Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК метициллин-чувствительного и метициллин-резистентного Staphylococcus aureus, метициллин-резистентных коагулазонегативных Staphylococcus spp. в биологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "АмплиСенс® MRSA-скрин-титр-FL" по ТУ 9398-190-01897593-2012 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2012/13998 от 29.10.2012 · класс риска 2б

Производитель: ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (Россия)

В госконтрактах 44-ФЗ: 4 контракта, медианная цена за единицу 22 801 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:
ВКО STI-87 - внутренний контрольный образец для наборов с гибридизационно- 
флуоресцентной детекцией
В- - отрицательный контроль экстракции
К- - отрицательный контроль ПЦР
ОКО - отрицательный контрольный образец
ПКО - положительный контрольный образец
ПК - положительный контроль экстракции
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно- 
исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы 
по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия 
человека
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
MRCoNS - метициллин-резистентные коагулазонегативные 
Staphylococcus spp.
MRSA - метициллин-резистентный Staphylococcus aureus
MSSA - метициллин-чувствительный Staphylococcus aureus
MRSspp. - метициллин-резистентные Staphylococcus spp.
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиСенс® М/?5/\-скрин-титр-Ри» предназначен для 
выявления и количественного определения ДНК метициллин-чувствительного и 
метициллин-резистентного Staphylococcus aureus,  метициллин-резистентных 
коагулазонегативных Staphylococcus  spp. в биологическом материале (мазок из 
ротоглотки, бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ), мокрота, эндотрахеальный аспират, 
промывные воды бронхов, моча (осадок первой порции), кровь, плазма крови, 
спинномозговая жидкость (СМЖ), пунктаты из очагов поражения органов и тканей, 
смывы с медицинского оборудования, инструментария и инвентаря) методом 
полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной 
детекцией.
ВНИМАНИЕ! Результаты ПЦР-исследования учитываются в комплексной 
диагностике заболевания^
ПРИНЦИП МЕТОДА
Выявление ДНК при помощи полимеразной цепной реакции с гибридизационно- 
флуоресцентной детекцией основано на амплификации участка ДНК микроорганизма 
при помощи специфичных к данному участку ДНК праймеров. Наличие в реакционной 
смеси олигонуклеотидных зондов, меченных флуоресцентными красителями,
^  в соответствии с Директивой Европейского Союза 98/79/ЕС.


--- стр. 4 ---
позволяет проводить гибридизационно-флуоресцентную детекцию продукта 
амплификации без открывания пробирок после ПЦР. Регистрация флуоресцентного 
сигнала проводится непосредственно в ходе ПЦР, с помощью амплификатора с 
системой детекции в режиме «реального времени». Набор реагентов содержит 
внутренний контрольный образец, который добавляется в каждую исследуемую пробу 
на этапе экстракции ДНК, что позволяет контролировать процедуру анализа каждого 
образца. В наборе реагентов применяется «горячий старт», что значительно снижает 
количество неспецифических реакций. «Горячий старт» обеспечивается 
использованием химически модифицированной Тар-полимеразы. Химически 
модифицированная полимераза (TaqF) активируется при прогреве реакционной 
смеси при 95 °С в течение 15 мин.
ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ  
Набор реагентов выпускается в 1  формате.
Формат FRT
Набор реагентов выпускается в 3 формах комплектации:
Форма 1  включает комплекты реагентов «РИБО-преп» вариант 100 и «ПЦР-комплект» 
вариант FRT-100 F;
Форма 2 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F.
Форма 3 включает наборы реагентов оптом, расфасованные по отдельным
реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой фасовке.
Форма комплектации 1  предназначена для проведения полного ПЦР-
исследования, включающего экстракцию и амплификацию с гибридизационно- 
флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
Форма комплектации 2 предназначена для проведения амплификации с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени». Для 
проведения полного ПЦР-исследования необходимо использовать комплекты 
реагентов для экстракции ДНК, рекомендованные ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора.
Форма комплектации 3 предназначена для производственных целей для
последующей маркировки на языке заказчика и комплектации по наборам.
ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 3 используется только в соответствии с 
регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.


