Набор реагентов для качественного и количественного определения ДНК Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium и Trichomonas vaginalis методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме "реального времени" (АмплиПрайм® NCM(T)) по ТУ 21.20.23-031-09286667-2018 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 2 ---
__ ' 9
АмплиПрайм /
...........
IVD
Набор реагентов для качественного и количественного определения ДНК Neisseria
gonorrhoeae. Chlamydia trachomatis. Mycoplasma genitalium и Trichomonas vaginalis
методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме «реального времени»
(АмплиПрайм® NCM(T)) по ТУ 21.20.23-031-09286667-2018
«АмплиПрайм® NCM(T)»
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
iJ
ООО «НекстБио», Россия. 111394.
г. Москва, ул. Полимерная, д. 8, стр. 2,
тел, (495) 620-08-73, e-mail; info@nextbio.ru
--- стр. 3 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ.............................................................................3
1. НАЗНАЧЕНИЕ............................................................................................................................... 4
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА................................................................................................... 4
2.1. Формы выпуска, состав и комплектность........................................................................4
2.2. Принцип метода......................................................................................................................6
2.3. Прослеживаемость значений калибратора ПКО S T I ..................................................7
3. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА.............................................................................................................. 8
3.1. Внутренний контроль качества...........................................................................................8
3.2. Рекомендуемые контрольные материалы......................................................................9
4. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ................................................................9
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ...............................................10
6. ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ ..............................................12
6.1. Взятие исследуемого материала..................................................................................... 12
6.2. Предварительная обработка мочи..................................................................................12
6.3. Экстракция ДНК из исследуемых образцов .................................................................13
6.4. Амплификация, детекция продуктов амплификации, анализ и интерпретация
результатов.................................................................................................................................... 13
7. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ..................................................................................................15
7.1. Мазки со слизистой оболочки влагалища.....................................................................15
7.2. Соскобы эпителия со слизистой оболочки цервикального канала ......................16
7.3. Соскобы эпителия со слизистой оболочки уретры....................................................16
7.4. Мазки со слизистой оболочки прямой кишки...............................................................16
7.5. Мазки со слизистой оболочки ротоглотки.....................................................................17
7.6. Мазки с конъюнктивы ................................................................. 17
7.7. Моча..........................................................................................................................................17
7.8. Секрет предстательной железы...................................................................................... 18
8. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ .........................................................................................19
8.1. Экстракция ДНК из исследуемого материала.............................................................19
8.2. Подготовка реагентов для амплификации ...................................................................20
8.3. Внесение проб ДНК, проведение амплификации и детекции ...............................21
8.4. Анализ и вычисление результатов................................................................................. 22
8.5. Интерпретация результатов.............................................................................................23
8.6. Возможные ошибки.............................................................................................................. 24
8.7. Диагностическое значение полученного результата................................................25
9. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА.......................................................25
9.1. Предел обнаружения ................................................................. 25
9.2. Линейный диапазон измерения и предел измерения...............................................26
9.3. Аналитическая специфичность........................................................................................ 26
9.4. Воспроизводимость и повторяемость измерения......................................................27
9.5. Правильность измерения...................................................................................................28
9.6. Диагностическая чувствительность и диагностическая специфичность ..........28
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА. .. 30
11. ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ.............................................................................................31
12. БИБЛИОГРАФИЯ....................................................................................................................... 31
13. СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДОКУМЕНТАЦИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ.................32
Версия 18.02.19
--- стр. 4 ---
список СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ
ct
вко
гэ
ДНК
ДНКаза
дНТФ
ИППП
Набор/
АмплиПрайм*^
NCM(T)
ПК
ПКО STI
ОК
ОКО
ООО ПК
О С О Р
ПЦР
РУ
СОУГ
спж
УДГ
Cycle threshold (пороговый цикл)
внутренний контрольный образец
геномные эквиваленты
дезоксирибонуклеиновая кислота
дезоксирибонуклеаза
дезоксирибонуклеотидтрифосфат
инфекции, передаваемые половым путем
Набор реагентов для качественного и количественного
определения ДНК Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis,
Mycoplasma genitalium и Trichomonas vaginalis методом
полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме «реального
времени» (АмплиПрайм® NCM(T)) по ТУ 21.20.23-031-09286667-
2018
положительный контроль
положительный контрольный образец, ДНК-калибратор
отрицательный контроль
отрицательный контрольный образец
отделяемое слизистой оболочки прямой кишки
отделяемое слизистой оболочки ротоглотки
полимеразная цепная реакция
регистрационное удостоверение
соскобный материал и отделяемое слизистых оболочек
урогенитального тракта
секрет предстательной железы
урацил-ДНК-гликозилаза
Версия 18.02.19
--- стр. 5 ---
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиПрайм® NCM(T)» предназначен для качественного и
количественного определения ДНК Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis,
Mycoplasma genitalium и Trichomonas vaginalis в биологическом материале (соскобный
материал или отделяемое слизистых оболочек урогенитального тракта (влагалища,
цервикального канала, уретры), прямой кишки, ротоглотки, конъюнктивы; моча; секрет
предстательной железы) методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией продуктов амплификации в режиме «реального времени».
Набор может использоваться совместно с амплификаторами с четырьмя каналам
флуоресцентной детекции для флуорофоров РАМ, R6G, ROX, Су5. В данном случае
выявление ДНК Т. vaginalis не производится.
Материалом для проведения ПЦР служат пробы ДНК, экстрагированные из
исследуемого материала с помощью наборов реагентов, рекомендованных в разделе
«Дополнительное оборудование и материалы».
1.1. Область применения
Набор используется в клинической лабораторной диагностике для исследования
биологического материала, полученного от лиц с подозрением на наличие инфекций,
передаваемых половым путем. Результаты ПЦР-исследования учитываются в
комплексной диагностике заболевания.
1.2. Показания к применению:
Набор используется в комплексной диагностике ИППП, всех групп населения.
1.3. Противопоказания к применению:
Нарушение целостности упаковки, истекший срок годности, несоблюдение
требованиям инструкции.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. Формы выпуска, состав и комплектность
Набор выпускается в двух формах (состав форм и комплектность поставки см. в
таблице 1 и 2). Обе формы выпуска предназначены для проведения амплификации
ДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
Для проведения полного исследования необходимо использовать наборы реагентов
для экстракции ДНК, рекомендованные в разделе «Дополнительное оборудование и
материалы».
