Набор реагентов для выявления ДНК вируса папилломы человека 66 типа методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (РеалБест ДНК ВПЧ 66) по ТУ 9398-512-23548172-2015 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- «УТВЕРЖДАЮ» Г енеральный директор ^.Д. Хусаинов о'^*' ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для выявления ДНК вируса папилломы человека 66 типа методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РеалБест ДНК ВИЧ 66» (комплект 2) 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов для выявления ДНК вируса папилломы человека 66 типа методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РеалБест ДНК ВПЧ 66» пред назначен для выявления ДНК вируса папилломы человека 66 типа методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в ре жиме реального времени. Выделение ДНК из клинических проб проводится с помощью наборов: «РеалБест ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «РеалБест ДНК-экстракция 2», «РеалБест ДНК-экстракция 3» и «РеалБест экстракция 100». Комплект 2 предназначен для применения с региетрирующими амплификаторами как роторного типа: «Rotor-Gene 3000», «Rotor-Gene 6000» (фирма Corbett Research, Австралия), «Rotor-Gene Q» (фирма Qiagen, Германия), так и планшетного типа: «iQ5 iCycler», «CFX96», «ДТ-96» или их аналогами. Комплект 2 рассчитан на проведение анализа 100 образцов, включая контрольные образцы. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРАЧ 2.1. Принцип метода Принцип ПЦР-анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного участка ДНК возбудителя инфекции в ходе проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР). Процесс амплификации заключается в повторяющихся циклах: температурная дена- Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В. --- стр. 2 --- /урация ДНК-матрицы, отжиг праймеров с комплементарными поеледовательностями ДНК- матрицы, синтез комплементарной цепи с этих праймеров Taq-полимеразой. В основе регистрации процесса амплификации лежит измерение сигналов флуоресцен ции в каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря исполь зованию гибридизационного ДНК-зонда, специфичного для выбранного участка ДНК возбуди теля инфекции, который в ходе реакции связьшается с одной из цепей ДНК, обеспечивая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5'-конце флуоресцентный кра ситель, а на 3'-конце - гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуо ресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благодаря 5'-3'-нуклеазной активности Taq-полимеразы, зонд расщепляется с 5'-конца и происходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию сигнала флуорес ценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образовав шихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определяется исход ным количеством ДНК возбудителя инфекции в образце. Достоверность анализа контролируется по наличию положительного результата в об разце ПКО, который подвергается процедуре выделения ДНК вместе с анализируемыми биопробами. Учет эффективности выделения ДНК ВПЧ 66 из образцов обеспечивается выделением ДНК из клинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним контрольным образцом (ВКО). 2.2. Состав набора: - положительный контрольный образец (ПКО) - 1 пробирка (1,0 мл); - реакционная смесь для ПЦР (PC), лиофилизированная - 10 пробирок, каждая на 10 определений; - раствор для восстановления (РВ) - 2 флакона (по 2,0 мл). 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ* 3.1. Специфичность выявления ДНК ВПЧ 66 определяется по стандартной панели от рицательных образцов ДНК-экстрактов, СПП (per. № 05-2-291), как процентное содержание образцов, определенных набором как отрицательные, и составляет 100%. N 3.2. Чувствительноеть определяется по пяти образцам с содержанием ДНК ВПЧ 66 100 копий в пробе, приготовленным из СОН ДНК ВПЧ 66 (per. № 05-2-475), как процентное содержание образцов, определенных набором как положительные, и составляет 100%. 3.3. Диагностическая чувствительность выявления ДНК ВПЧ 66: клинические испыта ния, проведенные на 49 положительных образцах, показали 100 % чувствительность (интер вал 94 %-100 %, с доверительной вероятностью 90 %); 2 --- стр. 3 --- 3.4. Диагностическая специфичность выявления ДНК ВПЧ 66: клинические испытания, проведенные на 54 отрицательных образцах, показали 100 % специфичность (интервал 95 %- 100 %, с доверительной вероятностью 90 %). 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к искажению результатов ПЦР. 4.1. Потенциальный риек применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 № 4н). 