Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс® ВИЧ-Монитор-Duo-FL — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
i
у
«УТВЕРЖДАЮ»
Зам. директора Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный научно-
исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной службы по
надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
( Н ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотре^адзора)
А.В. Горелов
2019 г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® ВИЧ-Монитор-Duo-FL
АмплиСенс'
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123 ,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА IVD
--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ...................... 3
НАЗНАЧЕНИЕ....................................... 3
ПРИНЦИП МЕТОДА................................................... 4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ......................................... 5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ............................................. 6
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ .............
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ.................................................14
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА 17
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК...........................18
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА..............................................................................................18
СОСТАВ............................................................. 21
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ 24
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ.....................................................^ 24
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ
«РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»......................................................................................................25
Подготовка пробирок для обратной транскрипции и амплификации при
использовании «ПЦР-комплекта» вариант FRT-LA (формы 1 и 3) ...........................25
Подготовка пробирок для обратной транскрипции и амплификации при
использовании «ПЦР-комплекта» вариант FRT-L (формы 2 и 4)..............................27
Проведение обратной транскрипции и амплификации с детекцией в режиме
«реального времени»...........................................................................................................28
Анализ и интерпретация результатов............................... 30
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ .......................39
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ ...................... 41
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ 42
ПРИЛОЖЕНИЕ А ..................... 43
ПРИЛОЖЕНИЕ Б........................................ 46
ПРИЛОЖЕНИЕ В......................................... 49
--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИЙ
ВИЧ-1 вирус иммунодефицита человека типа 1
вко — внутренний контрольный образен
К1. К2 - калибраторы
НК - нуклеиновые кислоты
ок - отрицательный контроль экстракции
от - обратная транскрипция
ОТ-ПЦР — полимеразная цепная реакция с обратной тоанскпипммрй
ПК1, ПК2 “ положительные контроли экстракции
ПК01, ПК02 — положительные контрольные образцы
ПО - программное обеспечение
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ДНК______________ — дезоксирибонуклеиновая кислота
РНК - рибонуклеиновая кислота
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
— Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс® ВИЧ-Монитор-Duo-FL,
далее - набор реагентов, предназначен для количественного определения РНК
вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) в биологическом материале
(плазма крови, собранной в пробирки с КзЭДТА или КзЭДТА) методом ОТ-ПЦР с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации. Набор
выявляет ВИЧ-1 генетических групп М. N и О. Набор реагентов используется в
клинической лабораторной диагностике. Материалом для проведения ОТ-ПЦР
служат пробы РНК, экстрагированные из исследуемого материала.
В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011 № 323-ФЗ «Об основах
охраны здоровья граждан в Российской Федерации» ПЦР-исследование является
одним из методов всестороннего обследования пациента, на основании которого
лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия по лечению
пациента.
Показания и противопоказания к применению набора реагентов
Набор реагентов используется для исследования биологического материала,
полученного от лиц инфицированных ВИЧ-1 вне зависимости от формы и наличия
манифестации заболевания.
--- стр. 5 ---
экстракцию, обратную транскрипцию и амплификацию кДНК исследуемых образцов
проводят одновременно с калибраторами К1, К2 и положительными контрольными
образцами ПК1, ПК2, содержащими известную концентрацию РНК-мишени.
Аттестация калибраторов К1, К2 и положительных контрольных образцов ПК1, ПК2
осуществляется относительно стандарта NIBSC HIV-1 RNA (3rd International
standard) согласно пункту 5.5. ГОСТ 1S017511.
На этапе ОТ-ПЦР одновременно в одной пробирке проводятся 3 реакции —
амплификация двух различных участков генома кДНК ВИЧ-1, а также амплификация
последовательности кДНК ВКО. Результаты амплификации кДНК ВИЧ-1, а также
кДНК ВКО регистрируются по трём различным каналам флуоресцентной детекции:
Таблица 1
Канал для
флуорофора FAM JOE ROX
кДНК-мишень кДНК ВКО кДНК ВИЧ-1 кДНК ВИЧ-1
Область амплификации г енно-инженерный
конструкт Область гена ро/ 5'UTR
Анализ концентрации по двум независимым областям амплификации генома
ВИЧ-1 позволяет значительно снизить риск получения ложноотрицательных
результатов и заниженных показателей вирусной нагрузки вследствие мутаций
вируса.
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «РИБО-преп» вариант 100; «ПЦР-комплект» вариант FRT-LA;
программное обеспечение АмплиСенс® ВИЧ-Монитор-Duo версия 1.0
Форма 2: «РИБО-преп» вариант 100; «ПЦР-комплект» вариант FRT-L; программное
обеспечение АмплиСенс® ВИЧ-Монитор-Duo версия 1.0
Форма 3: «МАГНО-сорб» вариант 100-1000; «ПЦР-комплект» вариант FRT-LA;
программное обеспечение АмплиСенс® ВИЧ-Монитор-Duo версия 1.0
Форма 4. «МАГНО-сорб» вариант 100-1000; «ПЦР-комплект» вариант FRT-L;
программное обеспечение АмплиСенс® ВИЧ-Монитор-Duo версия 1.0
Формы 1, 2, 3 и 4 предназначены для проведения полного ПЦР-исследования,
включающего экстракцию РНК из биологического материала, проведение реакции
обратной транскрипции РНК и амплификации кДНК с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени», позволяют провести
калибровку набора реагентов и выявлять РНК в количественном формате.
--- стр. 6 ---
Формы 1 и 3 рассчитаны на экстракцию и проведение 100 реакций обратной
транскрипции и амплификации, включая контроли. Формы 2 и 4 рассчитаны на
экстракцию и проведение 96 реакций обратной транскрипции и амплификации,
включая контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие характеристики:
Предел обнаружения (аналитическая чувствительность) и диапазон измерения
Таблица 2
Вид иссле
дуемого
материала
Объем образца
для экстракции,
мкл
Комплект для
амплификации
Предел
обнаружения,
копий/мл
Диапазон
измерения,
копий/мл
Плазма крови 1000
ПЦР-комплект»
вариант FRT-LA,
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-L
25 4 0 - 10 000 000
Данные значения характеристик определены с помощью стандартного образца
предприятия, аттестованного относительно стандарта N1BSC, и достигаются при
соблюдении правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и хранение
исследуемого материала», «Подготовка исследуемого материала к экстракции РНК»
и «Экстракция РНК из исследуемых образцов».
В случае необходимости получения результатов в Международных Единицах
измерения (МЕ/мл), результаты, измеренные в копиях/мл, необходимо пересчитать,
учитывая соотношение 1 ME ВИЧ-1 =0,58 копий^
Неопределенность измерения
Неопределенность измерения оценивалась с помощью тестирования
стандартного образца предприятия, аттестованного относительно стандарта N1BSC.
В таблице 3 представлены средние значения для всех вариантов ПЦР-
исследования, указанных в настоящей инструкции по применению.
’ Согласно WHO Expert Committee on Biological Standardization, sixty-seventh report (WHO technical
report series; no. 1004) ISSN 0512-3054 и WHO International Standard 3rd HIV-1 International Standard
NIBSC code: 10-152.
--- стр. 7 ---
Т а б л и ц а 3
Истинное
значение
концентрации, 1д
копий/мл
Количество
повторов
Среднее
полученное
значение
концентрации, Ig
копий/мл
Отклонение
среднего
полученного
значения от
истинного, Ig
копий/мл
Среднее стандартное отклонение
(SD) между полученными
значениями концентрации, Ig
копий/мл
внутри одной
постановки
по всем
постановкам
7,23 19 7,25 0,02 0,10 0,11
4,15 85 4,09 0,06 0,09 0,14
2,15 77 2,10 0,05 0,09 0,16
1,60 51 1,60 0,00 0,23 0,32
_j
Результаты измерений, полученные с помощью набора реагентов могут
отличаться от истинных не более чем на 0,25 1д копий/мл - для образцов,
концентрация РНК ВИЧ-1 в которых более 80 копий/мл, и не более чем на 0,50 [д
копий/мл - для образцов, концентрация РНК ВИЧ-1 в которых менее или равна
80 копий/мл.
Аналитическая специфичность
Набор реагентов выявляет РНК ВИЧ-1 различных субтипов. Были исследованы
образцы различных субтипов ВИЧ-1 группы М, N и О из панелей генотипов ВИЧ-1
(HIV-1 Genotype panel NIBSC code; 08/358; 2nd WHO International Reference Panel
Preparation for HIV-1 Subtypes for NAT (Main) NIBSC code; 12/22). Аналитическая
специфичность набора реагентов доказана при исследовании ДНК/РНК следующих
микроорганизмов/вирусов, потенциально способных оказать воздействие на работу
набора реагентов; ИАУ (вирус гепатита А), HBV (вирус гепатита В), HCV (вирус
гепатита С), HDV (вирус гепатита D), HEV (вирус гепатита Е), CMV
(цитомегаловирус), EBV (вирус Эпштейна-Барр), HSV 1, HSV 2 (вирус простого
герпеса типы 1, 2), \ZZV (вирус ветряной оспы), HHV 6, HHV 8 (вирус герпеса
человека типы 6, 8), В19 (парвовирус В19), TBEV (вирус клещевого энцефалита),
WNV (вирус лихорадки западного Нила), HAdV 2, HAdV 3, HAdV 7 (аденовирус типы
2, 3, 7), Escherichia со//. Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus
agalactiae.
