Набор реагентов для обнаружения ДНК микобактерий туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis complex) в клиническом материале, культурах микроорганизмов и объектах окружающей среды методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией «АмплиСенс® MTC-FL» по ТУ 9398-107-01897593-2012 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2010/09556 от 30.12.2010 · класс риска 2б

Производитель: ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (Россия)

Вид изделия: Mycobacterium tuberculosis нуклеиновая кислота ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 111 контрактов, медианная цена за единицу 8 748 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА УТВЕРЖДАЮ
Приказом Росздравнадзора Директор Федерального
от________№ _____________ бюджетного учреждения науки
«Ц ен тральн ы й  научно-
и ссл ед о в §1Тельский институт 
эпи;де1ЙЙШогЙи>> Ф едеральной 
I  по н ^ э р р у  В  с ф е р е  
" г |р ^ е б и т е л е й  и
^ П о к р о в с к и й  
2012 г.
„ ■  ■
И Н С Т Р У К Ц И Я
по применению набора реагентов 
для обнаружения ДНК микобактерий туберкулеза  
{Mycobacterium tuberculosis complex)  в клиническом 
материале, культурах микроорганизмов и  объектах 
окружающей среды методом полимеразной цепной реакции 
(ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
« А м п л и С е н с ®  М Г С - F L »
АмплиСенс
ш 1
Ф едеральное бю джетное учреждение науки 
«Центральны й научно-исследовательский 
институт эпидемиологии»,
Российская Федерация, 111123,
город М осква, улица Новогиреевская, дом За IVD


--- стр. 2 ---
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ............................................................................ 3
НАЗНАЧЕНИЕ...........................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА...................................................................................3
ФОРМАТЫ И  ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ....................................4
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.........................................................6
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ....................................................................7
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И  ОБОРУДОВАНИЕ....................................9
ВЗЯТИЕ. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 1 1
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК
..................1 2
ФОРМАТ FEP.......................................................................................... 1 5
СОСТАВ............................................................................................. 1 5
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ......................................................17
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ....................................17
ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ.............................................................1 7
А, Подготовка пробирок для амплификации............................................1 7
Б . Проведение амплификации..............................................................18
ФЛУОРЕСЦЕНТНАЯ ДЕТЕКЦИЯ ПРОДУКТОВ АМПЛИФИКАЦИИ ПО «КОНЕЧНОЙ
ТОЧКЕ»..............................................................................................1 9
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ..........................................................19
ФОРМАТ FRT..........................................................................................23
СОСТАВ.............................................................................................23
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ......................................................25
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ....................................25
ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ»......................................................................................... 25
А. Подготовка пробирок для амплификации............................................25
Б . Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени».... 26
АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ............................................27
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ................3 1
ПРИЛОЖЕНИЕ 1 . Экстракция ДНК из образцов исследуемого материала при
использовании комплекта реагентов «ДНК-сорб-В».........................................32
ПРИЛОЖЕНИЕ 2. Экстракция ДНК из образцов исследуемого материала при
использовании комплекта реагентов «РИБО-преп».........................................34
ПРИЛОЖЕНИЕ 3 . Экстракция ДНК из образцов исследуемого материала при
использовании комплекта реагентов «ДНК-сорб-С».........................................35
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ..............................38
С О Д Е Р Ж А Н И Е


--- стр. 3 ---
с п и с о к  СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и  обозначения:
БАЛ - бронхо-альвеолярный лаваж
ВКО - внутренний контрольный образец
ВКО STI-87
- внутренний контрольный образец STI (self-tested inclusion) 
длиной 87 нуклеотидов для наборов с гибридизационно- 
флуоресцентной детекцией
К- - отрицательный контроль ПЦР
К + - положительный контроль ПЦР
МБТ (МТС) - микобактерии туберкулеза {Mycobacterium tuberculosis 
complex)
м.т. - микробные тела
ОКО - отрицательный контрольный образец
ок - отрицательный контроль экстракции
ПВБ - промывные воды бронхов
ПКО - положительный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный 
научно-исследовательский институт эпидемиологии» 
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав 
потребителей и  благополучия человека
FEP - флуоресцентная детекция по «конечной точке»
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
PBS - фосфатно-солевой буфер
UDG - фермент UDG - фермент урацил-ДНК-гликозилаза
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиСенс® /ИГС-FL» предназначен для обнаружения ДНК 
микоба1стерий туберкулеза (МБТ) - Mycobacterium tuberculosis complex (МТС),  
включающий в себя виды микобактерий разной степени вирулентности, 
вызывающих туберкулез у человека (М.tuberculosis, M.bovis, M.africanum, М.microti, 
M.canetti, M.pinipedii),  в разных видах клинического материала, культурах 
микроорганизмов и  объектах окружающей среды методом полимеразной цепной 
реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.
ВНИМАНИЕ! Результаты ПЦР-исследования учитываются в комплексной 
диагностике заболевания"'.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Обнаружение ДНК микобактерий туберкулеза (МБТ) - Mycobacterium tuberculosis 
complex (МТС) -  методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно- 
флуоресцентной детекцией включает в себя три этапа: 1 ) экстракцию (выделение) 
тотальной ДНК из образцов клинического материала, парафиновых блоков, культур
' В соответствии с Директивой Европейского Союза 98/79/ЕС.


