Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М и G к Pneumocystis carinii "ПневмоцистоСтрип" по ТУ 9388-006-01897357-2008 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДЕНА Приказом Росздравнадзора от 200 г. № УТВЕРЖДАЮ» Государственного учреждения . Н.Ф. Гамалеи РАМН едгамал» ГУ НИИЭМ алей РАМН) А. Л.Г инцбург 200 г. ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М и G к Pneumocystis carinii «ПневмоцистоСтрип» Пневмоцистоз - заболевание, вызываемое P.carinii. Клинические проявления характеризуются тяжелыми интерстициальными пневмониями, нередко со смертельным исходом. Пневмоцистоз чаще поражает ослабленных детей, стариков и лиц молодого возраста со сниженным иммунным статусом. На распространение этой инфекции влияет экологическая обстановка в регионе, высокий радиационный фон и неполноценное питание с низким содержанием белка. 1.Н А ЗН А Ч Е Н И Е Н А БО РА Набор реагентов предназначен для выявления антител к антигену P.carinii в сыворотках крови больных людей с подозрением на пневмоцистоз и у здоровых при проведении эпидемиологических исследований. 2. Х А РА К Т Е РИ С Т И К А Н А БО РА 2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ Набор для выявления антител классов IgM и IgG к антигену P.carinii основан на непрямом иммуноферментном анализе на твердой фазе с использованием пероксидазы хрена в качестве маркерного фермента. Анализ состоит из следующих этапов: I. Исследуемую сыворотку крови человека добавить в лунку планшета с адсорбированными на ее поверхности антигенами P.carinii. Если в сыворотке содержатся IgM или IgG антитела, они соединяются с этими антигенами. II. Сыворотку удалить отмывкой и в лунку добавить конъюгаты моноклональных антител против IgM или IgG человека, меченные пероксидазой, которые взаимодействуют с иммобилизованными в лунках IgM или IgG антителами к антигену P.carinii. III. Лунки промыть и добавить хромоген (ТМБ). В результате взаимодействия ТМБ с пероксидазой, соединенной с антителами и фиксированной на стенках лунок, раствор приобретает голубую окраску. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна содержанию антител к антигену P.carinii в сыворотке. После остановки реакции кислотой голубая окраска меняется на желтою. 7 / “ M t ’-v A N 1'' ' --- стр. 2 --- 2.2.СОСТАВ НАБОРА 1. Планшет полистироловый с адсорбированным антигеном Р.carinii (разборный, 12x8) 2 шт. 2. Моноклональные антитела к IgM человека, меченные пероксидазой хрена (концентрат конъюгата антител к IgM) - 0,1 мл 1 фл. 3. Моноклональные антитела к IgG человека, меченные пероксидазой хрена (концентрат конъюгата антител к IgG) - 0,1 мл 1 фл. 4. Контрольная сыворотка человека, положительная, содержащая антитела класса IgM к Р.carinii, лиофилизированная. Положительный контроль (К 1+) - 0,16 мл 4 фл. 5. Контрольная сыворотка человека, положительная, содержащая антитела класса IgG к P.carinii, лиофилизированная. Положительный контроль (К2+) - 0,16 мл 4 фл 6. Контрольная сыворотка человека, отрицательная, лиофилизированная. Отрицательный контроль (К-) - 0,320 мл 2 фл. 7. Фосфатно-солевой буфер с Твином 20 (ФСБ-Т), концентрат - 12,5 мл 2 фл. 8. Раствор для разведения хромогена - 10 мл 2 фл. 9. Хромоген (ТМБ) - 1,4 мл 1 пр. 10. Бычий сывороточный альбумин (БСА) - 100 мг 2 фл. 11. Стоп-реагент (2М серная кислота) 1 фл. 12. Инструкция по применению 1шт. 3. А Н А Л И Т И Ч Е С К И Е И Д И А Г Н О С Т И Ч Е С К И Е Х А РА К Т Е РИ С Т И К И 3.1. Результат качественного определения набором иммуноглобулинов класса М и G к Pneumocystis carinii должен соответствовать требованиям СПП (рег.№ 15.001-01), включающей образцы сывороток, содержащие специфические IgM и IgG к Pneumocystis carinii: чувствительность по иммуноглобулинам класса М и G к Pneumocystis carinii - 100%. 