Форма выпуска 1 включает смесь для проведения ПЦР, раскапанную под
прослойку парафина по стрипованным (12 стрипов по 8 пробирок) пробиркам
объемом 0,2 мл. Форма предназначена для применения совместно с
амплификаторами планшетного типа и рассчитана на проведение исследования 96
образцов, включая контроли.
Версия 18.02.19
--- стр. 6 ---
Форма выпуска 2 включает смесь для проведения ПЦР в пробирке объемом
1,5 мл для дозирования в любые типы пробирок. Форма предназначена для
применения совместно с амплификаторами планшетного и роторного типа и
рассчитана на проведение исследования 96 образцов, включая контроли. Форма
может быть использована совместно с автоматическими станциями для
приготовления и дозирования реакционных смесей.
Таблица 1
Состав форм выпуска набора
Компонент 1 1 Количество________________1___1..................................... Описание
Форма выпуска 1
ПЦР-смесь
NCM(T) 0,01
96 пробирок(12
стрипов по 8
пробирок)
Буферный раствор со специфическими
праймерами, флуоресцентно-мечеными зондами
и дНТФ
Прозрачная жидкость, раскапана под парафин
Буфер А 0,96 1 пробирка
Буферный раствор с термостабильной ДНК-
полимеразой Taq, сульфатом магния и урацил-
ДНК-гликозилазой.
Прозрачная жидкость.
ПКО STI 1.0 1 пробирка
Положительный контрольный образец. ДНК-
калибратор.
Прозрачная жидкость.
ОКО 1,0 1 пробирка Отрицательный контрольный образец.
Прозрачная жидкость.
Программное
обеспечение
«АмплиПрайм®
NCM(T) ПО»
версия 1.0
- -
На USB флэш-наколителе, а также в
электронном виде на официальном сайте
Производителя:
http://www.nextbio.ru/reagents/ .
Форма выпуска 2
ПЦР-смесь
NCM(T) 0,96 1 пробирка
Буферный раствор со специфическими
праймерами, флуоресцентно-мечеными зондами
и дНТФ.
Прозрачная жидкость.
Буфер А 0,96 1 пробирка
Буферный раствор с термостабильной ДНК-
полимеразой Taq. сульфатом магния и урацил-
ДНК-гликозилазой
Прозрачная жидкость.
ПКО STI 1,0 1 пробирка
Положительный контрольный образец, ДНК-
калибратор.
Прозрачная жидкость.
ОКО 1,0 1 пробирка Отрицательный контрольный образец.
Прозрачная жидкость.
Программное
обеспечение
«АмплиПрайм®
NCM(T) ПО»
версия 1.0
- -
На USB флэш-накопителе, а также в
электронном виде на официальном сайте
Производителя: http://www.nextbio.ru/reagents/ .
Версия 18.02.19
--- стр. 9 ---
измерений аттестованного значения концентраций калибратора ПКО STI составляет
не более 5% (с уровнем доверительной вероятности 95%).
3. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
3.1. Внутренний контроль качества
3.1.1. Отрицательный и положительный контроли исследования
Для оценки качества получаемых результатов каждая группа экстрагируемых
образцов и каждая индивидуальная постановка ПЦР должны включать контрольные
образцы: отрицательный контроль (ОК), положительный контроль (ПК). Результаты
для контролей должны соответствовать заданным критериям валидности, указанным
в разделе «Интерпретация результатов».
В качестве отрицательного контроля используется реагент ОКО, входящий в
состав набора. Отрицательный контроль тестируется, начиная с этапа экстракции, и
позволяет контролировать возможную контаминацию другими образцами или
ампликонами. В пробирке с отрицательным контролем не должно детектироваться
ДНК выявляемых микроорганизмов, В случае несоответствия результата для
контроля заданным критериям валидности, результаты для всех образцов в
постановке считаются недостоверными, необходимо предпринять меры по выявлению
и ликвидации источника контаминации и повторить исследование всех исследуемых
образцов и контролей, начиная с этапа экстракции.
В качестве положительного контроля используется реагент ПКО STI, входящий в
состав набора. В случае несоответствия результатов для положительного контроля
заданным критериям валидности, результаты для всех образцов в постановке
считаются недостоверными, требуется повторить исследование всех исследуемых
образцов и контролей, начиная с этапа экстракции.
3.1.2. Анализ калибровки
Количественная оценка концентрации ДНК исследуемых образцов проводится
относительно количественно охарактеризованного положительного контрольного
образца ПКО STI. Исследование ПКО STI проводится параллельно с исследованием
образцов, начиная с этапа экстракции. Определение концентрации ДНК производится
в соответствии с заданными значениями концентраций ПКО и полученными
значениями порогового цикла (Ct) для ПКО и исследуемых образцов. Для повышения
точности количественной оценки дополнительно используется поправка,
учитывающая эффективность экстракции ДНК из ПКО и исследуемых образцов.
Версия 18.02.19
--- стр. 10 ---
3.1.3. Контроль ингибирования
Для контроля всех этапов исследования, эффективности экстракции ДНК и оценки
влияния ингибиторов ПЦР предусмотрено использование экзогенного ВКО®, который
добавляется в каждый исследуемый и контрольный образец на этапе экстракции ДНК.
Результаты исследования ВКО должны соответствовать заданным критериям
валидности для положительных и отрицательных исследуемых образцов, указанным
в разделе «Интерпретация результатов». Если в исследуемых образцах не
обнаружена ДНК анализируемых микроорганизмов и ДНК ВКО, то результаты
исследования данных образцов считаются недостоверными, требуется повторить их
анализ, начиная с этапа экстракции. В исследуемых образцах, в которых обнаружена
ДНК выявляемых микроорганизмов, допускается наличие или отсутствие ДНК ВКО.
3.1.4. Мониторинг лаборатории на наличие контаминации
Рекомендуется раз в месяц проводить мониторинг лаборатории на контаминацию
продуктами амплификации, исследуемыми образцами, положительными
контрольными образцами. Оценка наличия/отсутствия контаминации проводится
путем исследования смывов с различных объектов: пипеток, рабочих поверхностей
лабораторной мебели, оборудования и поверхностей помещений. Взятие и
исследование смывов следует проводить согласно процедуре, описанной в МУ
1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности». При обнаружении контаминации
необходимо провести обработку лаборатории моющими и дезинфицирующими
растворами согласно указаниям, описанным в МУ 1.3.2569-09.
3.2. Рекомендуемые контрольные материалы
В качестве контрольных материалов для проверки заявленных функциональных
характеристик набора могут быть использованы зарегистрированные на территории
Российской Федерации панели контрольных образцов, предназначенные для
проведения внутреннего и внешнего контролей качества лабораторных исследований
по обнаружению ДНК выявляемых микроорганизмов.
4. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Набор применяется только для диагностики in vitro.
4.2. Набор предназначен для работы только с исследуемым материалом,
указанным в разделе «Назначение». Исследование других видов биологического
® ВКО (ВКО А или BKO-FL) входит в состав набора реагентов, рекомендованного Производителем для
экстракции ДНК из исследуемого материала.
Версия 18.02.19 9
--- стр. 11 ---
материала может привести к получению недостоверных результатов.
4.3. Получение достоверных результатов обеспечивается выполнением
требований, предъявляемых к взятию, транспортированию, подготовке и хранению
образцов исследуемого материала (см. раздел «Исследуемый материал»).
4.4. С помощью набора возможно ПЦР-исследование только проб ДНК,
экстрагированных из исследуемого материала совместно с внутренним контрольным
образцом - BKO-FL или ВКО А. входящим в состав наборов реагентов для экстракции.
Без использования ВКО невозможно провести оценку валидности постановки.
4.5. Применение набора возможно только персоналом, обученным методам
молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической
лаборатории.
4.6. При работе с набором следует использовать только амплификаторы с
системой детекции флуоресцентного сигнала, характеристики которых
удовлетворяют требования, указанные в разделе «Дополнительное оборудование и
материалы».
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ
5.1. Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно
биологические (ПЦР) исследования биологического материала на наличие
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-
эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами» и методических указаний
МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
5.2. При работе необходимо всегда выполнять следующие требования;
- Применять набор строго по назначению в соответствии с данной инструкцией.
Отклонение от прописанных процедур и порядка действий может привести к
получению недостоверных результатов анализа.
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ следует
проводить в отдельных помещениях (зонах) в соответствии с МУ 1.3.2569-09. Не
возвращать образцы, оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена
предыдущая стадия процесса.
- Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные,
организовывать работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08.
Версия 18.02.19 10
--- стр. 12 ---
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реагенты, используя
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08.
- Удалять неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а
также использованные реагенты, упаковку®, биологический материал^, включая
материалы, инструменты и предметы, загрязненные биологическим материалом, в
соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7,2790-10.
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих
продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого,
поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны,
оборудования и реагентов.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для
автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду (пробирки,
наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер, содержащий
дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для
обеззараживания медицинских отходов.
- Набор предназначен для однократного применения для проведения ПЦР-
исследования указанного количества образцов (см. раздел «Формы выпуска, состав и
комплектность»).
- К работе с набором допускается только персонал, обученный методам
молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической
лаборатории в установленном порядке (в соответствии с требованиями СП 1.3.2322-
08).
- Не использовать набор, если нарушена внутренняя упаковка или внешний вид
реагента не соответствует описанию.
- Не использовать набор, если не соблюдались условия транспортирования и
хранения согласно инструкции.
- Не смешивать реагенты разных серий.
- Не использовать набор по истечении срока годности
- Использовать одноразовые неопудренные перчатки, лабораторные халаты,
защищать глаза во время работы с образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки
по окончании работы. Все операции проводятся только в перчатках для исключения
контакта с организмом человека.
- Не есть, не пить и не курить в процессе использования набора. Избегать контакта
® Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использованные реагенты,
упаковка относятся к классу опасности медицинских отходов Г
^Биологический материал, включая инструменты и предметы, загрязненные материалом, относятся к
классу опасности медицинских отходов Б,
Версия 18.02.19 11
--- стр. 14 ---
6.2.3. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фильтром
до 1000 мкл.
6.2.4. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема без фильтра
до 200 мкл.
6.2.5. Микроцентрифуга для пробирок типа «Эппендорф» объемом 1,5 мл с
ускорением не менее 10 000 д.
6.2.6. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления
надосадочной жидкости.
6.2.7. Вортекс.
6.2.8. Автоматический дозатор переменного объема на 1000 мкл.
6.3. Экстракция ДНК из исследуемых образцов
6.3.1. Набор реагентов для экстракции ДНК «МагноПрайм® ФАСТ» (РУ № РЗН
2019/8043 от 22.01.2019) либо «АмплиПрайм® ДНК-сорб-АМ» (РУ № РЗН 2015/2879
от 15.07.2015) либо любой другой рекомендованный производителем набор,
зарегистрированный в РФ и соответствующий следующим требованиям:
- набор позволяет выделять ДНК из биологического материала (соскобный
материал или отделяемое слизистых оболочек урогенитального тракта, прямой
кишки, ротоглотки, конъюнктивы; моча, секрет предстательной железы) для
последующего исследования методом полимеразной цепной реакции;
- состав набора включает внутренний контрольный образец - реагент ВКО А или
BKO-FL;
- набор позволяет исследовать образцы объемом не менее 100 мкл;
- набор позволяет проводить элюцию очищенной ДНК в объеме не менее 100 мкл.
6.3.2. Дополнительные материалы и оборудование, необходимые для экстракции
ДНК, - согласно инструкции к набору реагентов для экстракции ДНК.
6.4. Амплификация, детекция продуктов амплификации, анализ и
интерпретация результатов
6.4.1. Одноразовые полипропиленовые пробирки, свободные от ДНКаз,
следующих видов (при работе с формой выпуска 2);
- завинчивающиеся пробирки и крышки к ним или плотно закрывающиеся
пробирки объемом 1,5 мл - для приготовления реакционной смеси;
- тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с выпуклой или плоской
оптически прозрачной крышкой или пробирки объемом 0,2 мл в стрипах по 8 шт. с
прозрачными крышками - для проведения ПЦР при использовании прибора
планшетного типа:
- тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с плоской крышкой или
Версия 18.02.19 13
--- стр. 15 ---
пробирки для ПЦР объемом 0,1 мл в стрипах по 4 шт. с крышками - для проведения
ПЦР при использовании прибора роторного типа.
6.4.2. Одноразовые наконечники, свободные от ДНКаз, для дозаторов
переменного объема с фильтром до 100 мкл
6.4.3. Штативы для пробирок объемом 0,2 мл или 0,1мл (в соответствии с
используемыми пробирками для ПЦР).
6.4.4. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс).
6.4.5. Вортекс.
6.4.6. Автоматические дозаторы переменного объема.
6.4.7. Станция автоматическая с модулем для приготовления и дозирования
реакционных смесей и комплект расходных материалов к ней согласно инструкции
Производителя, - при работе с формой выпуска 2 в случае приготовления
реакционных смесей с использованием автоматической станции.