4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы выделения ДНК/РНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организа ция работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». 4.4. При работе е набором еледует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За прещается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для пипеток. 4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз ных образцов. 4.8. После окончания работ для дезинфекции и предотвращения контаминации все ра бочие поверхности и оборудование еледует подвергнуть действию бактерицидных УФ ламп в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфи цирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор «ДП-2Т»; 1-3% раствор «Диабак»; Q,5%раствор «Лизафин»; 0,5-1%раствор «Мистраль»; 0,5-2%раствор «Велтолен»), 4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфициру ющими средствами с последующей утилизацией (см. МУ-287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очиетке и стерилизации изделий медицинского назначения»). 4.10. При использовании набора образуются отходы классов А, Б и Г, которые класси фицируются и уничтожаются (утилизируются) в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Са- 3 --- стр. 7 --- 8.3. В каждом исследуемом образце программа должна фиксировать нарастание сиг- амплификации ДНК ВКО (канал «FAM»/«Green») и определять CtBKO. 9. УЧЁТ РЕЗУЛЬТАТОВ 9.1. Вычислить (Ct ВКО)ср как среднее значение Ct ВКО всех анализируемых образ цов (включая ПКО и ОКО). Отбраковке подлежат значения Ct ВКО, отличающиеся более чем на 2 от значения (Ct ВКО)ср. После отбраковки пересчитать (Ct ВКО)ср для оставшихся значений. 9.2. Анализируемый образец считается положительным, содержащим ДНК ВПЧ 66, если для этого образца значение Ct по каналу «КОХ» («Orange») меньше или равно 35. 9.3. Результат анализа образца считается отрицательным, если для этого образца значения Ct по каналу «ROX»/«Orange» больше 35 или не определяются Если для такого образца значение Ct ВКО отличается от значения (Ct ВКО)ср более чем на 2, то результат по данному образцу не подлежит учёту как отрицательный. Необхо димо провести повторный анализ данного образца, начиная с этапа выделения. 9.4. Если для ОКО значение Ct по каналу «ROX»/«Orange» меньше или равно 35, то это свидетельствует о наличии контаминации в системе. В этом случае положительные ре зультаты, полученные в данной индивидуальной постановке ПЦР, считаются недостоверны ми. Требуется предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить анализ всех образцов данной постановки, для которых получен положительный результат. Образцы, анализ которых дал отрицательный результат, следует учитывать как отрицательные. 10. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА 10.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспорт ных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида, при температуре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 25 °С не более 1 о суток. 10.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или холо- Ч дильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной ре гистрацией температуры. 10.3. Срок годности набора - 12 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение наборов по истечении срока их годности. 10.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной инструкции по применению набора. 7 --- стр. 8 --- 11. г а р а н т и й н ы е о б я з а т е л ь с т в а 11.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям нормативной и технической документации. Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности. 11.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, воз никших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы. 11.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функцио нальные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют нормативной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого де фекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем. По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест ДНК ВПЧ 66» (комплект 2), следует об ращаться в ЗАО «Вектор-Бест» по адресу: 630117, г. Новосибирск-117, а/я492, тел. (383) 332-92-49, 227-60-30; тел./факс (383), 332-94-47, 332-94-44. E-mail: plkobtk(a).vector-best. ru Начальник отделения ЗАО «Вектор-Бест» A.B. Трухина Директор по производству ЗАО «Вектор-Бест» Зам. директора по научной работе ГБУЗ «НИИ СП им. Н.В.Склифосовского Д профессор, д.м.н. В.