Набор реагентов для приготовления питательной среды для выделения и первичной идентификации парагемолитических вибрионов (Набор ПГСВ) по ТУ 20.59.52-001-01898316-2018 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- ФКУЗ Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотребнадзора Ч4002. г. Ростов-на-Дону, ул. М. Горького, 117/40, тел./факс (863) 240-27-03 Е- mail; «УТВЕРЖДАЮ» Директор ФКУЗ Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотребнадзора ИНСТРУКЦИЯ Набор реагентов для приготовления питательной среды для выделения и первичной идентификации парагемолитических вибрионов (Набор ПГВС). --- стр. 2 --- Набор ПГВС предназначен для диагностики ин витро и представляет собой комплект из 2-х вариантов среды ПГВС - питательной основы среды с добавлением селективной добавки (смесь алкилсульфатов натрия) и идентифицирующей добавки (натрия хлорида) для выделения парагемолитических вибрионов из посевного материала (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) и варианта среды без добавления натрия хлорида (вариант с селективной, без идентифицирующей добавкой) для определения галофильных свойств вибрионов выделенных на варианте с селективной и идентифицирующей добавками Набор ПГВС предназначен для выделения парагемолитических вибрионов из образцов клинического материала, объектов окружающей среды и продуктов питания при проведении микробиологической диагностики пищевых токсикоинфекций и мониторинге за этими заболеваниями. Состав Набора ПГВС и его характеристики. Набор представляет собой комплект для приготовления двух вариантов среды ПГВС. 1- й (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) питательной среды (2 л): питательная основа среды - 50 г/л (2 фл.), идентифицирующая добавка 30 г/л (2 фл.), селективная добавка 2 х 2,0 мл/л из общего флакона с селективной добавкой набора на 6 мл. 2- й (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки) питательной среды (1 л): питательная основа среды - 50 г/л (1 фл.), селективная добавка 1 х 2,0 мл/л из общего флакона с селективной добавкой набора на 6 мл Основа питательной среды (смесь питательных веществ с солями и агаром) имеет вид сухой аморфной порощковидной массы желтовато-серого цвета. Селективная добавка (смесь алкилсульфатов натрия) прозрачна бесцветная жидкость. Идентифицирующая добавка - натрия хлорид имеет вид кристаллического порошка белого цвета В питательную среду (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) после расплавления основы среды и охлаждения до 45-50 ° С вносят идентифицирующую и селективную добавки. В среду (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки) - только селективную добавку. Набор ПГВС рассчитан на приготовление 2 л среды (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) и 1 л среды (вариан с селективной, без идентифицирующей добавки). Набор ПГВС (на 3 л) рассчитан на исследование 15-20 проб анализируемого материала. Пример записи Набора ПГВС при заказе и в документации другого изделия «Набор реагентов для приготовления питательной среды для выделения и первичной --- стр. 3 --- идентификации парагемолитических вибрионов (Набор ПГВС)» по ТУ 20.59.52-001- 01898316-2018, код ОКП 2 20.59.52.140. Принцип действия среды. Принцип действия Набора ПГВС основан на использовании двух этапов селекции микроорганизмов с целью выявления парагемолитических вибрионов. На первом этапе в основу среды с селективной добавкой (алкилсульфатами натрия) вносится идентифицирующая добавка (натрия хлорид) - вариант с селективной и идентифицирующей добавкой. Данный вариант среды применяют для выделения возбудителя из клинического материала или объектов окружающей среды. На втором этапе выросшие колонии высевают на среду, содержащую основу с селективной добавкой без добавления натрия хлорида - вариант с селективной, без идентифицирующей добавки Идентифицирующая и селективная добавка обеспечивают выделение парагемолитических галофильных и негалофильных вибрионов за счет наличия натрия хлористого и алкилсульфатов натрия в среде (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой). На среде без натрия хлорида (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки) вырастают только негалофильные вибрионы. Таким образом, используя селективную и идентифицирующую добавки на первом этапе и селективную добавку на втором, среда обеспечивает выделение парагемолитических галофильных вибрионов и дифференциацию их от вибрионов других видов. Набор ПГВС может быть использован для выделения следующих патогенных вибрионов: V. parahaemolylicus, V algino/yticiis, V. minuciis, V fiirnissii, V. vulnificus, V. damsela и dp. Аналитические характеристики. Питательная среда (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) обеспечивает рост парагемолитических вибрионов при посеве 0,1 мл микробной взвеси тест-щтамма из разведения 10"' (10 м.