Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК цитомегаловируса человека (CMV) в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "АмплиСенс® CMV-скрин/монитор-FL" по ТУ 9398-085-01897593-2012 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
УТ ВЕРЖ Д ЕН А У Т ВЕРЖ Д А Ю
Приказом Росздравнадзора Директор Федерального
о т___________№ _________________ бюджетного учреждения науки
«Центральный научно-
исследовательский институт
эп№ ^1^ Ш1даи>> Федеральной
.г' по;>^;здзору в сфере
1И.Пбкровский
2012 г.
1 ^ , .««т-Г'ч
И Н С Т Р У К Ц И Я
^ п о п р и м е н е н и ю н а б о р а р е а г е н т о в
д л я в ы я в л е н и я и к о л и ч е с т в е н н о г о о п р е д е л е н и я
Д Н К ц и т о м е г а л о в и р у с а ч е л о в е к а ( C M V ) в к л и н и ч е с к о м
/
^ м а т е р и а л е м е т о д о м п о л и м е р а з н о й ц е п н о й р е а к ц и и (П Ц Р )
с г и б р и д и з а ц и о н н о - ф л у о р е с ц е н т н о й д е т е к ц и е й
« А м п л и с е н с ® C y W \ / - C K p M H / M O H M T O p - F L »
А м п л и С е н с '^
ш 1
Ф е д е р а л ь н о е б ю д ж е т н о е у ч р е ж д е н и е н а у к и « Ц е н т р а л ь н ы й н а у ч н о -и с с л е д о в а т е л ь с к и й и н с т и т у т э п и д е м и о л о г и и » ,
Р о с с и й с к а я Ф е д е р а ц и я , 1 1 1 1 2 3 ,г о р о д М о с к в а , у л и ц а Н о в о г и р е е в с к а я , д о м З аIVD
--- стр. 2 ---
С П И С О К С О К Р А Щ Е Н И Й . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3
Н А З Н А Ч Е Н И Е . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3
П Р И Н Ц И П М Е Т О Д А . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3
Ф О Р М А Т Ы И Ф О Р М Ы В Ы П У С К А Н А Б О Р А Р Е А Г Е Н Т О В . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4
А Н А Л И Т И Ч Е С К И Е Х А Р А К Т Е Р И С Т И К И . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
М Е Р Ы П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5
Д О П О Л Н И Т Е Л Ь Н Ы Е М А Т Е Р И А Л Ы И О Б О Р У Д О В А Н И Е . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .7
В З Я Т И Е , Т Р А Н С П О Р Т И Р О В А Н И Е И Х Р А Н Е Н И Е И С С Л Е Д У Е М О Г О М А Т Е Р И А Л А . . . 8
П О Д Г О Т О В К А И С С Л Е Д У Е М О Г О М А Т Е Р И А Л А К Э К С Т Р А К Ц И И Д Н К . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8
Ф О Р М А Т F R T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 0
С О С Т А В . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 0
П Р О В Е Д Е Н И Е П Ц Р - И С С Л Е Д О В А Н И Я . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 1
Э К С Т Р А К Ц И Я Д Н К И З И С С Л Е Д У Е М Ы Х О Б Р А З Ц О В . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 1
П Р О В Е Д Е Н И Е А М П Л И Ф И К А Ц И И С Д Е Т Е К Ц И Е Й В Р Е Ж И М Е « Р Е А Л Ь Н О Г О
В Р Е М Е Н И » . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1
А . П о д г о т о в к а п р о б и р о к д л я а м п л и ф и к а ц и и . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 1
Б . П р о в е д е н и е а м п л и ф и к а ц и и с д е т е к ц и е й в р е ж и м е « р е а л ь н о г о в р е м е н и »
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 3
А Н А Л И З И И Н Т Е Р П Р Е Т А Ц И Я Р Е З У Л Ь Т А Т О В . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 4
С Р О К Г О Д Н О С Т И . У С Л О В И Я Т Р А Н С П О Р Т И Р О В А Н И Я И Х Р А Н Е Н И Я . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 0
П Р И Л О Ж Е Н И Е 1 С х е м а п р и г о т о в л е н и я р е а к ц и о н н ы х с м е с е й . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .2 1
С И М В О Л Ы . И С П О Л Ь З У Е М Ы Е В П Е Ч А Т Н О Й П Р О Д У К Ц И И . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .2 2
О Г Л А В Л Е Н И Е
--- стр. 3 ---
сп и со к СОКРАЩ ЕНИЙ
В н а с т о я щ е й и н с т р у к ц и и п р и м е н я ю т с я с л е д у ю щ и е с о к р а щ е н и я и о б о з н а ч е н и я :
В К О S T I - 8 7 - э к з о г е н н ы й в н у т р е н н и й к о н т р о л ь н ы й о б р а з е ц
В К О G l o b - э н д о г е н н ы й в н у т р е н н и й к о н т р о л ь н ы й о б р а з е ц
К - - о т р и ц а т е л ь н ы й к о н т р о л ь П Ц Р
К + - п о л о ж и т е л ь н ы й к о н т р о л ь П Ц Р
О К О - о т р и ц а т е л ь н ы й к о н т р о л ь н ы й о б р а з е ц
О К - о т р и ц а т е л ь н ы й к о н т р о л ь э к с т р а к ц и и
П К - п о л о ж и т е л ь н ы й к о н т р о л ь э к с т р а к ц и и
П К О - п о л о ж и т е л ь н ы й к о н т р о л ь н ы й о б р а з е ц
П Ц Р - п о л и м е р а з н а я ц е п н а я р е а к ц и я
Ф Б У Н Ц Н И И
Э п и д е м и о л о т и
Р о с п о т р е б н а д з о р а
- Ф е д е р а л ь н о е б ю д ж е т н о е у ч р е ж д е н и е н а у к и « Ц е н т р а л ь н ы й
н а у ч н о - и с с л е д о в а т е л ь с к и й и н с т и т у т э п и д е м и о л о г и и »
Ф е д е р а л ь н о й с л у ж б ы п о н а д з о р у в с ф е р е з а щ и т ы п р а в
п о т р е б и т е л е й и б л а г о п о л у ч и я ч е л о в е к а
C M V - ц и т о м е г а л о в и р у с ч е л о в е к а
F R T - ф л у о р е с ц е н т н а я д е т е к ц и я в р е ж и м е « р е а л ь н о г о в р е м е н и »
Н А З Н А Ч Е Н И Е
Н а б о р р е а г е н т о в « А м п л и С е н с ® С Л 7 \ Л с к р и н / м о н и т о р - Р Ь > п р е д н а з н а ч е н д л я
в ы я в л е н и я м и к о л и ч е с т в е н н о г о о п р е д е л е н и я Д Н К ц и т о м е г а л о в и р у с а ч е л о в е к а {C M V )
п у т е м а м п л и ф и к а ц и и с п е ц и ф и ч е с к о г о ф р а г м е н т а Д Н К в и р у с а м е т о д о м П Ц Р с
г и б р и д и з а ц и о н н о - ф л у о р е с ц е н т н о й д е т е к ц и е й п р о д у к т о в а м п л и ф и к а ц и и .
^ М а т е р и а л о м д л я п р о в е д е н и я П Ц Р с л у ж а т п р о б ы Д Н К , в ы д е л е н н ы е и з п л а з м ы
п е р и ф е р и ч е с к о й к р о в и , а м н и о т и ч е с к о й ж и д к о с т и , с п и н н о м о з г о в о й ж и д к о с т и ( л и к в о р а ) ,
с л ю н ы , с м ы в о в и м а з к о в и з р о т о г л о т к и , м о ч и , б р о н х о а л ь в е о л я р н о г о л а в а ж а , ц е л ь н о й
к р о в и , л е й к о ц и т о в к р о в и , б и о п т а т о в в н у т р е н н и х о р г а н о в .