При тестировании образцов ДНК/РНК вышеперечисленных организмов и ДНК
человека неспецифических реакций выявлено не было.
Повторяемость, воспроизводимость и правильность
Повторяемость и воспроизводимость были определены при тестировании
клинического образца, содержащего РНК ВИЧ-1 в концентрации 10200 копий/мл
(4,01 1д копий/мл). Концентрация клинического образца была определена с помощью
7
--- стр. 14 ---
- вред при вдыхании,
- вред при приеме внутрь.
Специфические воздействия набора реагентов на организм человека (для всех
Форм комплектации):
- Канцерогенный эффект отсутствует.
- Мутагенное действие отсутствует.
- Репродуктивная токсичность отсутствует.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
Взятие исследуемого материала
1. Система вакуумного забора крови (например, Vacuette®, Greiner Bio-One GmbH
(«Грейнер Био-Уан»), Австрия, или аналогичная), включаюо|ая пробирки с
КгЭДТА или КзЭДТА.
2. Центрифуга с охлаждением до 24 тыс g (например, Hettish, Германия, или
аналогичная).
3. Центрифуга медицинская с принадлежностями (например, MPW Med.instruments
Spoidzielnia Pracy («МПВ Мед.инструменте Сполдзиелния Праци»), Польша или
аналогичная).
4. Одноразовые полипропиленовые плотно закрывающиеся пробирки объемом
2,0 мл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк.»), США, или аналогичные).
Экстракция РНК из исследуемых образцов
При работе с формами 1 и 2. включающими комплект реагентов «РИБО-преп»:
5. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся
пробирки объемом 1,5 мл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или
аналогичные).
6. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фильтром до
200 и до 1000 мкл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или
аналогичные).
7. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл
(например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные).
8. Штативы для пробирок объемом 1,5 мл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен,
Инк»), США, или аналогичные).
9. Ламинарный бокс класс биологической безопасности II тип А (например, «БАВп-
01-«Ламинар-С.»-1,2», ЗАО «Ламинарные системы», Россия, или аналогичный).
10. Микроцентрифуга для пробирок типа «Эппендорф» с максимальной скоростью
14
--- стр. 15 ---
центрифугирования не менее 12 тыс g (например, MiniSpin, Eppendorf
Manufacturing Corporation («Эппендорф Мануфэктуринг Корпорэйшн»), Германия,
ИЛИ аналогичные).
И.Вортекс (например, SIA Biosan, Латвия, или аналогичный).
12. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100 °С (например, ООО
«НПО ДНК-Технология», Россия, или аналогичный).
13. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления
надосадочной жидкости (например, «ОМ-1», ООО «Утес», Россия, или
аналогичный).
14. Автоматические дозаторы переменного объема (например, ООО «Биохит»,
Россия, или аналогичные).
15. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24 до минус 16 °С.
16.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09.
17.Одноразовые пластиковые контейнеры для сброса и инактивации материалов.
При работе с формами 3 и 4, включающими комплект реагентов «МАГНО-сорб».
18.Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся
пробирки объемом 1,5 мл (например, Axygen, !пс. («Эксиджен, Инк»), США, или
аналогичные).
19,Завинчивающиеся крышки к пробиркам (например, Axygen, Inc. («Эксиджен,
Инк.»), США. или аналогичные).
20.Одноразовые полипропиленовые или полистирольные пробирки объемом до 5 мл
диаметром 12 мм, круглодонные (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США,
или аналогичные).
21 .Одноразовые полипропиленовые крышки для пробирок объемом до 5 мл
диаметром 12 мм (например, Axygen, 1пс. («Эксиджен, Инк»), США, или
аналогичные).
22.Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл, до
1000 мкл и до 5000 мкл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или
аналогичные).
23.Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фильтром до
100, до 200, до 1000 и до 5000 мкл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»),
США, или аналогичные).
24.Штативы для пробирок объемом 1,5 мл и/или 5 мл (например, Axygen, Inc.
(«Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные).
15
--- стр. 16 ---
25. Ламинарный бокс класс биологической безопасности II тип А (например, «БАВп-
01-«Ламинар-С.»-1,2», ЗАО «Ламинарные системы», Россия, или аналогичный).
26. Вортекс (например, SIA Biosan, Латвия, или аналогичный).
27. Термостат для пробирок объемом 5 мл, диаметром 12 мм от 25 до 100 °С
(например, SIA BioSan, Латвия, или аналогичный).
28. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100 °С (например, SIA
BioSan, Латвия, или аналогичный).
29. Магнитный штатив для пробирок типа «Эппендорф» объемом 1,5 мл и/или
объемом 5 мл. диаметром 12 мм (например, Promega («Промега»), США, или
аналогичные).
30. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления
надосадочной жидкости (например, «ОМ-1», Россия, или аналогичный).
31 .Автоматические дозаторы переменного объема (например, ООО «Биохит»,
Россия, или аналогичные).
32.Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24 до минус 16 °С.
33.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09.
34.Одноразовые пластиковые контейнеры для сброса и инактивации материалов.
При использовании автоматических станций для экстракции нуклеиновых кислот. -
ПРИ работе с Формами 3 и 4:
35. Автоматическая станция для экстракции НК «открытого типа»^ (например, Xiril
Neon 100 series, Тесал Schweiz AG («Тикан Швейц АГ»), Швейцария) и другие,
рекомендованные Производителем).
36. Набор необходимых расходных материалов к данным автоматическим станциям.
Обратная транскрипция, амплификация с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией продуктов амплификации
37.Одноразовые полипропиленовые пробирки при работе с «ПЦР-комплектом»
вариант FRT-LA:
а) завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки объемом 1,5 мл
(например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные) для
приготовления реакционной смеси;
б) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с круглой или плоской
оптически прозрачной крышкой или пробирки объемом 0,2 мл в стрипах по
8 шт. с прозрачными крышками (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»),
® Станции, совместимые с наборами реагентов различных производителей.
16
--- стр. 17 ---
"
США, или аналогичные) - при использовании прибора планшетного типа;
в) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с плоской крышкой
(например. Axygen, tnc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные) или
пробирки для ПЦР к Rotor-Gene объемом 0,1 мл в стрипах по 4 шт. с крышками
(например, QIAGEN GmbH («Киаген ГмбХ»), Германия, или аналогичные) - при
использовании прибора роторного типа.
38.Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фильтром до
200 мкл (например, Axygen, inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные),
39. Штативы для пробирок объемом 0,2 мл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен,
Инк»), США, или аналогичные.
40. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс) (например, «БАВ-ПЦР-
«Ламинар-С», ЗАО «Ламинарные системы», Россия, или аналогичный).
41. Вортекс (например, SIA Biosan, Латвия, или аналогичный).
42. Автоматические дозаторы переменного объема (например, ООО «Биохит»,
Россия, или аналогичные).
43. Программируемый амплификатор роторного или планшетного типа с системой
детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени», имеющий 3
или более независимых каналов флуоресцентной детекции (например, Rotor-
Gene Q (QIAGEN GmbH («Киаген ГмбХ»), Германия), CFX96 (Bio-Rad Laboratories,
inc. («Био-Рад Лабораториз, Инк.»), США) и другие, рекомендованные
Производителем.
44. ПО для автоматической обработки результатов, зарегистрированное в
установленном порядке.
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Материалом для исследования служат образцы плазмы крови.
Плазма крови
Взятие крови проводится утром натощак в пробирку с калия ЭДТА (КгЭДТА или
КзЭДТА) в качестве антикоагулянта. Закрытую пробирку с кровью несколько раз
переворачивают и хранят при температуре от 2 до 8 “С не более 6 ч. Пробирку с
цельной кровью центрифугируют 20 мин при 800- 1600 g при комнатной
температуре. Полученную плазму переносят в количестве не менее 1 мл
отдельными наконечниками с аэрозольным барьером в стерильные пробирки типа
«Эппендорф» объемом 2,0 мл.
Допускается хранение образцов плазмы крови до проведения ПЦР-исследования;
17
--- стр. 23 ---
СОСТАВ
I |ДА>, 1’t ..*
Реагент Описание Объем, мл Количество
K2L ВИЧ-Duo Порошок белого цвета - 4 пробирки
HKOIL ВИЧ-Duo Порошок белого цвета - 4 пробирки
ПК021 ВИЧ-Duo
BKOL
Порошок белого цвета - 4 пробирки
Порошок белого цвета - 4 пробирки
Растворитель
Прозрачная жидкость от
соломенно-желтого цвета до
бесцветного(допускается
появление осадка в виде
хлопьев)
5.0 5 пробирок
Комплект реагентов рассчитан на проведение 96 реакций обратной транскрипции и
амплификации, включая контроли и калибраторы. Входит в состав форм 2 и 4.