к.) через (20±2) ч инкубации при температуре (37±1)° С в виде желтых, бесцветных или голубоватых плоско-выпуклых колоний диаметром не менее 1,0 мм и прорастание не менее 30% колоний в сравнении с контролем (средой TCBS-агаром). Среда (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки) обеспечивают рост тест-штамма холерного вибриона при посеве 10 м.к. Среда (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки) является отрицательным --- стр. 4 --- контролем в тесте на галофильность, на ней нет роста парагемолнтических вибрионов при посеве 100 м.к. Меры предосторожности при работе со Средой ПГВС. Потенциальный риск применения среды ПГВС - класс 2а (ГОСТ Р 51609-2000). Работу проводить в соответствии с санитарными правилами СП ГЗ.2322-08 «Безопасность работ с микроорганизмами 111-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». Работы по приготовлению и использованию Среды должны проводить специалисты необходимого профессионального уровня - врач клинической лабораторной диагностики, медицинский лабораторный техник (фельдшер-лаборант, лаборант) Компоненты среды ПГВС в используемых концентрациях безопасны и не обладают токсическим воздействием. Оборудование и материалы, необходимые при работе с изделием - чашки Петри (ГОСТ 23932-90), - горелки газовые или спиртовые (ГОСТ 25336-82), - пипетки градуированные (ГОСТ 29227-91), второго класса точности; - пробирки П-2-16-150 (ГОСТ 25336-82), -термостат суховоздушный с диапазоном стабилизируемых температур (10. . . 50 “С) +0,5 Т (ГОСТ ISO 7218-2011); - стерилизатор медицинский воздушный с температурой (160+5) “С (ГОСТ ISO 7218- 2011 ); - стерилизатор паровой (ГОСТ Р ЕН 13060-2011); - холодильник бытовой электрический (ГОСТ 26678-85); - весы лабораторные общего назначения (ГОСТ 24104-2001) второго класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г и пределом допускаемой погрешности ±2, - холодильник бытовой, - микроскоп оптический, - стереомикроскоп; - автоматические пипетирующие устройства, - одноканальный дозатор переменного объема Колор (объем дозирования 500 мкл), - наконечник жёлтый/1000 шт в упаковке (объем дозирования до 500 мкл); - микробиологический шпатель; - спирт этиловый Об'', --- стр. 5 --- - чашки с крышкой (Петри) пластмассовые лабораторные однократного применения диаметр 90 мм ТУ 9398-046-00480230-2005; - вата гигроскопичная; - микробиологические петли, объём 1 мкл, - петля бактериологическая из никеля или хрома диаметром 3 мм (ТУ 9439-009- 39484474-2004); - стандартный образец мутности ОСО 42-28-86П (стандарт 10 ед.) - спирт этиловый ректификованный (ГОСТ 5962-2013), - вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72); - питательный агар СПА Микроген; - 0,9 % раствор натрия хлорида, забуференный 1/150 М фосфатным буфером pH (7,2±0,1); - агар Мартена pH (7,7±0,1); - 1 % пептонная вода; - 1 % пептонная вода с 3% натрия хлорида, - бульон Хоттингера pH 7,2; - щелочной агар pH (7,7-8,2); - щелочной агар с добавлением 3% натрия хлорида pH (7,7-8,2); - питательный агар для культивирования микроорганизмов по ТУ 9398-20-78095326- 2006, - Питательная среда для выделения и культивирования возбудителя холеры и других энтеропатогенных вибрионов сухая (TCBS-ATAP) (ФБУН ГНЦ ПМБ, Оболенск, Россия) ТУ 9398-156-78095326-2012, - Питательная среда для выделения и культивирования холерного вибриона сухая «Щелочной агар» (ФБУН ГНЦ ПМБ, Оболенск, Россия) ТУ 9398-039-78095326-2008. Подготовка среды к исследованию. Для приготовления Зл готовых сред 3 основы питательной среды по 50±2,0 г внести раздельно в 3 стеклянные колбы вместимостью 2 л с 1 л дистиллированной воды в каждой Смеси размешать, довести до кипения и кипятить в течение 2-3 мин при периодическом помешивании до полного расплавления, признаком которого является появление крупнопузырчатой пены. Расплав охладить до 45-50 °С. --- стр. 6 --- Для приготовления 2 л варианта среды с селективной и идентифицирующей добавками в каждую из 2-х колб с охлаждённым расплавом основы внести при перемешивании по 2,0±2 мл селективной добавки и по 30,0±0,2 г идентифицирующей добавки Для приготовления 1 л варианта среды с селективной без идентифицирующей добавки в колбу с 1 л охлаждённого расплава основы внести при перемешивании только 2,0±2 мл селективной добавки. Среды разлить в чашки Петри по 25 мл, подсушить на рабочем столе или в термостате. Чашки со средами можно хранить