в пробирки по 20 мкл ДНК-буфера,  
используя новый наконечник с фильтром для каждой пробы. Перемешать на 
вортексе и осадить капли с крышки пробирки.
Полученная в реакции обратной транскрипции кДНК используется для проведения 
амплификации.
Готовый препарат кДНК можно хранить при температуре не выше минус 16 °С  
в течение 1 нед или при температуре не выше минус 68 °С в течение года.
II. Проведение амплификации
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем пробы кДНК -  
5 мкл.
ВНИМАНИЕ! При работе с кДНК необходимо использовать только одноразовые 
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку 
«RNase-free», «DNase-free».
А. Подготовка пробирок для амплификации
Для внесения в пробирки реагентов, проб кДНК и контрольных образцов  
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
ВНИМАНИЕ! Каждый образец анализируется с использованием двух реакционных 
смесей - ПЦР-смеси-1-R HCV генотипы 1а/1Ь и ПЦР-смеси-1-R HCV генотипы 2/За.
1. Отобрать необходимое количество пробирок с ПЦР-смесью-1-R HCV генотипы 
1а/1Ь и ПЦР-смесью-1-R HCV генотипы 2/За для амплификации кДНК 
исследуемых и контрольных проб (на каждой ПЦР-смеси необходимо поставить 
один контроль экстракции РНК (ОК), три контроля амплификации (К- и два К+)). 
Промаркировать пробирки.
2. На поверхность воска внести по 10 мкл ПЦР-смеси-2 red, при этом она не 
должна проваливаться под воск и смешиваться с ПЦР-смесью-1-R.
3. Сверху добавить по капле минерального масла для ПЦР (примерно 25 мкл).
4. В подготовленные пробирки в соответствии с маркировкой внести по 5 мкл кДНК-  
проб, полученных в реакции обратной транскрипции, причем каждый образец, в 
том числе ОК, необходимо внести в пробирку, содержащую ПЦР-смесь-1-R HCV 
генотипы 1а/1Ь, и в пробирку, содержащую ПЦР-смесь-1-R НС\/генотипы 2/За.
15


--- стр. 16 ---
5. Поставить контрольные реакции амплификации:
а) отрицательный контроль ПЦР (К-) - внести в пробирки с ПЦР-смесью-1-Р  
НС\/ генотипы 1а/1Ь и ПЦР-смесью-1-Р НС\/ генотипы 2/За по 5 мкл ДНК-  
буфера;
б) положительный контроль ПЦР (К+ 1а) - в пробирку с ПЦР-смесью-1-Р НС\/ 
генотипы 1а/1Ь внести 5 мкл ПКО кДНК НС\/генотип 1а;
в) положительный контроль ПЦР (К+ 1ь) - в пробирку с ПЦР-смесью-1-Р НС\/ 
генотипы 1а/1Ь внести 5 мкл ПКО кДНК НС\/генотип 1Ь;
г) положительный контроль ПЦР (К+г) - в пробирку с ПЦР-смесью-1-Р НС\/ 
генотипы 2/За внести 5 мкл ПКО кДНК НС\/ генотип 2;
д) положительный контроль ПЦР (К+за) - в пробирку с ПЦР-смесью-1-Р HCV 
генотипы 2/За внести 5 мкл ПКО кДНК НС\/ генотип За.
Рекомендуется перед постановкой в амплификатор осадить капли со стенок 
пробирок кратким центрифугированием на вортексе (1-3 с).
Б. Проведение амплификации
1. Запустить на амплификаторе соответствующую программу термоциклирования 
(см. табл. 2 и 3).
2. Когда температура в ячейках достигнет 95 °С (режим паузы), поставить пробирки 
в ячейки амплификатора, закрыть крышку прибора и нажать кнопку продолжения 
программы.
Таблица 2
Программа амплификации кДНК генотипов (1а, 1Ь, 2, За) HCV
Амплификаторы с активным регулированием (по раствору в пробирке):
GeneAmp PCR System 2400 GeneAmp PCR System 2700
(Applied Biosystems); (Applied Biosystems); MaxyGene (Axygen)Omn-E (Hibaid); «Терцик» Gradient Palm Cycler
(«ДНК-Технология») (CorbettResearch)
цикл температура время циклы температура время циклы температура время циклы
0 95 °C пауза 95 °C пауза 95 °C пауза
1 95 °C 5 мин 1 95 °C 5 мин 1 95 °C 5 мин 1
95 °C 10 с 95 °C 30 c 95 X 30 с
2 68 °C 10 с 42 68 °C 30 c 42 68 °C 45 с 42
72 °C 10 с 72 °C 30 c 72 °C 45 с
3 72 “C 1  мин 1 72 °C 1  мин 1 72 X 1 мин 1
4 4°C хранение 4°C хранение 10 X хранение
16


