Набор реагентов для дифференциального выявления ДНК вирусов папилломы человека 68, 73 и 82 типов методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (РеалБест ДНК ВПЧ 68/73/82) по ТУ 9398-430-23548172-2013 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- ЗЕРЖДЕНА 1казом Росздравнадзора «УТВЕРЖДАЮ» Е енеральный директор 20 г. № М.Д. Хусаинов 2013 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для дифференциального выявления ДНК вирусов папилломы человека 68, 73, 82 типов методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени Набор реагентов «РеалБест ДНК ВПЧ 68/73/82» предназначен для дифференциально- выявления ДНК вирусов папилломы человека 68, 73 и 82 типов, методом полимеразной шой реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в ре ме реального времени. Возможно использование данного набора для количественного определения ДНК ви гов папилломы человека 68, 73 и 82 типов в клинических образцах при сочетании с набо- м РеалБест ДНК ВПЧ ВКР генотип количественный (комплект 1). Комплект 1 предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами: 3 1Сус1ег», «К25 Юус1ег» и «СРХ96» (фирма Вю-К.а<3, США), «ДТ-96» (ООО «НПО ДНК- хнология», Россия) или их аналогами. Набор реагентов может быть применён в клинической практике для анализа шнического материала. Выделение ДНК вирусов папилломы человека 68, 73 и 82 типов из клинических проб роводится с помощью наборов «РеалБест ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», РеалБест ДНК-экстракция 2», «РеалБест ДНК-экстракция 3» или «РеалБест экстракция Комплект 1 рассчитан на проведение анализа 96 образцов, включая контрольные образцы. «РеалБест ДНК ВПЧ 68/73/82» (комплект 1) 1. НАЗНАЧЕНИЕ 00». Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором ю производству Ткачевым В. К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В. --- стр. 2 --- 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип метода. Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фраг мента ДНК, заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями, достройка полинуклеотидных по следовательностей с этих праймеров Тац-полимсразой. В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуоресцен ции в каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря ис пользованию специфичного для данного участка ДНК возбудителя инфекции гибридизаци- онных ДНК- зондов, которые в ходе реакции связываются с одной из цепей ДНК. обеспечи вая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5' конце флуорес центный краситель, а на 3’ конце - гаситель флуоресценции, значительно снижающий ин тенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благо даря 5’-3’ нуклеазной активности Тац ДНК-полимеразы, зонд расщепляется с 5’ конца и про исходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зави сит от количества образовавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуорес ценции определяется исходным количеством бактериальной ДНК в образце. Учет эффективности выделения ДНК из образцов обеспечивается выделением ДНК ВПЧ 68/73/82 из клинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним кон трольным образцом (ВКО). 2.2. Состав набора: - положительный контрольный образец (ПКО) - 1 пробирка (1,0 мл); - готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС), лиофилизированная - 96 пробирок (12 стрипов по 8 пробирок). Набор дополнительно комплектуется: - оптической плёнкой - 1,5 листа. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Чувствительность - определение 100 копий ДНК ВПЧ 68, ДНК ВПЧ 73, ДНК ВПЧ 82 в стандартных образцах предприятия - 100%. 3.2. Специфичность определения ДНК ВПЧ 68, ДНК ВПЧ 73, ДНК ВПЧ 82 (по стан дартной панели предприятия отрицательных ДНК-экстрактов) - 100%. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Вшшание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к искажению результатов ПЦР. 2 --- стр. 3 --- 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 № 4н ). 4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с икроорганизмами Ш-1У групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных элезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы ^деления ДНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора- эрий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, адержащим микроорганизмы НУ групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе- гменного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За- рещается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме реального ремени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для пипеток. 