--- стр. 5 ---
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТИСТИКИ  
Аналитическая чувствительность
Вид биологического  
материала
Комплект  
для 
экстракци  
и ДНК
Комплект для  
амплификации  
и детекции
Аналитическая  
чувствитель­
ность, копий/мл
Линейный
диапазон
измерения,
копий/мл
Мазок из ротоглотки,
БАЛ,
мокрота,
эндотрахеальный
аспират,
промывные воды
бронхов,
моча^,
кровь, плазма крови, 
СМЖ,
пунктаты из очагов 
поражения органов и 
тканей,
смывы с медицинского 
оборудования, 
инструментария и 
инвентаря
____________
«РИБО-
преп»
«ПЦР-комплект» 
вариант FRT-100 F 400 800- 
10 000 О О О
Аналитическая специфичность
Специфическая активность набора реагентов доказана при исследовании 
бактериальных штаммов Staphylococcus aureus,  в том числе MRSA, а также при 
исследовании биологического материала с последующим подтверждением 
результата методом секвенирования фрагментов амплификации.
Аналитическая специфичность изучена на следующих штаммах и изолятах: 
Chlamydophila pneumonia, Escherichia coli, IHaemophiius haemolyticus, IH.influenzae,
H.parainfluenzae, Klebsiella oxytoca, K.pneumonia, Listeria monocytogenes, Moraxella  
catarrhalis, Mycobacterium tuberculosis. Mycoplasma pneumonia, Neisseria cinereae,  
N.elongata, N.flavescens, N.gonorrhoeae, N. meningitidis, N.mucosa, N.sicca,  
N.subflava, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa. Salmonella typhimurium,  
Shigella flexneri. Streptococcus agalactiae, S.milleri, S.mitis, S.mutans, S. pneumoniae,
S.pyogenes, S.salivarius, S.sanguis, S.suis, S.viridans,  a также на геномной ДНК 
человека. Неспецифических реакций при тестировании штаммов с помощью 
набора реагентов выявлено не было.
■  Требуется предобработка образцов мочи.


--- стр. 16 ---
ФОРМАТ FRT
цикла Ct (кривая флуоресценции не пересекает пороговую линию). Расчет 
концентрации проводится по формуле:
(В/С)*коэффициент BKO*N = (копий/мл образца).
-  ДНК M RSA (метициллин-резистентный Staphylococcus aureus)  
обнаружена, если для данной пробы в таблице результатов по каналам для 
флуорофоров FAM и JOE определено значение порогового цикла Ct. При этом 
кривые флуоресценции данной пробы должны пересекать пороговую линию на 
участке характерного экспоненциального подъема флуоресценции, а десятичный 
логарифм расчетной концентрации по каналам для флуорофоров FAM и JOE 
отличается не более чем на 0,3 (см. табл. 2). Расчет концентрации проводится по 
формуле;
(В/С)*коэффициент BKO*N = (копий/мл образца).
Если десятичный логарифм расчетной концентрации по каналу для флуорофора 
FAM отличается от расчетной концентрации по каналу для флуорофора JOE более, 
чем на 0,3, то выдается результат «ДНК MRSspp. {MRSA  и MRCoNS)  (метициллин-  
резистентные Staphylococcus  spp,, в том числе метициллин-резистентный  
Staphylococcus aureus  и метициллин-резистентные коагулазонегативные  
Staphylococcus  spp.)». Расчет концентрации проводится по формуле: 
(В/С)*коэффициент BKO*N = (копий/мл образца).
-  Результат анализа невалидный, если для данной пробы не определено 
(отсутствует) значение порогового цикла 
Ct по каналу для флуорофору FAM и по 
каналу для флуорофору JOE, и по каналу для флуорофора ROX значение Ct также 
не определено (отсутствует) или расчетное значение меньше указанного во 
вкладыше. В этом случае требуется повторно провести ПЦР-исследование 
соответствующего биологического образца.
Линейный диапазон измерения набора реагентов: 800 -  10 000 000 копий/мл. 
Если результат больше, чем 10 000 000 копий/мл, то он выдается как р е з у л ь т а т 
более 10 ООО ООО копий/мл.  Если результат меньше, чем 800 копий/мл, то он 
выдается как р е з у л ь т а т  менее 800 копий/мл.
ВНИМАНИЕ! Значения концентраций калибраторов указываются во вкладыше,  
прилагаемом к набору реагентов.
Результат считается достоверным, если получены правильные результаты  
для отрицательного контроля амплификации и положительного и  
отрицательного контролей экстракции ДНК, в соответствии с таблицей оценки  
результатов контрольных реакций (см. табл. 3).
16