3.2. Результат качественного определения набором иммуноглобулинов класса М и G к Pneumocystis carinii должен соответствовать требованиям СПП (рег.№ 15.001-01), включающей образцы сывороток, не содержащие специфические IgM и IgG к Pneumocystis carinii: специфичность по иммуноглобулинам класса М и G к Pneumocystis carinii - 100%. 4. М Е Р Ы П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И Потенциальный риск применения набора - класс 26 (ГОСТ Р 51609-2000). При работе с исследуемыми сыворотками и контрольными образцами следует соблюдать меры предосторожности, принятые при работе с потенциально инфекционным материалом: - работать в резиновых перчатках; - не пипетировать растворы ртом; - все использованные материалы дезинфицировать в соответствии с требованиями СП 1.3.2322-08 и МУ-287-113. 5. О БО РУ Д О В А Н И Е И М А Т Е РИ А Л Ы Для проведения иммуноферментного анализа необходимо наличие холодильника, термостата, центрифуги 10 000 об/мин., автоматических пипеток с погрешностью Ж о б т кМ И Н Ш Е ^ ' П О КАЧЕСТВУ С а з о н о в ю.С. --- стр. 3 --- с измерения объемов не более 5%, одноразовые наконечники для пипеток, кюветы и спектрофотометр (Мультискан) с фильтром для измерения длины волны 450 нм. - Забор крови производится согласно общепринятой процедуре из вены с соответствующими предосторожностями. - Свежие образцы могут храниться при +2-8°С в течение одной недели. Образцы могут быть заморожены и оттаяны только один раз, так как повторение этой процедуры может привести к искажению результатов. После размораживания сыворотку следует тщательно размешать. Длительное хранение сывороток должно быть в замороженном виде при - 20 °С или ниже. Образцы, содержащие осадок, перед анализом должны быть осветлены центрифугированием при 5-10 тыс.об/мин. Не использовать образцы с гемолизом, гиперлипидемией. В работе должны использоваться автоматические пипетки с погрешностью измерения объемов не более 5%. Раствор 1 Содержимое флакона 7 растворить в 250 мл дистиллированной воды и тщательно перемешать. Раствор 1 применяется: а) для промывки лунок планшетов, б) для разведения исследуемых сывороток. Хранение: до 1 недели при 2+6°С. Раствор 2. В одном флаконе 8, содержащем 10 мл раствора для разведения хромогена, растворить 0,7 мл ТМБ из флакона 9. Раствор 2 готовится непосредственно перед использованием. При приготовлении раствора ТМБ следует исключить воздействие света (использовать флакон из темного стекла). Раствор 3. Содержимое флаконов 10 в 20 мл раствора 1. Растворы используются для разведения конъюгатов. 1. Положительную контрольную сыворотку развести в 160 мкл раствора 1, а отрицательную - в 320 мкл, внести по 50 мкл: в лунки А1-АЗ положительную сыворотку, в лунки В1-ВЗ - отрицательную. 2. Анализируемую сыворотку для определения титра антител класса IgG развести в соотношении 1/100, 1/1000 и 1/10000 раствором 1, для определения антител класса IgM - в соотношении 1/200,1/2000 и 1/20000 и внести по 50 мкл каждого разведения в лунки с антигеном Р.carinii. 3. Планшет закрыть крышкой и инкубировать 18 часов при комнатной температуре или 2 часа при 37°С. 4. Лунки отмыть раствором 1, заполняя их полностью и выдерживая с раствором 1 не менее 2-3 мин. (4 раза). ' -медгамал” \ 5. 100 мкл концентрата конъюгата антител к 1еМ ((Ьлакон №2) внести 6. С Б О Р И П О Д ГО ТО В К А О БРА ЗЦ О В 7. П О Д ГО ТО В К А РЕ А ГЕ Н Т О В К РА БО ТЕ 8. П РО В Е Д Е Н И Е И М М У Н О Ф Е РМ Е Н Т Н О ГО А НАЛИЗА С а з о н о в Ю . С . КАЧЕСТВУ 3 --- стр. 4 --- во флакон № 10 и 100 мкл концентрата конъюгата антител к 1§0 (флакон №3) внести во флакон № 10, после чего, полученные растворы внести по 50 мкл на лунку. Инкубировать 2 часа при 37°С. Отмыть, как указано в п.4. 