Набор реагентов для выявления РНК вируса Западного Нила в биологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "АмплиСенс® WNV-FL" по ТУ 9398-162-01897593-2012 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от №
Директор Федерального
бюджетного учреждения науки
«Центральный научно-
исследовательский институт
эпадемирддгии» Федеральной
сЯужбь! " по'Надзору в сфере
/защиты,, ррав Потребителей и
I/благополучия человека
кровский
2012 г.
УТВ Е Р Ж Д А Ю
И Н С Т Р У К Ц И Я
п о п р и м е н е н и ю н а б о р а р е а г е н т о в
д л я в ы я в л е н и я Р Н К в и р у с а З а п а д н о г о Н и л а
в б и о л о г и ч е с к о м м а т е р и а л е м е т о д о м п о л и м е р а з н о й ц еп н о й
р еа к ц и и (П Ц Р ) с г и б р и д и з а ц и о н н о - ф л у о р е с ц е н т н о й д е т е к ц и е й
« А м п л и С е н с ® W N V - F L v >
А м п л и С е н с®
ш1
Ф е д е р а л ь н о е б ю д ж ет н о е у чр еж д ен и е науки
« Ц ен тр а л ь н ы й н ау ч н о -и ссл ед о вател ьск и й
институт эп и д ем и о л оги и » ,
Р о сси й ск ая Ф е д е р а ц и я , 111123,
город М осква, у л и ц а Н о вогиреевская, д о м За
IVD
--- стр. 2 ---
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.......................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ..........................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА............................................................................................................... 3
ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ................................................ 4
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.............................................................................. 5
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ...........................................................................................6
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ................................................ 7
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.... 9
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ РНК........................... 9
ФОРМАТ FRT.........................................................................................................................12
СОСТАВ............................................................................................................................ 12
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ....................................................................... 14
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ............................................... 15
ПРОВЕДЕНИЕ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ РНК И АМПЛИФИКАЦИИ кДН К С
ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»............................................... 15
А . Подготовка пробирок для амплификации..........................................................15
Б. Проведение обратной транскрипции РНК и амплификации кДНК с детекцией
в режиме «реального времени»...............................................................................16
АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ............................................................... 17
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ.....................20
ПРИЛОЖЕНИЕ 1. Экстракция РНК из плазмы и сыворотки крови, СМЖ,
лейкоцитарной фракции крови, мочи (без осадка солей), гомогенатов тканей
внутренних органов и комаров с применением комплекта реагентов «РИБО-преп». 21
ПРИЛОЖЕНИЕ 2. Экстракция РНК из лейкоцитарной фракции крови, осадков мочи,
суспензий тканей внутренних органов, комаров и клещей с применением комплектов
реагентов «РИБО-золь-С» и «РИБО-преп»...................................................................... 23
ПРИЛОЖЕНИЕ 3. Экстракция РНК из лейкоцитарной фракции крови, осадков мочи,
суспензий тканей внутренних органов, комаров и клещей с применением комплектов
реагентов «РИБО-золь-С» и «РИБО-сорб»......................................................................25
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ.........................................28
ОГЛАВЛЕНИЕ
--- стр. 3 ---
с п и с о к СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:
В КО - внутренний контрольный образец
К- - отрицательный контроль ПЦР
К+ - положительный контроль ПЦР
кД Н К - комплементарная ДНК, получаемая в реакции обратной
транскрипции на матрице РНК
Н К - нуклеиновые кислоты (РНК/ДНК)
ОКО - отрицательный контрольный образец
ОК - отрицательный контрольный образец экстракции РНК
П К -положительный контроль экстракции РНК
П К О - положительный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
СМЖ - спинномозговая жидкость
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
WNV - West Nile virus, вирус Западного Нила
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиСенс® WNV-FL» предназначен для выявления РНК
вируса Западного Нила {WNV) в клиническом (плазма и сыворотка крови,
лейкоцитарная фракция крови, спинномозговая жидкость, моча) и аутопсийном
материале от людей (ткани мозга, печени, селезенки, лимфоузлов), материале от
животных (ткани мозга), в комарах и клещах методом ПЦР с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией.