В Н И М А Н И Е ! Р е з у л ь т а т ы П Ц Р - и с с л е д о в а н и я у ч и т ы в а ю т с я в к о м п л е к с н о й
ф д и а г н о с т и к е з а б о л е в а н и я ^ ^
П Р И Н Ц И П М Е Т О Д А
В ы я в л е н и е C M V м е т о д о м п о л и м е р а з н о й ц е п н о й р е а к ц и и ( П Ц Р ) с
г и б р и д и з а ц и о н н о - ф л у о р е с ц е н т н о й д е т е к ц и е й в к л ю ч а е т в с е б я т р и э т а п а : э к с т р а к ц и ю
Д Н К и з о б р а з ц о в к л и н и ч е с к о г о м а т е р и а л а , а м п л и ф и к а ц и ю у ч а с т к а Д Н К д а н н о г о
м и к р о о р г а н и з м а и г и б р и д и з а ц и о н н о - ф л у о р е с ц е н т н у ю д е т е к ц и ю , к о т о р а я
п р о и з в о д и т с я н е п о с р е д с т в е н н о в х о д е П Ц Р . Э к с т р а к ц и я Д Н К и з п л а з м ы
п е р и ф е р и ч е с к о й к р о в и , а м н и о т и ч е с к о й ж и д к о с т и , с п и н н о м о з г о в о й ж и д к о с т и
( л и к в о р а ) , с л ю н ы , с м ы в о в и м а з к о в и з р о т о г л о т к и и б р о н х о а л ь в е о л я р н о г о л а в а ж а
п р о в о д и т с я в п р и с у т с т в и и в н у т р е н н е г о к о н т р о л ь н о г о о б р а з ц а ( В К О S T I - 8 7 ) , к о т о р ы й
п о з в о л я е т к о н т р о л и р о в а т ь в ы п о л н е н и е п р о ц е д у р ы и с с л е д о в а н и я д л я к а ж д о г о
В с о о т в е т с т в и и с д и р е к т и в о й Е в р о п е й с к о г о С о ю з а 9 8 /7 9 /Е С
--- стр. 4 ---
о б р а з ц а . П р и э к с т р а к ц и и Д Н К и з к л и н и ч е с к о г о м а т е р и а л а , с о д е р ж а щ е г о к л е т к и ,
п р о и с х о д и т а м п л и ф и к а ц и я у ч а с т к а Д Н К г е н о м а ч е л о в е к а ( э н д о г е н н ы й в н у т р е н н и й
к о н т р о л ь ) . Э н д о г е н н ы й в н у т р е н н и й к о н т р о л ь ( В К О G l o b ) п о з в о л я е т н е т о л ь к о
к о н т р о л и р о в а т ь э т а п ы П Ц Р - и с с л е д о в а н и я ( э к с т р а к ц и ю Д Н К и П Ц Р ) , н о и о ц е н и в а т ь
а д е к в а т н о с т ь в з я т и я м а т е р и а л а и е г о х р а н е н и я . З а т е м с п о л у ч е н н ы м и п р о б а м и Д Н К
п р о в о д и т с я р е а к ц и я а м п л и ф и к а ц и и у ч а с т к а Д Н К C M V п р и п о м о щ и с п е ц и ф и ч н ы х к
э т о м у у ч а с т к у Д Н К п р а й м е р о в и ф е р м е н т а Т а д - п о л и м е р а з ы . В с о с т а в е р е а к ц и о н н о й
с м е с и п р и с у т с т в у ю т ф л у о р е с ц е н т н о - м е ч е н ы е о л и г о н у к л е о т и д н ы е з о н д ы , к о т о р ы е
г и б р и д и з у ю т с я с к о м п л е м е н т а р н ы м у ч а с т к о м а м п л и ф и ц и р у е м о й Д Н К - м и ш е н и , в
р е з у л ь т а т е ч е г о п р о и с х о д и т н а р а с т а н и е и н т е н с и в н о с т и ф л у о р е с ц е н ц и и . Э т о
п о з в о л я е т р е г и с т р и р о в а т ь н а к о п л е н и е с п е ц и ф и ч е с к о г о п р о д у к т а а м п л и ф и к а ц и и
п у т е м и з м е р е н и я и н т е н с и в н о с т и ф л у о р е с ц е н т н о г о с и г н а л а . Д е т е к ц и я
ф л у о р е с ц е н т н о г о с и г н а л а о с у щ е с т в л я е т с я н е п о с р е д с т в е н н о в х о д е П Ц Р с п о м о щ ь ю
а м п л и ф и к а т о р а с с и с т е м о й д е т е к ц и и ф л у о р е с ц е н т н о г о с и г н а л а в р е ж и м е
« р е а л ь н о г о в р е м е н и » .
Ф О Р М А Т Ы И Ф О Р М Ы В Ы П У С К А Н А Б О Р А Р Е А Г Е Н Т О В
Н а б о р р е а г е н т о в в ы п у с к а е т с я в 1 ф о р м а т е .
/
Ф о р м а т F R T
Н а б о р р е а г е н т о в в ы п у с к а е т с я в 3 ф о р м а х к о м п л е к т а ц и и :
Ф о р м а 1 в к л ю ч а е т к о м п л е к т ы р е а г е н т о в « Р И Б О - п р е п » в а р и а н т 1 0 0 , « П Ц Р - к о м п л е к т »
в а р и а н т F R T - 1 0 0 F ;
Ф о р м а 2 в к л ю ч а е т к о м п л е к т р е а г е н т о в « П Ц Р - к о м п л е к т » в а р и а н т F R T - 1 0 0 F .
Ф о р м а 3 в к л ю ч а е т н а б о р ы р е а г е н т о в о п т о м , р а с ф а с о в а н н ы е п о о т д е л ь н ы м
^ р е а г е н т а м , с м а р к и р о в к о й р е а г е н т о в н а и х о п т о в о й ф а с о в к е . ^
Ф о р м а к о м п л е к т а ц и и 1 п р е д н а з н а ч е н а д л я п р о в е д е н и я п о л н о г о П Ц Р - и с с л е д о в а н и я ,
в к л ю ч а ю щ е г о э к с т р а к ц и ю Д Н К , а м п л и ф и к а ц и ю и к о л и ч е с т в е н н о е о п р е д е л е н и е Д Н К
ц и т о м е г а л о в и р у с а ч е л о в е к а {C M V ) с г и б р и д и з а ц и о н н о - ф л у о р е с ц е н т н о й д е т е к ц и е й в
р е ж и м е « р е а л ь н о г о в р е м е н и » .
Ф о р м а к о м п л е к т а ц и и 2 п р е д н а з н а ч е н а д л я а м п л и ф и к а ц и и и к о л и ч е с т в е н н о г о
о п р е д е л е н и я Д Н К ц и т о м е г а л о в и р у с а ч е л о в е к а {C M V ) с г и б р и д и з а ц и о н н о -
ф л у о р е с ц е н т н о й д е т е к ц и е й в р е ж и м е « р е а л ь н о г о в р е м е н и » . Д л я п р о в е д е н и я
п о л н о г о П Ц Р - и с с л е д о в а н и я н е о б х о д и м о и с п о л ь з о в а т ь к о м п л е к т ы р е а г е н т о в д л я
э к с т р а к ц и и Д Н К , р е к о м е н д о в а н н ы е Ф Б У Н Ц Н И И Э п и д е м и о л о г и и Р о с п о т р е б н а д з о р а .
Ф о р м а к о м п л е к т а ц и и 3 п р е д н а з н а ч е н а д л я п р о и з в о д с т в е н н ы х ц е л е й д л я
п о с л е д у ю щ е й м а р к и р о в к и н а я з ы к е з а к а з ч и к а и к о м п л е к т а ц и и п о н а б о р а м .