в полиэтиленовом пакете при температуре + 2- + 8 '* С в течение 20 суток. Проведение исследования. Подготовка проб к исследованию. Отбор проб и проведение исследований осуществляют в соответствии с требованиями МУК 4.2.1793-03 «Лабораторная диагностика заболеваний, вызываемых парагемолитическими и другими, патогенными для человека вибрионами», МУ 4.2.2039-05 «Техника сбора и транспортировки материала в микробиологические лаборатории», МУК 4.2.2046-06 «Методы выявления и определения парагемолитических вибрионов в рыбе, не рыбных объектах промысла, продуктах, вырабатываемых из них, воде поверхностных водоёмов и других объектов». Посев материала для выделения вибрионов. Объекты внешней среды и пищевые продукты засевают на среду (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) методом прямого посева либо после накопления в 1% пептонной воде. Клинические образцы (рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, отделяемое ран) засевают прямым посевом каждый на 2 чашки Петри со средой (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой). При исследовании крови на среде (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) высевают материал с первой пептонной воды Первичное (предварительная идентификация парагемолитических вибрионов). На среду (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки) после предварительного учёта рассевают материал подозрительных колоний, выросших на среде (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой). Чашки инкубируют (20±2) ч при (37±1)° С Учет результатов. На среде (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) парагемолитические вибрионы (V. parahaemolyticus) вырастают в виде плоско-выпуклых бесцветных или голубоватых колоний диаметром не менее 1 мм с характерной морфологией. Холерные вибрионы и галофильные вибрионы других видов, ферментирующие сахарозу. --- стр. 7 --- вырастают в виде полупрозрачных округлых колоний жёлтого цвета. Подозрительные колонии параллельно пересевают секторами (1/2 - 1/8) на чашки со средой (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) и (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки). Пересев осуществляют с забором минимальной части колонии краем бактериологической петли с максимальным распределением материала по сектору агаровой пластинки. На среде (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки) вырастают не галофильные вибрионы в виде колоний жёлтого цвета. Культуры вибрионов, выросшие как на среде (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой), так и на среде (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки) не считаются галофильными и ориентировочно могут быть отнесены к холерным вибрионам. Наличие роста на среде (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) и отсутствие роста на среде (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки) указывает на галофильность микроорганизмов и с учётом морфологии колоний вибрионов могут быть отнесены либо к К parahaemolyticiis , либо к другим видам галофильных вибрионов (V. alginolyticus, V. vulnificus и т.д ). На обеих средах подавляется рост посторонней микрофлоры. Для дальнейшей идентификации парагемолитических вибрионов используют тесты, оговоренные в соответствующих Методических указаниях. Комплект среды ПГВС (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой - 80 чашек, вариант с селективной, без идентифицирующей добавки - 40 чашек) предназначен для проведения исследования 15-20 образцов испытуемых материалов: 2 чашки (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) для первичного прямого посева или пересева с первой пептонной воды; и 2-3 чашки (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки) для пересева выросших на среде (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) подозрительных колоний секторами для первичной идентификации в тесте на галофильность. Приготовление питательной среды, подготовку и посев материала производить с максимальным соблюдением режима стерильности Транспортировка, подготовка материала к посеву и сам процесс исследования детально описан в соответствующих разделах МУК 4.2.1793-03 и МУК 4.2.2046-06. Готовая среда ПГВС, разлитая в чашки Петри и упакованная в стерильные полиэтиленовые пакеты, может храниться при температуре от + 2° до +8° С в течение 20 суток. Обезвреживание. Обеззараживание, уничтожение и утилизацию Среды ПГВС после пцименения следует проводить в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 как медицинские 7 --- стр. 8 --- отходы класса Б (эпидемиологически опасные отходы). Термическое уничтожение Среды ПГВС может