6.4.8. Программируемый амплификатор с системой детекции флуоресцентного
сигнала в режиме «реального времени» роторного типа - Rotor-Gene Q, либо
планшетного типа - С1000 Touch в комплекте с модулем CFX96, либо аналогичный,
рекомендованный производителем, зарегистрированный в РФ и соответствующий
следующим требованиям:
- наличие независимых каналов флуоресцентной детекции для флуорофоров
РАМ, R6G, ROX, Суб, Су5.5 с характеристиками, указанными в таблице 4.
Таблица 4
Требуемые характеристики каналов флуоресцентной детекции
Канал для
флуорофора
Длины волн, нм
Возбуждения Детекции
Минимум Максимум Минимум Максимум
РАМ 450 470 510 530
R6G 515 532 545 580
ROX 565 585 605 650
Су5 620 640 660 690
Су5.5 660 690 705 750
Примечание - Допускается использование амплификаторов с 4 каналами
флуоресцентной детекции для флуорофоров РАМ, R6G, ROX, Су5, при этом учет
результатов по каналу для флуорофора Су5.5 не производится, и ДНК Г. vaginalis не
выявляется.
- для приборов планшетного типа наличие подогреваемой крышки с температурой
более 100°С;
- точность поддержания температуры < ±0,4®С;
Версия 18.02,19 14
--- стр. 16 ---
- скорость нагрева не менее 2‘ "С/сек;
- скорость охлаждения не менее 1°С/сек.
6.4.9. Холодильник от 2 до 8 °С.
6.4.10.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки в соответствии с
МУ 1.3.2569-09.
6.4.11.Емкость для сброса наконечников.
7. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ
Материалом для исследования служат:
- соскобный материал или отделяемое слизистых оболочек урогенитального
тракта (мазки со слизистой оболочки влагалища, соскоб эпителия со слизистой
оболочки цервикального канала, соскоб эпителия со слизистой оболочки уретры),
- отделяемое слизистой оболочки прямой кишки (мазки),
- отделяемое слизистой оболочки ротоглотки (мазки).
- отделяемое конъюнктивы (мазки),
- моча (осадок первой порции утренней мочи),
- секрет предстательной железы.
Наиболее информативными являются исследования материала, полученного
непосредственно из потенциального очага инфекционного процесса. Поскольку
инфекционный процесс может захватывать несколько очагов, для получения
наиболее исчерпывающей информации пробы материала необходимо брать из всех
очагов, где имеются признаки воспаления или находятся клетки-мишени для
инфекционных агентов. Решение о выборе места взятия исследуемого материала
принимает лечащий врач в зависимости от диагностической задачи.
Взятие. предварительную обработку, транспортирование и хранение
исследуемого биологического материала следует проводить в соответствии с
нижеперечисленными требованиями, несоблюдение которых может привести к
получению некорректных результатов исследования.
7.1. Мазки со слизистой оболочки влагалища
Взятие материала провести из заднебокового свода влагалища с помощью
стерильного одноразового зонда-тампона или универсального зонда из
полипропилена/полистирола для забора клинического материала, в пробирку с
транспортной средой в соответствии с инструкцией по применению зонда. Головка
(рабочая часть) зонда может отламываться по имеющейся насечке от ручки зонда.
Необходимо максимально полно собрать отделяемое. Допустимо минимальное
присутствие примесей в виде слизи и крови.
Биологический материал, помещенный в транспортную среду (включающую
Версия 18.02.19 15
--- стр. 21 ---
- объем исследуемого образца® - 100 мкл в пробирки для исследуемых образцов;
- объем реагента ОКО - 100 мкл в пробирку для ОК;
- объем реагента ПКО STI - 100 мкл в пробирку для ПК;
- объем реагента, используемого для элюции ДНК, - 100 мкл. Допускается
увеличение объема элюции до 200 мкл.
8.2. Подготовка реагентов для амплификации
8.2.1. При использовании формы выпуска 1
8.2.1.1. Отобрать необходимое количество стрипованных пробирок с ПЦР-
смесью NCM(T) для амплификации ДНК исследуемых и контрольных образцов,
полученной на этапе экстракции.
8.2.1.2. Убедиться, что парафин полностью покрывает раствор на дне пробирок. В
противном случае, не использовать данные пробирки.
8.2.1.3. На поверхность парафина внести по 10 мкл Буфера А, при этом он не
должен проваливаться под прослойку парафина и смешиваться с ПЦР-смесью.
8.2.2. При использовании формы выпуска 2
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно
перед проведением ПЦР.
ВНИМАНИЕ! В случае приготовления реакционной смеси с помощью автоматической
станции следуйте указаниям инструкции по ее использованию.
8.2.2.1. Рассчитать объемы ПЦР-смеси NCM(T) и Буфера А. требующиеся для
приготовления реакционной смеси (см. таблицу 5). Смесь готовить на общее число
исследуемых и контрольных образцов плюс запас не менее чем на одну реакцию.
Таблица 5
Расчет объемов компонентов реакционной смеси
Реагент Объем, мкл Обозначения
ПЦР-смесь NCM(T) 10,0*(N+1) N - количество образцов ДНК, полученных на
этапе экстракции, включая контролиБуфер А 10,0*{N+1)
8.2.2.2. Перемешать содержимое пробирок с ПЦР-смесью NCM(T) и Буфером А,
осадить капли на вортексе.
8.2.2.3. Приготовить реакционную смесь, добавив компоненты в отдельную
пробирку в объемах, рассчитанных в п. 8.2.2.1. Перемешать смесь и осадить капли на
вортексе.
8.2.2.4. Отобрать необходимое количество пробирок или стрипов для
амплификации ДНК исследуемых и контрольных образцов, полученной на этапе
® Для образцов мочи необходимо произвести предобработку согласно разделу «Исследуемый
материал».
Версия 18.02.19 20
--- стр. 22 ---
экстракции. Выбор пробирок для амплификации зависит от используемого
амплификатора с системой детекции в режиме «реального времени».
8.2.2.5. Внести в пробирки по 20 мкл приготовленной реакционной смеси.
ВНИМАНИЕ! Неиспользованные остатки реакционной смеси хранению не подлежат.
8.3. Внесение проб ДНК, проведение амплификации и детекции
ВНИМАНИЕ! При добавлении проб ДНК, экстрагированных с помощью наборов
реагентов для проведения экстракции методом сорбции на силикагеле или магнитной
сепарации, необходимо избегать попадания сорбента в реакционную смесь.
ВНИМАНИЕ! Программирование и запуск амплификатора проводить согласно
инструкции по его применению. Рекомендуемые параметры для программирования
амплификаторов указаны во вкладыше, прилагаемом к набору.