ВНИМАНИЕ! Результаты ПЦР-исследования учитываются в комплексной
диагностике заболевания^
ПРИНЦИП МЕТОДА
Выявление WNV методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией включает в себя следующие этапы:
экстракцию РНК из образцов клинического материала, проведение обратной
транскрипции РНК и амплификацию участка кДНК WNV с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией, которая производится непосредственно в ходе ПЦР.
Экстракция РНК из клинического материала проводится в присутствии внутреннего
контрольного образца (ВКО STI-87-гес), который позволяет контролировать
выполнение процедуры исследования для каждого образца. Затем с полученными
пробами проводятся; обратная транскрипции РНК с помощью фермента ТМ -
’ В соответствии с Директивой Европейского Союза 98/79/ЕС.
--- стр. 4 ---
Р е в е р т а з ы и а м п л и ф и к а ц и я у ч а с т к о в к Д Н К W N V п р и п о м о щ и с п е ц и ф и ч н ы х к э т о м у
у ч а с т к у к Д Н К п р а й м е р о в и ф е р м е н т а Т а р - п о л и м е р а з ы . В с о с т а в е р е а к ц и о н н о й с м е с и
п р и с у т с т в у е т ф л у о р е с ц е н т н о - м е ч е н ы й о л и г о н у к л е о т и д н ы й з о н д , к о т о р ы й
г и б р и д и з у е т с я с к о м п л е м е н т а р н ы м у ч а с т к о м а м п л и ф и ц и р у е м о й к Д Н К - м и ш е н и , в
р е з у л ь т а т е ч е г о п р о и с х о д и т н а р а с т а н и е и н т е н с и в н о с т и ф л у о р е с ц е н ц и и . Э т о
п о з в о л я е т р е г и с т р и р о в а т ь н а к о п л е н и е с п е ц и ф и ч е с к и х п р о д у к т о в а м п л и ф и к а ц и и
п у т е м и з м е р е н и я и н т е н с и в н о с т и ф л у о р е с ц е н т н ы х с и г н а л о в . Д е т е к ц и я
ф л у о р е с ц е н т н ы х с и г н а л о в п р и и с п о л ь з о в а н и и ф о р м а т а F R T п р о и с х о д и т
н е п о с р е д с т в е н н о в х о д е П Ц Р с п о м о щ ь ю а м п л и ф и к а т о р а с с и с т е м о й д е т е к ц и и
ф л у о р е с ц е н т н о г о с и г н а л а в р е ж и м е « р е а л ь н о г о в р е м е н и » .
Ф О Р М А Т Ы И Ф О Р М Ы В Ы П У С К А Н А Б О Р А Р Е А Г Е Н Т О В
Н а б о р р е а г е н т о в в ы п у с к а е т с я в 1 ф о р м а т е .
Ф о р м а т F R T
Н а б о р р е а г е н т о в в ы п у с к а е т с я в 6 ф о р м а х к о м п л е к т а ц и и :
Ф о р м а 1 в к л ю ч а е т к о м п л е к т р е а г е н т о в « П Ц Р - к о м п л е к т » в а р и а н т F R T .
Ф о р м а 2 в к л ю ч а е т к о м п л е к т ы р е а г е н т о в « Р И Б О - п р е п » в а р и а н т 5 0 , « П Ц Р - к о м п л е к т »
в а р и а н т F R T .
Ф о р м а 3 в к л ю ч а е т к о м п л е к т ы р е а г е н т о в д л я к о м б и н и р о в а н н о г о м е т о д а э к с т р а к ц и и
Р Н К : « Р И Б О - п р е п » в а р и а н т 5 0 , « Р И Б О - з о л ь - С » в а р и а н т 5 0 , « П Ц Р - к о м п л е к т »
в а р и а н т F R T .