К. Ткачев Абакумов --- стр. 9 --- л уэтью -'’ИСТОВ. "научной работе. '^•'^■АбакумоЕ --- стр. 10 --- «УТВЕРЖДАЮ» Генеральный директор ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для выявления ДНК вируса папилломы человека 66 типа методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РеалБест ДНК ВИЧ 66» (комплект 1) 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов для выявления ДНК вируса папилломы человека 66 типа методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РеалБест ДНК ВПЧ 66» пред назначен для выявления ДНК вируса папилломы человека 66 типа методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в ре жиме реального времени. Вьщеление ДНК из клинических проб проводится с помощью наборов; «РеалБест ДНК- экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «РеалБест ДНК-экстракция 2», «РеалБест ДНК- экстракция 3» и «РеалБест экстракция 100». Комплект 1 предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами; «iQ5 iCycler» и «СРХ96» (фирма Bio-Rad, США), «ДТ-96» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия) или их аналогами. Комплект 1 рассчитан на проведение анализа 96 образцов, включая контрольные образцы. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип метода Принцип ПЦР-анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного участка ДНК возбудителя инфекции в ходе проведения полимеразной цепной реакции Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В. --- стр. 11 --- (ПЦР). Процесс амплификации заключается в повторяющихся циклах: температурная денатурация ДНК-матрицы, отжиг праймеров с комплементарными поеледовательноетями ДНК-матрицы, синтез комплементарной цепи с этих праймеров Taq-полимеразой. В основе регистрации процесса амплификации лежит измерение сигналов флуоресценции в каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря использованию гибридизационного ДНК-зонда, специфичного для выбранного участка ДНК возбудителя инфекции, который в ходе реакции связывается с одной из цепей ДНК, обеепечивая также дополнительную специфичноеть метода. ДНК-зонд содержит на 5'-конце флуоресцентный краситель, а на 3'-конце - гаситель флуоресценции, значительно енижающий интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного еинтеза комплементарной цепи, благодаря 5'-3'- нуклеазной активности Taq-полимеразы, зонд расщепляется с 5'-конца и происходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образовавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определяется исходным количеством ДНК возбудителя инфекции в образце. Достоверность анализа контролируется по наличию положительного результата в образце ПКО, который подвергается процедуре выделения ДНК вместе с анализируемыми биопробами. Учет эффективности вьщеления ДНК ВПЧ 66 из образцов обеспечивается вьщелением ДНК из клинических проб совместно с предварительно внееенным внутренним контрольным образцом (ВКО). 2.2. Соетав набора: - положительный контрольный образец (ПКО) - 1 пробирка (1,0 мл); - готовая реакционная смееь для ПЦР (ГРС), лиофилизированная - 96 пробирок (12 стрипов по 8 пробирок). Набор дополнительно комплектуетея: - оптической плёнкой - 1,5 листа. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ* 3.1. Специфичность выявления ДНК ВПЧ 66 определяется по стандартной панели от- Ч рицательных образцов ДНК-экетрактов, СПП (per. № 05-2-291), как процентное еодержание образцов, определенных набором как отрицательные, и составляет 100%. 3.2. Чувствительность определяется по пяти образцам с содержанием ДНК ВПЧ 66 100 копий в пробе, приготовленным из СОН ДНК ВПЧ 66 (per. № 05-2-475), как процентное содержание образцов, оцределенных набором как положительные, и еоетавляет 100%. 3.3. Диагностическая чувствительность выявления ДНК ВПЧ 66: клинические испыта- 2 --- стр. 12 --- /ния, проведенные на 49 положительных образцах, показали 100 % чувствительность (интер вал 94 %-100 %, с доверительной вероятностью 90 %); 3.4. Диагностическая специфичность выявления ДНК ВПЧ 66: клинические испытания, проведенные на 54 отрицательных образцах, показали 100 % специфичность (интервал 95 %- 100 %, с доверительной вероятностью 90 %). 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к искажению результатов ПЦР. 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 № 4н). 4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроор ганизмами Ш-ГУ групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы выделения ДНК/РНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с ма териалом, содержащим микроорганизмы 1-IV групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пере менного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. Запре щается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для пипеток. 4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз ных образцов. 