Программное обеспечение АмплиСенс® ВИЧ-Монитор-Duo версия 1.0 и
руководство оператора.
Дата выпуска ПО; 20.08.18
Класс безопасности ПО: Класс А (невозможны никакие травмы и ущерб здоровью) в
соответствии с п.4.3 ГОСТ Р МЭК 62304.
23
--- стр. 24 ---
П Р О В Е ДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
- экстракция РНК из исследуемых образцов,
- обратная транскрипция РНК и амплификации кДНК с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального
времени»,
- анализ и интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые
пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку «RNase-
free», «DNase-free».
Для экстракции, используются следующие комплекты реагентов;
- «РИБО-преп» вариант 100 в соответствии с приложением А.
- «МАГНО-сорб» вариант 100-1000 в соответствии с приложением Б.
Каждая индивидуальная постановка должна сопровождаться постановкой трёх
контролей: отрицательного контроля (ОК) и двух положительных контролей (ПК1 и
ПК2). В качестве отрицательного контроля (ОК) используют реагент Растворитель,
в качестве положительных контролей (ПК1, ПК2) используют восстановленные
реагенты HKOIL ВИЧ-Duo и ПК02Е ВИЧ-Duo
Экстракция РНК из каждого исследуемого образца и контролей проводится в
присутствии восстановленного внутреннего контрольного образца ~ BKOL.
При первом использовании набора реагентов необходим анализ дополнительных
образцов - калибраторов K1L ВИЧ-Duo и K2L ВИЧ-Duo ~ минимум в трех повторах
каждый (рекомендуется по четыре повтора), начиная с этапа экстракции.
Процедура экстракции калибраторов аналогична процедуре экстракции
исследуемых образцов.
При получении достоверных результатов калибровки полученные параметры
калибровочной прямой и рассчитанное значение медианы Ct ВКОмед могут быть
использованы в последующих постановках для расчета концентрации РНК ВИЧ-1 в
исследуемых образцах.
ВНИМАНИЕ! Калибровку необходимо проводить при изменении условий постановки
или через каждые 6 месяцев использования одной серии набора реагентов в
одинаковых условиях. Под условиями постановки подразумеваются: серия
24
--- стр. 25 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ni^P-HCC'jи-:ДОБАИИЯ
1 (Г «
комплекта для экстракции, объем экстракции, прибор для амплификации, версия
программного обеспечения прибора.
Подготовка лиофилизированных контролей и калибраторов
1. Достать лиофилизированные реагенты BKOL, ПК01Е ВИЧ-Duo и ПК02Е ВИЧ-
Duo, K1L ВИЧ-Duo, K2L ВИЧ-Duo. Содержимое пробирок осадить на вортексе,
аккуратно открыть крышки, избегая распыления содержимого, и добавить реагент
Растворитель в соответствии с таблицей:
Таблица 10
Название контроля Добавить реагент Растворитель, мкл
ПК01Е ВИЧ-Duo 1200
ПК02Е ВИЧ-Duo 1200
K1L ВИЧ-Duo 1200
K2L ВИЧ-Duo 1200
BKOL 300
2. Плотно закрыть пробирки и оставить их на 2 мин при температуре от 18 до 25 °С,
периодически перемешивая на вортексе.
3. После полного растворения осадить содержимое пробирок на вортексе в течение
3-5 с для сброса капель с крышки.
ВНИМАНИЕ! Восстановленные реагенты BKOL, ПК01Е ВИЧ-Duo и RK02L ВИЧ-
Duo, K1L ВИЧ-Duo, K2L ВИЧ-Duo хранить при температуре от 2 до 8 °С не более
3 месяцев.
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ
«РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку
RNase-free, DNase-free.
Подготовка пробирок для обратной транскрипции и амплификации при
использовании «ПЦР-комплекта» вариант FRT-LA (формы 1 и 3)
Выбор пробирок для проведения ОТ-ПЦР зависит от используемого
амплификатора с системой детекции в режиме «реального времени».
Для внесения в пробирки реагентов, проб РНК и контрольных образцов
25
--- стр. 26 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
Общий объем реакционной смеси - 50 мкл, включая объем пробы РНК - 25 мкл.
1. Определить по схеме приготовления реакционных смесей (Приложение В)
количество каждого реагента, требующееся для приготовления реакционной смеси.
На одну реакцию требуется 15 мкл ПЦР-смеси-FL ВИЧ-Duo, 10 мкл
ПЦР-буфера-В и 2 мкл восстановленной Смеси ОТ-ПЦР-ферментов. Смесь
готовить на общее число исследуемых и контрольных образцов (три контрольных
образца в одном повторе при каждой постановке, два калибратора в трех или
четырех повторах в случае проведения калибровки) плюс запас на одну реакцию.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно
перед проведением ОТ-ПЦР.
2. Перемешать на вортексе содержимое нелиофилизированных реагентов ПЦР-
комплекта, осадить капли на вортексе.
3. В пробирку со Смесью ОТ-ПЦР-ферментов добавить 60 мкл Восстановителя
ферментов. Тщательно перемешать смесь пипетированием и осадить капли с
крышки пробирки на вортексе. Приготовленная смесь хранится при температуре
от минус 24 до минус 16 °С в течение 3 месяцев.
4. Затем в отдельной одноразовой пробирке смешать необходимое количество
ПЦР-смеси-FL ВИЧ-Duo, ПЦР-буфера-В и восстановленной Смеси ОТ-ПЦР-
ферментов. Тщательно перемешать смесь и осадить капли на вортексе.
5. Отобрать необходимое количество пробирок или стрипов для проведения ОТ-ПЦР
исследуемых и контрольных образцов (количество контрольных образцов см. в п.
8).
6. Внести в каждую пробирку по 25 мкл приготовленной реакционной смеси.
Неиспользованные остатки реакционной смеси выбросить.
7. В подготовленнь!е пробирки с реакционной смесью внести по 25 мкл проб РНК,
полученных в результате экстракции из исследуемых образцов.
ВНИМАНИЕ! При добавлении проб РНК, экстрагированных с помощью комплектов
реагентов для проведения экстракции методом магнитной сепарации, необходимо
избегать попадания сорбента в реакционную смесь.
ВНИМАНИЕ! При использовании амплификаторов планшетного типа после
добавления пробы РНК содержимое пробирки необходимо тщательно перемешать
пипетированием, не допуская появления пузырьков воздуха.
26
--- стр. 37 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР i/1' СЛГПОВАНИЯ
<
повторном получении неудовлетворительного результата необходимо повторить
ПЦР-исследование для всех образцов, начиная с этапа экстракции РНК,
включая контрольные образцы.
5. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналам для флуорофоров JOE
и/или ROX определено значение порогового цикла Ct. Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов на каком-
либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо проверить правильность установки
пробирок или обозначения контрольного образца в блоке амплификатора. При
повторном получении неудовлетворительного результата необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая РНК, начиная с этапа экстракции РНК.
6. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналу для флуорофора FAM
определено значение порогового цикла (Ct), отличающееся от рассчитанного
значения Ct ВКОмел более чем на 3 цикла. Необходимо проверить правильность
установки пробирок или обозначения контрольных образцов в блоке
амплификатора. При повторном получении неудовлетворительного результата
необходимо повторить ПЦР-исследование для всех образцов, начиная с этапа
экстракции РНК, включая контрольные образцы.
7. Для отрицательного контроля ОТ-ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров FAM
и/или JOE, и/или ROX определено значение порогового цикла Ct. Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или контаминация
реагентов на этапе ОТ-ПЦР. Необходимо проверить правильность установки
пробирок или обозначения контрольного образца в блоке амплификатора. При
повторном получении неудовлетворительного результата необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ОТ-ПЦР и детекцию для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая РНК
8. Для исследуемого образца по каналу для флуорофора FAM значение порогового
цикла {Ct) не определено, или отличается от рассчитанного значения Ct ВКОмед
более чем на 3 цикла. Необходимо проверить правильность установки пробирок
или обозначения образца в блоке амплификатора. При повторном получении
неудовлетворительного результата необходимо повторить ПЦР-исследование
для данного образца, начиная с этапа экстракции РНК.
37
--- стр. 38 ---
ПРОВЕДЕНИЕ П Ц Р 4 Г .J.; ;ОВАНИЯ
9. Для исследуемого образца по каналам для флуорофоров JOE и ROX не
определены значения порогового цикла (СО. значение C f по каналу для
флуорофора Р А М отклоняется от рассчитанного значения C f ВКОмед более чем на
2 цикла. Необходимо проверить правильность установки пробирок или
обозначения образца в блоке амплификатора. При повторном получении
неудовлетворительного результата необходимо повторить ПЦР-исследование
для данного образца, начиная с этапа экстракции РНК.