4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении разных образцов. 4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности аминарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных Ф ламп в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами езинфицирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор ДП-2Т; 1-3% раствор «Диабак»; ,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «Мистраль»). 4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфици- Мощими средствами с последующей утилизацией. 4.10. Утилизацию или уничтожение, дезинфекцию наборов реагентов следует прово рь в соответствии с СанПин 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к вращению с медицинскими отходами» и МУ-287-113 «Методические указания гю дезин секции. предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения». 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ - амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени: «К) 1Сус1ег», «К)5 1Сус1ег», «СРХ96» (фирма Вю-КжЕ США), «ДТ-96» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия) или их аналог; - ПЦР-бокс или отдельный стол, освещаемый УФ-лампой (например, «ЦиклоТемп» фирмы СГ1 «РТС», Россия); - холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С; - микроцентрифуга типа «ЕррепбогРМтБрт» (фирма ЕррепбогГ, Еермания); - пипетки полуавтоматические (дозаторы механические) одноканальные с переменным объ ёмом, со сменными наконечниками (фирма Ленпипет, Россия; фирма ВюНй. Финляндия); 3 --- стр. 8 --- Прошнуровано, пронумеровано и скреплено п е ч а м л и с т о в --- стр. 9 --- УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ» Приказом Росздравнадзора Еенеральный директор для дифференциального выявления ДНК вирусов папилломы человека 68, 73 и 82 типов методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РеалБест ДНК ВПЧ 68/73/82» (комплект 2) 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов «РеалБест ДНК ВПЧ 68/73/82» предназначен для дифференциального вы- явления ДНК вируса папилломы человека 68, 73 и 82 типов методом полимеразной цепной реак ции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ГИДР в режиме реального времени. Возможно использование данного набора для количественного определения ДНК ви русов папилломы человека 68, 73 и 82 типов в клинических образцах при сочетании с набо ром РеалБест ДНК ВНЧ ВКР генотип количественный (комплект 2). Выделение ДНК из клинических проб проводится с помощью наборов: «РеалБест ДНК- ' экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «РеалБест ДНК-экстракция 2». «РеалБест ДНК- экстракция 3» и «РеалБест экстракция 100». Комплект 2 предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами как роторного типа: «Ко1ог-Оепе 3000», «КоГог-Оепе 6000» (фирма СогЬеО КезеагсЬ, Австралия), «Ко1ог-Оепе О» (фирма СДацеп, Германия), так и планшетного типа: «К) 1Сус1ег», «КД5 1Сус1ег», «СГХ96», «Д'Г-96» или их аналогами. Комплект 2 рассчитан на проведение анализа 100 образцов, включая контрольные образцы. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип метода. Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фраг мента ДНК, заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями, достройка полинуклеотидных по- Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором по производству Ткачевым В. К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А. В. --- стр. 10 --- едовательностей с этих праймеров Тац-полимеразой. В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуоресцен- и в каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря по льзованию специфичного для данного участка ДНК ВГ1Ч 68, ДНК ВПЧ 73 и ДНК ВГ1Ч 82 бридизационных ДНК-зондов, которые в ходе реакции связываются с одной из цепей ДНК, еспечивая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5’ конце уоресцентный краситель, а на 3’ конце - гаситель флуоресценции, значительно спижаю- га интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, агодаря 5’-3’ нуклеазной активности Гац ДНК-полимеразы, зонд расщепляется с 5’ конца происходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта акции к возрастанию сигнала флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуо- сценции зависит от количества образовавшихся специфических ампликонов и динамика на- :тания флуоресценции определяется исходным количеством бактериальной ДНК в образце. Учет эффективности выделения ДНК из образцов обеспечивается выделением ДНК клинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним контрольным разном (ВКО). 2.2. Состав набора: - положительный контрольный образец (ПКО) - 1 пробирка (1,0 мл); - реакционная смесь для ПЦР (РС), лиофилизированная - 10 пробирок, каждая на 10 гре делений; - раствор для восстановления (РВ) - 2 флакона (по 2.0 мл). 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Чувствительность - определение 100 копий ДНК ВПЧ 68. ДНК ВПЧ 73 и ДНК 'ПЧ 82 в стандартных образцах предприятия - 100%. 3.2. Специфичность определения ДНК ВПЧ 68. ДНК ВПЧ 73 и ДНК ВПЧ 82 (по стан- 1артной панели предприятия отрицательных ДНК-экстрактов) - 100%. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требовании может привести к шажению результатов ПЦР. 4.1. Потенциальный риск применения набора-класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 №4н). 4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами 111-1V групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы выделения ДНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора- 2 --- стр. 11 --- орий. использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, эдержащим микроорганизмы 1-1У групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе- еменного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За- рещается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме реального эемени необходимо использовать только одноразовые наконечники с филыром для пипеток. 4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз- ых образцов. 4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности шинарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных Ф ламп в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами ^инфицирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор ДГ1-2Т; 1-3% раствор «Диабак»; ,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «Мистраль»), 4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфици- рощими средствами с последующей утилизацией. 4.10. Утилизацию или уничтожение, дезинфекцию наборов реагентов следует прово рь в соответствии с СанПин 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к Вращению с медицинскими отходами» и МУ-287-113 «Методические указания по дезин- екции. пред стерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения». 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ - амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени роторног о типа: Ко*ог-Оепе 3000», «КоЮг-Оепс 6000» (фирма СогЬеП КезеагсЬ, Австралия), «Ко1ог-Оепе О» (фирма ^еп. Г ермания) или планшетного типа: «КЗ 1Сус1ег», «К35 1Сус1ег», «СРХ96» (фирма Вю-Кас!, ША), «ДТ-96» (ООО «НПО ДПК-Технология», Россия) или их аналог; - ПЦР-бокс или отдельный стол, освещаемый УФ-лампой (например, «Цикло'Гемп» «рмы СП «РТС», Россия); - холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С; - микроцентрифуга типа «Ерреп<ЗогГМ1ш8рщ» (фирма ЕррепскчТ, Германия); - пипетки полуавтоматические (дозаторы механические) одноканальные с переменным объе кта) сменными наконечниками (фирма Ленпипет, Россия; фирма ВюНК, Финляндия); [ - перчатки медицинские одноразовые нестерильные неопудренные латексные или не- шреновые (перчатки «ЫеоТоисН», фирма АпзеП НеаНЬСаге, Германия); | - одноразовые наконечники для пипеток с защитным фильтром /аэрозольным барье- ((фирма ПппПр, Финляндия);хж 3 --- стр. 18 --- ТВЕРЖДЕНА 1риказом Росздравнадзора т 20 г. № «УТВЕРЖДАЮ» Еенеральный директор ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для дифференциального выявления ДНК вирусов папилломы человека 68, 73, 82 типов методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РеалБест ДНК ВИЧ 68/73/82» (комплект 1) 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов «РеалБест ДНК ВПЧ 68/73/82» предназначен для дифференциально- выявления ДНК вирусов папилломы человека 68, 73 и 82 типов, методом полимеразной пной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в ре- име реального времени. Возможно использование данного набора для количественного определения ДНК б и р с о в папилломы человека 68, 73 и 82 типов в клинических образцах при сочетании с набо- )м РеалБест ДНК ВПЧ ВКР генотип количественный (комплект 1). Комплект 1 предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами: Д ЮуНег», «1(^5 1Сус1ег» и «СРХ96» (фирма Вю-Ка<3, США), «ДТ-96» (ООО «НПО ДНК- ехнология», Россия) или их аналогами. Набор реагентов может быть применён в клинической практике для анализа цинического материала. Выделение ДНК вирусов папилломы человека 68, 73 и 82 типов из клинических проб роводится с помощью наборов «РеалБест ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», РеалБест ДНК-экстракция 2», «РеалБест ДНК-экстракция 3» или «РеалБест экстракция Комплект 1 рассчитан на проведение анализа 96 образцов, включая контрольные образцы. Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Вест»: Директором опроизводству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В. --- стр. 19 --- X ( 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип метода. Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фраг- тга ДНК, заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг шмеров с комплементарными последовательностями, достройка полинуклеотидных по- !довательностей с этих праймеров Тац-полимеразой. В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуоресцен- и в каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря ис- льзованию специфичного для данного участка ДНК возбудителя инфекции гибридизаци- ных ДНК- зондов, которые в ходе реакции связываются с одной из цепей ДНК, обеспечи- я также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5’ конце флуорес- :нтный краситель, а на 3’ конце - гаситель флуоресценции, значительно снижающий ин- нсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благо- фя 5’-3’ нуклеазной активности Тац ДНК-полимеразы, зонд расщепляется с 5’ конца и нро- сходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к озрастанию сигнала флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зави- ет от количества образовавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуорес- внции определяется исходным количеством бактериальной ДНК в образце. Учет эффективности выделения ДНК из образцов обеспечивается выделением ДНК ВП Ч 68/73/82 из клинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним кон- фольным образцом (ВКО). 2.2. Состав набора: - положительный контрольный образец (ПКО) - 1 пробирка (1,0 мл); - готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС), лиофилизированная - 96 пробирок (12 стрипов по 8 пробирок). Набор дополнительно комплектуется: -оптической плёнкой - 1,5 листа. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Чувствительность - определение 100 копий ДНК ВПЧ 68, ДНК ВПЧ 73, ДНК ВПЧ 82 в стандартных образцах предприятия - 100%. 3.2. Специфичность определения ДНК ВПЧ 68, ДНК ВПЧ 73, ДНК ВПЧ 82 (по стан дартной панели предприятия отрицательных ДНК-экстрактов) - 100%. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к искажению результатов ПЦР. 2 --- стр. 20 --- 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 № 4н). 4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с кроорганизмами Ш-1У групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных иезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы деления ДНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора- рий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, держащим микроорганизмы 1-ТУ групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе- менного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За- вщается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме реального вмени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для пипеток. 4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении разных образцов. 4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности шинарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных Ф ламп в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами ^инфицирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор ДП-2Т; 1-3% раствор «Диабак»; 1,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «Мистраль»). 4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфици- )ующими средствами с последующей утилизацией. 4.10. Утилизацию или уничтожение, дезинфекцию наборов реагентов следует прово- ить в соответствии с СанПин 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к вращению с медицинскими отходами» и МУ-287-113 «Методические указания по дезин- |екции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения». 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ - амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени: «К) 1Сус1ег», «И35 1Сус1ег», «СРХ96» (фирма Вю-К.ас1, США), «ДТ-96» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия) или их аналог; - ПЦР-бокс или отдельный стол, освещаемый УФ-лампой (например, «ЦиклоТемп» фирмы СП «РТС», Россия); - холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С; - микроцентрифуга типа «ЕррепбогГ МЫЗрт» (фирма ЕррепбоЛ", Германия); - пипетки полуавтоматические (дозаторы механические) одноканальные с переменным объ ём ом , со сменными наконечниками (фирма Ленпипет, Россия; фирма ВюЬй, Финляндия); 3 --- стр. 25 --- --- стр. 26 --- УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ» Приказом Росздравнадзора Еенеральный директор для дифференциального выявления ДНК вирусов папилломы человека 68, 73 и 82 