4.8. После окончания работ для дезинфекции и предотвращения контаминации все ра бочие поверхности и оборудование следует подвергнуть действию бактерицидных УФ ламп в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфи- цйрующими средствами (такими, как: 0,2% раствор «ДП-2Т»; ]-3% раствор «Диабак»; 0,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1%раствор «Мистраль»; 0,5-2%раствор «Велтолен»), 4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфициру ющими средствами с последующей утилизацией (см. МУ-287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения»). --- стр. 15 --- Для регистрации процесса амплификации ДНК ВПЧ 66 следует выбрать канал ' детекции «КОХ». 7.8. Запрограммировать положение пробирок с исследуемыми образцами, положи тельным и отрицательным контролями согласно инструкции к используемому прибору. 7.9. Запустить программу и провести реакцию амплификации с регистрацией флуо ресценции в режиме реального времени. 8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ 8.1. В положительном контрольном образце (ПКО) программа должна фиксировать: - нарастание сигнала амплификации ДНК ВКО (канал «РАМ») и определять значение порогового цикла Ct ВКО; - нарастание сигнала амплификации ДНК ВПЧ 66 (канал «КОХ») и определять значе ние порогового цикла Ct ПКО. 8.2. В отрицательном контрольном образце (ОКО) црограмма должна фиксировать нарастание сигнала амплификации ДНК ВКО (канал «РАМ») и определять Ct ВКО, при этом программа не должна регистрировать нарастания сигнала специфического продукта ампли фикации ДНК по каналу «КОХ». 8.3. В каждом исследуемом образце программа должна фиксировать нарастание сигна ла амплификации ДНК ВКО (канал «РАМ») и определять CtBKO. 9. УЧЁТ РЕЗУЛЬТАТОВ 9.1. Вьиислить (Ct ВКО)ср как среднее значение Ct ВКО всех анализируемых образцов (включая ПКО и ОКО). Отбраковке подлежат значения Ct ВКО, отличающиеся более чем на 2 от значения (Ct ВКО)ср. После отбраковки пересчитать (Ct ВКО)ср для оставшихся значений. 9.2. Анализируемый образец считается положительным, содержащим ДЬЖ возбудителя ин фекции, если для данного образца значение Ct по каналу «КОХ» меньше или равно 35. 9.3. Результат анализа образца считается отрицательным, если для этого образца зна чения Ct по каналу «КОХ» больше 35 или не определяются. Ч Если для такого образца значение Ct ВКО отличается от значения (Ct ВКО)ср более, чем на 2, то результат не подлежит учёту как отрицательный. Необходимо провести повтор ный анализ данного образца, начиная с этапа выделения ДНК. 9.4. Если для ОКО значение Ct по каналу «КОХ» меньше или равно 35, то это свиде тельствует о наличии контаминации в системе. В этом случае положительные результаты. --- стр. 16 --- J ^0ученные в данной индивидуальной постановке ПЦР, считаются недостоверными. Требу ется предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить анализ всех образцов данной постановки, для которых получен положительный результат. Образцы, анализ которых дал отрицательный результат, следует учитывать как отрица тельные. 10. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА 10.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспортных сред ствах в соответствии с правилами переюзок, действующими на транспорте данного вида, при темпера туре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 25 °С не более 10 суток. 10.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или холо дильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной ре гистрацией температуры. 10.3. Срок годности набора - 12 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение наборов по истечении срока их годности. 10.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной инструкции по применению набора. 11. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА 11.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям нор мативной и технической документации. Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности. 11.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, возник ших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, ли бо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы. 11.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функцио нальные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют норматив-ч НОЙ и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем. --- стр. 17 --- Лопросам, касающимся качества набора «РеалБест ДНК ВПЧ 66» (комплект 1), следует ^ащаться в ЗАО «Вектор-Бест» по адресу: 630117, г. Новосибирск-117, а/я 492, тел. (383) 332-92-49, 227-60-30; тел./факс (383), 332-94-47, 332-94-44. E-mail: plkobtk(a),vector-best, ru Начальник отделения ЗАО «Вектор-Бест» А.В. Трухина Директор по производству ЗАО «Вектор-Бест» В.К. Ткачев Зам. директора по научной работе ГБУЗ «НИИ СП им. Н.В.Склифосовского | профессор, д.м.н. .М. Абакумов