10.Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального
подъема (график представляет собой приблизительно прямую горизонтальную
линию). Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой
линии или параметров расчета базовой линии в программном обеспечении
прибора. Если результат получен при правильном уровне пороговой линии
(базовой линии), необходимо повторить ПЦР-исследование для данного образца,
начиная с этапа экстракции РНК,
--- стр. 39 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению
не подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности,
указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до
8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами
крытых транспортных средств. Допускается транспортирование при температуре от
2 до 25 °С не более 3 сут.
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-I.A при получении
разукомплектовать в соответствии с указанными температурами хранения.
Допускается хранение комплекта реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-LA без
разукомплектации при температуре от 2 до 8 °С не более 3 месяцев от даты
изготовления.
Хранение.
Форма 1. Комплект реагентов «РИБО-преп» хранить в холодильной камере при
температуре от 2 до 8 “С. «ПЦР-комплект» вариант FRT-LA хранить в холодильной
камере при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-смеси-FL ВИЧ-Duo и ПЦР-буфера-
В. ПЦР-смесь-FL ВИЧ-Duo и ПЦР-буфер-В хранить в морозильной камере при
температуре от минус 24 до минус 16 X . ПЦР-смесь-FL ВИЧ-Duo хранить в
защищенном от света месте. Лиофилизированные реагенты (Смесь ОТ-ПЦР-
ферментов, BKOL, калибраторы K1L ВИЧ-Duo и K2L ВИЧ-Duo, контрольные образцы
ПК011 ВИЧ-Duo и ПК021 ВИЧ-Duo) хранить (до растворения) в пакетах с
влагопоглотителем. Восстановленные реагенты BKOL, K1L ВИЧ-Duo, K2L ВИЧ-Duo,
ПК011 ВИЧ-Duo, ПК021 ВИЧ-Duo хранить в холодильной камере при температуре
от 2 до 8 °С не более 3 месяцев. Восстановленный реагент Смесь ОТ-ПЦР-
ферментов хранить в морозильной камере при температуре от минус 24 до минус
16 °С не более 3 месяцев
Форма 2. Комплект реагентов «РИБО-преп» хранить при температуре от 2 до 8 °С.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в холодильной камере при температуре от 2
до 8 ®С. ПЦР-смесь ВИЧ-Duo-Lyo хранить в пакетах с влагопоглотителем в
защищенном от света месте. Лиофилизированные реагенты (BKOL, калибраторы K1L
ВИЧ-Duo и K2L ВИЧ-D jo , контрольные образцы HK01L ВИЧ-Duo и nK02L ВИЧ-Duo)
хранить (до растворения) в пакетах с влагопоглотителем. Восстановленные
реагенты BKOL, K1L ВИЧ-Duo, K2L ВИЧ-Duo, HKOIL ВИЧ-Duo, HK02L ВИЧ-Duo
39
--- стр. 40 ---
хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С не более 3 месяцев.
Форма 3. Комплект реагентов «МАГНО-сорб» вариант 100-1000 хранить при
температуре от 2 до 25 °С. ПЦР-комплект» вариант FRT-LA хранить в холодильной
камере при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-смеси-FL ВИЧ-Duo и ПЦР-буфера-
В. ПЦР-смесь-FL ВИЧ-Duo и ПЦР-буфер-В хранить в морозильной камере при
температуре от минус 24 до минус 16 “С. ПЦР-смесь-FL ВИЧ-Duo хранить в
защи 1ценном от света месте, Лиофилизированные реагенты (Смесь ОТ-ПЦР-
ферментов, BKOL, калибраторы K1L ВИЧ-Duo и K2L ВИЧ-Duo, контрольные образцы
HK01L ВИЧ-Duo и [1K02L ВИЧ-Duo) хранить (до растворения) в пакетах с
влагопоглотителем. Восстановленные реагенты BKOL, K1L ВИЧ-Duo, K2L ВИЧ-Duo,
□ K01L ВИЧ-Duo, ПК021 ВИЧ-Duo хранить в холодильной камере при температуре
от 2 до 8 °С не более 3 месяцев. Восстановленный реагент Смесь ОТ-ПЦР-
ферментов хранить в морозильной камере при температуре от минус 24 до минус
16 °С не более 3 месяцев.
Форма 4. Комплект реагентов «МАГНО-сорб» вариант 100-1000 хранить при
температуре от 2 до 25 °С. «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить а холодильной
камере при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь ВИЧ-Duo-Lyo хранить в пакетах с
влагопоглотителем в загцигценном от света месте. Лиофилизированные реагенты
(BKOL, калибраторы K1L ВИЧ-Duo и K2L ВИЧ-Duo, контрольные образцы HKOIL
ВИЧ-Duo и ПК021 ВИЧ-Duo) хранить (до растворения) в пакетах с
влагопоглотителем. Восстановленные реагенты BKOL, K1L ВИЧ-Duo, K2L ВИЧ-Duo,
HK01L ВИЧ-Duo, HK02L ВИЧ-Duo хранить в холодильной камере при температуре
от 2 до 8 °С не более 3 месяцев.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать регламентированный
температурный режим.
--- стр. 41 ---
I
1
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
Производитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик
набора реагентов требованиям, указанным в технической и эксплуатационной
документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий
транспортирования, хранения и применения.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по адресу 111123,
г. Москва, ул, Новогиреевская, дом ЗА, e-mail: cs@pcr.ru
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению
набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и
обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную
государственную регулирующую организацию (в РФ - Федеральная служба по
надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора
Главный врач ФГБУЗ ГЦГ и Э ФМБА России
Е.Н. Родионова
С.А. Богдан
17
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amDlisens.ru ,
41
--- стр. 42 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF Номер по каталогу
V
LOT Код партии
IVD Медицинское изделие для
диагностики in vitro □а
VER Дата изменения
t
Температурный диапазон
id
Изготовитель
f
Содержимого
достаточно для
проведения п-
количества тестов
Использовать до
Обратитесь к
инструкции по
применению
Не допускать
воздействия
солнечного света
Дата изготовления
Беречь от влаги
42
--- стр. 51 ---
УТВЕРЖДАЮ
Зам. директора Федерального
бюджетного учреждения науки
«Центральный научно-
исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и ^^;^л а го получил
человека '
I.В.Малеев
2017 г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® ВИЧ-Монитор-Duo-FL
АмплиСенс ®
ш1
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА
IVD
--- стр. 52 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
НАЗНАЧЕНИЕ.......................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА............................................................................................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ.................................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.............................................................................6
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ......................................................................10
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ..............................12
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ .............................................15
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 19
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК.........................19
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.......................................................................................19
СОСТАВ..............................................................................................................................20
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ...........................................................................23
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ...................................................23
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ
«РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»...............................................................................................24
Подготовка пробирок для обратной транскрипции и амплификации при
использовании «ПЦР-комплекта» вариант FRT-LA (формы 1, 3 и 5)......................25
Подготовка пробирок для обратной транскрипции и амплификации при
использовании «ПЦР-комплекта» вариант FRT-L (формы 2, 4 и 6)........................26
Проведение обратной транскрипции и амплификации с детекцией в режиме
«реального времени»...................................................................................................27
Анализ и интерпретация результатов........................................................................29
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ.....................38
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ...............................................41
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ........................................42
ПРИЛОЖЕНИЕ А...............................................................................................................43
ПРИЛОЖЕНИЕ Б...............................................................................................................46
ПРИЛОЖЕНИЕ В...............................................................................................................49
ПРИЛОЖЕНИЕ Г................................................................................................................50
--- стр. 53 ---
список СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения;
ВИЧ-1 - вирус иммунодефицита человека типа 1
вко - внутренний контрольный образец
К1, К2 - калибраторы
НК - нуклеиновые кислоты
ок - отрицательный контроль экстракции
от - обратная транскрипция
ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией
ПК1. ПК2 - положительные контроли экстракции
ПК01, ПК01 - положительные контрольные образцы
ПО - программное обеспечение
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ДНК -дезоксирибонуклеиновая кислота
РНК - рибонуклеиновая кислота
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс® ВИЧ-1\/1онитор-0ио-Р1,
далее - набор реагентов, предназначен для количественного определения РНК
вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) в биологическом материале
(плазма крови) методом ОТ-ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
продуктов амплификации. Набор выявляет ВИЧ-1 генетических групп М, N и О.
Набор реагентов используется в клинической лабораторной диагностике.
Материалом для проведения ОТ-ПЦР служат пробы РНК, экстрагированные из
исследуемого материала.
В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011 № 323-ФЗ «Об основах
охраны здоровья граждан в Российской Федерации» ПЦР-исследование является
одним из методов всестороннего обследования пациента, на основании которого
лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия по лечению
пациента.
Показания и противопоказания к применению набора реагентов
Набор реагентов используется для исследования биологического материала,
полученного от лиц инфицированных ВИЧ-1 вне зависимости от формы и наличия
--- стр. 55 ---
экстракцию, обратную транскрипцию и амплификацию кДНК исследуемых образцов
проводят одновременно с калибраторами К1, К2 и положительными контрольными
образцами ПК1, ПК2, содержащими известную концентрацию РНК-мишени.
Аттестация калибраторов К1, К2 и положительных контрольных образцов ПК1, ПК2
осуществляется относительно стандарта NIBSC HIV-1 RNA (3rd International
standard) согласно пункту 5.5. ГОСТ IS017511.
На этапе ОТ-ПЦР одновременно в одной пробирке проводятся 3 реакции -
амплификация двух различных участков генома кДНК ВИЧ-1, а также амплификация
последовательности кДНК ВКО. Результаты амплификации кДНК ВИЧ-1, а также
кДНК ВКО регистрируются по трём различным каналам флуоресцентной детекции;
Таблица 1
Канал для
флуорофора ГАМ JOE ROX
кДНК-мишень кДНК ВКО кДНК ВИЧ-1 кДНК ВИЧ-1
Область амплификации Генно-инженерный
конструкт Область гена ро/ 5’UTR
Анализ концентрации по двум независимым областям амплификации генома
ВИЧ-1 позволяет значительно снизить риск получения ложноотрицательных
результатов и заниженных показателей вирусной нагрузки вследствие мутаций
вируса.
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT-LA
Форма 2: «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
Форма 3: «МАГНО-сорб» вариант 100-1000; «ПЦР-комплект» вариант FRT-LA
Форма 4: «МАГНО-сорб» вариант 100-1000; «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
Форма 5: «РИБО-преп» вариант 100; «ПЦР-комплект» вариант FRT-LA
Форма 6: «РИБО-преп» вариант 100; «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
Формы 1 и 2 предназначены для проведения реакции обратной транскрипции
РНК и амплификации кДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени» и позволяют провести калибровку набора реагентов и
выявлять РНК в количественном формате. Для проведения полного ПЦР-
исследования необходимо использовать комплекты реагентов для экстракции РНК,
рекомендованные Производителем.
Формы 3, 4, 5 и 6 предназначены для проведения полного ПЦР-исследования,
включающего экстракцию РНК из биологического материала, проведение реакции
--- стр. 56 ---
обратной транскрипции РНК и амплификации кДНК с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» и позволяют провести
калибровку набора реагентов и выявлять РНК в количественном формате.
Форма 1 рассчитана на проведение 110 реакций обратной транскрипции и
амплификации, включая контроли. Форма 2 рассчитана на проведение 96 реакций
обратной транскрипции и амплификации, включая контроли. Формы 3 и 5
рассчитаны на экстракцию и проведение 110 реакций обратной транскрипции и
амплификации, включая контроли. Формы 4 и 6 рассчитаны на экстракцию и
проведение 96 реакций обратной транскрипции и амплификации, включая контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие характеристики:
Диапазон обнаружения и диапазон измерения
Таблица 2
Вид И С С Л 6 '
дуемого
материала
Объем образца
для экстракции,
мкл
Комплект для
амплификации
Предел
обнаружения,
копий/мл
Диапазон
измерения,
копий/мл
Плазма крови 1000
ПЦР-комплект»
вариант FRT-LA,
«ПЦР-комплект»
вариант FRT-L
25 40- 10 000 000
Данные значения характеристик определены с помощью стандартного образца
предприятия, аттестованного относительно стандарта NIBSC, и достигаются при
соблюдении правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и хранение
исследуемого материала», «Подготовка исследуемого материала к экстракции РНК»
и «Экстракция РНК из исследуемых образцов».
В случае необходимости получения результатов в Международных Единицах
измерения (МЕ/мл), результаты, измеренные в копиях/мл, необходимо пересчитать,
учитывая соотношение 1 ME ВИЧ-1 =0,58 копий\
Неопределенность измерения
Неопределенность измерения оценивалась с помощью тестирования
стандартного образца предприятия, аттестованного относительно стандарта NIBSC.
В таблице 3 представлены средние значения для всех вариантов ПЦР-
исследования, указанных в настоящей инструкции по применению.
Согласно WHO Expert Committee on Biological Standardization, sixty-seventh report (WHO technical
report series; no. 1004) ISSN 0512-3054 и WHO International Standard 3rd HIV-1 International Standard
NIBSC code: 10-152,
--- стр. 57 ---
Истинное
значение
концентрации,
1д копий/мл
Количество
повторов
Среднее
полученное
значение
концентрации, 1д
копий/мл
Отклонение
среднего
полученного
значения от
истинного, 1д
копий/мл
Среднее стандартное
отклонение (SD) между
полученными значениями
концентрации, 1я копий/мл
внутри одной
постановки
по всем
постановкам
7,23 19 7.25 0,02 0,10 0,11
4,15 85 4,09 0,06 0,09 0,14
2.15 77 2,10 0,05 0,09 0,16
1,60 51 1,60 0,00 0,23 0,32
Результаты измерений, полученные с помощью набора реагентов могут
отличаться от истинных не более чем на 0,25 1д копий/мл - для образцов,
концентрация РНК ВИЧ-1 в которых более 80 копий/мл, и не более чем на 0,50 1д
копий/мл - для образцов, концентрация РНК ВИЧ-1 в которых менее или равна 80
копий/мл.
Аналитическая специфичность
Набор реагентов выявляет РНК ВИЧ-1 различных субтипов. Были исследованы
образцы различных субтипов ВИЧ-1 группы М, N и О из панелей генотипов ВИЧ-1
(HIV-1 Genotype panel NIBSC code: 08/358; 2nd WHO International Reference Panel
Preparation for HIV-1 Subtypes for NAT (Main) NIBSC code; 12/22). Аналитическая
специфичность набора реагентов доказана при исследовании ДНК/РНК следующих
микроорганизмов/вирусов, потенциально способных оказать воздействие на работу
набора реагентов: HAV (вирус гепатита А), HBV (вирус гепатита В), HCV (вирус
гепатита С), HDV (вирус гепатита D), HEV (вирус гепатита Е), CMV
(цитомегаловирус), EBV (вирус Эпштейна-Барр), HSV 1, HSV 2 (вирус простого
герпеса типы 1, 2), VZV (вирус ветряной оспы), HHV 6, HHV 8 (вирус герпеса
человека типы 6, 8), В19 (парвовирус В19), TBEV (вирус клещевого энцефалита),
WNV (вирус лихорадки западного Нила), HAdV 2, HAdV 3, HAdV 7 (аденовирус типы
2, 3, 7), Escherichia соН, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus
agalactiae.
При тестировании образцов ДНК/РНК вышеперечисленных организмов и ДНК
человека неспецифических реакций выявлено не было.
Воспроизводимость, повторяемость и правильность
Воспроизводимость, повторяемость и правильность были определены путем
тестирования модельных образцов биоматериала. Для определения
воспроизводимости и повторяемости использовались разведения стандартного
--- стр. 59 ---
Воспроизводимость
Истинная
концен’
трация
ВИЧ-1,1д
копий/мл
Полученное значение
(онцентрации для каждой ФормьСреднее для всех форм
Вариант ПЦР-
исследования
Количес
тво
повто
ров
Среднее
значение
концен
трации, Ig
копий/мл
Стандарт
ное откло
некие(SD
Коэффи
циент
’ вариации
(CV), %
Среднее
значение
концентра1
ИИ, Ig
копий/мл
J SD CV, %
МАГНО-сорб
«ПЦР-
комплект» LA
16 4,05 0,18 4,44
МАГНО-сорб
«ПЦР-
комплект» L 4,15
16 4,07 0,10 2,46
4,07 0,11 2,70РИБО-преп
«ПЦР-
комплект» LA
16 4,06 0,06 1,48
РИБО-преп
«ПЦР-
комплект» L
16 4,10 0,11 2,68
МАГНО-сорб
«ПЦР-
комплект» LA
16 3,07 0,19 6,19
МАГНО-сорб
«ПЦР-
комплект» L 'Ч 1 я
16 3,08 0,12 3,90
3,13 0,14 4,47
\
РИБО-преп
«ПЦР-
комплект» LA
16 3,05 0,14 4,59
РИБО-преп
«ПЦР-
комплект» L
16 3,31 0,10 3,02
_____L_______
--- стр. 60 ---
Правильность
Вариант ПЦР-
исследования
Истинная
концентрация
ВИЧ-1,1д
копий/мл
Количес
тво
повторов
Полученное значение
концентрации для каждой
формы
Среднее для всех форм
Среднее
значение
измерения,
1д копий/мл
Системати
ческая
погрешность
(В), %
Среднее
значение
измерения, 1д
копий/мл
Система
тическая
погреш
ность (В),
%
МАГНО-сорб
«ПЦР-
комплект» LA
4,15
24 3,96 4,58
4,08 1,69
МАГНО-сорб
«ПЦР-
комплект» L
24 4,19 0,96
РИБО-преп
«ПЦР-
KownnetcT» LA
24 4,12 0,72
РИБО-преп
«ПЦР-
комплект» L
24 4,04 2,65
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Таблица 7
Результаты тестирования набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® ВИЧ-Монитор-Duo-FL в сравнении с референтным методом
Тип
образцов
Результаты применения
набора реагентов АмплиСенс®
BHM-MoHHTop-Duo-FL
Результаты применения
референтного метода^
положительных отрицательных
Плазма
крови
Всего положительных
исследовано
120 0
229 1 отрицательных 4 105____________________1
Диагностическая чувствительность исследовалось путем тестирования 124
образцов плазмы крови. Подтверждение вирусной нагрузки в данных образцах
проводилась с помощью референтного диагностического метода. Диагностическая
специфичность была определена путем тестирования 105 серонегативных на ВИЧ-1
образцов плазмы крови.
^ в качестве референтного метода использовался набор реагентов «Abbott RealTime HlV-1», Abbott
Molecular Inc., США. (РУ ФСЗ 2008/01688 от 24.02.2016).
--- стр. 61 ---
Диагностические характеристики набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® ВИЧ-Монитор-Duo-FL
Тип образцов
Диагностическая чувствительность^
(с доверительной вероятностью
90 %), в интервале, %
Диагностическая специфичность^
(с доверительной вероятностью
90 % ) , в интервале, %
плазма крови 94,5-100,0 98,0-100,0
Корреляция значений концентрации РНК ВИЧ-1 с референтным методом
Было проанализировано 78 биологических образцов, содержащих РНК ВИЧ-1 в
концентрации от 676 000 до 135 копий/мл (от 5,83 до 2,13 1д копий/мл). Корреляция
значений концентрации РНК ВИЧ-1 (в 1д копий/мл), полученных с помощью
референтного метода^ и АмплиСенс® ВИЧ-Монитор-Duo-FL представлены на
рисунке 1.
Рисунок 1
,50 2.00 2.50 3,00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50
Референтный метод
Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом.
Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
--- стр. 62 ---
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно
биологические (ПЦР) исследования биологического материала на наличие
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-
эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами» и методических указаний МУ
1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
ВНИМАНИЕ! Растворитель, восстановленные калибраторы и контроли содержат
материалы животного происхождения.
При работе необходимо всегда выполнять следующие требования:
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С, относительная влажность от
15 до 75%.
- Рассматривать исследуемые образцы, а также реагент Растворитель,
восстановленные калибраторы и контроли, как инфекционно-опасные,
организовывать работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности)
и возбудителями паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы, используя дезинфицирующие
средства в соответствии с СП 1,3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
паразитарных болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в
отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Экстракции,
продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы,
оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена предыдущая стадия
процесса.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также
--- стр. 64 ---
- Не использовать набор реагентов по истечении срока годности.
- Использовать одноразовые неопудренные перчатки, лабораторные халаты,
защищать глаза во время работы с образцами и реагентами. Тщательно вымыть
руки по окончании работы. Все операции проводятся только в перчатках для
исключения контакта с организмом человека.
- Избегать вдыхания паров, контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой.
Вреден при проглатывании. При контакте немедленно промыть пораженное
место водой, при необходимости обратиться за медицинской помощью.
- При соблюдении условий транспортировки, эксплуатации и хранения риски
взрыва и возгорания отсутствуют.
- Листы безопасности реагентов (SDS - safety data sheet) доступны по запросу.
Оценка вероятных событий, в результате наступления которых могут произойти
отрицательные последствия для организма человека (для Форм комплектации, не
включающих комплекты реагентов «МАГНО-сорб» и «РИБО-преп»^:
При использовании по назначению и соблюдении вышеперечисленных мер
предосторожности набор безопасен.
Оценка вероятных событий, в результате наступления которых могут произойти
отрицательные последствия для организма человека (для Форм комплектации,
включающих комплекты реагентов «МАГНО-сорб» или «РИБО-преп»’):
При использовании по назначению и соблюдении вышеперечисленных мер
предосторожности контакт с организмом человека исключен. При аварийных
ситуациях возможно следующее;
- раздражение слизистой оболочки глаз у чувствительных лиц,
- раздражение кожи у чувствительных лиц,
- аллергическая реакция,
- вред при вдыхании,
- вред при приеме внутрь.
Специфические воздействия набора реагентов на организм человека (для всех
форм комплектации):
- Канцерогенный эффект отсутствует.
- Мутагенное действие отсутствует.
- Репродуктивная токсичность отсутствует.
--- стр. 65 ---
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
Взятие исследуемого материала
1. Система вакуумного забора крови (например, Vacuette®, Greiner Bio-One GmbH
(«Грейнер Био-Уан»), Австрия, или аналогичная).
2. Центрифуга с охлаждением до 24 тыс g (например, Hettish, Германия, или
аналогичная).
3. Центрифуга медицинская с принадлежностями (например, MPW Med.instruments
Spoidzielnia Pracy («МПВ Мед.инструменте Сполдзиелния Праци»), Польша или
аналогичная).
4. Одноразовые полипропиленовые плотно закрывающиеся пробирки объемом
2,0 мл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк.»), США, или аналогичные).
Экстракция РНК из исследуемых образцов
При работе с Формами 3 и 4. включающими комплект реагентов «МАГНО-сорб»:
5. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся
пробирки объемом 1,5 мл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или
аналогичные).
6. Завинчивающиеся крышки к пробиркам (например, Axygen, Inc. («Эксиджен,
Инк.»), США, или аналогичные).
7. Одноразовые полипропиленовые или полистирольные пробирки объемом до 5 мл
диаметром 12 мм, круглодонные (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США,
или аналогичные).
8. Одноразовые полипропиленовые крышки для пробирок объемом до 5 мл
диаметром 12 мм (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или
аналогичные).
9. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл, до
1000 мкл и до 5000 мкл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или
аналогичные).
10.Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фильтром до
100, до 200, до 1000 и до 5000 мкл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»),
США, или аналогичные).
11. Штативы для пробирок объемом 1,5 мл и/или 5 мл (например, Axygen, Inc.
(«Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные).
12. Ламинарный бокс класс биологической безопасности II тип А (например, «БАВп-
01-«Ламинар-С.»-1,2», ЗАО «Ламинарные системы», Россия, или аналогичный).
--- стр. 66 ---
13. Вортекс (например, SIA Biosan, Латвия, или аналогичный).
14. Термостат для пробирок объемом 5 мл, диаметром 12 мм от 25 до 100 °С
(например, SIA BioSan, Латвия, или аналогичный).
15. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100 °С (например, SIA
BioSan, Латвия, или аналогичный).
16. Магнитный штатив для пробирок типа «Эппендорф» объемом 1,5 мл и/или
объемом 5 мл, диаметром 12 мм (например, Promega, США).
17. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления
надосадочной жидкости (например, «ОМ-1», Россия, или аналогичный).
18. Автоматические дозаторы переменного объема (например, ООО «Биохит»,
Россия, или аналогичные).
19. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24 до минус 16 “С.
20.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09.
21.Одноразовые пластиковые контейнеры для сброса и инактивации материалов.
При использовании автоматических станций для экстракции нуклеиновых кислот. -
при работе с Формами 3 и 4:
22. Автоматическая станция для экстракции НК «открытого типа»^ (например, Xiril
Neon 100 series, Тесап Schweiz AG («Тикан Швейц АГ»), Швейцария) и другие,
рекомендованные Производителем).
23. Набор необходимых расходных материалов к данным автоматическим станциям.
При работе с Формами 5 и 6, включающими комплект реагентов «РИБО-преп»:
24.Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся
пробирки объемом 1,5 мл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или
аналогичные).
25.Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фильтром до
200 и до 1000 мкл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или
аналогичные).
26.Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл
(например, Axygen, Inc. («Эксиджен, Инк»), США, или аналогичные).
27. Штативы для пробирок объемом 1,5 мл (например, Axygen, Inc. («Эксиджен,
Инк»), США, или аналогичные).
28. Ламинарный бокс класс биологической безопасности II тип А (например, «БАВп-
01-«Ламинар-С.»-1,2», ЗАО «Ламинарные системы», Россия, или аналогичный).
^ Станции, совместимые с наборами реагентов различных производителей.
--- стр. 67 ---
29. Микроцентрифуга для пробирок типа «Эппендорф» с максимальной скоростью
центрифугирования не менее 12 тыс g (например, MiniSpin, Eppendorf
Manufacturing Corporation («Эппендорф Мануфэктуринг Корпорэйшн»), Германия,
или аналогичные).
30. Вортекс (например, SIA Biosan, Латвия, или аналогичный).
31. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100 “С (например, ООО
«НПО ДНК-Технология», Россия, или аналогичный).
32. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления
надосадочной жидкости (например, «ОМ-1», ООО «Утес», Россия, или
аналогичный).
33. Автоматические дозаторы переменного объема (например, ООО «Биохит»,
Россия, или аналогичные).
34. Холодильник от 2 до 8 ®С с морозильной камерой от минус 24 до минус 16 °С.
35.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09.
36.Одноразовые пластиковые контейнеры для сброса и инактивации материалов.
При работе с Формами 1 и 2:
37. Комплекты реагентов для экстракции РНК, например «РИБО-преп» вариант 100
(РУ № ФСР 2008/03147), «МАГНО-сорб» вариант 100-1000 (РУ Ш № ФСР
2010/07265).
38. Дополнительные материалы и оборудование для экстракции РНК - согласно
инструкции к комплекту реагентов для экстракции РНК.
При использовании автоматических станций для экстракции нуклеиновых кислот. -
ПРИ работе с Формами 1 и 2:
39. Автоматическая станция для экстракции НК «закрытого типа»® (например,
QIAsymphony SP/AS или QIAsymphony SP (QIAGEN GmbH («Киаген ГмбХ»),
Германия) и другие, рекомендованные Производителем).
40. Комплекты реагентов для экстракции РНК для автоматической станции
QIAsymphony SP/AS или QIAsymphony SP (QIAGEN GmbH («Киаген ГмбХ»),
Германия) (например, QIAsymphony Virus/Bacteria Midi Kit (QIAGEN GmbH
(«Киаген ГмбХ»), Германия).
41 .Одноразовые пробирки объемом 2,0 мл, рекомендованные в инструкции по
запуску автоматической станции QIAsymphony SP/AS (например, Sarstedt,
Германия, или аналогичные).
Станции, совместимые с наборами реагентов только одного производителя.
--- стр. 72 ---
Реагент Описание Объем, мл Количество
HKOIL ВИЧ-Duo Порошок белого цвета - 4 пробирки
nK02L ВИЧ-Duo Порошок белого цвета - 4 пробирки
BKOL Порошок белого цвета - 4 пробирки
Растворитель
Прозрачная жидкость от
соломенно-желтого цвета до
бесцветного (допускается
появление осадка в виде
хлопьев)
5,0 5 пробирок
Комплект реагентов рассчитан на проведение 96 реакций обратной транскрипции и
амплификации, включая контроли и калибраторы. Входит в состав форм 2, 4 и 6,
--- стр. 73 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов;
- экстракция РНК из исследуемых образцов,
- обратная транскрипция РНК и амплификации кДНК с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального
времени»,
- анализ и интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые
пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку «RNase-
free», «DNase-free».
Для экстракции, используются следующие комплекты реагентов:
- «РИБО-преп» вариант 100 в соответствии с приложением А.
- «МАГНО-сорб» вариант 100-1000 в соответствии с приложением Б.
- QlAsymphony Virus/Bacteria Midi Kit в соответствии с приложением В.
Каждая индивидуальная постановка должна сопровождаться постановкой трёх
контролей: отрицательного контроля (ОК) и двух положительных контролен (ПК1 и
ПК2), В качестве отрицательного контроля (ОК) используют реагент Растворитель,
в качестве положительных контролей (ПК1, ПК2) используют восстановленные
реагенты ПК01Е ВИЧ-Duo и HK02L ВИЧ-Duo.
Экстракция РНК из каждого исследуемого образца и контролей проводится в
присутствии восстановленного внутреннего контрольного образца - BKOL.
При первом использовании набора реагентов необходим анализ дополнительных
образцов - калибраторов K1L ВИЧ-Duo и K2L ВИЧ-Duo - минимум в трех повторах
каждый (рекомендуется по четыре повтора), начиная с этапа экстракции.
Процедура экстракции калибраторов аналогична процедуре экстракции
исследуемых образцов.
При получении достоверных результатов калибровки полученные параметры
калибровочной прямой и рассчитанное значение медианы Ct ВКОмед могут быть
использованы в последующих постановках для расчета концентрации РНК ВИЧ-1 в
исследуемых образцах.
--- стр. 74 ---
ВНИМАНИЕ! ! Калибровку необходимо проводить при изменении условий
постановки или через каждые 6 месяцев использования одной серии набора
реагентов в одинаковых условиях. Под условиями постановки подразумеваются:
серия комплекта для экстракции, объем экстракции, прибор для амплификации,
версия программного обеспечения прибора.
Подготовка лиофилизированных контролей и калибраторов
1. Достать лиофилизированные реагенты BKOL, HK01L ВИЧ-Duo и HK02L ВИЧ-
Duo, K1L ВИЧ-Duo, K2L ВИЧ-Duo. Содержимое пробирок осадить на вортексе,
аккуратно открыть крышки, избегая распыления содержимого, и добавить реагент
Растворитель в соответствии с таблицей:
Таблица 9
Название контроля Добавить реагент Растворитель, мкл
HKOIL ВИЧ-Duo 1200
nK02L ВИЧ-Duo 1200
K1L ВИЧ-Duo 1200
K2L ВИЧ-Duo 1200
BKOL 300
2. Плотно закрыть пробирки и оставить их на 2 мин при температуре от 18 до 25 “С,
периодически перемешивая на вортексе.
3. После полного растворения осадить содержимое пробирок на вортексе в течение
3-5 с для сброса капель с крышки.
ВНИМАНИЕ! Восстановленные реагенты BKOL, HK01L ВИЧ-Duo и ПК02Е ВИЧ-
Duo, K1L ВИЧ-Duo, K2L ВИЧ-Duo хранить при температуре от 2 до 8 °С не более 3
месяцев.
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ
«РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку
RNase-free, DNase-free.
--- стр. 75 ---
Подготовка пробирок для обратной транскрипции и амплификации при
использовании «ПЦР-комплекта» вариант FRT-LA (формы 1, 3 и 5)
Выбор пробирок для проведения ОТ-ПЦР зависит от используемого
амплификатора с системой детекции в режиме «реального времени».
Для внесения в пробирки реагентов, проб РНК и контрольных образцов
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
Общий объем реакционной смеси - 50 мкл, включая объем пробы РНК - 25 мкл.
1. Определить по схеме приготовления реакционных смесей (Приложение Г)
количество каждого реагента, требующееся для приготовления реакционной смеси.
На одну реакцию требуется 15 мкл ПЦР-смеси-FL ВИЧ-Duo, 10 мкл
ПЦР-буфера-В и 2 мкл восстановленной Смеси ОТ-ПЦР-ферментов. Смесь
готовить на общее число исследуемых и контрольных образцов (три контрольных
образца в одном повторе при каждой постановке, два калибратора в трех или
четырех повторах в случае проведения калибровки) плюс запас на одну реакцию.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно
перед проведением ОТ-ПЦР.
2. Перемешать на вортексе содержимое нелиофилизированных реагентов ПЦР-
комплекта, осадить капли на вортексе.
3. В пробирку со Смесью ОТ-ПЦР-ферментов добавить 60 мкл Восстановителя
ферментов. Тщательно перемешать смесь пипетированием и осадить капли с
крышки пробирки на вортексе. Приготовленная смесь хранится при температуре
от минус 24 до минус 16 “С в течение 3 месяцев.
4. Затем в отдельной одноразовой пробирке смешать необходимое количество
ПЦР-смеси-FL ВИЧ-Duo, ПЦР-буфера-В и восстановленной Смеси ОТ-ПЦР-
ферментов. Тщательно перемешать смесь и осадить капли на вортексе.
5. Отобрать необходимое количество пробирок или стрипов для проведения ОТ-ПЦР
исследуемых и контрольных образцов (количество контрольных образцов см. в п.
8).
6. Внести в каждую пробирку по 25 мкл приготовленной реакционной смеси.
Неиспользованные остатки реакционной смеси выбросить.
7. В подготовленные пробирки с реакционной смесью внести по 25 мкл проб РНК,
полученных в результате экстракции из исследуемых образцов.
ВНИМАНИЕ! При добавлении проб РНК, экстрагированных с помощью комплектов
--- стр. 86 ---
пробирок или обозначения контрольных образцов в блоке амплификатора. При
повторном получении неудовлетворительного результата необходимо повторить
ПЦР-исследование для всех образцов, начиная с этапа экстракции РНК,
включая контрольные образцы.
5. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналам флуорофоров JOE
и/или ROX определено значение порогового цикла Ct. Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов на каком-
либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо проверить правильность установки
пробирок или обозначения контрольного образца в блоке амплификатора. При
повторном получении неудовлетворительного результата необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая РНК, начиная с этапа экстракции РНК.
6. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналу для флуорофора FAM
определено значение порогового цикла (Cf), отличающееся от Ct ВКО„ед более,
чем на 3 цикла. Необходимо проверить правильность установки пробирок или
обозначения контрольньгх образцов в блоке амплификатора. При повторном
получении неудовлетворительного результата необходимо повторить ПЦР-
исследование для всех образцов, начиная с этапа экстракции РНК, включая
контрольные образцы.
7. Для отрицательного контроля ОТ-ПЦР (К-) по каналам флуорофоров FAM и/или
JOE и/или ROX определено значение порогового цикла Ct. Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или контаминация
реагентов на этапе ОТ-ПЦР. Необходимо проверить правильность установки
пробирок или обозначения контрольного образца в блоке амплификатора. При
повторном получении неудовлетворительного результата необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ОТ-ПЦР и детекцию для всех образцов, в которых обнаружена
специфическая РНК.
8. Для исследуемого образца по каналу для флуорофора FAM значение порогового
цикла (Ct) не определено, или отличается от Ct ВКОмед более чем на 3 цикла.
Необходимо проверить правильность установки пробирок или обозначения
образца в блоке амплификатора. При повторном получении
неудовлетворительного результата необходимо повторить ПЦР-исследование
--- стр. 87 ---
для данного образца, начиная с этапа экстракции РНК.
9. Для исследуемого образца по каналам флуорофоров JOE и ROX не определены
значения порогового цикла (СО, значение Ct по каналу для флуорофора РАМ
отклоняется от Ct ВКОмед более чем на 2 цикла. Необходимо проверить
правильность установки пробирок или обозначения образца в блоке
амплификатора. При повторном получении неудовлетворительного результата
необходимо повторить ПЦР-исследование для данного образца, начиная с этапа
экстракции РНК.
10. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на
графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального
подъема (график представляет собой приблизительно прямую горизонтальную
линию). Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой
линии или параметров расчета базовой линии в программном обеспечении
прибора. Если результат получен при правильном уровне пороговой линии
(базовой линии), необходимо повторить ПЦР-исследование для данного образца,
начиная с этапа экстракции РНК.
--- стр. 88 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес, Набор реагентов с истекшим сроком годности применению
не подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности,
указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до
8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами
крытых транспортных средств. Допускается транспортирование при температуре от
2 до 25 °С не более 3 сут.
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-LA при получении
разукомплектовать в соответствии с указанными температурами хранения.
Допускается хранение комплекта реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-LA без
разукомплектации при температуре от 2 до 8 °С не более 3 месяцев от даты
изготовления.
Хранение.
Форма 1. ПЦР-комплект» вариант FRT-LA хранить в холодильной камере при
температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-смеси-FL ВИЧ-Duo и ПЦР-буфера-В. ПЦР-
смесь-FL ВИЧ-Duo и ПЦР-буфер-В хранить в морозильной камере при температуре
от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL ВИЧ-Duo хранить в защищенном от света
месте. Лиофилизированные реагенты (Смесь ОТ-ПЦР-ферментов, BKOL,
калибраторы K1L ВИЧ-Duo и K2L ВИЧ-Duo, контрольные образцы HKOIL ВИЧ-Duo и
ПК021 ВИЧ-Duo) хранить (до растворения) в пакетах с влагопоглотителем.
Восстановленные реагенты BKOL, K1L ВИЧ-Duo, K2L ВИЧ-Duo, ПК011 ВИЧ-Duo,
ПК021 ВИЧ-Duo хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С не
более 3 месяцев. Восстановленный реагент Смесь ОТ-ПЦР-ферментов хранить в
морозильной камере при температуре от минус 24 до минус 16 ®С не более 3
месяцев.
Форма 2. «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в холодильной камере при
температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь ВИЧ-Duo-Lyo хранить в пакетах с
влагопоглотителем в защищенном от света месте. Лиофилизированные реагенты
(BKOL, калибраторы K1L ВИЧ-Duo и K2L ВИЧ-Duo, контрольные образцы HK01L
ВИЧ-Duo и HK02L ВИЧ-Duo) хранить (до растворения) в пакетах с
влагопоглотителем. Восстановленные реагенты BKOL, K1L ВИЧ-Duo, K2L ВИЧ-Duo,
--- стр. 90 ---
от 2 до 8 °С не более 3 месяцев. Восстановленный реагент Смесь ОТ-ПЦР-
ферментов хранить в морозильной камере при температуре от минус 24 до минус
16 '’С не более 3 месяцев.
Форма 6. Комплект реагентов «РИБО-преп» хранить при температуре от 2 до 8 °С.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в холодильной камере при температуре от 2
до 8 °С. ПЦР-смесь ВИЧ-Duo-Lyo хранить в пакетах с влагопоглотителем в
защищенном от света месте. Лиофилизированные реагенты (BKOL, калибраторы K1L
ВИЧ-Duo и K2L ВИЧ-Duo, контрольные образцы ПКОИ ВИЧ-Duo и ПК021 ВИЧ-Duo)
хранить (до растворения) в пакетах с влагопоглотителем. Восстановленные
реагенты BKOL, K1L ВИЧ-Duo, K2L ВИЧ-Duo, ПКОИ ВИЧ-Duo. ПК021 ВИЧ-Duo
хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С не более 3 месяцев.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать регламентированный
температурный режим.
--- стр. 91 ---
г а р а н т и й н ы е о б я з а т е л ь с т в а п р о и з в о д и т е л я
производитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик
набора реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуатационной
документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий
транспортирования, хранения и применения.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по адресу 111123,
г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail: cs@pcr.ru
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению
набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и
обстоятельств, создаю 1цих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется
направить сообидение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную
государственную регулирующую организацию (в РФ - Федеральная служба по
надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора
Е.Н. Родионова
17
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amDlisens.ru.
--- стр. 92 ---
REF Номер по каталогу V
LOT Код партии
IVD
Медицинское изделие для
диагностики in vitro □а
VER Дата изменения
1
Температурный диапазон d ]
Изготовитель
Содержимого
достаточно для
проведения п-
количества тестов
Использовать до
Обратитесь к
инструкции по
применению
Не допускать
воздействия
солнечного света
Дата изготовления
Беречь от влаги
--- стр. 109 ---
транскрипции и амплификации, включая контроли.
3. Технические условия: ТУ 21.20.23-344-01897593-2017
4. Свидетельства на товарный знак:
АмплиСенс № 212724, срок действия свидетельства до 06 октября 2020 г.;
AmpliSens № 321480, срок действия свидетельства до 03 октября 2025 г.
5. Разработчик:
Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно-
исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору
в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии Роспотребнадзора)
6. Производитель:
Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно-
исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору
в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии Роспотребнадзора)
7. Сведения о готовности производителя (изготовителя) к серийному
выпуску:
- Сертификат соответствия ГОСТ ISO 13485-2011 (ISO 13485:2003),
регистрационный номер № РОСС RU.31508.04HE40.0C.01.085.2016, дата
выдачи 18.10.2016 г., срок действия до 18.10.2019 г.
8. Сведения о соответствии национальным стандартам РФ на
продукцию:
Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс® ВИЧ-Монитор-Duo-
FL отвечает качеству, технической и биологической безопасности в
соответствии с требованиями ГОСТ Р 51088-2013 «Медицинские изделия для
диагностики ин витро. Реагенты, наборы реагентов, тест-системы, контрольные
материалы, питательные среды. Требования к изделиям и поддерживающей
документации» (в части соответствия технической документации), ГОСТ ISO
3
--- стр. 110 ---
т
14971-2011 «Изделия медицинские. Применение менеджмента риска к
медицинским изделиям», ГОСТ ISO 17511-2011 «Изделия медицинские для
диагностики in vitro. Измерение величин в биологических пробах.
Метрологическая прослеживаемость значений, приписанных калибраторам и
контрольным материалам», ГОСТ Р ИСО 23640-2015 «Изделия медицинские
для диагностики in vitro. Оценка стабильности реагентов для диагностики in
vitro», ГОСТ Р ИСО 15223-1-2014 «Изделия медицинские. Символы,
применяемые при маркировании на медицинских изделиях, этикетках и в
сопроводительной документации», ГОСТ 14192-96 «Маркировка грузов»,
ГОСТ 15.309-98 «Система разработки и постановки продукции на
производство. Испытания и приемка выпускаемой продукции. Основные
положения» (в части соответствия технической документации), СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10
«Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими
отходами» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при
работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности»,
а также соответствует показателям качества, изложенным в ТУ 21.20.23-344-
01897593-2017.
Подтверждается следующими документами:
Акт оценки результатов технических испытаний медицинского изделия
для диагностики in vitro 99/2017-04 от 10 августа 2017 г. Составлен
Испытательным лабораторным центром Федерального государственного
бюджетного учреждения здравоохранения Г оловной центр гигиены и
эпидемиологии ФМБА России (ФГБУЗ ГЦГиЭ ФМБА России), г. Москва.
Полномочия на проведение испытаний - Аттестат аккредитации
испытательного лабораторного центра: № RA.RU.510207. Дата внесения
сведений в реестр аккредитованных лиц 09.06.2016. Срок действия - бессрочно.
--- стр. 111 ---
9. Сведения о порядке классификации изделия по приказу М3 РФ от
06.06.2012 № 4н и Приказу Минздрава России от 25.09.2014 г. № 557н:
Вид медицинского изделия в соответствии с номенклатурной
классификацией медицинских изделий - 106370.
10. Класс потенциального риска применения медицинского изделия в
соответствии с номенклатурной классификацией медицинских изделий:
Класс 3 в соответствии с Приказом М3 РФ от 06.06.2012 № 4н и п. 5.2.2
ГОСТ Р 51088.
11. Код ОКПД 2 (Общероссийского классификатора продукции по
видам экономической деятельности):
ОКПД 2 21.20.23.110
12. Комплект документов для регистрации:
Комплект документов для государственной регистрации подготовлен в
соответствии с Правилами регистрации медицинских изделий (Постановление
правительства РФ от 27.12.12 № 1416), пунктами 9 (заявление о регистрации) и
10 (комплект документов).
•>