осуществляться децентрализованным способом (инсинераторы) или централизованным способом (мусоросжигательный завод) Условия хранения, транспортирования и эксплуатации изделия. Набор ПГВС хранят в герметически закрытых флаконах и полиэтиленовой упаковке предприятия в помещении с относительной влажностью воздуха не более 60 % и температурой от +2 до +8° С в течение всего срока годности. Набор ПГВС можно транспортировать всеми видами крытого транспорта при температуре от +2° С до +8° С в течение не более 30 суток. Срок годности - 1 год. Вскрытые компоненты изделия (флаконы с основой и добавками) подлежат использованию в течение 14 дней в связи с опасностью обсеменения. Вскрытая внещняя упаковка изделия (полиэтиленовый пакет) требует использования набора в течение 3-х месяцев при соблюдении условий хранения. В случае изменения аналитических характеристик Набора до истечения срока годности эксплуатация изделия прекращается, и не вскрытый образец набора направляется на рекламацию. По истечении срока годности использование Набора не допускается. Изделие, хранивщееся или транспортированное с нарущениями регламентированного режима, к применению не допускается. Специальное обучение персонала при использовании Набора не требуется. Внутренний контроль качества набора ПГВС производится в соответствии с существующими правилами Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению питательной среды ПГВС. Рекламации на качество питательной среды ПГВС в течение гарантийного срока следует направлять в адрес: 344007, г. Ростов-на-Дону, ул. Горького, 117/40, ФКУЗ Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотребнадзора, тел./факс (863) 240-27-03; E-mail: plague @aaanet.ru. Директор ФКУЗ Ростовский-на-Дону противочумный институз Роспотребнадзора --- стр. 9 --- ♦ // // --- стр. 12 --- Хлорид ы,% готовая основа питательной среды - 0,03 ± 0,01 Готовая питательная среда (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) -3,00 ± 0,20 Г отовая питательная среда (вариант сселективной, без идентифицирующей добавки) -0,03 + 0,01 0,026 Готовая основа питательной среды - 330±50 I отовая питательная среда (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой)-330±50 Г отовая питательная среда (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки) - 330±50 325Прочность студня,г --- стр. 13 --- Наименование показателей По ТУ 20.59.52-001-01898316-2018 Результаты контроля Контроль чистоты розлива готовой среды 2 чашки каждого варианта среды после инкубации в течение 24 ч при Т 37° С должны оставаться стерильными Чувствительность Среда (вариант с селективной и среды и скорость роста идентифицирующей добавкой ) должна микроорганизмов обеспечивать визуально обнаруживаемый рост колоний на всех засеянных чашках F. cholerae поп 01 Р-9741, V. parahaemolyticus АТСС 17802, V., alginolylicus А ТСС 17749 при посеве 0,1 мл микробной взвеси(концентрация 1 0 * ^ м.к.) каждого штамма из разведения 10“ ^ (чувствительность среды) через (20 ±2) ч инкубации при температуре (37±1) ° С Минимальное время инкубации, обеспечивающее отчётливый видимый невооружённым глазом рост колоний, типичных по морфологии, культур тест- щтаммов V. cholerae поп 01 Р-9741 , Г. parahaemolyticus А ТСС 17802, V alginolylicus А ТСС 17749 при посеве 0,1 мл микробной взвеси(концентрация 10^ м.к ) каждого штамма из разведения 10'^ (100 м. к.) и инкубации при температуре (37±1) ° С, составляет 18часов(скорость роста). Колонии тест- штаммов, сформировавшиеся на поверхности контролируемой среды, должны быть типичными и легко дифференцируемыми - F. cholerae поп 01 Р-9741, F alginolylicus А ТСС 17749 в виде жёлтых плоско-выпуклых полупрозрачных колоний диаметром не менее 1,0 мм., Г. parahaemolyticus А ТСС 17802 - в виде бесцветных или голубоватых плоско - выпуклых колоний диаметром не менее 1,0 мм Среда (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки ) должна обеспечивать визуально обнаруживаемый рост колоний на всех засеянных чашках F. cholerae поп 01 Р-9741 при посеве 0,1 мл микробной взвеси (концентрация 1 0 * ^ м.к ) штамма из разведения 10"^ (чувствительность среды) через (20±2) ч инкубации при температуре (37±1)° С. Минимальное время инкубации, обеспечивающее отчётливый видимый невооружённым глазом рост колоний, типичных по морфологии, культуры тест - штамма F. cholerae поп 01 Р-9741, при посеве 10'^(100 м. к.) и инкубации при температуре (37±1) ° С, составляет 18часов (скорость роста). Колоний тест - штамма F. Соответствует --- стр. 14 --- cholerae non 01 P-9741, сформировавшиеся на поверхности контролируемой среды, должны быть типичными и легко дифференцируемыми в виде жёлтых плоско-выпуклых полупрозрачных колоний диаметром не менее 1,0 мм,,_____________________ Показатель стабильности основных биологических свойств м и кроорган измо в Среда (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) должна обеспечивать рост типичных по морфологическим, биохимическим и серологическим свойствам колоний V. cholerae поп 01 Р-9741, V parahaemolyticus АТСС 17802, V alginolyOciis АТ(Х' 17749 при посеве 0,1 мл микробной взвеси каждого штамма(концентрация Ю^м.