--- стр. 5 ---
В Н И М А Н И Е ! Ф о р м а к о м п л е к т а ц и и 3 и с п о л ь з у е т с я т о л ь к о в с о о т в е т с т в и и с
р е г л а м е н т о м , у т в е р ж д е н н ы м Ф Б У Н Ц Н И И Э п и д е м и о л о г и и Р о с п о т р е б н а д з о р а .
А Н А Л И Т И Ч Е С К И Е Х А Р А К Т Е Р И С Т И К И
А н а л и т и ч е с к а я ч у в с т в и т е л ь н о с т ь
Л и н е й н ы й д и а п а з о н и з м е р е н и я н а б о р а р е а г е н т о в ; 5 0 0 - 1 0 0 0 0 О О О к о п и й / м л .
Е с л и р е з у л ь т а т б о л ь ш е , ч е м 1 0 . 0 0 0 . 0 0 0 к о п и й / м л , т о о н в ы д а е т с я к а к результат
более 10 О О О О О О копий ДНК CMV/мл. Е с л и р е з у л ь т а т м е н ь ш е ч е м , 5 0 0 к о п и й / м л , т о
о н в ы д а е т с я к а к результ ат менее 500 копий ДНК CMV/мл.
П л а зм а п ер и ф ер и ч еск о й к р о в и , а м н и о т и ч е с к а я ж и д к о с т ь , с п и н н о м о зг о в а я ж и д к о с т ь (л и к в о р ),
с л ю н а , с м ы в ы и м а з к и и з
р о т о г л о т к и , м о ч а ,
б р о н х о а л ь в е о л я р н ы й л а в а ж_____
Ц е л ь н а я к р о в ь , л е й к о ц и т ы к р о в и ,
б и о п т а т ы в н у т р е н н и х о р г а н о в
Р И Б О -п р е п
Р И Б О -п р е п
400 к о п и й /м л
5 к о п и й Д Н К CMV
н а 1 0 ® к л е т о к
А н а л и т и ч е с к а я с п е ц и ф и ч н о с т ь
Н а б о р р е а г е н т о в о б н а р у ж и в а е т ф р а г м е н т Д Н К ц и т о м е г а л о в и р у с а ч е л о в е к а .
С п е ц и ф и ч е с к а я а к т и в н о с т ь н а б о р а р е а г е н т о в д о к а з а н а п р и и с с л е д о в а н и и
р е ф е р е н с н о г о ш т а м м а A D 1 6 9 , а т а к ж е п р и и с с л е д о в а н и и к л и н и ч е с к о г о м а т е р и а л а с
п о с л е д у ю щ и м п о д т в е р ж д е н и е м р е з у л ь т а т а м е т о д о м с е к в е н и р о в а н и я ф р а г м е н т о в
а м п л и ф и к а ц и и .
П о к а з а н о о т с у т с т в и е а к т и в н о с т и к о м п о н е н т о в н а б о р а в о т н о ш е н и и Д Н К д р у г и х
в и р у с о в ( Э п ш т е й н - Б а р р в и р у с ч е л о в е к а , в и р у с п р о с т о г о г е р п е с а 1 и 2 т и п а , в и р у с
г е р п е с а 6 и 8 т и п а , в и р у с В а р и ц е л л а - З о с т е р , Parvovirus В 1 9 и д р . ) , б а к т е р и а л ь н ы х
в о з б у д и т е л е й {Streptococcus pyogenes. Staphylococcus aureus, Streptococcus
agalactiae и д р . ) и Д Н К ч е л о в е к а .
М Е Р Ы П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
Р а б о т а д о л ж н а п р о в о д и т ь с я в л а б о р а т о р и и , в ы п о л н я ю щ е й м о л е к у л я р н о
б и о л о г и ч е с к и е ( П Ц Р ) и с с л е д о в а н и я к л и н и ч е с к о г о м а т е р и а л а н а н а л и ч и е
в о з б у д и т е л е й и н ф е к ц и о н н ы х б о л е з н е й , с с о б л ю д е н и е м с а н и т а р н о - э п и д е м и ч е с к и х
п р а в и л С П 1 . 3 . 2 3 2 2 - 0 8 « Б е з о п а с н о с т ь р а б о т ы с м и к р о о р г а н и з м а м и I I I - I V г р у п п
п а т о г е н н о с т и ( о п а с н о с т и ) и в о з б у д и т е л я м и п а р а з и т а р н ы х б о л е з н е й » , С а н П и Н
2 . 1 . 7 . 2 7 9 0 - 1 0 « С а н и т а р н о - э п и д е м и о л о г и ч е с к и е т р е б о в а н и я к о б р а щ е н и ю с
м е д и ц и н с к и м и о т х о д а м и » и м е т о д и ч е с к и х у к а з а н и й М У 1 . 3 . 2 5 6 9 - 0 9 « О р г а н и з а ц и я
--- стр. 6 ---
р а б о т ы л а б о р а т о р и й , и с п о л ь з у ю щ и х м е т о д ы а м п л и ф и к а ц и и н у к л е и н о в ы х к и с л о т п р и
р а б о т е с м а т е р и а л о м , с о д е р ж а щ и м м и к р о о р г а н и з м ы I - I V г р у п п п а т о г е н н о с т и » .
П р и р а б о т е в с е г д а с л е д у е т в ы п о л н я т ь с л е д у ю щ и е т р е б о в а н и я ;
- С л е д у е т р а с с м а т р и в а т ь и с с л е д у е м ы е о б р а з ц ы к а к и н ф е к ц и о н н о - о п а с н ы е ,
о р г а н и з о в ы в а т ь р а б о т у и х р а н е н и е в с о о т в е т с т в и и с С П 1 . 3 . 2 3 2 2 - 0 8
« Б е з о п а с н о с т ь р а б о т ы с м и к р о о р г а н и з м а м и I I I - I V г р у п п п а т о г е н н о с т и
( о п а с н о с т и ) и в о з б у д и т е л я м и п а р а з и т а р н ы х б о л е з н е й » .
- У б и р а т ь и д е з и н ф и ц и р о в а т ь р а з л и т ы е о б р а з ц ы и л и р е а к т и в ы , и с п о л ь з у я
д е з и н ф и ц и р у ю щ и е с р е д с т в а в с о о т в е т с т в и и с С П 1 . 3 . 2 3 2 2 - 0 8 « Б е з о п а с н о с т ь
р а б о т ы с м и к р о о р г а н и з м а м и I I I - I V г р у п п п а т о г е н н о с т и ( о п а с н о с т и ) и
в о з б у д и т е л я м и п а р а з и т а р н ы х б о л е з н е й » .
- Л а б о р а т о р н ы й п р о ц е с с д о л ж е н б ы т ь о д н о н а п р а в л е н н ы м . А н а л и з п р о в о д и т с я в
о т д е л ь н ы х п о м е щ е н и я х ( з о н а х ) . Р а б о т у с л е д у е т н а ч и н а т ь в З о н е В ы д е л е н и я ,
п р о д о л ж а т ь в З о н е А м п л и ф и к а ц и и и Д е т е к ц и и . Н е в о з в р а щ а т ь о б р а з ц ы ,
о б о р у д о в а н и е и р е а к т и в ы в з о н у , в к о т о р о й б ы л а п р о в е д е н а п р е д ы д у щ а я с т а д и я
п р о ц е с с а .
- У д а л я т ь н е и с п о л ь з о в а н н ы е р е а к т и в ы в с о о т в е т с т в и и с С а н П и Н 2 . 1 . 7 . 2 7 9 0 - 1 0
« С а н и т а р н о - э п и д е м и о л о г и ч е с к и е т р е б о в а н и я к о б р а щ е н и ю с м е д и ц и н с к и м и
о т х о д а м и » .