8.3.1. Внести в подготовленные пробирки с реакционной смесью по 10 мкл проб
ДНК, полученных в результате экстракции из исследуемых и контрольных образцов.
8.3.2. Запрограммировать амплификатор с системой детекции в режиме
«реального времени» для выполнения единой программы амплификации и детекции
флуоресцентного сигнала (см. таблицу 6).
Таблица 6
Единая программа амплификации и детекции флуоресцентного сигнала
Цикл Температура, °С Время Детекция по каналам для Количество
мклов
1 50 15 мин - 1
2 95 15 мин - 1
3
95 Ю с -
45
60 20 с FAM, R6G10 ROX, Су5, С у5.5"
Примечание - С использованием единой программы можно одновременно
проводить в одном приборе любое сочетание тестов, включая тесты с обратной
транскрипцией и амплификацией. При одновременном проведении нескольких тестов
детекция флуоресцентного сигнала назначается и по другим используемым каналам,
помимо указанных в таблице. В случае если в одном приборе одновременно
проводятся тесты только для выявления ДНК, можно удалить из данной программы
первый шаг обратной транскрипции (50 °С - 15 мин) для экономии времени.
8.3.3. Установить пробирки или стрипы в ячейки реакционного модуля прибора.
Примечание - Рекомендуется перед постановкой в амплификатор планшетного
Детекция сигнала для флуорофора R6G осуществляется по каналу детекции для аналогичных
флуорофоров Hex и Joe.
Допускается использование амплификаторов с четырьмя каналам флуоресцентной детекции для
флуорофоров FAM, R6G, ROX, Су5
Rpnrwq 1R 02 19 2 1
--- стр. 23 ---
типа осадить капли со стенок пробирок на вортексе.
8.3.4. Запустить выполнение программы амплификации с детекцией
флуоресцентного сигнала.
8.3.5. Прибор проводит регистрацию флуоресцентного сигнала автоматически в
режиме «реального времени».
8.4. Анализ и вычисление результатов
ВНИМАНИЕ! Обработку данных (флуоресцентных кривых), полученных в
программном обеспечении прибора, используемого для проведения ПЦР с детекцией
в режиме «реального времени», проводить согласно инструкции по его применению.
Рекомендуемые параметры для обработки данных указаны во вкладыше,
прилагаемом к набору.
ВНИМАНИЕ! Количественный анализ результатов возможно проводить только в
автоматическом режиме с использованием программного обеспечения к набору
«АмплиПрайм® NCM(T) ПО» версии 1.0, согласно руководству оператора по
применению программного обеспечения. Руководство оператора и программное
обеспечение находятся на USB флэш-носителе, входящем в состав набора, а также
на официальном сайте Производителя по адресу: http://www.nextbio.ru/reagents/ .
Необходимые значения для расчета результатов указаны во вкладыше, прилагаемом
к набору
Обработка и расчет результатов происходит на основании наличия (или
отсутствия) пересечения кривой флуоресценции S-образной (сигмообразной) формы
с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, что определяет
наличие (или отсутствие) для данной пробы ДНК значения порогового цикла (Ct) в
соответствующей графе таблицы результатов.
Кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируются по четырем или пяти
каналам детекции (см. таблицу 7).
Таблица 7
Детекция флуоресцентного сигнала
Канал для РАМ R6G ROX Су5 Су5.5
при использовании 4 каналов детекции
Продукт
амплификации
ДНК
N. gonorrtioeae
ДНК
С. trachom atis
ДНК
М. Qenitalium ДНК вко -
при использовании 5 каналов детекции
Продукт
амплификации
ДНК
N. Q onorrhoeae
ДНК
С. trachom atis
ДНК
М. Qenitalium ДНК вко ДНК
Т. vaainalis
При использовании программного обеспечения к набору на основании полученных
значений Ct для образца ПК и исследуемых образцов и исходя из заданных значений
концентраций для образца ПК происходит автоматический расчет значений
Версия 18.02.19 22
--- стр. 24 ---
концентрации геномных эквивалентов ДНК выявляемых микроорганизмов в 1 мл
исследуемых и контрольных образцов Количественный анализ результатов для
исследуемого образца возможен, только если по каналу для флуорофора Су5
значение Ct для данного образца отличается от значения Ct для образца ПК не более
чем на ±3 цикла.
8.5. Интерпретация результатов
Интерпретацию результатов можно проводить в двух вариантах;
- в автоматическом режиме с использованием программного обеспечения к набору
«АмплиПрайм® NCM(T) ПО» версии 1.0. Используемые в программном обеспечении
алгоритм интерпретации результатов для исследуемых образцов и критерии
валидности результатов, полученных для контролей, представлены в таблицах 8, 9 и
10 соответственно;
- вручную в соответствии с таблицей 8 и вкладышем, прилагаемым к набору.
Результат исследования считают достоверным, если получены правильные
результаты для контролей в соответствии с таблицей 10.
Таблица 8
Интерпретация результатов для исследуемых образцов
при проведении качественного анализа
Результат Интерпретация
Значение Ct по каналу для флуорофора Су5
отсутствует или определено больше г р а н и ч н о г о ^ ^ при
этом значения Ct по каналам для флуорофоров РАМ,
R6G, ROX, Су5.5^з отсутствуют.
Невалидный
Значение Ct для ДНК N. gonorrhoeae. С. trachom atis,
М. genitalium и Т. vaginalis отсутствует, а по каналу для
флуорофора Суб определено значение Ct не больше
граничного.
ДНК выявляемых микроорганизмов не
обнаружена
Значение Ct для ДНК N. gonorrhoeae. С. trachom atis.
М. genitalium и Т. vaginalis определено.
ДНК выявляемых микроорганизмов
обнаружена.
Таблица 9
Интерпретация результатов для исследуемых образцов
при проведении количественного анализа
Результат Интерпретация
Значение Ct по каналу для флуорофора Суб
отсутствует или определено больше г р а н и ч н о г о ^ ^
этом значения Ct по каналам для флуорофоров РАМ,
R6G, ROX, Суб.5^^ отсутствуют.
Невалидный
Значение Ct для ДНК N. gonorrhoeae. С. trachom atis.
М. genitalium и Т vaginalis отсутствует, а по каналу для
флуорофора Суб определено значение Ct не больше
граничного.
ДНК выявляемых микроорганизмов не
обнаружена
Граничные значения Ct указаны во вкладыше, прилагаемом к набору.
Значение Ct по каналу для флуорофора Су5.5 учитывается в случае проведения амплификации и
детекции с помощью пятиканального прибора.