Ф о р м а 4 в к л ю ч а е т к о м п л е к т ы р е а г е н т о в д л я к о м б и н и р о в а н н о г о м е т о д а э к с т р а к ц и и
Р Н К : « Р И Б О - с о р б » в а р и а н т 5 0 , « Р И Б О - з о л ь - С » в а р и а н т 5 0 , « П Ц Р - к о м п л е к т »
в а р и а н т F R T .
Ф о р м а 5 в к л ю ч а е т 1 к о м п л е к т р е а г е н т о в « М А Г Н О - с о р б » в а р и а н т 1 0 0 - 1 0 0 0 ,
2 к о м п л е к т а р е а г е н т о в « П Ц Р - к о м п л е к т » в а р и а н т F R T .
Ф о р м а 6 в к л ю ч а е т н а б о р ы р е а г е н т о в о п т о м , р а с ф а с о в а н н ы е п о о т д е л ь н ы м
р е а г е н т а м , с м а р к и р о в к о й р е а г е н т о в н а и х о п т о в о й ф а с о в к е .
Ф о р м а к о м п л е к т а ц и и 1 п р е д н а з н а ч е н а д л я п р о в е д е н и я о б р а т н о й т р а н с к р и п ц и и
Р Н К и а м п л и ф и к а ц и и к Д Н К с г и б р и д и з а ц и о н н о - ф л у о р е с ц е н т н о й д е т е к ц и е й в р е ж и м е
« р е а л ь н о г о в р е м е н и » . Д л я п р о в е д е н и я п о л н о г о П Ц Р - и с с л е д о в а н и я н е о б х о д и м о
д о п о л н и т е л ь н о и с п о л ь з о в а т ь к о м п л е к т ы р е а г е н т о в д л я э к с т р а к ц и и Р Н К ,
р е к о м е н д о в а н н ы е Ф Б У Н Ц Н И И Э п и д е м и о л о г и и Р о с п о т р е б н а д з о р а в з а в и с и м о с т и о т
в и д а и с с л е д у е м о г о м а т е р и а л а .
--- стр. 5 ---
Ф о р м ы к о м п л е к т а ц и и 2 , 3 , 4 , 5 п р е д н а з н а ч е н ы д л я п р о в е д е н и я п о л н о г о П Ц Р -
и с с л е д о в а н и я , в к л ю ч а я э к с т р а к ц и ю Р Н К из к л и н и ч е с к о г о м а т е р и а л а , п р о в е д е н и е
о б р а т н о й т р а н с к р и п ц и и Р Н К и а м п л и ф и к а ц и ю к Д Н К с г и б р и д и з а ц и о н н о -
ф л у о р е с ц е н т н о й д е т е к ц и е й в р е ж и м е « р е а л ь н о г о в р е м е н и » .
Ф о р м а к о м п л е к т а ц и и 6 п р е д н а з н а ч е н а д л я п р о и з в о д с т в е н н ы х ц е л е й д л я
п о с л е д у ю щ е й м а р к и р о в к и н а я з ы к е з а к а з ч и к а и к о м п л е к т а ц и и п о н а б о р а м .
ВНИМАНИЕ! Ф о р м а к о м п л е к т а ц и и 6 и с п о л ь з у е т с я т о л ь к о в с о о т в е т с т в и и с
р е г л а м е н т о м , у т в е р ж д е н н ы м Ф Б У Н Ц Н И И Э п и д е м и о л о г и и Р о с п о т р е б н а д з о р а .