--- стр. 17 ---
Таблица 3
Программа амплификации кДНК генотипов (1а, 1Ь, 2, За) HCV
Амплификатор с матричным 
регулированием температуры: 
Uno-2 (Biometra); MiniCycler, 
РТС-100 (MJ Research)
цикл температура время циклы
0 95 °C пауза
1 95 °C 5 мин 1
2
95 “C 1 мин
4268 °C 1 мин
72 “C 1  мин
3 72 °C 1  мин 1
4 4 “C хранение
3. После окончания реакции пробирки отправить в помещение для детекции 
продуктов ПЦР-амплификации (ЗОНУ 3). Пробы после амплификации можно 
хранить 16 ч при комнатной температуре, в течение 1 нед при температуре от 2 
до 8 °С (однако, перед проведением электрофореза необходимо нагреть 
пробирки до комнатной температуры для размягчения воска).
Анализ продуктов амплификации проводится разделением фрагментов ДНК в 
агарозном геле.
ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКАЯ ДЕТЕКЦИЯ ПРОДУКТОВ АМПЛИФИКАЦИИ
При проведении электрофоретической детекции 10-15 мкл ПЦР-образца  
необходимо аккуратно внести в соответствующую лунку геля, избегая перетекания 
образцов в соседние лунки. Необходимо использовать новый наконечник для каждой 
пробы.
в каждом ряду дорожек геля должен быть обязательно представлен К-, К+ 1а, 
К+1ь (для образцов, тестируемых на ПЦР-смеси-1-Р НС\/ генотипы 1а/1Ь), К+ 2, К+за 
(для образцов, тестируемых на ПЦР-смеси-1-Р НС\/ генотипы 2/За) и, желательно, 
маркер молекулярных масс ДНК.
Порядок работы при использовании комплекта реагентов «ЭФ» вариант генотил-200 
производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора приведен в 
Приложении 2 - «Электрофоретическая детекция продуктов амплификации в агарозном 
геле с использованием комплекта реагентов «ЭФ» вариант генотип-200».
17


--- стр. 18 ---
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Интерпретация результатов ПЦР-исследования проводится по наличию или 
отсутствию на электрофореграмме специфических полос амплифицированной кДНК.
Длина специфических полос амплифицированных фрагментов кДНК:  
генотип 1а - 338 п.н.
генотип 1Ь -395 п.н.
генотип 2 -286 п.н.
генотип За - 227 п.н.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным, если получены 
правильные результаты для положительных и отрицательного контролей 
амплификации и отрицательного контроля экстракции РНК, в соответствии с табл. 4.
Таблица 4
Контрольный
образец
Контролируемый 
этап ПЦР- 
исследования
Специфическая полоса на электрофорег^мме
ПЦР-смесь-1-Р НСУ 
генотипы 1а/1Ь
ПЦР-смесь-1-Р НСУ 
генотипы 2/За
338 п.н. 395 п.н. 286 п.н. 227 п.н.
ОК Экстракция РНК Нет Нет Нет Нет
К- ПЦР Нет Нет Нет Нет
К+1а ПЦР Есть Нет * *
К+1Ь ПЦР Нет Есть * *
К+2 ПЦР * * Есть Нет
к+за ПЦР * Нет Есть
- на данной реакционной смеси не тестируется
1. В дорожках, соответствующих отрицательному контролю этапа экстракции  
(ОК) и отрицательному контролю этапа ПЦР (К-) не должно быть никаких 
полос.
2 В дорожках, соответствующих положительным контролям этапа ПЦР (К+ 1а, 
К+1ь, К+ 2, К+за), должны быть яркие специфические светящиеся оранжевые 
полосы на соответствующих уровнях.
Результаты анализа не подлежат учету в следующих случаях:
1. Если результаты анализа контрольных точек не совпадают с приведенными в 
таблице 4, то в этом случае требуется повторить исследование для всех 
образцов, начиная с этапа амплификации.
2. Появление специфических полос в любом из отрицательных контролей (ОК, К-) 
указывает на контаминацию реактивов или проб. Требуется повторить анализ 
проб с первого этапа анализа (экстракция РНК), а также предпринять меры по 
выявлению источника контаминации.
18