Версия 18.02.19 23
--- стр. 25 ---
ДНК N gonorrhoeae. С. trachomatis, М. genitalium,
Т vaginalis выявлена в концентрации меньше нижнего
предела линейного диапазона измерения набора.
ДНК N. gonorrhoeae, С. trachomatis.
М genitalium обнаружена в концентрации
менее 2x10^ ГЭ/мл.
ДНК Г. uag/na/Zs обнаружена в
концентрации менее 2x10^ ГЭ/мл.
Рассчитанное значение концентрации ДНК
N. gonoirhoeae. С. trachomatis. М. genitalium, Т. vaginalis
(ГЭ/мл) находится в лределах линейного диапазона
измерения набора
ДНК выявляемых микроорганизмов
обнаружена в концентрации ХхЮ'' ГЭ/мл.
ДНК N. gonorrhoeae. С. trachomatis, М. genitalium.
Т. vaginalis выявлена в концентрации выше верхнего
предела линейного диалазона измерения набора
ДНК выявляемых микроорганизмов
обнаружена в концентрации более
1x10’ ГЭ/мл.
Таблица 10
Результаты для контролей
Контроль
Результаты амплие >икации по каналу для флуорофора
РАМ R6G ROX Су5 Су5.5
ОК
(отрицательный
контроль)
Значение Ct
отсутствует.
Значение Ct
отсутствует
Значение Ct
отсутствует
Определено
значение Ct не
больше
граничного^^.
Значение Ct
отсутствует
ПК
(положительный
контроль)
Определено значение Ct не больше граничного ло каждому каналу детекции.
8.6. Возможные ошибки
8.6.1. Для отрицательного контроля (ОК) по каналам для флуорофоров РАМ и/или
R6G и/или ROX и/или Су5.5 определено значение порогового цикла (Ct). Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов
или исследуемых образцов другими образцами или продуктами амплификации на
каком-либо этапе исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению и
ликвидации источника контаминации и повторить исследование для всех образцов,
начиная с этапа экстракции ДНК.
8.6.2. Для отрицательного контроля (ОК) по каналу для флуорофора Су5 значение
Ct отсутствует или определено больше граничного. Требуется повторное
исследование всех образцов, начиная с этапа экстракции ДНК.
8.6.3. Для положительного контроля (ПК) значение Ct отсутствует или определено
больше граничного по какому-либо из указанных каналов для флуорофоров (см.
таблицу 10). Требуется повторное исследование всех образцов, начиная с этапа
экстракции ДНК.
8.6.4. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при
этом на графике флуоресценции отсутствует участок характерного
экспоненциального подъема (график представляет собой приблизительно прямую
линию). Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой линии
или параметров расчета базовой линии. Если результат получен при правильном
граничные значения Ct указаны во вкладыше, прилагаемом к набору
Версия 18.02.19 24
--- стр. 26 ---
уровне пороговой линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
8.6.5. Для исследуемого образца по каналу для флуорофора Су5 определено
значение Ct не больше граничного, но оно отличается от значения Ct по каналу для
флуорофора Суб для образца ПК более чем на ±3 цикла. Для данного образца
возможно проведение анализа только в качественном формате. Для проведения
количественного анализа требуется повторное исследование данного образца,
начиная с этапа экстракции ДНК.
8.6.6. Для исследуемого образца по каналу для флуорофора Су5 значение Ct
отсутствует. Для данного образца возможно проведение анализа только в
качественном формате. Для проведения количественного анализа требуется
повторное исследование данного образца, начиная с этапа экстракции ДНК.
8.6.7. В случае получения невалидных результатов требуется повторное
исследование образца, начиная с этапа экстракции ДНК В случае воспроизводимого
результата рекомендуется повторно провести взятие и исследование биологического
материала.
8.7. Диагностическое значение полученного результата
ПЦР-исследование является одним из методов всестороннего обследования
пациента, на основании которых лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает
мероприятия по лечению пациента. Результаты, полученные при использовании
набора, следует рассматривать и интерпретировать в сочетании с данными других
клинических и лабораторных исследований.
9. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
9.1. Предел обнаружения^^
Предел обнаружения набора «АмплиПрайм® NCM(T)» был определен с
использованием пробит-анализа с 95%-ой доверительной вероятностью (см. таблицу
11).
Значения характеристики, указанные в таблице 11, достигаются при соблюдении
правил, указанных в разделе «Исследуемый материал».
Предел обнаружения - 95%-ое положительное пороговое значение концентрации (концентрация ДНК
определяемого микроорганизма, при которой 95% тестов дают положительный результат).
Версия 18.02.19 26
--- стр. 27 ---
Таблица 11
Предел обнаружения набора
Микроорганизм Предел обнаружения по
Probit 95%, ГЭ/мл
95%-ый доверительный
интервап, ГЭ/мл
N. gonorrhoeae 5x102 3,09x102 - 8,77x102
С. trachomatis 5x102 2,86x102 - 7,88x102
М. genitalium 1x10^ 6 .9 6 x1 0 2 -1 ,7 0 x1 0^
Т. vaginalis 50 3 ,6 x 1 0 '-7 ,6 x 1 0 '
9.2. Линейный диапазон измерения и предел измерения
Диапазон, в котором набор «АмплиПрайм® NCM(T)» дает линейный ответ,
приведен в таблице 12. Предел измерения набора является нижним пределом
линейного диапазона измерения набора.
Указанные значения характеристики достигаются при соблюдении правил,
указанных в разделе «Исследуемый материал».
Таблица 12
Линейный диапазон измерения набора
Микроорганизм Линейный диапазон измерения, ГЭ/мл
N. gonorrhoeae
2 x 1 0 ^-1 x 1 0 "С. trachomatis
М. genitalium
Т. vaginalis 2 x 1 0 ^-1 x 1 0 "
9.3. Аналитическая специфичность
Набор «АмплиПрайм® NCM(T)» обнаруживает фрагменты ДНК
Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis. Mycoplasma genitalium и
Trichomonas vaginalis.
Аналитическая специфичность набора оценивалась тестированием ДНК
микроорганизмов (см. таблицу 13) и геномной ДНК человека. ДНК микроорганизмов в
концентрации не менее 1x10® ГЭ/мл и геномную ДНК человека в концентрации
1 мкг/мл вносили в образцы биологического материала, не содержащие
определяемые с помощью набора микроорганизмы.
Дополнительно подтверждалось отсутствие перекрестных реакций между
выявляемыми микроорганизмами при тестировании ДНК микроорганизмов в
концентрации не менее 1x10^ ГЭ/мл.
Количество геномных эквивалентов микроорганизма (ГЭ):
- в биологическом материале (соскобный материал и отделяемое слизистых оболочек урогенитального
тракта, ротоглотки, прямой кишки, конъюнктивы), помещенном в транспортную среду, в пересчете на
1 мл;
- в пересчете на 1 мл мочи или секрета предстательной железы.
--- стр. 28 ---
Микроорганизмы, ДНК которых использовалась для оценки аналитической
специфичности
Таблица 13
Микроорганизмы
Treponema pallidum Enterococcus faecium
Toxoplasma gondii Neisseria flava
Herpes simplex virus type 1 Neisseria subfiava
Herpes simplex virus type 2 Neisseria sicca
Human papilloma virus 16 Neisseria mucosa
Cytomegalovirus Staphylococcus aureus
Gardnerella vaginalis Streptococcus pneumoniae
Mycoplasma hominis Lactobacillus easel
Escherichia coli Ureaplasma parvum
Candida albicans Ureaplasma urealyticum
При тестировании образцов ДНК вышеперечисленных микроорганизмов и
геномной ДНК человека, а также ДНК выявляемых микроорганизмов в высоких
концентрациях с использованием набора перекрестных реакций выявлено не было.
9.4. Воспроизводимость и повторяемость измерения
Воспроизводимость и повторяемость измерений с помощью набора
«АмплиПрайм® NCM(T)» оценивали путем тестирования модельных образцов
биологического материала, содержащих ДНК выявляемых микроорганизмов в трех
диапазонах концентраций (см. таблицы 14 и 15). Модельные образцы были
приготовлены разведением стандартных образцов предприятия, содержащих ДНК
выявляемых микроорганизмов, в биологическом материале, не содержащем ДНК
указанных микроорганизмов и каких-либо других возбудителей ИППП. Ка>кдый
образец проходил все этапы исследования (экстракцию ДНК, амплификацию ДНК и
детекцию результатов).
Тестирование каждого разведения для оценки повторяемости проводилось в 40
повторах, для оценки воспроизводимости - в 80 повторах.
Таблица 14
Повторяемость измерения
Микроорганизм Исходное значение
концентрации, ГЭ/мл
Среднее измеренное
значение
kohM M M HM IL iBBkh
Стандартное
отклонение
fSD Lh fc
Коэффициент
вариации (CV),
%
N. gon orrh oeae
5x103-1x10^
3,90 0,11 2.8
C. trachom atis 3,87 0.10 2,6
M. genitalium 3,87 0,11 2,8
T. vaginalis 3,90 0,11 2,7
N. gon orrh oeae
5x10*- 1x10^
4,89 0,09 1.9
C. trachom atis 4,87 0,11 2,2
Версия 18.02.19 27
--- стр. 29 ---
Микроорганизм Исходное значение
концентрации, ГЭ/мл
Среднее измеренное
значение
Стандартное
отклонение
iS D M M »
Коэффициент
вариации (CV),
%
М. genitalium 4,86 0,11 2,2
Т vaginalis 4.88 0,12 2,5
N. gonorrhoeae
5x10^-1x10®
5,86 0,12 2,0
С. trachomatis 5,85 0,13 2,3
М. genitalium 5,87 0,12 2,1
Т vaginalis 5,88 0,11 1.9
Таблица 15
Воспроизводимость измерения
Микроорганизм Исходное значение
концентрации, ГЭ/мл
Среднее измеренное
значение
конИ М М И Ш и. Ё В Л л
Стандартное
отклонение
Коэффициент
вариации (CV),
%
N. gonorrhoeae
5x103-1x1 O '*
3,87 0,11 2,8
С. trachomatis 3,86 0,11 2,9
М. genitalium 3,87 0,11 2,8
Т. vaginalis 3,89 0,10 2,7
N. gonorrhoeae
5x10“ - 1x10®
4,88 0,09 1,9
С. trachomatis 4,87 0,12 2,4
М. genitalium 4,85 0,11 2.2
Т. vaginalis 4,89 0,12 2,4
N. gonorrhoeae
5x10®-1x10®
5,85 0,13 2.2
С. trachomatis 5,85 0,14 2,4
М. genitalium 5,86 0,14 2.3
Т. vaginalis 5,87 0,12 2,1
9.5. Правильность измерения
Правильность измерения с помощью набора «АмплиПрайм® NCM(T)» была
определена путем тестирования стандартных образцов предприятия в 104 повторах
(см. таблицу 16).
Таблица 16
Правильность измерения
Микроорганизм Среднее значение
измерения, 1одю
Установленное значение
концентрации, 1одю
Система
1одю
тическая
%
N. gonorrhoeae 4,81 4,70 0,11 2,31
С. trachomatis 4,78 4,70 0,08 1,70
М. genitalium 4,72 4,70 0,02 0,51
Т vaginalis 4,80 4,70 0,10 2,20
9.6. Диагностическая чувствительность и диагностическая специфичность
Для определения диагностических характеристик набора «АмплиПрайм® NCM(T)»
были использованы 500 образцов соскобного материала и отделяемого слизистых
Версия 18.02.19 28
--- стр. 30 ---
оболочек урогенитального тракта (СО УТ), 300 образцов отделяемого слизистой
оболочки прямой кишки (ОСО ПК), 300 образцов отделяемого слизистой оболочки
ротоглотки (ОСО Р), 300 образцов отделяемого конъюнктивы, 350 образцов секрета
предстательной железы (СПЖ), 500 образцов мочи, полученных от пациентов с
подозрением на урогенитальную инфекцию, с вагинитом, цервицитом, уретритом,
проктитом, конъюнктивитом, фарингитом и простатитом.
В качестве референтного метода, с помощью которого устанавливали наличие или
отсутствие ДНК определяемых микроорганизмов, использовался набор реагентов для
определения ДНК Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium
и Trichomonas vaginalis методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) для
диагностики in vitro «АмплиПрайм® Л/СМГ» (РУ № ФСР 2015/3168).
Результаты тестирования набора в сравнении с референтным методом приведены
в таблице 17. ДНК М. genitalium и Т. vaginalis не были выявлены в образцах
отделяемого слизистых оболочек прямой кишки, ротоглотки и конъюнктивы, а ДНК
С. trachomatis в образцах отделяемого слизистой оболочки ротоглотки в связи с тем,
что данные места взятия биологического материала не являются распространенными
областями локализации указанных микроорганизмов.
Таблица 17
Результаты тестирования образцов биологического материала с помощью
набора «АмплиПрайм® NCM(T)»
Исследуемые Результаты тестирования
Тип Коли
чество
«Ампли
Прайм*
NCM(T)»
Референтный метод
N. gonorrhoeae С. trachomatis М. genitalium Т. vaginalis
положи
тельных
отрица
тельных
положи
тельных
отрица
тельных
положи
тельных
отрица
тельных
положи
тельных
отрица
тельных
СОУТ 500
положи
тельных 104 0 102 0 108 0 101 0
отрица
тельных 0 396 0 398 0 392 0 399
ОСО
ПК 300
положи
тельных 101 0 103 0 0 0 0 0
отрица
тельных 0 199 0 197 0 300 0 300
Моча 500
положи
тельных 102 0 115 0 108 0 104 0
отрица
тельных 0 398 0 385 0 392 0 396
ОСОР 300
положи
тельных 105 0 0 0 0 0 0 0
отрица
тельных 0 195 0 300 0 300 0 300
Отделя
емое
конъюн
ктивы
300
положи
тельных 101 0 106 0 0 0 0 0
отрица
тельных 0 199 0 194 0 300 0 300
СПЖ 350
положи
тельных 109 0 113 0 113 0 111 0
отрица
тельных 0 241 0 237 0 237 0 239
Версия 18.02.19 29
--- стр. 31 ---
Значения диагностической специфичности и диагностической чувствительности
набора «АмплиПрайм® NCM(T)» с доверительной вероятностью 95 %, рассчитанные,
исходя из полученных данных, приведены в таблицах 18 и 19 соответственно.
Таблица 18
Диагностическая специфичность набора
Тип образцов Диагностическая специфичность, %
N. gonorrhoeae С. trachomatis М. genitaiium Г. vaginalis
соскобный материал и
отделяемое слизистых оболочек
урогенитального тракта
9 9,2-100 9 9,3-100 9 9,2-100 9 9,3-100
отделяемое слизистой оболочки
прямой кишки 9 8,5-100 9 8,5-100 9 9,0-100 9 9,0 -1 00
моча 9 9,3-100 9 9,2 -1 00 9 9,2 -1 00 9 9,2 -1 00
отделяемое слизистой оболочки
РОТОГЛОТКИ
9 8,5-100 9 9,0 -1 00 9 9,0 -1 00 9 9,0 -1 00
отделяемое конъюнктивы 9 8,5-100 9 8,5-100 9 9,0 -1 00 9 9,0 -1 00
секрет предстательной железы 9 8,8-100 9 8,7 -1 00 9 8,7 -1 00 9 8,8 -1 00
Таблица 19
Диагностическая чувствительность набора
Тип образцов Диагностическая чувствительность, %
N. gonorrhoeae С. trachomatis М. genitaiium Т. vaginalis
соскобный материал и
отделяемое слизистых оболочек
урогенитального тракта
9 7,2 -1 00 9 7,1-100 9 7,3 -1 00 9 7,1 -1 00
отделяемое слизистой оболочки
прямой кишки 9 7,1-100 97,1 - 100 - -
моча 9 7,1-100 9 7,4-100 9 7,3 -1 00 9 7,2 -1 00
отделяемое слизистой оболочки
ротоглотки 9 7,2 -1 00 - - -
отделяемое конъюнктивы 9 7,1 -1 00 9 7,2 -1 00 - -
секрет предстательной железы 9 7,3 -1 00 9 7,4 -1 00 9 7,4 -1 00 9 7,3 -1 00
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
10.1. срок годности
Срок годности набора составляет 12 месяцев от даты изготовления. После вскрытия
реагенты использовать до истечения срока годности набора. Набор с истекшим сроком
годности применению не подлежит.
10.2. Транспортирование
Набор транспортировать при температуре от 2 до 8 “С всеми видами крытых
транспортных средств в термоконтейнерах с хладоэлементами или в
авторефрижераторах. Не допускается замораживание реагентов.
Допускается транспортирование при температуре от 8 до 25 ''С не более 3 суток.
Набор, транспортированный с нарушением указанного температурного режима,
применению не подлежит.
Версия 18.02,19 30
--- стр. 32 ---
10.3. Хранение
Набор хранить при температуре от 2 до 8 °С в защищенном от света месте в
течение всего срока годности набора. Не допускается замораживание реагентов.
Реагенты после вскрытия хранить в тех же условиях, что и реагенты до вскрытия.
Невскрытые и вскрытые реагенты стабильны в течение срока годности, указанного на
этикетке, при соблюдении указанных условий хранения. При использовании формы
выпуска 2 реакционная смесь, приготовленная из ПЦР-смеси NCM(T) и Буфера А,
хранению не подлежит.
Набор, хранившийся с нарушением указанного режима хранения, применению не
подлежит.
11. ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
Производитель гарантирует соответствие характеристик набора требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение указанного
срока годности при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и
применения.
Рекламации на качество набора «АмплиПрайм® NCM(T)» направлять в адрес
производителя ООО «НекстБио»: 111394, г. Москва, ул. Полимерная, 8 стр. 2, тел.
(495) 620-08-73, e-mail: info@nextbio.ru .
При выявлении нежелательных реакций при использовании набора, фактов и
обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при обращении и эксплуатации набора, рекомендуется направить
сообщение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную государственную
регулирующую организацию (в Российской Федерации - Федеральная служба по
надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Консультацию по работе с набором, а также по вопросам, касающимся качества
набора, можно получить по контактам, указанным на официальном сайте
Производителя:
www.nextbio.ru .
12. БИБЛИОГРАФИЯ
1. Pavsic J.. Devonshire А., BlejecA., atal. Inter-laboratory assessment of different digital
PCR platforms for quantification of human cytomegalovirus DNA. Analytical and
Bioanalytical Chemistry 2017; 409: 2601-2614.
2. Hayden R.T., Gu Z., Sam S.S., at al. Comparative evaluation of three commercial
quantitative cytomegalovirus standards by use of digital and real-time PCR. Journal of
Clinical Microbiology 2015; 53(5): 1500-1505.
Версия 18.02.19 31
--- стр. 33 ---
13.СИМВ0ЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДОКУМЕНТАЦИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
REF Номер по каталогу
iJ
Изготовитель
LOT Код партии Дата изготовления
IVD
Медицинское изделие для
диагностики in vitro 2
Использовать до
Содержимого достаточно для
проведения п-количества
тестов
Температурный диапазон
□ а
Обратитесь к инструкции по
применению
л1/.
ж
Не допускать попадания
солнечного света
Qenrua 1А П9 10 32