к ) из разведения 10'^ через (20±2) ч инкубации при температуре (37±1) ° С. Число атипичных по морфологии или биохимическим или серологическим свойствам колоний к общему числу колоний на чашках не должно превышать 5% (показатель стабильности ..). Среда (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки) должна обеспечивать типичный по морфологии рост колоний V. cholerae поп 01 Р-9741 при посеве 0,1 мл микробной взвеси(концентрация 10^ м.к ) из разведения 10'^. Число атипичных по морфологии или биохимическим серологическим свойствам колоний к общему числу колоний на чашках не должно превышать 5% (показатель стабильности..,) ________ Показатель прорастания микроорганизмов Среда (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) при посеве 0,1 мл взвеси, каждого тест - штамма V. cholerae поп 01 Р-9741, 2) V. parahaemolyticus АТСС 17802, 3) V. alginolyticus А ТСС 17749 из разведения 10'^ содержащего в 1 мл 10^ м.к; через (20±2) ч инкубации при температуре (37±1)°С должна обеспечивать рост не менее 30% от количества колоний указанных тест-штаммов, выросших на контрольной среде (показатель прорастания). Среда (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки) при посеве 0,1 мл взвеси, содержащей в 1 мл 10^ м.к.: 1) У. cholerae поп 01 Р-9741, через (20±2) ч инкубации при температуре (37±1) ° С должна обеспечивать рост не менее 30% от количества колоний указанного тест-штамма, выросшего на контрольной среде (показатель прорастания).______________________________ _____ С оответству ет Ингибирующие и дифференцирующ ие свойства среды Среда (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) при раздельном посеве 0,1 мл микробной взвеси(концентрация 10^ м.к) щтаммов посторонней микрофлоры; Е. соИ 18 из разведения 10'^ (показатель ингибирующих свойств в отнощении Е. соИ ) и Р. vulgaris НХ 19 N 222 из разведения 10“* (показатель ингибирующих свойств в отношении Р. vulgaris), через (20±2) ч инкубации при температуре (37±1)° С должна полностью подавлять рост Е. coli. Соответствует --- стр. 15 --- Допускается рост изолированных колоний Р. vulgaris НХ 19 N 222 при полном подавлении тенденции к роению. При раздельном посеве 0,1 мл. взвеси(концентрация Ю^м.к ) из разведения в 10'^ V. cholerae non 01 P-9741 и 0,1 мл. взвеси из разведения в 10“* Р. vulgaris НХ 19 N222 должна наблюдаться чёткая дифференциация V. cholerae non 01 P-9741 от Р. vulgaris по морфологии (желтые выпуклые у вибриона, серовато-матового цвета - у протея) - дифференцирующие свойства. Идентифицирующ ие свойства среды Среда (вариант с селективной и идентифицирующей добавкой) должна обеспечивать рост V. cholerae non 01 P-9741 и V. parahaemolyticus А ТСС 17802 при посеве 0,1 мл. микробной взвеси(концентрация 10^ м.к) каждого штамма из разведения 10"^ на всех засеянных чащках через (20±2) ч инкубации при температуре (37±1) ° С. Среда (вариант с селективной, без идентифицирующей добавки) должна обеспечивать рост V. cholerae non 01 P-9741. Рост V. parahaemolyticus АТСС 17802 при посеве 100 м.к. на всех засеянных чащках должен отсутствовать Соответствует Проверка комплектности, упаковки, маркировки Набор ПГВС представляет собой полиэтиленовый пакет с 5-ю ячейками: основа питательной среды во флаконах на 100 мл - 3 фл; селективная добавка во флаконе на 10 мл - 1 фл. на 3 л среды; идентифицирующая добавка во флаконе на 50 мл - 2 фл. Флаконы маркированы этикетками по приложению 3. Соответствует 7, аключение ОКК: Набор реагентов для приготовления питательной среды для выделения и ервичной идентификации парагемолитических вибрионов (Набор ПГВС), серии 01-18 по физико- имическим и биологическим показателям соответствует требованиям ТУ 20.59.52-001-01898316-2018 Годен до 05.2019 г. Условия хранения и транспортирования. Хранение в упаковке предприятия - производителя в ащищённом от света месте с относительной влажностью не более 60% при Т от +2 до +8 °С в ечение всего срока годности. Транспортирование всеми видами крытого транспорта при емпературе от +2 до +8 °С или от +8 до +30 °С в течение 5 суток. ав. ОКК (ата выдачи паспорта - 06 мая 2018 г. --- стр. 16 ---