типов методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РеалБест ДНК ВПЧ 68/73/82» (комплект 2) 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов «РеалБест ДНК ВПЧ 68/73/82» предназначен для дифференциального вы- вления ДНК вируса папилломы человека 68, 73 и 82 типов методом полимеразной цепной реакции рЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени. Возможно использование данного набора для количественного определения ДНК виру- »в папилломы человека 68, 73 и 82 типов в клинических образцах при сочетании с набором рлБест ДНК ВПЧ ВКР генотип количественный (комплект 2). Выделение ДНК из клинических проб проводится с помощью наборов: «РеалБест ДНК- пресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «РеалБест ДНК-экстракция 2», «РеалБест ДНК-в кстракция 3» и «РеалБест экстракция 100». Комплект 2 предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами как оторного типа: «Ко1ог-Оепе 3000», «Ро1ог-Оепе 6000» (фирма СогЬеП КезеагсЬ, Австралия), Ко1ог-Оепе (Д> (фирма (Дацеп. Германия), так и планшетного типа: «1(3 1Сус1ег», «И35 К’ускг». РХ96», «ДТ-96» или их аналогами. Комплект 2 рассчитан на проведение анализа 100 образцов, включая контрольные образцы. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА «с, 2.1. Принцип метода. Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фраг- Ьнта ДНК, заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг шмеров с комплементарными последовательностями, достройка полинуклеотидных после- вательносгей с этих праймеров Тац-полимеразой. I Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором производству Ткачевым В. К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А В. --- стр. 27 --- В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуоресцен- в каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря ис- >зованию специфичного для данного участка ДНК ВПЧ 68, ДНК ВПЧ 73 и ДНК ВПЧ 82 шдизационных ДНК-зондов, которые в ходе реакции связываются с одной из цепей ДНК, печивая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5’ конце эресцентный краситель, а на 3’ конце - гаситель флуоресценции, значительно снижаю- интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, ■одаря 5’-3’ нуклеазной активности Тая ДНК-полимеразы, зонд расщепляется с 5’ конца юисходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта :ции к возрастанию сигнала флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуо- (енции зависит от количества образовавшихся специфических ампликонов и динамика на- ания флуоресценции определяется исходным количеством бактериальной ДНК в образце. Учет эффективности выделения ДНК из образцов обеспечивается выделением ДНК шинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним контрольным 13ЦОМ (ВКО). 2.2. Состав набора: - положительный контрольный образец (ПКО) - 1 пробирка (1,0 мл); - реакционная смесь для ПЦР (РС), лиофилизированная - 10 пробирок, каждая на 10 еделений; - раствор для восстановления (РВ) - 2 флакона (по 2,0 мл). 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Чувствительность - определение 100 копий ДНК ВПЧ 68, ДНК ВПЧ 73 и ДНК Ч 82 в стандартных образцах предприятия - 100%. 3.2. Специфичность определения ДНК ВПЧ 68, ДНК ВПЧ 73 и ДНК ВПЧ 82 (по стан иной панели предприятия отрицательных ДНК-экстрактов) - 100%. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к кажению результатов ПЦР. 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (ГОСТ Р 51609-2000). 4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с псроорганизмами Ш-1У групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных лезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы деления ДНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора- 2 --- стр. 28 --- 1ИЙ, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, [ержащим микроорганизмы 1-1У групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе- 1енного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За- щается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме реального мени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для пипеток. 4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз- х образцов. 4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности шнарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных ) ламп в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами 1инфицирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор ДП-2Т; 1-3% раствор «Диабак»; % раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «Мистраль»), 4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфици- ющими средствами с последующей утилизацией. 