В Н И М А Н И Е ! П р и у д а л е н и и о т х о д о в п о с л е а м п л и ф и к а ц и и ( п р о б и р о к , с о д е р ж а щ и х
п р о д у к т ы П Ц Р ) н е д о п у с т и м о о т к р ы в а н и е п р о б и р о к и р а з б р ы з г и в а н и е с о д е р ж и м о г о ,
п о с к о л ь к у э т о м о ж е т п р и в е с т и к к о н т а м и н а ц и и п р о д у к т а м и П Ц Р л а б о р а т о р н о й з о н ы ,
о б о р у д о в а н и я и р е а г е н т о в .
- П р и м е н я т ь н а б о р с т р о г о п о н а з н а ч е н и ю , с о г л а с н о д а н н о й и н с т р у к ц и и .
- Д о п у с к а т ь к р а б о т е с н а б о р о м т о л ь к о с п е ц и а л ь н о о б у ч е н н ы й п е р с о н а л . ^
- Н е и с п о л ь з о в а т ь н а б о р п о и с т е ч е н и и с р о к а г о д н о с т и .
- И с п о л ь з о в а т ь о д н о р а з о в ы е п е р ч а т к и , л а б о р а т о р н ы е х а л а т ы , з а щ и щ а т ь г л а з а в о
в р е м я р а б о т ы с о б р а з ц а м и и р е а к т и в а м и . Т щ а т е л ь н о в ы м ы т ь р у к и п о о к о н ч а н и и
р а б о т ы .
- И з б е г а т ь к о н т а к т а с к о ж е й , г л а з а м и и с л и з и с т о й о б о л о ч к о й . П р и к о н т а к т е
н е м е д л е н н о п р о м ы т ь п о р а ж е н н о е м е с т о в о д о й и о б р а т и т ь с я з а м е д и ц и н с к о й
п о м о щ ь ю .
- Л и с т ы б е з о п а с н о с т и м а т е р и а л о в ( M S D S - m a t e r i a l s a f e t y d a t a s h e e t ) д о с т у п н ы п о
з а п р о с у .
--- стр. 7 ---
Д О П О Л Н И Т Е Л Ь Н Ы Е М А Т Е Р И А Л Ы И О Б О Р У Д О В А Н И Е
П р о в е д е н и е п р е д в а р и т е л ь н о й п о д г о т о в к и м а т е р и а л а :
1 . Г Е М О Л И Т И К ( Т У 9 3 9 8 - 0 9 7 - 0 1 8 9 7 5 9 3 - 2 0 1 0 ) - р е а г е н т д л я п р е д о б р а б о т к и ц е л ь н о й
п е р и ф е р и ч е с к о й и п у п о в и н н о й к р о в и ( п р о и з в о д с т в а Ф Б У Н Ц Н И И Э п и д е м и о л о г и и
Р о с п о т р е б н а д з о р а ) .
2 . О д н о р а з о в ы е п о л и п р о п и л е н о в ы е з а в и н ч и в а ю щ и е с я и л и п л о т н о з а к р ы в а ю щ и е с я
п р о б и р к и н а 1 , 5 м л ( н а п р и м е р , A x y g e n , С Ш А ) .
Э к с т р а к ц и я Д Н К и з о б р а з ц о в ( З О Н А 1 ) :
3 . К о м п л е к т р е а г е н т о в д л я в ы д е л е н и я Р Н К / Д Н К « Р И Б О - п р е п » ( Т У 9 3 9 8 - 0 7 1 -
0 1 8 9 7 5 9 3 - 2 0 0 8 ) , к о м п л е к т р е а г е н т о в д л я в ы д е л е н и я Д Н К « Д Н К - с о р б - В » ( Т У 9 3 9 8 -
0 0 3 - 0 1 8 9 7 5 9 3 - 2 0 0 9 ) и л и д р у г и е р е к о м е н д о в а н н ы е Ф Б У Н Ц Н И И Э п и д е м и о л о г и и
Р о с п о т р е б н а д з о р а - п р и р а б о т е с ф о р м о й к о м п л е к т а ц и и 2 .
4. Д о п о л н и т е л ь н ы е м а т е р и а л ы и о б о р у д о в а н и е д л я э к с т р а к ц и и Д Н К - с о г л а с н о
и н с т р у к ц и и к к о м п л е к т у р е а г е н т о в д л я в ы д е л е н и я Д Н К .
5 . А в т о м а т и ч е с к а я с т а н ц и я д л я в ы д е л е н и я Р Н К / Д Н К ( н а п р и м е р N u c l i S E N S e a s y M A G
( b i o M 6 i 1 f e u x , Ф р а н ц и я ) - п р и и с п о л ь з о в а н и и а в т о м а т и ч е с к и х с т а н ц и й д л я
э к с т р а к ц и и н у к л е и н о в ы х к и с л о т .
6 . Н а б о р р е а к т и в о в и р а с х о д н ы х м а т е р и а л о в к а в т о м а т и ч е с к о й с т а н ц и и ( н а п р и м е р
N u c l i S E N S ® e a s y M A G ( N u c l i S e n s б у ф е р д л я э к с т р а к ц и и 1 , N u c l i S e n s б у ф е р д л я
э к с т р а к ц и и 2 , N u c l i S e n s б у ф е р д л я э к с т р а к ц и и 3 , N u c l i S e n s б у ф е р д л я л и з и с а ,
N u c l i S e n s м а г н е т и з и р о в а н н а я с и л и к а ) ( b i o M 6 r i e u x , Ф р а н ц и я ) ) - п р и и с п о л ь з о в а н и и
а в т о м а т и ч е с к и х с т а н ц и й д л я э к с т р а к ц и и н у к л е и н о в ы х к и с л о т .
7 . О д н о р а з о в ы е п о л и п р о п и л е н о в ы е з а в и н ч и в а ю щ и е с я и л и п л о т н о з а к р ы в а ю щ и е с я
п р о б и р к и о б ъ е м о м 2 , 0 м л ( н а п р и м е р , A x y g e n , С Ш А ) - п р и и с п о л ь з с Ж а н и и
а в т о м а т и ч е с к и х с т а н ц и й д л я э к с т р а к ц и и н у к л е и н о в ы х к и с л о т .
П р о в е д е н и е П Ц Р и г и б р и д и з а ц и о н н о - ф л у о р е с ц е н т н о й д е т е к ц и и п ро д укто в П Ц Р -
а м п л и ф и к а ц и и . ( З О Н А 2 ) :
В . П Ц Р - б о к с ( н а п р и м е р , « Б А В - П Ц Р - « Л а м и н а р - С » , « Л а м и н а р н ы е с и с т е м ы » , Р о с с и я ) .
9 . Ц е н т р и ф у г а / в о р т е к с ( н а п р и м е р , « Т Э Т А - 2 » , « Б и о к о м » , Р о с с и я ) .
1 0 . А в т о м а т и ч е с к и е д о з а т о р ы п е р е м е н н о г о о б ъ е м а о т 5 д о 2 0 м к л и о т 2 0 д о 2 0 0 м к л .
1 1 . О д н о р а з о в ы е н а к о н е ч н и к и с ф и л ь т р о м д о 1 0 0 и 2 0 0 м к л в ш т а т и в а х .
1 2 . Ш т а т и в ы д л я п р о б и р о к о б ъ е м о м 0 , 2 м л и л и 0 , 1 м л ( в с о о т в е т с т в и и с
и с п о л ь з у е м ы м и п р и б о р о м ) .
1 3 . Х о л о д и л ь н и к о т 2 д о 8 ° С с м о р о з и л ь н о й к а м е р о й н е в ы ш е м и н у с 1 6 ° С д л я
в ы д е л е н н ы х п р о б Д Н К .