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Аналитическая чувствительность
Вид
А биологического
материала (объем
исследуемой
_____пробы)_____
Комплект для
экстракции
РНК/ДНК
Комплект для
амплифика
ции и детек
ции
Аналити
ческая чув
ствитель
ность,
копий/мл
Пробоподготовка
материала
сы воротка крови
(200 мкл), С М Ж
(2 0 0 мкл), л е й к о ц и
т а р н а я ф р а к ц и я
крови (2 0 0 мкл),
1 0 % сусп ен зи я
тканей м озга
(30 мкл), ком ары
(1 0 0 мкл)___________
«РИБО-преп»
« П Ц Р -
ком пл е кт»
в а р и а н т F R T
5x10=*
л е й к о ц и т а р н а я
ф р а к ц и я крови
(200 мкл), 1 0 %
сусп ензия тк а н е й
мозга (30 мкл),
комары ( 1 0 0 мкп)
«РИБО-преп» и
«РИБО-золь-С»
« П Ц Р -
к ом пл ект»
в а р и а н т F R T
5 x 1 0 '
л е й к о ц и та р н а я
ф р а к ц и я крови
(2 0 0 мкл), 1 0 %
сусп ензия тк а н е й
м озга (30 мкл),
ком ары ( 1 0 0 мкл)
«РИБО-сорб» и
«РИБО-золь-С»
« П Ц Р -
к ом пл ект»
в а р и а н т F R T
Д а н н а я ч у в с т в и
те л ь н о с т ь д о с ти
га е т с я при с о б л ю
д е н и и ниж еизл о
ж ен ны х п р а в и л
п р о б о п о д го то в к и
б и о м а т е р и а л а и
р е к о м е н д уе м о м
и с с л е д у е м о м
о б ъ е м е п робы
5 x 1 0 ^
С ы в о р о тк а и п л а з м а
крови, С М Ж - 1 мл «МАГНО-сорб»
« П Ц Р -
к о м п л е к т »
в а р и а н т F R T
5 x 1 0^
Аналитическая специфичность
А н а л и т и ч е с к а я с п е ц и ф и ч н о с т ь и з у ч е н а н а ;
- ф л а в и в и р у с а х ( в и р у с к л е щ е в о г о э н ц е ф а л и т а , Л а н г а т , П о в а с с а н , Я п о н с к о г о
э н ц е ф а л и т а . О м с к о й г е м о р р а г и ч е с к о й л и х о р а д к и ) ;
- г е р п е с в и р у с а х (I и И т и п о в ,
CM V , E B V , VZV, I V т и п а ) , э н т е р о в и р у с а х {ECHO,
Coxsackie);
--- стр. 6 ---
- р и к к е т с и я х г р у п п ы п я т н и с т ы х л и х о р а д о к {Rickettsia conorii s s p . caspia,
R.heilongiangensis] C oxiella burnetii] Bartonella henselae, B.quintana)]
- с п и р о х е т а х {Borrelia miyamotoi] Treponem a pallidum] Leptospira interrogans,
L . kirshneri, L. borgpetersenii).
П р и р а б о т е с Р Н К / Д Н К в ы ш е п е р е ч и с л е н н ы х о р г а н и з м о в . Д Н К ч е л о в е к а , Д Н К
п т и ц , Д Н К к л е щ е й и к о м а р о в , Д Н К г р ы з у н о в н е в ы я в л е н о л о ж н о п о л о ж и т е л ь н ы х
р е з у л ь т а т о в .