4.10. Утилизацию или уничтожение, дезинфекцию наборов реагентов следует прово- ть в соответствии с СанПин 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к ращению с медицинскими отходами» и МУ-287-113 «Методические указания по дезин- жции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения». 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ - амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени роторного типа: 1о1ог-Оепе 3000», «КоЮг-Оепе 6000» (фирма СогЬей КезеагсЬ, Австралия), «Ко1ог-Оепе С» (фирма и§еп, Германия) или планшетного типа: «КЗ 1Сус1ег», «К)5 1Сус1ег», «СРХ96» (фирма Вю-Каб, (ПА), «ДТ-96» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия) или их аналог; I - ПЦР-бокс или отдельный стол, освещаемый УФ-лампой (например, «ЦиклоТемп» ирмы СП «РТС», Россия); -холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С; - микроцентрифуга типа «ЕррепёогГ Мпп8рт» (фирма ЕрретЗоД, Германия); [ - пипетки полуавтоматические (дозаторы механические) одноканальные с переменным объе- ю м, со сменными наконечниками (фирма Ленпипет, Россия; фирма ВюЬй, Финляндия); - перчатки медицинские одноразовые нестерильные неопудренные латексные или копреновые (перчатки «НеоТоисй», фирма АпзеП НеаЙЬСаге, Германия); - одноразовые наконечники для пипеток с защитным фильтром /аэрозольным барье- ж1 (фирма ИппТСр, Финляндия); 3 --- стр. 35 --- ТВЕРЖДЕНА риказом Росздравнадзора г 20 г. № «УТВЕРЖДАЮ» Еенеральный директор ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для дифференциального выявления ДНК вирусов папилломы человека 68, 73, 82 типов методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РеалБест ДНК ВИЧ 68/73/82» (комплект 1) 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов «РеалБест ДНК ВПЧ 68/73/82» предназначен для дифференциально го выявления ДНК вирусов папилломы человека 68, 73 и 82 типов, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в ре жиме реального времени. Возможно использование данного набора для количественного определения ДНК ви русов папилломы человека 68, 73 и 82 типов в клинических образцах при сочетании с набо ром РеалБест ДНК ВПЧ ВКР генотип количественный (комплект 1). Комплект 1 предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами: «К} Юус1ег», «К)5 1Сус1ег» и «СРХ96» (фирма Вю-Каё, США), «ДТ-96» (ООО «НПО ДНК- Технология», Россия) или их аналогами. Набор реагентов может быть применён в клинической практике для анализа клинического материала. Выделение ДНК вирусов папилломы человека 68, 73 и 82 типов из клинических проб I проводится с помощью наборов «РеалБест ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», ь «РеалБест ДНК-экстракция 2», «РеалБест ДНК-экстракция 3» или «РеалБест экстракция 100». Комплект 1 рассчитан на проведение анализа 96 образцов, включая контрольные образцы. Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором юпроизводству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В. --- стр. 36 --- 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип метода. Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фраг- ята ДНК, заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг тймеров с комплементарными последовательностями, достройка полинуклеотидных по- щовательностей с этих праймеров Тац-полимеразой. В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуоресцен- и в каждом цикле ПНР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря по льзованию специфичного для данного участка ДНК возбудителя инфекции гибридизаци- ных ДНК- зондов, которые в ходе реакции связываются с одной из цепей ДНК, обеспечи- II также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5’ конце флуорес- нтный краситель, а на 3’ конце - гаситель флуоресценции, значительно снижающий ин- нсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благо- ря 5’-3’ нуклеазной активности Тац ДНК-полимеразы, зонд расщепляется с 5’ конца и про ходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к 'Зрастанию сигнала флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зави- гг от количества образовавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуорес- :нции определяется исходным количеством бактериальной ДНК в образце. Учет эффективности выделения ДНК из образцов обеспечивается выделением ДНК ПЧ 68/73/82 из клинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним кон- рольным образцом (ВКО). 2.2. Состав набора: - положительный контрольный образец (ПКО) - 1 пробирка (1,0 мл); - готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС), лиофилизированная - 96 пробирок (12 трипов по 8 пробирок). Набор дополнительно комплектуется: - оптической плёнкой - 1,5 листа. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Чувствительность - определение 100 копий ДНК ВПЧ 68, ДНК ВПЧ 73, ДНК ВП Ч 82 в стандартных образцах предприятия - 100%. 3.2. Специфичность определения ДНК ВПЧ 68, ДНК ВПЧ 73, ДНК ВПЧ 82 (по стан дартной панели предприятия отрицательных ДНК-экстрактов) - 100%. 3.3. Диагностическая чувствительность по ВПЧ 68: клинические исследования, проведенные в цух независимых учреждениях на 47 образцах биоматериала (соскобы со слизистой влагалища), по лученных от больных с цитологическими признаками папилломавирусной инфекции, показали 100% 2 --- стр. 37 --- У ствительность (интервал 94%-100%, с доверительной вероятностью 90%). Диагностическая чувствительность по ВПЧ 73: клинические исследования, проведенные в х независимых учреждениях на 51 образцах биоматериала (соскобы со слизистой влагалища), [ученных от больных с цитологическими признаками папилломавирусной инфекции, показали )% чувствительность (интервал 94%-100%, с доверительной вероятностью 90%). Диагностическая чувствительность по ВПЧ 82: клинические исследования, проведенные в /х независимых учреждениях на 21 образцах биоматериала (соскобы со слизистой влагалища), [ученных от больных с цитологическими признаками папилломавирусной инфекции, показали )% чувствительность (интервал 87%-100%, с доверительной вероятностью 90%). 3.4. Диагностическая специфичность по ВПЧ 68: клинические исследования, прове- иные в двух независимых учреждениях на 83 образцах биоматериала (соскобы со слизн ой влагалища), полученных от условно здоровых пациентов, больных с симптомами 1ПП и от пациентов, инфицированных ВПЧ других типов, показали 100% специфичность втервал 96%-100%, с доверительной вероятностью 90%). Диагностическая специфичность по ВПЧ 73: клинические исследования, проведенные двух независимых учреждениях на 79 образцах биоматериала (соскобы со слизистой вла- 1шща), полученных от условно здоровых пациентов, больных с симптомами ИППП и от щиентов, инфицированных ВПЧ других типов, показали 100% специфичность (интервал з%-100%, с доверительной вероятностью 90%). Диагностическая специфичность по ВПЧ 82: клинические исследования, проведенные двух независимых учреждениях на 109 образцах биоматериала (соскобы со слизистой лагалища), полученных от условно здоровых пациентов, больных с симптомами ИППП и д пациентов, инфицированных ВПЧ других типов, показали 100% специфичность (интер- ал97%-100%, с доверительной вероятностью 90%). 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к искажению результатов ПЦР. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 № 4н). 4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с шроорганизмами Ш-1У групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы выделения ДНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора торий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы 1-1У групп патогенности». 3 --- стр. 43 --- --- стр. 44 --- ТВЕРЖДЕНА 1риказом Росздравнадзора «УТВЕРЖДАЮ» Генеральный директор ЗАО «Вектор-Бесг» т 20 г. № по применени и н с М.Д. Хусаинов 2013 г. для дифференциального выявления ДНК вирусов папилломы человека 68, 73 и 82 типов методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РеалБест ДНК ВПЧ 68/73/82» (комплект 2) Набор реагентов «РеалБест ДНК ВПЧ 68/73/82» предназначен для дифференциального вы явления ДНК вируса папилломы человека 68, 73 и 82 типов методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени. Возможно использование данного набора для количественного определения ДНК ви русов папилломы человека 68, 73 и 82 типов в клинических образцах при сочетании с набо ром РеалБест ДНК ВПЧ ВКР генотип количественный (комплект 2). Выделение ДНК из клинических проб проводится с помощью наборов: «РеалБест ДПК- жспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «РеалБест ДНК-экстракция 2», «РеалБест ДНК- жтракция 3» и «РеалБест экстракция 100». Комплект 2 предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами как роторного типа: «Ко1ог-Оепе 3000», «Ко1ог-Оепе 6000» (фирма СогЬеИ КезеагсЬ, Австралия), «Ио1ог-Оепе 0» (фирма (Дауеп, Германия), так и планшетного типа: «КЗ !Сус1ег», «КД5 1Сус1ег», «СРХ96», «ДТ-96» или их аналогами. Комплект 2 рассчитан на проведение анализа 100 образцов, включая контрольные образцы. 2.1. Принцип метода. Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фраг мента ДНК, заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями, достройка полинуклеотидных по следовательностей с этих праймеров Тац-полимеразой. Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором по производству Ткачевым В. К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А. В. 1. НАЗНАЧЕНИЕ 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА --- стр. 45 --- В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуоресцен- 1 в каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря пе мзованию специфичного для данного участка ДНК ВПЧ 68, ДНК ВПЧ 73 и ДНК ВПЧ 82 ридизационных ДНК-зондов, которые в ходе реакции связываются с одной из цепей ДНК, спечивая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5’ конце /оресцентный краситель, а на 3’ конце - гаситель флуоресценции, значительно снижаю- й интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, го даря 5’-3’ нуклеазной активности Тац ДНК-полимеразы, зонд расщепляется с 5’ конца роисходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта кции к возрастанию сигнала флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуо- ценции зависит от количества образовавшихся специфических ампликонов и динамика астания флуоресценции определяется исходным количеством бактериальной ДНК в об- це. Учет эффективности выделения ДНК из образцов обеспечивается выделением ДНК клинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним контрольным шцом (ВКО). 2.2. Состав набора: - положительный контрольный образец (ПКО) - 1 пробирка (1,0 мл); - реакционная смесь для ПЦР (РС), лиофилизированная - 10 пробирок, каждая на 10 )еделений; - раствор для восстановления (РВ) - 2 флакона (по 2,0 мл). 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Чувствительность - определение 100 копий ДНК ВПЧ 68, ДНК ВПЧ 73 и ДНК 14 82 в стандартных образцах предприятия - 100%. 3.2. Специфичность определения ДНК ВПЧ 68, ДНК ВПЧ 73 и ДНК ВПЧ 82 (по стан- ртной панели предприятия отрицательных ДНК-экстрактов) - 100%. 3.3. Диагностическая чувствительность по ВПЧ 68: клинические исследования, проведенные в ух независимых учреждениях на 47 образцах биоматериала (соскобы со слизистой влагалища), полу- нных от больных с цитологическими признаками папилломавирусной инфекции, показали 100% чув- югельноаъ (интервал 94%-100%, с доверительной вероятностью 90%). Диагностическая чувствительность по ВПЧ 73: клинические исследования, проведенные в вух независимых учреждениях на 51 образцах биоматериала (соскобы со слизистой влагалища), олученных от больных с цитологическими признаками папилломавирусной инфекции, показали 00% чувствительность (интервал 94%-100%, с доверительной вероятностью 90%). Диагностическая чувствительность по ВПЧ 82: клинические исследования, проведенные в 2 --- стр. 46 --- х независимых учреждениях на 21 образцах биоматериала (соскобы со слизистой влагалища), ученных от больных с цитологическими признаками папилломавирусной инфекции, показали % чувствительность (интервал 87%-100%, с доверительной вероятностью 90%). 3.4. Диагностическая специфичность по ВПЧ 68: клинические исследования, прове- [ные в двух независимых учреждениях на 83 образцах биоматериала (соскобы со слизи- й влагалища), полученных от условно здоровых пациентов, больных с симптомами [ПП и от пациентов, инфицированных ВПЧ других типов, показали 100% специфичность [тервал 96%-100%, с доверительной вероятностью 90%). Диагностическая специфичность по ВПЧ 73: клинические исследования, проведенные рух независимых учреждениях на 79 образцах биоматериала (соскобы со слизистой вла- мща), полученных от условно здоровых пациентов, больных с симптомами ИППП и от циентов, инфицированных ВПЧ других типов, показали 100% специфичность (интервал %-100%, с доверительной вероятностью 90%). Диагностическая специфичность по ВПЧ 82: клинические исследования, проведенные двух независимых учреждениях на 109 образцах биоматериала (соскобы со слизистой агалища), полученных от условно здоровых пациентов, больных с симптомами ИППП и пациентов, инфицированных ВПЧ других типов, показали 100% специфичность (интер- л 97%-100%, с доверительной вероятностью 90%). 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требовании может привести к тжению результатов ПЦР. 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 № 4н). 4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с шкроорганизмами Ш-1У групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных юлезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы выделения ДНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора торий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы 1-1V групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За прещается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме реального врем ени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для пипеток. 3