14.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09.
--- стр. 8 ---
1 5 . Е м к о с т ь д л я с б р о с а н а к о н е ч н и к о в .
1 6 . П р о г р а м м и р у е м ы й а м п л и ф и к а т о р с с и с т е м о й д е т е к ц и и ф л у о р е с ц е н т н о г о с и г н а л а в
р е ж и м е « р е а л ь н о г о в р е м е н и » ( н а п р и м е р , R o t o r - G e n e 3 0 0 0 / 6 0 0 0 ( C o r b e t t R e s e a r c h ,
А в с т р а л и я ) , R o t o r - G e n e Q ( Q i a g e n , Г е р м а н и я ) , i C y c l e r i Q 5 ( B i o - R a d , С Ш А ) , М х З О О О Р
( S t r a t a g e n e , С Ш А ) , « Д Т - 9 6 » ( « Д Н К - Т е х н о л о г и я » , Р о с с и я ) и р е к о м е н д о в а н н ы е Ф Б У Н
Ц Н И И Э п и д е м и о л о г и и Р о с п о т р е б н а д з о р а в м е т о д и ч е с к и х р е к о м е н д а ц и я х п о
п р и м е н е н и ю д а н н о г о н а б о р а р е а г е н т о в ) .
1 7 . О д н о р а з о в ы е п о л и п р о п и л е н о в ы е п р о б и р к и д л я П Ц Р о б ъ е м о м 0 , 2 м л и л и 0 , 1 м л :
а ) т о н к о с т е н н ы е п р о б и р к и д л я П Ц Р о б ъ е м о м 0 , 2 м л с в ы п у к л о й к р ы ш к о й
( н а п р и м е р , А х у д е п , С Ш А ) - п р и и с п о л ь з о в а н и и п р и б о р а п л а н ш е т н о г о т и п а ;
б ) т о н к о с т е н н ы е п р о б и р к и д л я П Ц Р о б ъ е м о м 0 , 2 м л с п л о с к о й к р ы ш к о й
( н а п р и м е р , А х у д е п , С Ш А ) , и л и п р о б и р к и д л я П Ц Р к R o t o r - G e n e , о б ъ е м о м 0 , 1
м л в с т р и п а х п о 4 ш т . с к р ы ш к а м и ( н а п р и м е р , C o r b e t t R e s e a r c h , А в с т р а л и я ;
Q i a g e n , Г е р м а н и я ) - п р и и с п о л ь з о в а н и и п р и б о р а р о т о р н о г о т и п а .
В З Я Т И Е , Т Р А Н С П О Р Т И Р О В А Н И Е И Х Р А Н Е Н И Е И С С Л Е Д У Е М О Г О М А Т Е Р И А Л А
П е р е д н а ч а л о м р а б о т ы с л е д у е т о з н а к о м и т ь с я с м е т о д и ч е с к и м и р е к о м е н д а ц и я м и
; « В з я т и е , т р а н с п о р т и р о в к а , х р а н е н и е к л и н и ч е с к о г о м а т е р и а л а д л я П Ц Р -
д и а г н о с т и к и » , р а з р а б о т а н н ы м и Ф Г У Н Ц Н И И Э Р о с п о т р е б н а д з о р а , М о с к в а , 2 0 0 8 г .
М а т е р и а л о м д л я и с с л е д о в а н и я с л у ж и т ц е л ь н а я к р о в ь , л е й к о ц и т ы к р о в и ,
б и о п т а т ы в н у т р е н н и х о р г а н о в , с л ю н а , с м ы в ы и м а з к и и з р о т о г л о т к и , п л а з м а
п е р и ф е р и ч е с к о й к р о в и , а м н и о т и ч е с к а я ж и д к о с т ь , с п и н н о м о з г о в а я ж и д к о с т ь ( л и к в о р ) ,
м о ч а , б р о н х о а л ь в е о л я р н ы й л а в а ж .
П О Д Г О Т О В К А И С С Л Е Д У Е М О Г О М А Т Е Р И А Л А К Э К С Т Р А К Ц И И Д Н К
ф - ц е л ь н а я п е р и ф е р и ч е с к а я и п у п о в и н н а я к р о в ь ^
П е р е д э к с т р а к ц и е й н е о б х о д и м о п р о в е с т и п р е д о б р а б о т к у к р о в и ; в 1 , 5 м л п р о б и р к у
т и п а « Э п п е н д о р ф » в н е с т и о т д е л ь н ы м н а к о н е ч н и к о м 1 , 0 м л г е м о л и т и к а
( п р о и з в о д с т в а Ф Б У Н Ц Н И И Э п и д е м и о л о г и и Р о с п о т р е б н а д з о р а ) и 0 , 2 5 м л ц е л ь н о й
к р о в и . А к к у р а т н о п е р е м е ш а т ь с о д е р ж и м о е п р о б и р к и н а в о р т е к с е и о с т а в и т ь н а 1 0
м и н у т , п е р и о д и ч е с к и п е р е м е ш и в а я . Ц е н т р и ф у г и р о в а т ь п р о б и р к и н а
м и к р о ц е н т р и ф у г е п р и 8 т ы с о б / м и н в т е ч е н и е 2 м и н . Н а д о с а д о ч н у ю ж и д к о с т ь
о т о б р а т ь с п о м о щ ь ю в а к у у м н о г о о т с а с ы в а т е л я , н е з а д е в а я о с а д к а . П о с л е о т м ы в к и
о с а д о к к л е т о к д о л ж е н б ы т ь б е л ы м , д о п у с к а е т с я н а л и ч и е т о л ь к о н е б о л ь ш о г о н а л е т а
р о з о в а т о г о ц в е т а н а д о с а д к о м ( о с т а т к и р а з р у ш е н н ы х э р и т р о ц и т о в ) . П р и
н е о б х о д и м о с т и м о ж н о п о в т о р и т ь о т м ы в к у г е м о л и т и к о м . П о л у ч е н н ы й о с а д о к
л е й к о ц и т о в д о л ж е н б ы т ь н е м е д л е н н о л и з и р о в а н ( в с л у ч а е э к с т р а к ц и и с п о м о щ ь ю
к о м п л е к т а р е а г е н т о в « Р И Б О - п р е п » д о б а в и т ь 3 0 0 м к л л и з и р у ю щ е г о р а с т в о р а и в
8
--- стр. 9 ---
п о с л е д у ю щ е м в ы д е л и т ь Д Н К в с о о т в е т с т в и и с и н с т р у к ц и е й к к о м п л е к т у р е а г е н т о в
« Р И Б О - п р е п » , н е д о б а в л я я лизирующий р а с т в о р повторно ) или з а м о р о ж е н п р и
т е м п е р а т у р е н е в ы ш е м и н у с 6 8 ° С н а д л и т е л ь н о е в р е м я .
- б е л ы е к л е т к и ( л е й к о ц и т а р н а я м а с с а ) п е р и ф е р и ч е с к о й и / и л и пуповинной крови
П о л у ч а ю т и з ц е л ь н о й п е р и ф е р и ч е с к о й и / и л и п у п о в и н н о й к р о в и . К р о в ь м о ж е т
х р а н и т ь с я п р и к о м н а т н о й т е м п е р а т у р е в т е ч е н и е 6 ч с м о м е н т а в з я т и я . Д л я о т б о р а
б е л ы х к л е т о к п р о б и р к у с к р о в ь ю ц е н т р и ф у г и р о в а т ь в т е ч е н и е 2 0 м и н п р и 8 0 0 - 1 6 0 0 g ( 3
т ы с о б / м и н ) , п о с л е э т о г о о т о б р а т ь б е л у ю п л е н к у , о б р а з у ю щ у ю с я н а п о в е р х н о с т и
о т с т о я в ш е й с я к р о в и . Д а л е е п р о в е с т и п р е д о б р а б о т к у , о п и с а н н у ю в ы ш е д л я ц е л ь н о й
п е р и ф е р и ч е с к о й и п у п о в и н н о й к р о в и . Д о п у с к а е т с я х р а н е н и е б е л ы х к л е т о к
п е р и ф е р и ч е с к о й и п у п о в и н н о й к р о в и п р и т е м п е р а т у р е н е в ы ш е м и н у с 6 8 ° С в т е ч е н и е
д л и т е л ь н о г о в р е м е н и .
