Набор реагентов для выявления ДНК вирусов папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска (ВКР) 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 58, 59, 67 типов в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "АмплиСенс® ВПЧ ВКР скрин-FL" по ТУ 9398-051-01897593-2008 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- Директор Ф едерального бюджетного учреждения науки «Центральны й научно- исследовательский институт эпидемиологии» Ф едеральной^Э ^^^Ш }"^^ надзору в сф ере , и благополучия «УТВЕРЖДАЮ» защиты п р ^ ^ ^ '* человека В.Г. Акимкин 2018 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для выявления ДНК вирусов папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска (ВКР) 16, 18, 31,33, 35, 39, 45, 52, 58, 59, 67 типов в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно- флуоресцентной детекцией «АмплиСенс® ВПЧ ВКР скрин-FL» АмплиСенс ® ш 1 ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Российская Федерация, 111123, город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА IVD --- стр. 2 --- ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ Форма 1 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100, «ПЦР- комплект» вариант скрин-FEP 2х. Форма 2 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100, «ПЦР- комплект» вариант скрин-FEP Зх. Форма 3 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант скрин-FEP 2х. Форма 4 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант скрин-FEP Зх. ВНИМАНИЕ! Заявленные аналитические характеристики набора реагентов при работе с формами 3 и 4 гарантируются только в случае применения дополнительного комплекта реагентов «ДНК-сорб-АМ» (ТУ 9398-036-01897593-20Q9) производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. При работе с формами 2 и 4 для детекции используется трёхканальный флуоресцентный ПЦР-детектор. СОСТАВ Комплект реагентов «ДНК-сорб-АМ» вариант 100 — комплект реагентов для выделения ДНК из клинического материала включает: Реактив Описание Объем (мл) Кол-во Лизирующий раствор Прозрачная жидкость от бесцветного до жёлтого или розового цвета ^ 30 1 флакон Отмывочный раствор Прозрачная бесцветная жидкость 100 1 флакон Сорбент универсальный Суспензия от белого до темно бежевого цвета 1,0 2 пробирки ТЕ-буфер для элюции ДНК Прозрачная бесцветная жидкость 5,0 2 пробирки Комплект реагентов рассчитан на выделение дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) из 100 проб, включая контроли. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант скрин-FEP 2х - комплект реагентов для ПЦР-амплификации ДНК вирусов папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска (ВКР) 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 58, 59, 67 типов с отдельным определением ВПЧ 16 типа с гибридизационно-флуоресцентной детекцией по «конечной точке» включает: ^ При хранении лизирующего раствора при температуре от 2 до 8 °С возможно образование осадка в виде кристаллов. стр. 2 из 27 --- стр. 3 --- Реактив Описание Объем (мл) Кол-во ПЦР-смесь-1-FEP ВПЧ-1 (на 30 реакций) Прозрачная жидкость от бесцветного до светло- лилового цвета 0,21 4 пробирки синяя крышка ПЦР-смесь-1-FEP ВПЧ-2 (на 30 реакций) Прозрачная жидкость от бесцветного до светло- лилового цвета 0,21 4 пробирки зеленая крышка ПЦР-буфер-Flu (на 56 реакций) Прозрачная бесцветная жидкость 0,42 4 пробирки Полимераза (TaqF) (на 56 реакций) Прозрачная бесцветная жидкость 0,028 4 пробирки ПЦР-смесь-Фон ВПЧ Прозрачная бесцветная жидкость 0,8 1 пробирка Минеральное масло для ПЦР Бесцветная вязкая жидкость 4,0 1 пробирка ПКО ДНК ВПЧ 16, 31, 33 типов и ДНК человека Прозрачная бесцветная жидкость 0.2 2 пробирки ТЕ-буфер Прозрачная бесцветная жидкость 5,0 5 пробирок контроли и фоновые образцы. Дополнительно к комплекту реагентов прилагается отрицательный контрольный образец (ОКО) этапа выделения; Реактив Описание Объем (мл) Кол-во ОКО Прозрачная бесцветная жидкость 1.2 1 пробирка официальном сайте изготовителя: - программное обеспечение в формате Microsoft® Excel для автоматической обработки результатов. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант скрин-FEP Зх - комплект реагентов для ПЦР-амплификации ДНК вирусов папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска (ВКР) 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 58, 59, 67 типов с гибридизационно-флуоресцентной детекцией по «конечной точке» включает: Реактив Описание Объем (мл) Кол-во ПЦР-смесь-1-FEP ВПЧ Зх (на 30 реакций) Прозрачная жидкость от бесцветного до светло- лилового цвета 0,21 4 пробирки ПЦР-буфер-Flu (на 56 реакций) Прозрачная бесцветная жидкость 0,42 2 пробирки Полимераза (TaqF) (на 56 реакций) Прозрачная бесцветная жидкость 0,028 2 пробирки ПЦР-смесь-Фон ВПЧ Прозрачная бесцветная жидкость 0,8 1 пробирка стр. 3 из 27 --- стр. 12 --- i t 4. Вортекс (например, «ТЭТА-2», «Биоком», Россия). 5. Набор электронных или механических дозаторов переменного объема (например, «Ленпипет», Россия). 6. Одноразовые полипропиленовые микропробирки объемом 0,2 (0,5) мл (например «Ахудеп», США). 7. Одноразовые наконечники для дозаторов до 200 мкл (например, «Ахудеп», США). 8. Одноразовые наконечники с аэрозольным барьером до 200 мкл (например, «Ахудеп», США). 9. Штативы для наконечников (например, «Ахудеп», США) и микропробирок на 0,2 (0,5) мл (например, «ИнтерЛабСервис», Россия). 10. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой не выше минус 16 °С. 11 .Отдельный халат и одноразовые перчатки. 12.Емкость с дезинфицирующим раствором. ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-АНАЛИЗА ЭТАП 1. ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ ПРОБ (проводится в ЗОНЕ 1 - помещении для обработки исследуемого материала). Объем пробы, необходимый для выделения ДНК, - 0,1 мл. Порядок работы 1. Лизирующий раствор (если он хранился при температуре от 2 до 8 °С) прогреть, перемешивая при температуре 65 °С до полного растворения кристаллов. 2. Добавление реагентов. Способ 1: - отобрать необходимое количество одноразовых пробирок 1,5 мл (включая отрицательный контроль выделения). - ресуспендировать сорбент универсальный до гомогенной консистенции, внести в каждую пробирку по 20 мкл сорбента универсального и по 300 мкл лизирующего раствора, используя наконечники с аэрозольным барьером. Промаркировать пробирки. Способ 2: - перед началом работы во флакон с лизирующим раствором добавить весь объем (2 мл на 30 мл лизирующего раствора) предварительно гомогенизированного сорбента универсального и перемешать. Допускается хранение полученной смеси в течение 2 сут при комнатной температуре. Перед применением тщательно перемешать. - отобрать необходимое количество одноразовых пробирок 1,5 мл (включая стр. 12 из 27 --- стр. 13 --- отрицательный контроль выделения) и, используя наконечник с аэрозольным барьером, внести в каждую пробирку по 320 мкл подготовленной смеси лизирующего раствора и сорбента универсального. Промаркировать пробирки. 3. В пробирки согласно маркировке внести по 100 мкл пробы, используя для каждой пробы отдельный наконечник с аэрозольным барьером. В пробирку отрицательного контроля (ОК) выделения внести 100 мкл ОКО, используя наконечник с аэрозольным барьером. 4. Содержимое пробирок тщательно перемешать на вортексе и инкубировать 5 мин при температуре 65 °С в термостате. После окончания инкубации перемешать на вортексе и поставить в штатив на 2 мин. 5. Осадить сорбент универсальный в пробирках центрифугированием при 10 тый об/мин в течение 30 с. Не захватывая сорбент универсальный, удалить надосадочную жидкость в колбу-ловушку с помощью вакуумного отсасывателя, используя для каждой пробы отдельный наконечник без аэрозольного барьера. 