--- стр. 4 ---
микроорганизмов или смывов с объектов окружающей среды, а также внутреннего 
контрольного образца (ВКО STI-87), внесенного в тестируемый образец в  начале 
анализа; 2 ) одновременную амплификацию фрагмента ДНК МТС, т.е. микобактерий 
туберкулеза, и  фрагмента ДНК ВКО; 3) гибридизационно-флуоресцентную детекцию, 
которая производится либо непосредственно в ходе ПЦР с помощью 
амплификатора с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме 
«реального времени» (формат FRT), либо после ее завершения с помощью 
флуоресцентного ПЦР-детектора (формат FEP).
Гибридизационно-флуоресцентная детекция специфической мишени проводится 
по каналу FAM/Green (или аналогичному, в зависимости от модели прибора), ВКО - 
по каналу JOEA'ellow/HEX (или аналогичному, в зависимости от модели прибора).
«ПЦР-комплект» варианты FEP и  FRT, входящие в состав данного набора 
реагентов, содержат фермент UDG для снижения риска контаминации продуктами 
амплификации в ПЦР-лабораториях.
С целью оптимизации протоколов исследования микобактерий туберкулеза 
возможно проведение единой процедуры экстракции ДНК для последующего 
обнаружения, количественного определения, дифференцирования до вида 
М. tuberculosis complex и  определения резистентности к  противотуберкулезным 
препаратам.
ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ 
Набор реагентов выпускается в 2 форматах.
Формат FEP
Набор реагентов выпускается в 5 формах комплектации:
Форма 1  включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-В» вариант 50, «ПЦР-комплект» 
вариант FEP.
Форма 2  включает комплекты реагентов «РИБО-преп» вариант 50, «ПЦР-комплект» 
вариант FEP.
Форма 3  включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-С» вариант 50, «ПЦР-комплект» 
вариант FEP.
Форма 4 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP.
Форма 5 включает наборы реагентов оптом, расфасованные по отдельным 
реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой фасовке.
Формы комплектации 1 , 2 и  3  предназначены для проведения полного ПЦР- 
исследования, включающего экстракцию ДНК и  амплификацию ДНК МТС с 
гибридизационно-флуоресцентной детекцией по «конечной точке».
4


--- стр. 5 ---
Форма комплектации 4 предназначена для проведения амплификации ДНК МТС 
с гибридизационно-флуоресцентной детекцией по «конечной точке». Для 
проведения полного ПЦР-исследования необходимо использовать комплекты 
реагентов для экстракции ДНК, рекомендованные ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора.
Форма комплектации 5 предназначена для производственных целей для 
последующей маркировки на языке заказчика и  комплектации по наборам. 
ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 5 используется только в соответствии с 
регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.
Формат FRT
Набор реагентов выпускается в 5 формах комплектации;
Форма 1  включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-В» вариант 50, «ПЦР-комплект» 
вариант FRT.
Форма 2 включает комплекты реагентов «РИБО-преп» вариант 50, «ПЦР-комплект» 
вариант FRT.
Форма 3  включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-С» вариант 50, «ПЦР-комплект» 
вариант FRT.
Форма 4 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT.
Форма 5 включает наборы реагентов оптом, расфасованные по отдельным 
реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой фасовке.
Формы комплектации 1 , 2, 3 предназначены для проведения полного ПЦР- 
исследования, включающего экстракцию ДНК и  амплификацию ДНК МТС с 
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
Форма комплектации 4 предназначена для проведения амплификации ДНК МТС 
с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени». Для 
проведения полного ПЦР-исследования необходимо использовать комплекты 
реагентов для экстракции ДНК, рекомендованные ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора.
Форма комплектации 5 предназначена для производственных целей для 
последующей маркировки на языке заказчика и  комплектации по наборам. 
ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 5 используется только в соответствии с 
регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.