--- стр. 10 ---
Ф О Р М А Т F R T
ФОРМАТ FRT
СОСТАВ
Комплект реагентов «РИБО-преп» вариант 100 - комплект реагентов для
выделения РНК/ДНК из клинического материала - включает:
Раствор для лизиса Прозрачная жидкость
голубого цвета ^ 30 1 флакон
Раствор для преципитации Прозрачная бесцветная
жидкость 40 1 1 флакон
Раствор для отмывки 3 Прозрачная бесцветная
жидкость 50 1 флакон
Раствор для отмывки 4 Прозрачная бесцветная
жидкость 20 1 флакон
РНК-буфер Прозрачная бесцветная
жидкость 1,2 8 пробирок
Комплект реагентов рассчитан на выделение РНК/ДНК из 100 проб, включая
контроли.
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F - комплект реагентов
для амплификации и количественного определения ДНК цитомегаловируса человека
{C M V ) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального
времени» - включает;
Кол-во
ПЦР-смесь-1-FL СЛТ\/скрин/мониторПрозрачная бесцветная
жидкость 0.6 2 пробирки
ПЦР-смесь-2-FRT Прозрачная бесцветная
жидкость 0,3 2 пробирки
Полимераза (TaqF) Прозрачная бесцветная
жидкость 0,03 2 пробирки
РНК-буфер Прозрачная бесцветная
жидкость 0.6 1 пробирка
ДНК-калибраторы
KSG1 Прозрачная бесцветная
жидкость 0.2 1 пробирка
KSG2 Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 1 пробирка
РНК-буфер Прозрачная бесцветная
жидкость 1.2 1 пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 110 реакций амплификации, включая
контроли и калибраторы.
[При хранении раствора для лизиса при температуре от 2 до 8 °С возможно образование осадка в
иде кристаллов
1 0
--- стр. 11 ---
Ф О Р М А Т F R T
К комплекту реагентов прилагаются контрольные образцы этапа экстракции:
О К О
П К О ДНК СМ\/и ДНК человека
В К О STI-87
Прозрачная бесцветная
жидкость
Прозрачная бесцветная
жидкость_____________
Прозрачная бесцветная
жидкость
1,2
0 ,1
0,6
2 пробирки
2 пробирки
2 пробирки
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
- Экстракция ДНК из исследуемых образцов.
- Проведение амплификации с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в
режиме «реального времени».
- Анализ и интерпретация результатов.
Детальная информация по процедуре проведения ПЦР-исследования в
зависимости от используемого оборудования изложена в методических
рекоменда1:1иях по применению набора реагентов для выявления и количественного
определения ДНК цитомегаловируса человека {C M V ) в клиническом материале
методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией «АмплиСенс® СМ\/-скрин/монитор-Р1», разработанных ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии Роспотребнадзора.
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
Для экстракции ДНК используются наборы реагентов, рекомендованные ФБУН
ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, в соответствии с инструкц 1^ й к
используемому набору. Экстракция ДНК из каждого клинического образца
проводится в присутствии внутреннего контрольного образца - ВКО STI-87 (в каждый
образец добавляется 10 мкл ВКО STI-87). В пробирку отрицательного контроля (ОК)
экстракции внести 100 мкл ОКО. В пробирку положительного контроля (ПК)
экстракции внести 90 мкл ОКО и 10 мкл ПКО ДНК C M V и ДНК человека.
ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ»
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем пробы ДНК -
10 мкл.
А. Подготовка пробирок для амплификации
Выбор пробирок для амплификации зависит от используемого
амплификатора с системой детекции в режиме «реального времени».
11
--- стр. 12 ---
ФОРМАТ F R T
И
Д л я внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
1 . Предварительно необходимо подготовить смесь ПЦР-смеси-2-FRT и
полимеразы (TaqF). Содержимое одной пробирки с полимеразой (TaqF)
(30 мкл) необходимо полностью перенести в пробирку с ПЦР-смесью-2-FRT
(300 мкл) и аккуратно перемешать на вортексе, не допуская образования пены.
Промаркировать пробирку, указав дату приготовления смеси.
ВНИМАНИЕ! Приготовленная смесь рассчитана на исследование 60 образцов.
Смесь хранить при температуре от 2 до 8 °С в течение 3 мес и использовать по
мере необходимости.
В случае если данная смесь не может быть израсходована в течение трех
месяцев, необходимо готовить смесь на меньшее количество реакций,
например, смешать 150 мкл ПЦР-смеси-2-FRT и 15 мкл полимеразы (TaqF)
(полученная смесь рассчитана на 30 реакций).
2. Подготов 1Тгь реакционную смесь. Следует учитывать, что для тестирования
даже одного исследуемого образца ДНК в качественном формате
необходимо проводить постановку двух контрольных точек этапа
амплификации ПЦР: положительный (KSG2) и отрицательный контроль ПЦР
(РНК-буфер). А для тестирования даже одного исследуемого образца ДНК в
количественном формате необходимо проводить постановку пяти
контрольных точек этапа амплификации ПЦР: два калибратора (KSG1 и
KSG2) по два повтора и отрицательный контроль ПЦР (РНК-буфер). Кроме того,
необходимо брать реагенты с запасом; рассчитывать на одну реакцию больше.
т-
3. В отдельной пробирке смешать ПЦР-смесь-1-FL C M V скрин/монитор и заранее
подготовленную смесь ПЦР-смеси-2-FRT и полимеразы (TaqF). Расчет
производится исходя из того, что на каждую постановку ПЦР идет:
- 10 мкл ПЦР-смеси-1-FL СЛ7\/скрин/монтор,
- 5 мкл смеси ПЦР-смеси-2-FRT и полимеразы (TaqF).
Сделать расчет на необходимое число реакций, включающее тестирование
исследуемых и контрольных образцов, можно согласно расчетной таблице,
приведенной в Приложении 1.
ВНИМАНИЕ! При одновременном исследовании 60 образцов возможна упрощенная
схема приготовления смеси: все содержимое одной пробирки с ПЦР-смесью-2-FRT и
одной пробирки с полимеразой (TaqF) перенести в пробирку с ПЦР-смесью-1-FL CM V
скрин/монитор.
4. Отобрать необходимое количество пробирок для амплификации исследуемых и
1 2
--- стр. 13 ---
Ф О Р М А Т F R T
контрольных образцов ДНК. Тип пробирок выбрать в зависимости от используемого
прибора. Раскапать в пробирки по 15 мкл готовой реакционной смеси.
5. В пробирки с реакционной смесью добавить по 10 мкл исследуемой ДНК,
полученной в результате экстракции из клинических или контрольных образцов.
6. Для проведения качественного анализа:
а) отрицательный контроль ПЦР (К-) -внести в пробирку 10 мкл РНК-буфера;
б) положительный контроль ПЦР (К+) - внести в пробирку 10 мкл KSG2.
Для проведения количественного анализа:
а) отрицательный контроль ПЦР (К-) -внести в пробирку 10 мкл РНК-буфера;
б) калибраторы KSG1 и KSG2 - внести в две пробирки по 10 мкл калибратора
KSG1 и в две пробирки по 10 мкл калибратора KSG2.