--- стр. 19 ---
«
3. Появление неспецифических полос на разных уровнях. Возможные причины: 
отсутствие «горячего старта» или неверный температурный режим в ячейках 
амплификатора. Требуется повторить анализ проб, начиная с этапа ПЦР.
Интерпретация результатов в исследуемых образцах
1. Если образец при амплификации с ПЦР-смесью-1-Р НС\/ генотипы 1а/1Ь 
содержит специфическую светящуюся полосу на уровне 338 п.н. и не содержит 
специфических светящихся полос при амплификации с ПЦР-смесью-1-Р НС\/ 
генотипы 2/За, то для данного образца выдается результат «Генотип 1а»;
2. Если образец при амплификации с ПЦР-смесью-1-К НС\/ генотипы 1а/1Ь 
содержит специфическую светящуюся полосу на уровне 395 п.н. и не содержит 
специфических светящихся полос при амплификации с ПЦР-смесью-1-Р НСУ 
генотипы 2/За, то для данного образца выдается результат «Генотип 1Ь»;
3. Если образец при амплификации с ПЦР-смесью-1-Р НС\/ генотипы 2/За содержит 
специфическую светящуюся полосу на уровне 286 п.н. и не содержит 
специфических светящихся полос при амплификации с ПЦР-смесью-1-Р НС\/ 
генотипы 1а/1Ь, то для данного образца выдается результат «Генотип 2»;
4. Если образец при амплификации с ПЦР-смесью-1-Р НС\/ генотипы 2/За содержит 
специфическую светящуюся полосу на уровне 227 п.н. и не содержит 
специфических светящихся полос при амплификации с ПЦР-смесью-1-Р НС\/ 
генотипы 1а/1Ь, то для данного образца выдается результат «Генотип За»;
5. Если образец содержит несколько специфических полос, то выдается двойной, 
тройной и т.д. генотип. Например, если образец при амплификации с ПЦР-смесью-1- 
Р НС\/ генотипы 1а/1Ь содержит специфическую светящуюся полосу на уровне 
395 п.н., а при амплификации с ПЦР-смесью-1-Р НС\/ генотипы 2/За - на уровне 
227 П.Н., то для данного образца выдается результат «Генотипы 1Ь и За»;
6. Если образец не содержит специфических полос и
а) известно, что концентрация РНК НС\/ в этом образце находится в пределах 
аналитической чувствительности набора реагентов, то выдается результат 
«Генотип не определен по причине низкой вирусной нагрузки»;
б) концентрация РНК НС\/ для данного образца неизвестна, то требуется 
повторить исследование для этого образца, начиная с первого этапа 
(экстракция РНК). Если при повторном исследовании вновь отсутствуют 
специфические светящиеся полосы, то выдается результат «Генотип не  
определен».
19


--- стр. 20 ---
i
СРОК годности, УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ 
Срок годности. 9 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не 
подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности, 
указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано
иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 
8 °С не более 5 сут. При получении разукомплектовать в соответствии с указанными 
температурами хранения.
Хранение. Комплекты реагентов «РИБО-сорб», «ПЦР-комплект» хранить при 
температуре от 2 до 8 °С. Комплект реагентов «РЕВЕРТА-L» хранить лри температуре 
не выше минус 16 °С. Комплект реагентов «ЭФ» хранить при температуре от 18 до 
25 °С в защищенном от света месте.
Условия отпуска. Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических 
учреждений.
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
Производитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик 
набора реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуатационной 
документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий 
транспортирования, хранения и применения.
Рекламации на качество набора реагентов «АмплиСенс® /-/С\/-генотип-ЕРЬ» 
направлять на предприятие-изготовитель ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии (111123 
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. За) в отдел по работе с рекламациями и 
организации обучения (тел. (495) 974-96-46, факс (495) 916-18-18, e-mail: 
products@pcr.ru)®.
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету 
потребителя на сайте: www.amDlisens.ru .
20


--- стр. 21 ---
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению 
набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и 
обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских 
работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется 
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную 
государственную регулирующую организацию (в РФ - Федеральная служба по 
надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим 
законодательством.
i
Заведующий НПЛ ОМДиЭ 
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
Зав. Кафедрой клинической лабораторной 
диагностики ФГБОУ ДПО РМАПО 
Министерства Здравоохранения РФ 
Д.М.Н., профессор
Е.Н. Родионова
21


