Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита С (РекомбиБест анти-ВГС-IgM) по ТУ 9398-088-23548172-2007 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2007/00610 от 17.08.2007 · класс риска 2б

Производитель: АО "Вектор-Бест" (Россия)

Вид изделия: Вирус гепатита С антитела класса иммуноглобулин М (IgМ) ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 8 контрактов, медианная цена за единицу 5 851 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
Приказом Росздравнадзора
УТВЕРЖДЕНА
от 2007 г. №
ьный директор 
тор-Бест»
М.Д. Хусаинов 
2007 г.
УТВЕРЖДАЮ
И Н С Т Р У К Ц И Я  по П Р И М Е Н Е Н И Ю
набора реагентов для иммуноферментного выявления 
иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита С 
(РекомбиБест анти-ВГС - IgM)
1. Н А З Н А Ч Е Н И Е
1.1. Набор предназначен для выявления иммуноглобулинов класса М  к вирусу ге­
патита С в сыворотке (плазме) крови человека.
1.2. Набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая контроли (по 5  лунок в 
каждой постановке И Ф А ). Возможны 12 независимых постановок по 8 анализов, включая 
контроли.
2. Х А Р А К Т Е Р И С Т И К А  Н А Б О Р А
2.1. Принцип действия
Активными компонентами набора являются рекомбинантные антигены В ГС. 
иммобилизованные в лунках планшетов, конъюгат (антитела к IgM  человека, меченные 
пероксидазой хрена), положительный и оприцательный контрольные образцы сывороюк.
Способ определения IgM  к В Г С  представляет собой твердофазный 
иммуноферментный анализ, в ходе которого при взаимодействии исследуемых образцов 
сывороток крови с иммобилизовар[ными на поверхности лунок планшета 
рекомбинантными антигенами происходит связывание специфических антигел и  
образование комплекса «антиген-антитело», который выявляют с помощью 
иммуноферментного конъюгата.
Далее, во время инкубации с раствором тетраметилбензидина происходит окрашива­
ние раствора в лунках, содержащих образовавшиеся комплексы «антиген-антитело».
Ииструкцгт составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»; директором по производству
В. К. Ткачевым и зав. Лабораторией бактериальных инфекций С. А. Кротовым


--- стр. 2 ---
Реакцию останавливают добавлением стоп-реагента и измеряют оптическую ПJЮT- 
ность растворов в лунках в двухволновом режиме: при основной длине волны 450 нм и 
длине волны сравнения в диапазоне 620 -  650 нм; или при длине волны 450 нм. Интен­
сивность желтого окрашивания пропорциональна количеству содержащихся в исследуе­
мом образце IgM  к В Г С .
После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании рассчи­
танного значения К П  анализируемые об])азцы оцениваются как положительные или ог- 
рицательные.
2.2. Состав набора
Набор содержит все необходимые лля проведения анализа реагенты, кроме дистил­
лированной воды:
- Планшет с иммобилизованными рекомбинантными антигенами В Г С  - 1  ш i ;
- Положительный контрольный образец (К^), инактивированный, лиофилизироваи- 
ный - 1  фл.;
- 0т)3ицательный контрольный образец (К”), инактивированный, лиофилизирован* 
ный - 1  фл.;
- Конъюгат, лиофилизированный - 1  фл. или 2 фл.;
- Раствор для предварительного разведения (Р П Р ) - 1  фл., 3,0 мл;
- Раствор для разведения сывороток (P C ) - 1  фл., 13,0 мл;
- Раствор для разведеьшя конъюгата (Р К ) - 1  фл., 13,0 мл;
- Тетраметилбензидин (Т М Б ), концентрат - 1  фл.. 1,5 мл;
- 25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с гвино.м 
(Ф С Б-Т х 2 5 )- 1  фл.,28,0 мл;
- Субстратный буферный раствор (С Б Р ) - 1  фл., 13,0 мл;
- Стоп-реагент - 1  фл., 12,0 мл.
В  комплект поставки дополнитель>[о входят:
- Пленка для заклеивания планшета - 2 шт.;
- Ванночка для реагентов - 2 шт.;
- Наконечники для пипетки на 4-20С' мкл - 16 шт.
3. А Н А Л И Т И Ч Е С К И Е  И  Д И А Г Н О С Т И Ч Е С К И Е  Х А Р А К Т Е Р И С Т И К И
3.1. Результат качественного определения набором IgM  к В Г С  соответствовует требо­
ваниям стандартной панели предприятия С П П  (per. №  С О П  05-13): чувствителы{ость и 
специфичность по IgM  к В Г С  - 100%.