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени»
1. Установить пробирки в реакционный модуль.
2. Запрограммировать прибор для выполнения соответствующей программы
амплификации и детекции флуоресцентного сигнала согласно описанию для
данного прибора (см. табл. 1а и 16). '
Таблица 1а
Программа амплификации «АмплиСенс-1» для приборов роторного типа^
Э т в п ''ш ш Кол-во .
циклов
Hold/ Удерж,
темп-ры 95 15 мин - 1
Cycling 1/
Циклирование
95 5с —
560 20 с —
72 15с —
Cycling 2/
1Д иклирование
95 5с —
4060 20 с
FAM/Green,
JOEA'ellow,
ROX/Orange
72 15с -
I Например, Rotor-Gene 3000 и Rotor-Gene 6000 (Corbett Research, Австралия) и рекомендованные
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора в методических рекомендациях по применению
и ного набора реагентов.
1 3
--- стр. 14 ---
Ф О Р М А Т F R T
Таблица 16
Программа амплификации «АмплиСенс-1» для приборов планшетного типа^
Т ем п ер атущ ^ ^ С j
’ Щ К (^ в о
Muiwoe
1 95 15 мин — 1
95 5с —
2 60 20 с — 5
72 15с —
95 5с —
3 60 30 с FAM, МЕХ/JOE,
ROX 40
72 15с —
3. По окончании выполнения программы приступить к анализу результатов.
АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Полученные данные - кривые накопления флуоресцентного сигнала по двум
каналам - анализируются с помощью программного обеспечения прибора,
используемого для проведения ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
в режиме «реального времени».
По каналу - FAM/Green регистрируется накопление продукта амплификации
участка ДНК р - гл о б и н о в о го г е н а (ВКО Glob), по каналу JOE/HEX/Yellow - ДНК
C M V (ПКО ДНК C M V и ДНК человека), по каналу ROX/Orange - накопление
продукта амплификации участка ДНК ВКО STI-87 (ВКО STI-87).
При экстракции тотальной ДНК из суспензии клеток (цельная кровь, лейкоциты
крови, биоптаты внутренних органов) учитываются результаты по двум каналам: по
каналу - FAM/Green - регистрируется накопление продукта амплификации участка
ДНК р - гл о б и н о во го г е н а (ВКО Glob), по каналу JOE/HEXA^ellow - ДНК С М Щ П К О
ДНК C M V v if\ m человека).
При экстракции ДНК из плазмы периферической крови, амниотической жидкости,
слюны, смывов и мазков из ротоглотки, спинномозговой жидкости (ликвора) мочи,
бронхоальвеолярного лаважа совместно с внутренним контрольным образцом
учитываются результаты по двум каналам: по каналу JOE/HEX/Yellow -ДНК C M V
(ПКО ДНК C M V и ДНК человека), по каналу ROX/Orange - накопление продукта
амплификации участка ДНК ВКО STI-87 (ВКО STI-87).
Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия)
пересечения кривой флуоресценции с установленной на заданном уровне пороговой
линией, что соответствует наличию (или отсутствию) значения порогового цикла Ct в
^Например, «ДТ-96» («ДНК-Технология», Россия), iCycler iQ5 (Bio-Rad, США), МхЗОООР (Stratagene,
США) и рекомендованные ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора в методических
рекомендациях по применению данного набора реагентов.
1 4
--- стр. 15 ---
Ф О Р М А Т F R T
i
соответствующей графе таблицы результатов (см. приложения к инструкции для
используемого прибора).
Результат амплификации по каналу считается положительным, если кривая
флуоресценции имеет типичный для ПЦР в «реальном времени» S-образный вид и
однократно пересекается с пороговой линией в области достоверного прироста
флуоресценции.
Результат амплификации по каналу считается отрицательным в случае отсутствия
кривой типичной формы и пересечения с пороговой линией (нет значения Cf).
При экстракции тотальной ДНК из суспензии клеток (цельная кровь,
лейкоциты КРОВИ. биоптаты внутренних органов^ результаты
интерпретируются следующим образом:
- ДНК C M V обнаружена, если для данной пробы в таблице результатов по
каналу для флуорофора JOE/HEX/Yellow определено значение порогового цикла Ct,
® не превышающее порогового цикла положительного результата (определение
порогового цикла положительного результата описано в методических
рекомендациях по применению набора реагентов для выявления и количественного
определения ДНК цитомегаловируса человека (C M V ) в клиническом материале
.S методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией «АмплиСенс® СМ\/-скрин/монитор-Р1»). При этом кривая флуоресценции
данной пробы должна пересекать пороговую линию на участке характерного
экспоненциального подъема флуоресценции.
- ДНК C M V не обнаружена, если для данной пробы в таблице результатов по
каналу для флуорофора JOE/HEX/Yellow не определено (отсутствует) значение
порогового цикла Ct (кривая флуоресценции не пересекает пороговую линию), а в
таблице результатов по каналу для флуорофора FAM/Green для качественного
теста значение порогового цикла Ct не превышает указанное во вкладыше, а для
количественного теста - количество ДНК ВКО Glob более 2000 копий/реакция.
- Результат анализа невалидный, если для данной пробы не определено
(отсутствует) значение порогового цикла Ct по каналу для флуорофора
JOE/HEX/Yellow, и по каналу для флуорофора FAM/Green для качественного теста
значение Ct более указанного во вкладыше, а для количественного теста -
количество ДНК ВКО Glob менее 2000 копий/реакция. В этом случае требуется
повторно провести ПЦР-исследование соответствующего клинического образца.
Для клинических образцов, в которых значения C t по каналу JOE/Yellow/HEX
превышают порог, указанный во вкладыше, результат считается сомнительным.
Необходимо провести дополнительное исследование данного образца ДНК в двух
15
--- стр. 16 ---
Ф О Р М А Т F R T
повторах. В случае получения воспроизводимого положительного значения Ct -
результат считать положительным. При получении невоспроизводимых в двух
повторах значений - результат считается сомнительным.
Для качественного теста в случае, если значение порогового цикла Ct по каналу
для флуорофора FAM/Green превышает указанное во вкладыше, отрицательный
результат считается недостоверным.
Для количественного теста в случае, если ДНК ВКО Glob менее
2000 копий/реакция количественный положительный или отрицательный результат
считается недостоверным.
Результаты ПЦР-исследования считаются достоверными если получены
правильные результаты для контрольных образцов ОК, ПК, К-, К+ (см. табл. 2). Для
количественного теста результаты по ПК должны укладываться в диапазон
концентраций, указанный во вкладыше к набору реагентов.