--- стр. 24 ---
ПРИЛОЖЕНИЕ 2. Электрофоретическая детекция продуктов амплификации в  
агарозном геле с использованием комплекта реагентов «ЭФ» вариант генотип-200
(проводится в ЗОНЕ 3 - помещении для детекции продуктов амплификации методом 
электрофореза).
ВНИМАНИЕ! РАБОТА С АМПЛИФИЦИРОВАННОЙ ДНК ДОЛЖНА ПРОВОДИТЬСЯ В 
ИЗОЛИРОВАННОМ ПОМЕЩЕНИИ СОТРУДНИКОМ ЛАБОРАТОРИИ, НЕ 
ПРОИЗВОДЯЩИМ МАНИПУЛЯЦИЙ В ДРУГИХ ЗОНАХ ПЦР-ЛАБОРАТОРИИ.
Приготовление рабочих растворов и агарозного геля
1. Приготовить рабочий электрофорезный буфер. В мерный цилиндр влить 25 мл 
трис-боратного буфера (ТБЕ) концентрированного с бромидом этидия,  
довести дистиллированной водой до 500 мл, закрыть цилиндр парафильмом и 
перемешать.
ВНИМАНИЕ! Этидия бромид - канцерогенное соединение, поэтому при работе с 
ним следует соблюдать правила безопасности: работать только в перчатках, 
избегать попадания на кожу и слизистые, при попадании на кожу или слизистые 
тщательно промыть соответствующий участок водой. Все реагенты, содержащие 
этидия бромид, перед утилизацией следует подвергать специальной обработке.
2. Агарозу для электрофореза ДНК с высоким разрешением из одного флакона 
пересыпать в стеклянную колбу из термостойкого стекла на 250 мл. Налить 
100 мл рабочего буфера, перемешать вращением колбы и плавить в 
микроволновой печи до полного растворения агарозы. Время плавления агарозы 
в микроволновой печи мощностью 800 Вт при ее загруженности 1 колбой -
1.5 мин. Если в микроволновую печь мощностью 800 Вт ставится 5 колб с 
агарозой, время плавления увеличивается до 5 мин. Вынуть колбу с 
расплавленной агарозой из микроволновой печи, аккуратно перемешать, вращая 
колбу. После этого вновь поместить колбу с агарозой в микроволновую печь на
1.5 мин (при мощности 800 Вт), довести агарозу до кипения. Вынуть колбу из 
микроволновой печи и остудить агарозу, вращая колбу, до температуры 65-70 °С.
3. Выровнять столик для заливки гелей, залить расплавленный гель в форму 
камеры для горизонтального электрофореза. Установить гребенки, не касаясь 
дна формы, на расстоянии не менее 5 см друг от друга. Толщина геля должна 
быть около 0,6 см.
4. После полного застывания геля (30 мин при комнатной температуре) осторожно 
вынуть из него гребенки, не повредив лунки. Поместить подложку с готовым 
гелем в камеру для горизонтального электрофореза, лунки должны
ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКАЯ ДЕТЕКЦИЯ ПРОДУКТОВ АМПЛИФИКАЦИИ
24


--- стр. 25 ---
располагаться ближе к отрицательному электроду (ДНК будет двигаться к 
положительному). Залить в камеру для горизонтального электрофореза готового 
буфера столько, чтобы он покрывал гель на 5 мм сверху.
Порядок работы
1. Пробирки с продуктами амплификации выставить в штатив последовательно, 
отобрать из-под слоя масла по 10-15 мкл проб и аккуратно внести в лунки геля, 
избегая перетекания образцов в соседние лунки. Необходимо использовать 
новый наконечник для каждой пробы. В каждом ряду дорожек геля должны быть 
обязательно представлены К-, К+ 1а, К+ 1ь (для ПЦР-смеси-1-Р НСУ генотипы 
1а/1Ь), К+2, К+за (для ПЦР-смеси-1-Р НС\/ генотипы 2/За) и, желательно, маркер 
молекулярных масс ДНК.
2. Подключить камеру к источнику тока, соблюдая полярность (ДНК движется к 
положительному электроду), и включить источник. Если нет нарушения контактов, 
то при прохождении тока от электродов должны подниматься пузырьки. При 
использовании камеры «8Е-2» (Хеликон) и источника питания «Эльф-4» («ДНК- 
Технология») параметры источника следующие: напряжение 250 В, стабилизация по 
напряжению, время электрофореза - 40 мин. Оптимальная напряженность 
электрического поля при этом составляет 10 В/см.
3. По завершении времени электрофореза (краситель крезоловый красный при этом 
пройдет примерно 2/3 длины геля (~ 3,5 см) выключить источник тока и перенести 
гель на трансиллюминатор, расположив полосы горизонтально лунками вверх. 
Получить изображение геля на компьютере с помощью видеосистемы, отметив 
порядок нанесения.
ВНИМАНИЕ! При просматривании геля и фотографировании глаза и лицо
должны быть защищены маской или стеклянной пластиной!
ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКАЯ ДЕТЕКЦИЯ ПРОДУКТОВ АМПЛИФИКАЦИИ
25


--- стр. 26 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF
LOT
IVD
VER
II
м1
Номер в каталоге
А
Код партии
V
Изделие для in vitro 
диагностики
Дата изменения •
Ограничение
температуры
Верхнее ограничение 
температуры (WTj
Производитель
Осторожно! 
Обратитесь к 
сопроводительной 
документации
Максимальное 
число тестов
Использовать до
Обратитесь к 
руководству по 
эксплуатации
Не допускать 
попадания 
солнечного света^
Дата изготовления
26