--- стр. 3 ---
4. М Е Р Ы  П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
При подготовке к проведению анализа следует соблюдать меры предосторожности, 
принятые при работе с потенциально инфекционным материалом:
”  работать в резиновых перчатках;
-  не пиг[етировать растворы ртом;
—  все использованные материалы подвергать обработке 6 %  раствором перекиси водо* 
рода (не менее 6 ч).
5, О Б О Р У Д О В А Н И Е  И М А Т Е Р И А Л Ы
термрстат, поддерживающий темпер)атуру (37±1) °С ; 
холодильник бытовой;
пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным 
объёмом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объёмы жидкосги ог 5 до 
1000 мкл, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетиро- 
вания (погрешность неболее 5 % );
пипетка полуавтоматическая многоканальная со сменными наконечниками, позво­
ляющая отбирать объёмы жидкостей от 5 мкл до 350 мкл, аттестованная по значению 
средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 5 % ); 
промывочное устройство для планшет; 
перчатки резиновые хирургические; 
бума5га фильтровальная лабораторная;
цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 100 мл; 
цилиндр мерный вместимостью 1000 мл; 
вода очищенная;
6 %  раствор перекиси водорода.
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы  
Для внесения образцов в лунки стрипов следует использовать автоматические ии- 
петки с погрешностью измерения объемов не более 5%.
Допускается использование образцов, хранившихся при температуре (2-8) °С  не бо­
лее 5 суток, либо при температуре минус (20±3) °С . если необходимо более длительное 
хранение.
Сыворотки, содержащие взвешеньЕые частицы, могут дать неправильный результаг. 
Такие образцы перед использованием следует центрифуговать 10-15 мин при 3000 об/мип.
Нельзя использовать проросшие, гемолизированные, гиперлипидные сыворогки или 
подвергавшиеся многократному замораживанию и оттаиванию.


--- стр. 4 ---
4
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И З А
7.1. Внимание! Тщательное соблюдение описанных нилсе требовании позволит w j- 
белсать искалсения результатов ИФА.
Перед постановкой реакции все компоненты набора необходимо выдержать не менее 
30 мин при температуре от 18 до 25 °С .
Для приготовления растворов и проведения И Ф А  следует использовать чистую мер* 
ную посуду и автоматические пипетки с погрешностью измерения объемов не более 5%.
Контрольные образцы, концентрированный раствор конъюгата должны быть приго­
товлены, как минимум, за 15 мин до их использования.
После отбора необходимого количества стрипов оставшиеся сразу упаковать в паке г 
с осушителем. Упакованные стрипы, плотно закрытые флаконы с исходными компонен­
тами хранить при температуре от 2 до 8 °С , использовать в течение 1  мес.
Растворы Т М Б  и конъюгата в рабо^гем разведении готовить непосредственно перел 
использованием. И склю чить воздействие света на раствор Т М Б.
При промывке лунки планшета заполнять полностью (300-400 мкл промывочного 
раствора в зависимости от типа планшета) и не касаться лунок наконечником пипетки. 
Время между заполнением и опорожнением лунок должно быть не менее 30 сек.
При использовании автоматического или ручного промывателя необходимо следить 
за состоянием емкости для промывочного раствора и соединительных шлангов; в них не 
должно быть «заростов». Раз в неделю желательно емкость для промывочного раствора и 
шланги промывать 70%  спиртом.
Не допускать высыхания лунок планшета между отдельными операциями.
При постановке И Ф А  нельзя использовать компоненты из наборов разных серий или 
смешивать их при приготовлении растворов, кроме неспецифических компонентой 
(ФСБ-Тх25, С БР, Т М Б , стоп-реагент), которые взаимозаменяемы во всех наборах ЗАО  
«Вектор-Бест».
Перекисью водорода (другие дезинфицирующие растворы не использовать) обраба­
тывать только наконечники для пипеток, используемые для работы с исследуемыми сыво­
ротками и контрольными образцами. В  с;[учае их повторного использования, обеззаражи­
вать в 6 %  перекиси водорода (не менее 6 ч) с последующей ) 0-кратной промывкой в про­
точной воде, 3-кратной промывкой в дистиллированной воде и кипячением (40 мин) в 
последней из 3-х порций дистиллированной воды, чтобы избавиться от следов перекиси.