Таблица 2
Результаты для контролей ПЦР-исследования при экстракции тотальной
ДНК из суспензии клеток (цельная кровь, лейкоциты крови, биоптаты
внутренних органов)
Контролируемый
этап анализа
Результаты амплификации по каналу
F A N
Качественный
формат
/Green
Количественный
формат
JOE/HEXЛrellow
Качественный
формат
Количественный
формат
ОК Экстракция ДНК,
ПЦР
Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
ПК Экстракция ДНК,
ПЦР
Определено
значение
меньше
граничного
Определено
значение меньше
граничного
Определено
значение меньше
граничного
Значение
укладывается
в гршицы,
указаЖые во
вкладыше
i- ПЦР Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
ПЦР
Определено
значение
меньше
граничного
Определено
значение меньше
граничного
ПЦР
Определено
значение Ctи
расчетная
концентрация
Определено
значение С/ и
расчетная
концентрация
Для количественного теста расчет концентрации в логарифмах копий ДНК
CM V на стандартное количество клеток (10^) в контрольных и исследуемых
образцах (цельная кровь, лейкоциты крови, биоптаты внутренних органов)
провести по формуле:
1 6
--- стр. 17 ---
Ф О Р М А Т F R T
число _ копий _ Д Н К_ CM V _ в _ П Ц Р - пробе
'3^ число копий Д Н К Glob в ПЦР-пробе Ig {копий ДНК C /W W 1 0 ®
“ ------клеток}
Для выражения относительной концентрации ДНК C M V в копиях на стандартное
количество клеток (например, на 10®) используется коэффициент пересчета:
10^ клеток = 2^10^ геномов человека
При экстракции ДНК из плазмы периферической крови, амниотической
жидкости или спинномозговой жидкости (ликвора). мочи, слюны, смывов и
мазков из ротоглотки, бронхоальвеолярного лаважа совместно с внутренним
КОНТРОЛЬНЫМ образцом результаты интерпретируются следующим образом:
- ДНК C M V обнаружена, если для данной пробы в таблице результатов по
каналу для флуорофора JOE/HEX/Yellow определено значение порогового цикла Ct,
не превышающее порогового цикла положительного результата (определение
порогового цикла положительного результата описано в методических
рекомендациях по применению набора реагентов для выявления и количественного
определения ДНК цитомегаловируса человека {C M V ) в клиническом материале
методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией «АмплиСенс® СМ\/-скрин/монитор-Р1»). При этом кривая флуоресценции
данной пробы должна пересекать пороговую линию на участке характерного
экспоненциального подъема флуоресценции.
- ДНК C M V не обнаружена, если для данной пробы в таблице результатов по
каналу для флуорофора JOE/HEX/Yellow не определено (отсутствует) значение
порогового цикла C t (кривая флуоресценции не пересекает пороговую линию), а в
таблице результатов по каналу для флуорофора ROX/Orange значение порогового
цикла Ct не превышает указанное во вкладыше.
- Результат анализа невалидный, если для данной пробы не определено
(отсутствует) значение порогового цикла C t по каналу для флуорофора
JOE/HEX/Yellow, и по каналу для флуорофора ROX/Orange значение Ct также не
определено (отсутствует) или превышает значение, указанное во вкладыше. В этом
случае требуется повторно провести ПЦР-исследование соответствующего
клинического образца.
Для клинических образцов, в которых значения C t по каналу JOE/Yellow/HEX
превышают порог, указанный во вкладыше, результат считается сомнительным.
Необходимо провести дополнительное исследование данного образца ДНК в двух
повторах. В случае получения воспроизводимого положительного значения Ct -
результат считать положительным. При получении невоспроизводимых в двух
1 7
--- стр. 18 ---
Ф О Р М А Т F R T
повторах значений - результат считается сомнительным.
Результаты ПЦР-исследования считаются достоверными если получены
правильные результаты для контрольных образцов ОК, ПК, К-, К+ (см. табл. 3). Для
количественного теста результаты по ПК должны укладываться в диапазон
концентраций, указанный во вкладыше к набору реагентов.
Таблица 3
Результаты для контролей ПЦР-исследования при экстракции ДНК из плазмы
периферической крови, амниотической жидкости, спинномозговой жидкости
(ликвора), мочи, слюны, смывов и мазков из ротоглотки, бронхоальвеолярного
Контроль Контролируемый
этап анализа
Результаты амплификации по каналу
JO E/H EX /Y ellow R O X /O range
Качественный
формат
Количественный
формат
Качественный
формат
Количественный
формат
ОК Экстракция ДНК,
ПЦР
Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
Определено
значение меньше
граничного
Определено
значение меньше
граничного
ПК Экстракция ДНК,
^ ПЦР
Определено
значение
меньше
граничного
Значение
укладывается
в границы,
указанные во
вкладыше
Определено
значение меньше
граничного
Определено
значение меньше
граничного
к- ПЦР Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
Значение
отсутствует
г
Значение
отсутствует
к+ ПЦР
Определено
значение
меньше
граничного
-
Определено
значение меньше
граничного
-
KSG1,
KSG2 ПЦР -
Определено
значение Ctи
расчетная
концентрация
-
Определено
значение Ctи
расчетная
концентрация
Для количественного теста расчет концентрации ДНК C M V на мл o6pa^ta для
плазмы периферической крови, амниотической и спинномозговой жидкости
(ликвора), мочи, слюны, смывов и мазков из ротоглотки, бронхоальвеолярного
лаважа проводится по формуле:
КП ДНК C M V = [КДНК C M V l KSTI-87] х коэффициент ВКО (копий/мл)
К ДНК C M V - количество копий ДНК C M V в пробе ДНК;
KSTI-87 - количество копий ДНК STI-87 в пробе ДНК;
коэффициент ВКО - соответствует числу копий ВКО ДНК STI-87 в пробе ДНК и
указан во вкладыше к каждой серии наборов реагентов и специфичен для
каждого лота.
К каждому набору реагентов прилагается вкладыш, в котором указаны
концентрации ПКО
C M V и ДНК человека, ВКО STI-87 и ДНК-калибраторов,
1 8
--- стр. 19 ---
Ф О Р М А Т F R T
необходимые для расчета концентраций исследуемых проб и оценки достоверности
полученных результатов, а также значения порогового цикла Ct.
1 9
--- стр. 20 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 9 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не
подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности, указанному
на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до
8 °С не более 5 сут. При получении разукомплектовать в соответствии с указанными
температурами хранения.
Хранение. Комплект реагентов «РИБО-преп», «ПЦР-комплект» хранить при
температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь-1-FL C M V скрин/монитор, ПЦР-смесь-2-FRT и
полимеразу (TaqF) (из комплекта «ПЦР-комплект») хранить при температуре не
выше минус 16 °С . ПЦР-смесь-1-FL C M V скрин/монитор хранить в защищенном от
света месте.
Условия отпуска. Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических
учреждений.
Рекламации на качество набора реагентов «АмплиСенс® СМ^-скрин/монитор-
FL» направлять на предприятие-изготовитель ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора (111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, д. За) в отдел по работе с
рекламациями и организации обучения (тел. (495) 974-96-46, факс (495) 916-18-18, е-
mail: products@pcr.ru)®.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
Главный врач ФГБУ «Поликлиника № 1»
Управления делами Президента Российской
Е.Н. Родионова
Е.Л.Никонов
® Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amplisens.ru.
20
--- стр. 21 ---
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
СХЕМА ПРИГОТОВЛЕНИЯ РЕАКЦИОННЫХ СМЕСЕЙ
* - Приведены значения с учетом запаса (расчет на одну реакцию больше) и с учетом
необходимости постановки пяти контрольных точек (2 ДНК-калибратора KSG1, KSG2
(по два повтора) и отрицательный контроль РНК-буфер) для количественного
определения ДНК C M V и двух контрольных точек (положительного и отрицательного
контроля) для качественного определения ДНК CMV.
21
--- стр. 22 ---
си м во л ы , ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
R E F | Номер в каталоге А
LO TI Код партии
V
Осторожно!
Обратитесь к
сопроводительной
документации
Максимальное
число тестов
IVD Изделие для in vitro
диагностики Использовать до
V ER
Г
I
H i
Дата изменения
Ограничение
температуры
Верхнее ограничение
температуры
Производитель
( W f
Обратитесь к
руководству по
эксплуатации
Не допускать
попадания
солнечного света
Дата изготовления
22
--- стр. 23 ---
- I t
Пронумеровано, прошнуровано и скреплено
печатью _________листов
. ifj'" Зам. дй|>ектора ФБУН Ц Н ИИ Эпидемиологии
' Роспш^бц^адзора
/'Ч ----Малеев
* 1 i - У //
* ■ - ь - /Х '^
' .....■ ■
■ ^ E t c a = 2 s r 3 f f