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Р а б о т а д о л ж н а п р о в о д и т ь с я в л а б о р а т о р и и , в ы п о л н я ю щ е й м о л е к у л я р н о
б и о л о г и ч е с к и е ( П Ц Р ) и с с л е д о в а н и я к л и н и ч е с к о г о м а т е р и а л а н а н а л и ч и е
в о з б у д и т е л е й и н ф е к ц и о н н ы х б о л е з н е й , с с о б л ю д е н и е м с а н и т а р н о - э п и д е м и ч е с к и х
п р а в и л С П 1 . 3 . 2 3 2 2 - 0 8 « Б е з о п а с н о с т ь р а б о т ы с м и к р о о р г а н и з м а м и I I I - I V г р у п п
п а т о г е н н о с т и ( о п а с н о с т и ) и в о з б у д и т е л я м и п а р а з и т а р н ы х б о л е з н е й » ,
С а н П и Н 2 . 1 . 7 . 2 7 9 0 - 1 0 « С а н и т а р н о - э п и д е м и о л о г и ч е с к и е т р е б о в а н и я к о б р а щ е н и ю с
м е д и ц и н с к и м и о т х о д а м и » и м е т о д и ч е с к и х у к а з а н и й М У 1 . 3 . 2 5 6 9 - 0 9 « О р г а н и з а ц и я
р а б о т ы л а б о р а т о р и й , и с п о л ь з у ю щ и х м е т о д ы а м п л и ф и к а ц и и н у к л е и н о в ы х к и с л о т п р и
р а б о т е с м а т е р и а л о м , с о д е р ж а щ и м м и к р о о р г а н и з м ы I - I V г р у п п п а т о г е н н о с т и » .
П р и р а б о т е в с е г д а с л е д у е т в ы п о л н я т ь с л е д у ю щ и е т р е б о в а н и я :
- С л е д у е т р а с с м а т р и в а т ь и с с л е д у е м ы е о б р а з ц ы к а к и н ф е к ц и о н н о - о п а с н ы е ,
о р г а н и з о в ы в а т ь р а б о т у и х р а н е н и е в с о о т в е т с т в и и с С П 1 . 3 . 2 3 2 2 - 0 8
« Б е з о п а с н о с т ь р а б о т ы с м и к р о о р г а н и з м а м и I I I - I V г р у п п п а т о г е н н о с т и
( о п а с н о с т и ) и в о з б у д и т е л я м и п а р а з и т а р н ы х б о л е з н е й » .
ВНИМАНИЕ! П р и р а б о т е с к л е щ о м с в ы с о к о й с т е п е н ь ю н а п и т а н н о с т и р е к о м е н д у е т с я
п е р е д г о м о г е н и з а ц и е й п р о к о л о т ь е г о о д н о р а з о в о й и г л о й д л я в ы х о д а к р о в и и
п р е д у п р е ж д е н и я р а з б р ы з г и в а н и я м а т е р и а л а п р и р а с т и р а н и и в с т у п к е .
- У б и р а т ь и д е з и н ф и ц и р о в а т ь р а з л и т ы е о б р а з ц ы и л и р е а к т и в ы , и с п о л ь з у я
д е з и н ф и ц и р у ю щ и е с р е д с т в а в с о о т в е т с т в и и с С П 1 . 3 . 2 3 2 2 - 0 8 « Б е з о п а с н о с т ь
р а б о т ы с м и к р о о р г а н и з м а м и I I I - I V г р у п п п а т о г е н н о с т и ( о п а с н о с т и ) и
в о з б у д и т е л я м и п а р а з и т а р н ы х б о л е з н е й » .
- Л а б о р а т о р н ы й п р о ц е с с д о л ж е н б ы т ь о д н о н а п р а в л е н н ы м . А н а л и з п р о в о д и т с я в
о т д е л ь н ы х п о м е щ е н и я х ( з о н а х ) . Р а б о т у с л е д у е т н а ч и н а т ь в З о н е В ы д е л е н и я ,
п р о д о л ж а т ь в З о н е А м п л и ф и к а ц и и и Д е т е к ц и и . Н е в о з в р а щ а т ь о б р а з ц ы ,
о б о р у д о в а н и е и р е а к т и в ы в з о н у , в к о т о р о й б ы л а п р о в е д е н а п р е д ы д у щ а я с т а д и я
п р о ц е с с а .
- У д а л я т ь н е и с п о л ь з о в а н н ы е р е а к т и в ы в с о о т в е т с т в и и с С а н П и Н 2 . 1 . 7 . 2 7 9 0 - 1 0
6