6 . Добавить по 50 мкл раствора 2, планшет закрыть крышкой и инкубировать в темноте при комнатной температуре в течение 10-30 мин. Внимательно следить за развитием окраски. 7. Реакцию остановить добавлением 50 мкл стоп - реагента и определить степень окрашивания. *Таблицу расхода компонентов тест-системы см на стр. 6 . 9.У Ч Е Т РЕ ЗУ Л ЬТ А Т О В Результаты иммуноферментного анализа регистрировать с помощью ридера, измеряя оптическую плотность (ОП) при длине волны 450 нм. Результат учитывать при: ОПк 1 + ОПк 2+ ---------- > 2,1 и ---------- > 2,1 , где опк . опк . ОПк1+и ОПк2+- среднее значение оптической плотности положительного контроля. ОПк - среднее значение оптической плотности отрицательного контроля. Сыворотка считается положительной когда ОПс> ОПкрит. ОП - критическое = 0,5 (ОП к+ + ОП к-) Для более точной оценки результатов титрования исследуемых сывороток предлагается следующий метод. Исходя из величин экстинции конечных растворов в лунках с разведениями сывороток 1:200 , 1:2000 и 1:20 000 , вычисляется процент связывания антигена, адсорбированного на планшете с антителами исследуемых сывороток. Так, например, при исследовании разведений сыворотки 1:200 и 1:2000 расчет титра антител может проводиться по следующим формулам: ОПсгоо * ОПк- 8200=---------------------- X 100 % ОП к + - ОПк- ОП2000 - ОПк- 82000 = ........................... X 100% ОПк + - ОПк- 8200; 82000 - процент связывания антигена, адсорбированного на планшете с антителами, содержащимися в исследуемой сыворотке в соответствующем разведении; Титром антител к Р.саппп считают такое разведение сыворотки, в котором она обеспечивает 50% связывание с антигеном. Величину такого разведения высчитывают методом графической интерполяции в полулогарафмической системе координат, где по оси абсцисс (в логарифмическом масштабе) отложены величины разведения исследуемой сыворотки от 1:200 до 1:2000 , а по оси ординат (в линейном масштабе) - процент связывания антигена с антителами. В этой системе наносят точки, соответствующие процентам связывания для каждого из разведений (например 1:200 и 1:2000 ), а затем, М О БТи/ : / \ ч к И Н Ж Е Н Е Р ПО КАЧЕСТВУ \ / / _ ^ ____ _ С а з о н о в Ю .С . --- стр. 5 --- соединяя эти точки прямой, находят точку пересечения этой прямой с горизонтальной, проходящей через 50% на оси ординат. Пример: 82 о о=90%, 8гооо=27% Титр исследуемой сыворотки = 1:970 9.Ф О РМ А В Ы П У С К А Набор реагентов «ПневмоцистоСтрип» выпускается упакованным в картонную коробку. Один набор рассчитан на проведение анализов: 30 сывороток на антитела и 30 сывороток на антитела. Ю .У СЛОВИ Я Х РА Н ЕН И Я И Т РА Н С П О РТ И РО В К И Хранить при температуре 2-8 °С. Допускается транспортирование всеми видами транспорта при температуре не выше 10 °С в условиях, исключающих замораживание. Срок годности: 1 год. Рекламации на качество Набора реагентов просьба направлять в Государственное учреждение ГУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН (филиал "Медгамал" ГУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН). Адрес: 123098, Москва, ул. Гамалеи, 18. Тел., факс: (499) 193-30-50, (499) 190-43-89, --- стр. 6 --- 1 * Таблица расхода компонентов тест-систем Количество одновременно, используемых стрипов Конъюгат (мкл) Раствор для разведения конъюгата (мл) ТМБ (мкл) ЦФР (мл) 3 20 2 140 2 6 40 4 280 4 9 60 6 420 6 12 80 8 560 8 Заместитель директора филиала «Мед£ ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМ «СОГЛАСОВАНО» зав. кафедрой клинической лабораторной диагностики ГОУ ДПО «РМАПО Росздрава» Филиппова Н.Е. 200 г. .н., профессор Долгов В.В. 200 г.