6. Добавить в пробы по 1 мл отмывочного раствора, перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента универсального. 7. Повторить п. 5. 8. Поместить пробирки в термостат с температурой 65 °С на 5-10 мин для подсушивания сорбента универсального. При этом крышки пробирок должны быть открыты. 9. В пробирки добавить по 100 мкл ТЕ-буфера для элюции ДНК. Перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента универсального. Поместить в термостат с температурой 65 °С на 5 мин. 10. Перемешать на вортексе. Центрифугировать пробирки при 12 тыс об/мин в течение 1 мин на микроцентрифуге. Надосадочная жидкость содержит очищенную ДНК (ДНК-проба). Указанный материал готов к постановке ПЦР. ДНК-пробы можно хранить в течение 1 нед при температуре от 2 до 8 °С и в течение года при температуре не выше минус 16 °С. Пробирки с ДНК-пробами переносят в зону ПЦР-амплификации. ЭТАП_Z, ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-АМПЛИФИКАЦИИ И ДЕТЕКЦИИ ПРОДУКТОВ АМПЛИФИКАЦИИ (проводится в ЗОНЕ 2 — помещении для проведения ПЦР-амплификации) Общий объем реакции - 25 мкл, объем ДНК-пробы - 10 мкл. В комплекте реагентов применяется «горячий старт», который обеспечивается стр. 13 из 27 --- стр. 14 --- т f использованием химически модифицированной Taq-полимеразы, которая активируется при прогреве реакционной смеси при 95 °С в течение 15 мин. Проведение амплификации с использованием «ПЦР-комплекта» вариант скрин-FEP 2х В комплекте реагентов используются две смеси праймеров и зондов: - ПЦР-смесь-1-FEP ВПЧ-1 - для амплификации и детекции ДНК ВПЧ 16, 31, 35, 39 и 59 генотипов. Детекция 31, 35, 39 и 59 генотипов осуществляется по каналу FAM (канал «Специфика» в детекторе «Джин» или канал 1 в детекторе «АЛА-1/4»), детекция 16 генотипа осуществляется отдельно по каналу HEX/JOE (канал «ВК» в детекторе «Джин» или канал 2 в детекторе «АЛА-1/4»). (Данная смесь не содержит внутреннего контроля). - ПЦР-смесь-1-FEP ВПЧ-2 - для амплификации и детекции ДНК ВПЧ 18, 33, 45, 52, 58 и 67 генотипов, а так же участка Ь-глобинового гена человека (эндогенный внутренний контроль). Детекция 18, 33, 45, 52, 58 и 67 генотипов осуществляется по каналу FAM (Канал «Специфика» в детекторе «Джин» или канал 1 в детекторе «АЛА-1/4»), детекция сигнала внутреннего контроля осуществляется отдельно по каналу HEX/JOE (канал «ВК» в детекторе «Джин» или канал 2 в детекторе «АЛА- 1/4»). Для проведения анализа осуществляется амплификация ДНК с ПЦР-смесями-1-FEP ВПЧ-1 и ВПЧ-2. Результат считается положительным, если положительный сигнал регистрируется хотя бы с одной из ПЦР-смесей-1-FEP. А. Подготовка пробирок для проведения ПЦР 1. Предварительно необходимо подготовить смесь ПЦР-буфера-Flu и полимеразы (TaqF). Содержимое одной пробирки с полимеразой (TaqF) (28 мкл) необходимо полностью перенести в пробирку с ПЦР-буфером-Flu (420 мкл) и аккуратно перемешать на вортексе, не допуская образования пены. Промаркировать пробирку, указав дату приготовления смеси. ВНИМАНИЕ! Приготовленная смесь рассчитана на проведение 56 реакций. Смесь хранить при температуре от 2 до 8 °С в течение 3 мес и использовать по мере необходимости. 2. Подготовить реакционные смеси (см. табл. 1). При расчете следует учитывать, что постановка сопровождается двумя контрольными точками для каждой смеси (отрицательным и положительным контролями). Кроме того, необходимо брать реагенты с запасом: рассчитывать на одну реакцию больше. 