--- стр. 5 ---
Посуду (ванночки), наконечники для пипеток, используемые для работы с осталь­
ными реагентами, не обрабатывать дезинфицирующими растворами и моющими средсг- 
вами, т.к. они не содержат инфекционного агента. В  случае повторного использования 
посуду (ванночки), наконечники для пипеток промыть проточной водой, тщагельно и 
многократно ополаскивая дистиллированной водой.
Посуду (ванночки), наконечники для пипеток, используемые для работы с 1'МБ. в 
случае повторного использования, сразу после работы необходимо промыгь 50% раство­
ром этилового спирта, а затем дистиллированной водой, t.
Пипетки и рабочие поверхности обрабатывать только 70%  раствором тгилово1 'о 
спирта. Не использовать перекись водорода, хлорамин и т.д.
7.2. Приготовление реагентов.
7.2.1. Промывочный раствор
Взболтать содержимое флакона с концентратом ФСБ-Тх25. При выпадении осадка 
солей в концентрате прогреть его перед рс1 зведением до полного растворения осадка.
В  соответствии с числом используемых стрипов отобрать необходимое количсс [  во 
ФСБ-Тх25 (см. таблицу) и развести его дистиллированной водой до указанного в таблице 
объёма.
Хранение:  до 72 ч при температуре с»т 2 до 8 °С.
7.2.2. Контрольные образцы
Растворить лиофилизированные контрольные образцы и К ” добавлением в 
каждый флакон по 0,6 мл РП Р.
Хранение:  до 1  мес. при темпера1уре от 2 до 8 ^С.
7.2.3. Раствор конъюгата
Внимшше! Для работы с конъюгатом рекомендуем использовать одноразовые 
иакоиечнши для пипеток.
Приготовить концентрированный раствор конъюгата путем растворения 
содержимого флакона с конъюгатом в КО мл РП Р.
Хранение:  концентрированный раствор конъюгача - до 1  мес. при температуре о i 2  
до 8 X ,  '
Внимание! Раствор конъюгата в рабочем разведении готовить непосредственно 
перед использованием!
Тщательно взболтать содержимое флакона с раствором для разведения кон ъю гат
(РК ).


--- стр. 6 ---
Затем в ванночку для реагентов отобрать необходимое количество (см. таблицу) 
концентрированного раствора конъюгата, добавить соответствующее количество Рк. 
тщательна перемешать пипетированием.
Таблица расхода реагентов
Количество используемых стринов
7 10 1 1 12
Приготовление промывочного раствора
ФСБ-Тх25, мл 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Дистиллирован­
ная вода, мл
до
50
до
100
до
150
до
200
до
250
до
300
до
350
до
400
до
450
до
500
до
550
до
600
Приготовление раствора конъюгата в рабочем разведении
Концен1 'риро- 
ванный раствор 
конъюга^'а, мкл
а ' 2ха j)xa 4ха 5ха бха 7ха 8ха 9ха Ю х а ха 2ха
РК , мл 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10,0 11,0 12,0
Приготовление раствора Т М Б  в рабочем разведении
Т М Б, мкл 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600
С ВР, мл 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10,0 11,0 12,0
мкл
7.2.4. Раствор Т М Б  в рабочем разведении 
Внимание! Раствор ТМБ в рабочем разведении готовить в пластиковой ваипочке, 
входящей в состав набора, непосредственно перед использованием! Рекомендуем выде­
лить накоиечники для пипеток, которые использовать только для работы с ТМБ.
В  ванночку для реагентов отобрать необходимое количество Т М Б  (см. таблицу), до­
бавить соответствующее количество С БР, тщательно перемешать. При пригоювлении 
раствора Т М Б  следует исключить воздействие света.
Хранение:  до 3 ч при температуре от 18 до 25 °С  в защищенном от света месте.
7.3, Проведение анатиза
7.3.1. Подготовить необходимое количество стрипов к работе. Оставшиеся стрипы 
необходимо снять с рамки, поместить в цефленовый пакет с влагопоглотителем, rmaie:ii>- 
но закрыть пакет пластиковой застежкой. Упакованные таким образом стрипы moi у i хра­
ниться до 1  мес. при температуре от 2 до 8 
°С.
Приготовить промывочный раствор (п. 7.2.1), контрольные образцы (п. 7.2.2), кон­
центрированный раствор конъюгата (п. 7.2,3).
Все растворы должны быть комнатной температуры (от 18 до 25 °С').