--- стр. 17 ---
Ф О Р М А Т  F R T
Таблица 3
Результаты постановки контролей различных этапов ПЦР-исследования
Контроль Контролируемый  
этап анализа
Результаты амплификации по каналу
FAM/Green JOE/HEX/
Yellow
Orange/
Rox
Экстракция ДНК Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
Определено 
значение больше 
граничного*
ПК Экстракция 
ДНК, ПЦР
Значение 
укладывается 
в границы, 
указанные во 
вкладыше
Значение 
укладывается 
в границы, 
указанные во 
вкладыше
Определено 
значение больше 
граничного*
К- ПЦР Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
К1 MRSA, 
К2 MRSA ПЦР
Определено 
значение C tи 
расчетная 
концентрация
Определено 
значение C tи 
расчетная 
концентрация
Определено 
значение C tи  
расчетная 
концентрация
* Граничные значения концентраций указаны во вкладыше, прилагаемом к набору
реагентов.
ВНИМАНИЕ!
1. Если для пробы получен невалидный результат, требуется повторить ПЦР- 
исследование соответствующего биологического образца.
2. Отсутствие положительного сигнала в калибраторах может свидетельствовать о 
неправильно выбранной программе амплификации и о других ошибках, 
допущенных на этапе постановки ПЦР, В таком случае необходимо провести 
ПЦР еще раз для всех образцов.
3. Если в отрицательном контроле экстракции (В -) по каналам РАМ и/или JOE, или 
в отрицательном контроле ПЦР (К-) по любому из каналов РАМ, JOE, ROX 
детектируется положительный сигнал, значит, произошла контаминация 
реактивов или проб. В этом случае результаты анализа по всем пробам 
считаются недействительными. Требуется повторить анализ проб, а также 
предпринять меры по выявлению источника контаминации.
4. Для исследуемого образца зафиксирован положительный результат, при этом на 
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального 
подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию). Это может 
свидетельствовать о неправильно заданном уровне пороговой линии или 
параметров расчета базальной линии. Такой результат не должен рассматриваться 
как положительный. Если он получен при правильном уровне пороговой линии, 
требуется повторно провести ПЦР для этого образца.
17


--- стр. 18 ---
ФОРМАТ FRT
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ  
Срок годности, 9 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не 
подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности, указан­
ному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано иное. 
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до
8 °С не более 5 сут. «ПЦР-комплект» при получении разукомплектовать в соответст­
вии с указанными температурами хранения.
Хранение. Набор реагентов хранить при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь-1-FRT 
MRSA, ПЦР-смесь-2-FRT и полимеразу (TaqF) хранить при температуре не выше 
минус 16 °С. ПЦР-смесь-1-FRT MRSA хранить в защищенном от света месте. 
Условия отпуска. Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических 
учреждений.
Рекламации на качество набора реагентов «АмплиСенс® MRSA-CKprn-jmp-Fby  
направлять на предприятие-изготовитель ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотреб­
надзора (111123 г. Москва, ул. Новогиреевская, д. За) в отдел по работе с реклама­
циями и организации обучения (тел. (495) 974-96-46, факс (495) 916-18-18, e-mail 
products@pcr.ru)®.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ 
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
Главный врач ФГВУ «Поликлиника № 1»
Управления делами Президента Российской Ф е д б ^ц и и
.Л.Никонов
,V А .
®  Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету потребите­
ля на сайте; www.amplisens.ru.
1 8