3. Расчет производится исходя из того, что на каждую постановку ПЦР идет: - 7 мкл ПЦР-смеси-1-FEP ВПЧ-1 или ПЦР-смеси-1-FEP ВПЧ-2; стр. 14 из 27 --- стр. 16 --- Аналогично готовить пробирки «Фон» для ПЦР-смеси-1-FEP ВПЧ-2. ВНИМАНИЕ! После проведения амплификации образцы «Фон» можно хранить в течение 1 мес при температуре от 2 до 20 °С и использовать многократно. Многократное использование пробирок «Фон» допускается при условии их использования с набором реагентов той же серии, того же типа выделительных реагентов и того же типа ПЦР-пробирок. Б. Проведение ПЦР-амплификации: 1. В готовые пары пробирок внести по 10 мкл ДНК-проб, выделенных из исследуемых или контрольных проб этапа выделения ДНК. 2. Поставить контрольные реакции амплификации; а) отрицательный контроль (К-) - вместо ДНК-пробы внести в пару пробирок qo 10 мкл ТЕ-буфера. б) положительный контроль (К+) - внести в пару пробирок по 10 мкл ПКО ДНК ВПЧ 16, 31, 33 типов и ДНК человека. 3. Запустить на амплификаторе программу (см. табл. 2). Когда температура в ячейках достигнет 95 “С (режим паузы) поставить пробирки в ячейки амплификатора и нажать кнопку продолжения программы. Рекомендуется перед постановкой в амплификатор осадить капли со стенок пробирок кратким центрифугированием на вортексе (2-3 с). Таблица 2 Амплификаторы с активным регулированием (по раствору в пробирке); Другие приборы«Tepi Тех дик» («J нологи цнк- я») «GeneAmp PCR System 2700» («Applied Biosystems») «Gradient Palm Cycler» («Corbett Research») цикл темпе ратура время циклы темпе ратура время циклы темпе ратура время циклы темпе ратура время циклы 1 95 °С 15 мин 1 95 °C 15 мин 1 95 X 15 мин 1 95 X 15 мин 193 °С 5с 95 °C Ю с 93 X 5с 95 X 25 с2 59 “С 5с 20 59 °C 20 c 50 59 X Ю с 50 59 X 25 с 5072 °С 5с 72 °C Ю с 72 X 5с 72 X ^25 с 3 93 °С 2с 30 72 °C 1 мин 1 72 X 1 мин 1 72 X 1 мин 159 °С Ю с 95 X 20 с 1 95 X 20 с 1 95 X 20 с 1 4 10 °С хранение 10 X хранение 10 X хранен ие 10 X хранен 1ие помощью прибора «АЛА-1/4» или «Джин». В 1.Детекция результатов с помощью прибора «Джин» Детекция результатов может быть проведена в течение 1 нед после проведения стр. 16 из 27 --- стр. 17 --- амплификации при хранении образцов при температуре от 2 до 20 °С. Работа с флуоресцентным ПЦР-детектором «Джин» проводится согласно «Паспорту ПЦР-детектора флуоресцентного «Джин». Для проведения детекции и учета результатов необходимо в программе «Gene» создать 2 новых теста: «HPV-1» и «HPV-2». Параметры новых тестов (см. табл. 3); Таблица 3 Тест «-» «+» ВК «HPV-1» 1,75 2.1 2,1 «HPV-2» 1,75 2.1 2,5 программы. При выходе из программы необходимо сохранить изменения. 1. Включить прибор и запустить программу «Gene» на компьютере, присоединенном к прибору. 2. Задать протокол измерения. Ввести количество измеряемых образцов (включая две фоновые пробирки), выбрать вид теста «HPV-1» в списке тестов в графе «Тест». В следующей строке вновь задать количество образцов (включая 2 фоновые пробирки), выбрать вид теста «HPV-2», нажать «ОК». 3. Ввести последовательность детектируемых образцов (в колонке «Образец»), анализируемых на ПЦР-смеси-1-FEP ВПЧ-1. Далее переключиться с теста «HPV- 1» на «HPV-2» (в левом верхнем углу программы в выпадающем списке выбрать «HPV-2») и аналогично ввести последовательность образцов, анализируемых по смеси на ПЦР-смеси-1-FEP ВПЧ-2. 4. В качестве образцов, обозначенных «ФОН1» использовать образцы «Фон» соответствующей смеси. После проведения амплификации образцы «Фон» можно хранить в течение 1 мес при температуре от 2 до 20 ®С и использовать многократно. Многократное использование пробирок «Фон» допускается при условии их использования с набором реагентов той же серии, того же типа выделительных реагентов и того же типа ПЦР-пробирок. 5. Поставить пробирки в ячейки модуля прибора «Джин» в соответствии с заданной последовательностью (группами по 12 образцов). Сначала в прибор устанавливаются все пробирки, содержащие ПЦР-смесь-1-FEP ВПЧ-1, затем все пробирки, содержащие ПЦР-смесь-1-FEP ВПЧ-2. Запустить измерение с помощью значка цветной призмы в панели активных кнопок (вверху экрана). По окончании измерения вынуть пробирки и нажать кнопку «ОК». 6. Интерпретация результатов несколько отличается от предложенного в программе Gene автоматического варианта, что связано с использованием для проведения i стр. 17 из 27 --- стр. 18 --- 4 ♦ Автоматическая интерпретация результатов (для прибора «Джин») Для осуществления автоматической интерпретации результатов используется прилагаемое к комплекту программное обеспечение в формате Microsoft® Excel. Требования к обозначению образцов для ооуществления правильной автоматической интерпретации результатов; 1. Название теста в программе Gene для образцов, анализируемых по смеси ВПЧ-1 должно быть строго HPV-1, анализируемых по смеси ВПЧ-2 должно быть HPV-2. 2. Одинаковые образцы, анализируем.ые по смесям ВПЧ-1 и ВПЧ-2 должны иметь одинаковое обозначение в программе Gene. Или: в программе Gene должны быть обозначены только образцы, анализируемые по смеси ВПЧ-1, а образцы, анализируемые по смеси ВПЧ-2 не должны содержать никаких обозначений и быть установленными bjom же порядке, что и образцы, анализируемые по смеси ВПЧ-1. 3. Отрицательные контроли выделения и ПЦР должны быть обозначены как «ОК», «В- », «-» ИЛИ «к-». 4. Положительные контроли должны быть обозначены как «+» или «к+». Порядок действий: После проведения раунда детекции в приборе «Джин» необходимо сохранить результаты в формате программы Gene. Для этого войдите в меню «Протокол» и далее выберите пункт «Сохранить». В открывшемся окне выберите папку, введите ИМЯ файла и нажмите «Сохранить». Откройте прилагающийся к набору реагентов файл Microsoft® Excel «AmpliSens FEP HR HPV Screen Results Matrix.xls», согласитесь на включение макроса Если при открытии документа Excel не активируется макрос (выдается соответствующее сообщение, кнопка «Результаты» неактивна) необходимо изменить уровень безопасности Microsoft® Excel. Для этого выберите в меню пункт «Сервис»>«Макрос»>«Безопасность...» и установите средний уровень безопасности. Нажмите кнопку «Открыть...», перейдите в папку, в которую было произведено сохранение, и откройте файл протокола. Нажмите «Результаты». В 2.Детекция результатов с помощью прибора «АЛА-1/4» Детекция результатов может быть проведена в течение 1 нед после проведения амплификации при хранении образцов при температуре от 2 до 20 °С. Работа с флуоресцентным ПЦР-детектором «АЛА-1/4» проводится согласно паспорту к прибору. Для проведения детекции и учета результатов необходимо в программе «А1А_1» создать 2 новьгх теста: «HPV-1» и «HPV-2». Параметрьг новых тестов (см. табл. 4): анализа двух ПЦР-смесей-1. стр. 18 из 27 --- стр. 19 --- П а р а м е т р ы н о в ы х т е с т о вТ а б л и ц а 4 Тест Каналы ВКО Настройки для FAM «П-» «п+» ВКО/фон Инфекция «П-» «HPV1» FAM.HEX нет 2,0 2,3 — ВПЧ ВКР ? 0«HPV2» FAM.HEX HEX 2,0 2,3 - ВПЧ ВКР 2,0 Настройки для HEX «п+» 2,3 2,3 Инфекция ВПЧ 16 ВКО/Фон 3,0 .............oc^^^aгulU>1. Задать новые тесть, можно вь.брав «Настройки», «Тест-система» в меню программь,. ри закрытии окна необходимо сохранить изменения кнопкой «Сохранить». Создание привязки инфекций к каналам; - необходимо задать названия инфекций (ВПЧ 16 и ВПЧ ВКР). Для этого используется поле «Привязка каналов», в нижней части которого вводятся названия и добавляются в список кнопкой «Добавить». - необходимо выбрать появившееся в описке название инфекции и щелкнуть на кнопке (правее списка), соответствующей имени канала. 1. Включить прибор и запустить программу «ALA_1» на компьютере, присоединенном к прибору. 2. создать протокол измерения. Ввести название протокола, выбрать взд теста 1» в списке тестов, задать соответствующий тип ротора. Ввести последовательность детектируемых образцов (в колонке «Образец») анализируемых на ПЦР-смеси-1-FEP ВПЧ-1, включая образцы «фон» (задаются клавишами Ctrl+F) 3. Выбрать вид теста «HPV2,, в списке тестов. Продолжая список, в том же порядке ввести последовательность детектируемых образцов, анализируемых на ПЦР- смеси-1-FEP ВПЧ-2, включая образцы «фон». в качестве образцов, обозначенных «ФОН» использовать образцы «Фон» соответствующей смеси. После проведения амплификации образцы «Фон» «ожио хранить в течение 1 мес при температуре от 2 до 20 »С и использовать многократно. Многократное использование пробирок «Фон» допускается при условии их использования с набором реагентов той же серии, того же типа выделительных реагентов и того же типа ПЦР-пробирок. 4. Выити из окна редактирования протокола (кнопка «Exit»). 5. Поставить пробирки в ячейки модуля прибора «АЛА-1/4» в соответствии с заданной последовательностью. Запустить измерение с помощью значка пробирки в панели активных кнопок (вверху экрана). Сообщения о превышении фонового сигнала на X % игнорируются. 6. Интерпретация результатов должна учитывать, что для проведения анализа --- стр. 22 --- ДНК: в две ПЦР-пробирки внести по 7 мкл ПЦР-смеси-1-FEP ВПЧ Зх и по 18 мкл ПЦР-смеси-Фон ВПЧ. На поверхность добавить каплю минерального масла для ПЦP^ - Если используется иной метод выделения ДНК: в две ПЦР-лробирки внести по 7 мкл ПЦР-смеси-1-FEP ВПЧ Зх, по 8 мкл ПЦР- буфера-Flu и по 10 мкл отрицательного контроля выделения. На поверхность добавить каплю минерального масла для ПЦР^. ВНИМАНИЕ! После проведения амплификации образцы «Фон» можно хранить в течение 1 мес при температуре от 2 до 20 °С и использовать многократно. Многократное использование пробирок «Фон» допускается при условии их использования с набором реагентов той же серии, того же типа выделительных реагентов и того же типа ПЦР-пробирок. Б. Проведение ПЦР-амплификации 1. В готовые пробирки внести по 10 мкл ДНК-проб, выделенных из исследуемых или контрольных проб этапа выделения ДНК. 2. Поставить контрольные реакции амплификации: а) отрицательный контроль (К-) - вместо ДНК-пробы внести в пробирку 10 мкл ТЕ-буфера. б) положительный контроль (К+) - внести в пробирку 10 мкл ПКО ДНК ВПЧ 16, 31, 33 типов и ДНК человека. Запустить на амплификаторе программу (см. табл. 7). Когда температура в ячейках достигнет 95 °С (режим паузы) поставить пробирки в ячейки амплификатора и нажать кнопку продолжения программы. Рекомендуется перед постановкой в амплификатор осадить капли со стенок пробирок кратким центрифугированием на вортексе (2-3 с). 3. стр. 22 из 27 --- стр. 23 --- ’ Т а б л и ц а 7 Амплификаторы с активным регулированием (ло раствору в пробирке): Другие приборы«Те («ДНК-Те рцик» хнолс>гия») «GeneAmp PCR System 2700» («Applied Biosystems») «Gradient Palm Cycler» («Corbett Research»), «Махудепе» («Ахудеп») цикл темпе ратура время циклы темпе ратура время циклы темпе ратура время циклы темпе ратура время циклы 1 95 °С 15 мин 1 95 °C 15 мин 1 95 °С 15 мин 1 95 °С 15 мин 1 2 93 °С 5с 20 95 °C Ю с 50 93 °С 5с 50 95 °С 25 с 5059 °С 5с 59 °C 20 c 59 °С Ю с 59 °С 25 с 72 °С 5с 72 °C Ю с 72 °С 5с 72 °С 25 г. 3 93 °С 2с 30 72 °C 1 мин 1 72 °С 1 мин 1 72 °С 1 мин 159 °С Ю с 95 °C 20 с 1 95 °С 20 с 1 95 °С 20 с 14 10 °С хранение 10 °C хранение 10 °С хранение 10 °С хране ние помощью прибора «АЛА-1/4». В. Детекция результатов с помощью прибора «АЛА-1/4» Детекция результатов может быть проведена в течение 1 нед после проведения амплификации при хранении образцов при температуре от 2 до 20 °С. Работа с флуоресцентным ПЦР-детектором «АЛА-1/4» проводится согласно паспорту к прибору. Для проведения детекции и учета результатов необходимо в программе «ALA_1» создать новый тест: «HPV». Параметры теста (см. табл. 8); Таблица 8 Параметры нового теста Канал 1 «РАМ» Канал 2 «НЕХ» Канал 3 «ROX» «П-» «п+» Инфекция «П-» «п+» ВКО/фон «П-» «п+» Инфекция 2,0 2,3 ВПЧ ВКР - - 3,0 2,0 2.3 ВПЧ ВКР Задать новый тест можно выбрав «Настройки», «Тест-система» в меню программы. Перед закрытием окна необходимо сохранить изменения кнопкой «Сохранить». Создание привязки инфекций к каналам; - необходимо задать название инфекции (ВПЧ ВКР). Для этого используется поле «Привязка каналов», в нижней части которого вводятся названия и добавляются в список кнопкой «Добавить». необходимо выбрать появившееся в списке название инфекции и щелкнуть на кнопке (правее списка), соответствующей имени канала. стр. 23 из 27 --- стр. 24 --- 1. Включить прибор и запустить программу «А1А_1» на компьютере, присоединенном к прибору. 2. Создать протокол измерения. Ввести название протокола, выбрать вид теста «HPV» в списке тестов, задать соответствующий тип ротора. Ввести последовательность детектируемых образцов (в колонке «Образец»), включая образцы «фон» (задаются клавишами Ctrl+F) 3. В качестве образцов, обозначенных «ФОН» использовать образцы «Фон». После проведения амплификации образцы «Фон» можно хранить в течение 1 мес при температуре от 2 до 20 "С и использовать многократно. Многократное использование пробирок «Фон» допускается при условии их использования с набором реагентов той же серии, того же типа выделительных реагентов и того же типа ПЦР-пробирок. 4. Выйти из окна редактирования протокола (кнопка «Exit»). 5. Поставить пробирки в ячейки модуля прибора «АЛА-1/4» в соответствии с заданной последовательностью. Запустить измерение с помощью значка пробирки в панели активных кнопок (вверху экрана). Сообщения о превышении фонового сигнала на X % игнорируются. Результат считается достоверным только в случае прохождения положительных и отрицательных контролей амплификации и отрицательного контроля выделения ДНК (см. табл. 9). Таблица 9 Учет результатов Контроля Контролируемый этап ПЦР-анализа Результат реакции в - Выделение ДНК Канал «Рат» отрицат. Канал «Нех» отрицат. Канал «Кох» отрицат. К- ПЦР Канал «Рат» отрицат. Канал «Нех» отрицат. Канал «Кох» отрицат. К+ ПЦР Канал «Р ат» положит. Канал «Нех» положит. Канал «Кох» положит. стр. 24 из 27 --- стр. 25 --- СРОК годности, УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ. Срок годности. 6 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежит. Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут. При получении разукомплектовать в соответствии с указанными температурами хранения. Хранение. Комплект реагентов «ДНК-сорб-АМ» хранить при температуре от 2 до 25 °С. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» (кроме полимеразы (TaqF), ПЦР-смеси- 1-FEP ВПЧ-1, ПЦР-смеси-1-FEP ВПЧ-2’ и ПЦР-смеси-1-FEP ВПЧ Зх) хранить при температуре от 2 до 8 °С. Полимеразу (TaqF), ПЦР-смесь-1-FEP ВПЧ-1, ПЦР-смесь- 1-FEP ВПЧ-2 и ПЦР-смесь-1-FEP ВПЧ Зх хранить при температуре не выше минус 16 °С. Следует избегать длительного нахождения ПЦР-смеси-1-FEP ВПЧ-1, ПЦР- смеси-1-FEP ВПЧ-2, ПЦР-смеси-1-FEP ВПЧ Зх на свету. с стр. 25 из 27 --- стр. 26 --- гарантийные обязательства изготовителя Изготовитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик набора реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и применения. Медицинское изделие техническому обслуживанию и ремонту не подлежит. Рекламации на качество комплекта реагентов «АмплиСенс® ВПЧ ВКР скрин-FL» направлять по адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail: cs@pcr.ru ^. При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим законодательством. i Заведующий НПЛ ОМДиЭ ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора Главный врач ФГБУ «Поликлиника №1» Управления делами Президента Российской Федерации Е.Н. Родионова Е.В. Ржевская Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету потребителя на сайте: www.amplisens.ru . стр, 26 из 27 --- стр. 27 --- символы, И С П О Л Ь З У Е М Ы Е В П Е Ч А Т Н О Й П Р О Д У К Ц И И REF Номер по каталогу V LOT Код партии 2 IVD Медицинское изделие для диагностики in vitro г а VER Дата изменения I Температурный диапазон d l ш1 Изготовитель А Содержимого достаточно для проведения п-количества тестов Использовать до Обратитесь к инструкции по применению Не допускать воздействия солнечного света Дата изготовления Осторожно! Обратитесь к инструкции по применению стр, 27 из 27