--- стр. 6 ---
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 
Аналитическая чувствительность
Вид клинического материала
Комплект для 
экстракции 
ДНК
Комплект для 
амплификации 
и детекции
Аналитическая 
чувствительность, 
м.т./м л
M.tuberculosis 
(штамм Н37 Ra)
PBS-буфер, мокрота, бронхо­
альвеолярный лаваж
«ПЦР-комплект» 
варианты 
FEP и FRT
5x10"
Моча «РИБО-преп»
«ПЦР-комплект» 
варианты 
FEP и FRT
1x10"
Смывы с объектов 
окружающей среды^
«ПЦР-комплект» 
варианты 
FEP и FRT
2,5x10 ^  копий/мл
PBS-буфер, мокрота
«ПЦР-комплект» 
варианты 
FEP и FRT
5x10'
Бронхо-альвеолярный лаваж, 
моча
«ДНК-сорб-В»
«ПЦР-комплект» 
варианты 
FEP и FRT
1x10"
Смывы с объектов 
окружающей среды^
«ПЦР-комплект» 
варианты 
FEP и FRT
2,5x1 о' копий/мл
10% гомогенат разных видов 
тканей (легкие, 
лимфатические узлы, почки, 
печень, мозг, селезенка) _____
«ДНК-сорб-С»
«ПЦР-комплект» 
варианты 
FEP и FRT
1x10^
Аналитическая специфичность
Аналитическая специфичность оценивалась как при тестировании штаммов 
микобактерий входящих в группу M.tuberculosis complex, так и  иетуберкулезных 
микобактерий, а также штаммов микроорганизмов, вызывающих заболевания 
сходных локализаций.
Для определения аналитической специфичности на штаммах различных 
микроорганизмов (в концентрации не менее, чем 5 x1 0 ®  м.т./мл), тестировали 
67 контрольных штаммов или клинических изолятов. Из них 16 входили в  состав 
группы M.tuberculosis complex, 23 являлись нетуберкулезными микобактериями, 
28 принадлежали к  другим родам и  семействам. Специфичность набора реагентов 
оценивалась по отсутствию положительного результата амплификации ДНК 
бактерий, не принадлежащих к  M.tuberculosis complex, а также по наличию 
положительного результата у бактерий, входящих в состав этой группы.
Перечень референтных штаммов и  клинических изолятов:
^  Допускается проведение исследования без этапа экстракции ДНК при добавлении образца смывов 
с объектов окружающей среды непосредственно в реакционную смесь для проведения ПЦР- 
исследования.


--- стр. 7 ---
- Микобактерии, принадлежащие к  группе Mycobacterium tuberculosis complex: 
М.tuberculosis, M.bovis, M.bovis BCG и  др.
- Нетуберкулезные микобактерии: М.avium, M.fortuitum, M.gordonae, M.intracellulare, 
M.kansasii, M.marinum, M.paratuberculosis, M.phlei, M.scrofulaceum, M.smegmatis,  
M.xenopi, M.ulcerans, M.terrae и  др.
- Бактерии, принадлежащие к  другим родам и  семействам: Brucella abortus,
B.melitensis, B.ovis, B.suis; Campylobacter jejuni; Chlamydia suis; Chlamydophila  
abortus, Ch.felis; Cryptococuss neoformans; Enterobacter cloacae, E.faecalis;  
Enterococcus faecalis; Escherichia coH \ Klebsiella pneumoniae; Listeria  
monocytogenes; Moraxella catarrhalis; Neisseria cinerea, N.elongata, N.flava, N.gonor, 
N.mucosa, N.sicca, N.subflava, N.pantoea agglomerans; Pasteurella tularensis;  
Proteus vulgaris, P.mirabilis; Pseudomonas aeruginosa', Salmonella enteritidis, S.typhi; 
Shigella flexneri, Sh.sonne; Staphylococcus aureus,  различные клинические 
изоляты S.aureus MRSA, S.faecalis, S.saprophyticus; S.Streptococcus  A, B , C, G, 
S.oralis, S.pneumonia.
Результаты тестирования показали 100 %  специфичность как для набора 
реагентов в  варианте FRT, так и  в варианте FEP.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно­
биологические (ПЦР) исследования клинического материала на наличие 
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-эпидемических 
правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп 
патогенности (опасности) и  возбудителями паразитарных болезней», СанПиН 
2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к  обращению с 
медицинскими отходами» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация 
работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при 
работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе в лабораториях противотуберкулезных учреждений следует 
дополнительно руководствоваться требованиями Приказа №  109 от 2 1  марта 2003 г . 
«О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской 
Федерации» (Приложение № 11).
При работе всегда следует выполнять следующие требования:
-  Следует рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, 
организовывать работу и  хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08 
«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности