Набор реагентов для выявления ДНК вируса герпеса человека 6 типа методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (РеалБест ДНК ВГЧ-6) по ТУ 9398-283-23548172-2012 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- У Т В Е Р Ж Д Е Н А П риказом Росздравнадзора о'г 20 г. № « У Т В Е Р Ж Д А Ю » еральны й директор '1 ^ щ В е к то р -Б е с т» Х усаи нов f 3 2 0 12 г. ИНСТРУКЦИЯ^ по применению набора реагентов для выявления ДНК вируса герпеса человека 6 тина методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РеалБест ДНК НГЧ-6» (комплект 1) 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов «РеалБест ДНК ВГЧ-6» предназначен для выявления ДНК вируса герпеса человека 6 типа методом полимеразной цепной реакции (НЦР) с гибридизационно- флуоресцентной детекцией продуктов НЦР в режиме реального времени. Выделение ДНК из клинических проб проводится с помощью наборов; «РеалБест ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «РеалБест ДНК-экстракция 3» и «РеалБест экстракция 100». Комплект 1 предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами планшетного типа «iQ iCycler», «iQ5 iCycler», «СРХ96» (фирма «Bio-Rad», США), «ДТ-96» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия) или их ана;югами. Комплект 1 рассчитан на проведение анализа 48 образцов, включая контрольные образцы. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип метода. Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фрагмента ДНК, заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями, достройка полинуклео- тидных последовательностей с этих праймеров Taq ДПК-полимеразой. В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуорес- Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором по производству Ткачевым В.К. и иач. отделеиия производства ПЦР наборов Трухипой А.В. --- стр. 2 --- ценции в каждом цикле Г1ЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благода ря использованию специфичных для данных участков Д Н К В Г Ч -6 гибридизационных ДНК-зондов, которые в ходе реакции связываются с одной из цепей Д И К , обеспечивая также дополнительную специфичность метода. Д Н К -зо н д содержит на 5 ’ конце флуо ресцентный краситель, а на 3 ’ конце - гаситель флуоресценции, значительно снижаю- 1ЦИЙ интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного сиР 1теза комплементарной цепи, благодаря 5 ’-3 ’ нуклеазной активности Taq ДНК-полимеразы , зонд расщепляется с 5 ’ конца и происходит разобщение красителя и гасителя, нриводян 1ее по мере накопле ния продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образо вавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определя ется исходным количеством Д Н К возбудителя инфекции в образце. Достоверность анализа контролируется но наличию положительного результата в образце П К О , который подвергается процедуре выделения Д Н К вместе с анализируемы ми биопробами. Учет эффективности выделения Д Н К В ГЧ -6 из образцов обеспечивается выделени ем Д Н К из клинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним кон трольным образцом (В К О ). 2.2. Состав набора: - положительный контрольный образец (П К О ) - на ос 1юве плазмидной Д Н К со встройкой фрагментов Д Н К В Г Ч -6 - 1 пробирка (1,0 мл); - готовая реакционная смесь для Н Ц Р (ГР С ), лиофилизированная - 48 пробирок (6 стрипов по 8 пробирок). Набор дополнительно комплектуется: - стрипированными крыщками для пробирок (6 стрипов по 8 щ тук) или оптической плёнкой - 1 лист. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Чувствительность - определение 100 копий Д Н К В ГЧ -6 в пяти образцах, приго товленных из Стандартного образца предприятия (С О Н ) Д Н К В ГЧ -6 - 100 %. 3.2. Специфичность определения Д Н К В ГЧ -6 (по стандартной nancjm отрицательных сывороток предприятия, С П И О К С ) - 100 %. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖ НОСТИ Внимание! HccoGjHOAenne приведённых ниже требований может нривесги к искажению результагов НЦР. --- стр. 3 --- 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Г О С Т Р 51609-2000). 4.2. При работе с набором следует соблюдать С П 1.3.2322-08 «Безонасность работы с микроорганизмами II1-1V групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этагн .1 выделения Д Н К и постановки П Ц Р согласно М У 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора торий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот нри работе с материалом, содержащим микроорганизмы 1-IV групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За прещается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов П Ц Р в режиме ре- ajHjHoro времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для пинеток. 4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз ных образцов. 4.8. После окончания работ для предотвран 1ения контаминации рабочие поверхности ламинарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных У Ф ламп в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфицируюнщми средствами (такими, как: 0,2% раствор Д П -2 Т ; 1-3% раствор «Диабак»; 0,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «Мистраль»). 4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфици рующими средствами с последующей утилизацией. 5. О Б О Р У Д О В А Н И Е И М А Т Е Р И А Л Ы - амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме рсалыюго времени: «iQ iCycler», «iQ 5 iCycler», «С Р Х 96» (фирма «Bio-Rad», С Ш А ), «Д Т -96» (О О О «Н П О Д Н К-Технология», Россия) или их аналог; - ламинарный бокс П -го класса биологической защиты, предназначенный для ра боты с инфекци 01н1ым материалом (фирма «Ламинарные системы», Россия); - холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8°С; - микроцентрифуга типа «Eppendorf M iniSpin» (фирма «Eppendorf», Германия); - пипетки полуавтоматические (дозаторы механические) одноканальные с пере менным объемом, со сменными наконечниками (фирма «Biohit», Финляндия); --- стр. 9 --- У Т В Е Р Ж Д Е Н А « У 'Г В Е Р Ж Д А Ю » П риказом Росздравнадзора ___ Генеральны й директор о т________________20 г. № ,У ^^< о ^ -Д ^ ? Ш ».«В екго п -Б е с т» М .Д . Х усаи нов C S 20 12 г. X ' % ■ " O iip e v H ИНСТ1% Й по применению набора реагентов для выявления Д Н К вируса герпеса человека 6 типа методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РсалБест Д Н К В Г Ч -6 » (ко м п л е кт 2) 1. Н А З Н А Ч Е Н И Е Набор реагентов «РеалБест Д Н К В Г Ч -6» предназначен для выявления Д Н К вируса герпеса человека 6 типа методом полимеразной цепной реакции (Н Ц Р ) с гибридизационпо- флуоресцентной детекцией продуктов Н Ц Р в режиме реального времени. Выделение Д Н К из клинических проб проводится с помощью наборов: «РеалБест ДНК-экспресс», «РеалБест Д Н К-экстракция 1», «РеалБест Д Н К-экстракция 3» и «РеалБест экстракция 100». Комплект 2 предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами как роторного типа: «Rotor-Gene 3000», «Rotor-Gene 6000» (фирма Corbett Research, Австралия). «Rotor-Gene Q » (фирма Qiagen, Германия), так и планшетного типа: «iQ iCycler», «iQ5 iCycler», «С РХ96» (фирма Bio-Rad, С Ш А ), «Д Т-96» (О О О « Н П О Д Н К-Технология», Россия) или их аналогами. Комплект 2 рассчитан на проведение анализа 50 образцов, включая контрольные образцы. 2. Х А Р А К Т Е Р И С Т И К А Н А Б О Р А 2 .Г Принцип метода. Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фрагмента Д Н К , заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями, достройка 1Юлинуклео- Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А. В . --- стр. 10 --- тидных последовательностей с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой. В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуорес ценции в каждом цикле П Ц Р . Увеличение сигналов флуоресценции происходит благода ря использованию специфичных для данных участков Д Н К В Г Ч -6 гибридизационных ДНК-зондов, которые в ходе реакции связываются с одной из цепей Д Н К , обеспечивая также дополнительную специфичность метода. Д Н К -зо н д содержит на 5 ’ конце флуо ресцентный краситель, а на 3 ’ конце - гаситель флуоресценции, значительно снижаю щий интенсивность флуоресценции. В ходе полимераз 1Юго синтеза комплементарр 1ой цепи, благодаря 5 ’-3 ’ нуклеазной активности Taq ДНК-полимеразы , зонд расп 1епляется с 5’ конца и происходит разобщение красителя и гасителя, приводян 1ее по мере накопле ния продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образо- вавпшхся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определя ется исходным количеством Д Н К возбудителя инфекции в образце. Достоверность анализа контролируется по наличию положительного результата в образце П К О , который подвергается процедуре выделения Д Н К вместе с анализируемы ми биопробами. Учет эффективности выделения Д Н К В ГЧ -6 из образцов обеспечивается выделени ем Д Н К из клинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним кон трольным образцом (В К О ). 2.2. Состав набора: - положительный контрольный образец (Н К О ) - на основе плазмидной Д Н К со встройкой фрагментов Д Н К В Г Ч -6 - 1 пробирка (1,0 мл); - реакционная смесь для П Ц Р (PC ), лиофилизированная - 5 пробирок, каждая на 10 определений; - раствор для восстановления (РВ ) - 2 флакона (по 2,0 мл). 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Чувствительность - определение 100 копий Д Н К В ГЧ -6 в пяти образцах, приго- товлен 1п.1х из Стандартного образца предприятия (С О Н ) Д Н К В Г Ч -6 - 100 %. 3.2. Специфичность определения Д Н К В ГЧ -6 (по стандартной панели отрицательных сывороток предприятия, СНГ! О К С ) - 100 %. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖ НОСТИ Внимание! Н есоблюдение приведённых ниже требований может привести к искажению результатов НЦР. --- стр. 11 --- 4.1. Потенциальный риск применения н аб о р а -кл а сс 26 (ГО СТ' Р 51609-2000). 4.2. При работе с набором следует соблюдать С П 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами I11-1V групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 4.3. Для предотвран 1ения контаминации необходимо территориально разделять этапы выделения Д П К и постановки П Ц Р согласно М У 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора торий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы 1-IV групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За- преп 1,ается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов П Ц Р в режиме ре ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для пипеток. 4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз ных образцов. 4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности ламинарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных У Ф ламп в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфицирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор Д П -2 Т ; 1-3% раствор «Диабак»; 0,5%) раствор «Лизафин»; 0,5-1%) раствор «Мистраль»). 4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфици рующими средствами с последующей утилизацией. 5. О Б О Р У Д О В А Н И Е И М А Т Е Р И А Л Ы - амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени роторного типа; «Rotor-Gene 3000», «Rotor-Gene 6000» (фирма Corbett Research, Австралия), «Rotor- Gene Q » (фирма Qiagen, Германия) или планщетного типа: «iQ iCycler», «iQ5 iCycler», «C FX 96» (фирма Bio-Rad, С Ш А ), «Д Т -96 » (О О О « Н П О Д П К-Технол огия», Россия) или их аналюг; - ламинарный бокс 11-го класса биологической защиты, предназначенный для ра боты с инфекционным материалом (фирма «Ламинарные системы», Россия); - холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8°С; - микроцентрифуга типа «Eppendorf M iniSpin» (фирма «Eppendorf», Германия); --- стр. 17 --- --- стр. 18 --- УТВЕРЖДЕ1 lA «УТВЕРЖДАЮ» Приказом Росздравнадзора Г е н е ^ 1ьный директор о т ______________20_ _г. № ________ М.Д. Хусаинов 2012 г. ИИСТРУК! по применению набора реагентов для выявления Д Н К вируса герпеса человека 6 типа методом полимеразной цепной реакции в режиме реаги>ного времени «РеалБ естД Н К ВГЧ-6» (комплект 1) 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов «РеалБест Д Н К В ГЧ -6» предназначен для выявления Д Н К вируса герпеса человека 6 типа методом полимеразной цепной реакции (Н Ц Р ) с гибридизационно- флуоресцентной детекцией продуктов Н Ц Р в режиме реального времени. Выделение Д Н К из клинических проб проводится с помоп 1ью наборов: «РеалБест ДНК-экспресс», «РеалБест Д Н К-экстракция 1», «РеалБест Д Н К-экстракция 3» и «РеалБест экстракция 100». Комплект 1 предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами планшетного типа «iQ iCycler», «iQ5 iCycier», «С Р Х 96» (фирма «Bio-Rad», С Ш А ), «Д Т-96» (О О О «Н П О Д Н К-Техно л оги я», Россия) или их анагюгами. Комплект 1 рассчитан на проведение анализа 48 образцов, включая контрольные образцы. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип метода. Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фрагмента Д Н К , заключаюн 1егося в повторяюишхся циклах: температурная денатурация, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями, достройка полинуклео- тидных последовательностей с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой. В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигнагюв флуорес- Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором по производству Ткачевым В.К. и иач. omdenetiun производства ПЦР наборов Трухииой А. В. --- стр. 19 --- ценции в каждом цикле МЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благода ря использованию специфичных для данных участков Д Н К В Г Ч -6 гибридизацио 1ты х ДПК-зондов, которые в ходе реакции связываются с одной из цепей Д Н К , обеспечивая также дополнительную специфичность метода. Д Н К -зо н д содержит на 5 ’ конце флуо ресцентный краситель, а на 3 ’ конце - гаситель флуоресценции, значительно снижаю щий интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благодаря 5 ’-3 ’ нуклеазной активности 'I'aq ДНК-полимеразы , зонд расщепляется с 5 ’ конца и происходит разобщение красителя и гасителя, приводяи 1ее по мере накопле ния продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образо вавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определя ется исходным количеством Д Н К возбудителя инфекции в образце. Достоверность анализа ко 1ггролируется по наличию положительного результата в образце Н К О , который подвергается процедуре выделения Д Н К вместе с анализируемы ми биопробами. Учет эффективности выделения Д Н К В ГЧ -6 из образцов обеспечивается выделени ем Д Н К из клинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним кон трольным образцом (В К О ). 2.2. Состав набора: - положительный контрольный образец (Н К О ) - на основе плазмидной Д Н К со встройкой фрагментов Д Н К В ГЧ -6 - 1 пробирка (1,0 мл); - готовая реакцио 1т а я смесь для Н Ц Р (1'РС), лиофилизированная - 48 пробирок (6 стрипов по 8 пробирок). Набор дополнительно комплектуется: - стрипироваш 1ыми крышками для пробирок (6 стрипов по 8 ш тук) или оптической плёнкой - 1 лист. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Чувствительность - определение 100 копий Д Н К В ГЧ -6 в пяти образцах, приго товленных из Стандартного образца предприятия (С О Н ) Д Н К В Г Ч -6 - 100 %. 3.2. Специфичность определения Д Н К В ГЧ -6 (по стандартной панели отрицательных сывороток предприятия, С Н Н О К С ) - 100 %. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖ НОСТИ Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к искажению результатов НЦР. --- стр. 20 --- 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Г О С Т Р 51609-2000). 4.2. При работе с набором следует соблюдать С П 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами I1 I-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 4.3. Для предотвран 1ения контаминации необходимо территориально разделять этапы выделения Д Н К и постановки П Ц Р согласно М У 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора торий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы 1-IV групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе- ремещюго объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За- препщется их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов П Ц Р в режиме ре ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для пипеток. 4.7. Пе допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз ных образцов. 4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности ламинарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных У Ф ламп в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфицирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор Д П -2 Т ; 1-3% раствор «Диабак»; 0,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «Мистраль»). 4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфици- руюпщми средствами с последующей утилизацией. 5. О Б О Р У Д О В А Н И Е И М А Т Е Р И А Л Ы - амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени: «1Q iCycler», «iQ 5 iCycler», «С Р Х 96» (фирма «Bio-Rad», С Ш А ), «Д Т -96» (О О О «Н П О ДП К-Технология», Россия) или их аналог; - ламинарный бокс П-го класса биологической защиты, предназначенный для ра боты с инфекционным материалом (фирма «Ламинарные системы», Россия); - холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8°С; - микроцентрифуга типа «Eppendorf M iniSpin» (фирма «Eppendorf», Германия); - пипетки полуавтоматические (дозаторы механические) однокана;п,ные с пере менным объемом, со сменными наконечниками (фирма «Biohit», Финляндия); --- стр. 25 --- --- стр. 26 --- У Т В Е Р Ж Д Е Н А 11 р и к а з о м Р о с з д р а в и а д з о р а о т 2 0 г . № « У Т В Е Р Ж Д А Ю » Г е н е р а л ь н ы й д и р е к т о р ;;^оиЕРнй^^^^Щ ^ктор-Бест» М . Д . Х у с а и н о в 2012 г. по применению набора реагентов для выявления ДНК вируса герпеса человека 6 типа методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РеалБест ДНК ВГЧ-6» (комплекг 2) 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов «РеалБест ДНК ВГЧ-6» предназначен для выявления ДНК вируса герпеса человека 6 типа методом полимеразной цепной реакции (НЦР) с гибридизационно- флуоресцентной детекцией продуктов НЦР в режиме реального времени. Выделение ДНК из клинических проб проводится с помощью наборов: «РеалБест ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «РеалБест ДНК-экстракция 3» и «РеалБест экстракция 100». Комплект 2 предназначен для применения с регистрируюишми амплификаторами к ак роторного типа: «Rotor-Gene 3000», «Rotor-Gene 6000» (фирма Corbett Research, Австралия), «Rotor-Gene Q» (фирма Qiagen, Германия), так и планшетного типа: «iQ iCycler», «iQ5 iCycler», «СГХ96» (фирма Bio-Rad, США), «ДТ-96» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия) или их аналогами. Комплект 2 рассчитан на проведение анализа 50 образцов, включая контрольные образцы. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип метода. Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фрагмента ДНК, заключающегося в повторяюпщхся циклах: температурная денатурация, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями, достройка полинуклео- Ииструщия составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором по производству Ткачевым В. К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухипой Л.В. --- стр. 27 --- тидиых последовательностей с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой. В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуорес ценции в каждом цикле ИЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благода ря использованию специфичных для данных участков ДНК ВГЧ-6 гибридизационных ДНК-зондов, которые в ходе реакции связываются с одной из цепей ДНК, обеспечивая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5’ конце флуо ресцентный краситель, а на 3’ конце - гаситель флуоресценции, значительно снижаю щ ий интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благодаря 5’-3’ нуклеазной активности Taq ДНК-полимеразы, зонд расщепляется с 5’ конца и происходит разобп1епие красителя и гасителя, приводящее по мере накопле ния продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресценции. П ри этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образо вавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определя ется исходным количеством ДНК возбудителя инфекции в образце. Достоверность анализа контролируется по наличию ноложигельного результата в образце НКО, который подвергается процедуре выделения ДНК вместе с анализируемы ми биопробами. Учет эффективности выделения ДНК Г)ГЧ -6 из образцов обеспечивается выделени ем ДНК из клинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним кон трольным образцом (ВКО). 2.2. Состав набора: - положительный контрольный образец (НКО) - на основе плазмидной ДНК со встройкой фрагментов ДНК ВГЧ-6 - 1 пробирка (1,0 мл); - реакционная смесь для НЦР (PC), лиофилизироватшя - 5 пробирок, каждая на К ) определений; - раствор для восстановления (РВ) - 2 флакона (гю 2,0 мл). 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГ НОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Чувствительность - определение 100 копий ДНК ВГЧ-6 в пяти образцах, приго товленных из Стандартного образца предприятия (СОН) ДНК ВГЧ-6 - 100 % . 3.2. Специфичность определения ДНК ВГЧ-6 (по стандартной панели отрицательных сывороток предприятия, СП11 ОКС) - 100 % . 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Внимание! Несоблюдение иривсдённых ниже требований может привести к искажению результатов ПЦР. --- стр. 28 --- 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Г ’ О С 'Г Р 51609-2000). 4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами I11-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы выделения ДПК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора торий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За прещается их перемен1ение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре- a jH > H o ro времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для пипеток. 4.7. Пе допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз ных образцов. 4.8. После окончания работ для предотврап1ения контаминации рабочие поверхности ламинарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных УФ ламп в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфицирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор ДП-2Т; 1-3% раствор «Диабак»; 0,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «Мистраль»). 4.9. Все использованные одноразовые M aT epn ajH ii подвергать обработке дезинфици- руюнщми средствами с гюследуюн1ей утилизацией. 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ - амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени роторного тина: «Rotor-Gene 3000», «Rotor-Gene 6000» (фирма Corbett Research, Австралия), «Rotor- Gene Q» (фирма Qiagen, Германия) или плантетного типа: «iQ iCycler», «iQ5 iCycler», «СРХ96» (фирма Bio-Rad, США), «ДТ-96» (ООО «НПО ДПК-Технология», Россия) или их anajm r; - ламинарный бокс П-го класса биологической защиты, предназначенный для ра боты с инфекционным мaтepиaJЮ м (фирма «Ламинарные системы», Россия); - холодильник бытовой, поддерживаюпщй температуру от 2 до 8°С; - микроцентрифуга типа «Rppendorf MiniSpin» (фирма «Eppendorf», Германия);