--- стр. 7 ---
7
Перед использованием ][унки планшета промыть один раз промывочным раство­
ром, внося в каждую лунку не менее 300 мкл раствора. По окончании промывания влагу и з  
лунок тщательно удалить, постукивая перевернутым планшетом по сложенной в нескол(,- 
ко слоев фильтровальной бумаге.
7.3.2. Во все лунки стрипов внести по 80 мкл раствора для разведения сывороток 
(PC). В  2 лунки планшета внести по 20 мкл полол<ительного контрольного образца (К^). в 
2 лунки - -  по 20 мкл отрицательного контрольного образца (К “ ), 1  лунку оставит1 >  с 14 
(контроль конъюгата), в остальные лунки -  по 20 мкл цельных испытуемых сьшороток. 
Внесение сывороток должно сопровождаться тщательным перемешиванием  
(пипетироваиие не менее 4 раз).
Стрипы заклеить липкой пленкой и инкубировать 30 мин при температуре 
(37±1)°С.
За 5-10 мин до окончания инкубации приготовить раствор конъюгата в рабочем 
разведении (п. 7.2.3).
7.3.3. По окончании инкуба1 дии содержимое лунок собрать в сосуд с 
дезинфицирующим раствором, промыть лунки планшета 5 раз промывочным раствором с 
помощью вошера или вручную (используя многоканальную пипетку). При этом каждую лунк\ 
необходимЪ заполнять полностью (не менее 300 мкл промывочного раствора). Необходимо 
добиваться полного опорожнения лунок после каждого их заполнения. Время между 
заполнением и опорожнением лунок должно быть не менее 30 сек.
По окончании промывки необходимо тщательно удалить влагу из лунок, постукивая 
nepeBepnyrbiM планшетом по сложенной в несколько слоен фильтpoвaJ^ьнoй бумаге.
7.3.4. В  каждую лунку внести по 100 мкл раствора конъюгата в рабочем 
разведении.
Для внесения рабочего раствора конъюгата использовать ванночку для реагем гов и  
одноразовые наконечники, прилагаемые к набору.
Планшет заклеить липкой пленкой и инкубировать 30 мин при температуре 
(37 ± 1 )°С ..
7.3.5. По окончании инкубации промыть лунки 5 раз промывочным раствором и  
удалить влагу, как описано выше (п. 7.3.3).
7.3.6. Приготовить раствор Т М Б  в ])абочем разведении (п. 7.2.4).
Внести в каждую лунку по 100 мкл раствора Т М Б.


--- стр. 8 ---
8
Для внесения раствора тетраметилбензидина в рабочем разведении испольювагь 
ванночку для реагентов и одноразовые наконечники, входящие в состав набора.
Планшет инкубировать 30 мин при комнатной температуре (от 18 до 25 ^ С  ) i5  
защищенном от света месте.
7.3.7. Остановить реакцию добавлением в лунки по 100 мкл стоп-реагента и через 
2-3 минуты измерить оптическую плотность (О П ),
Следует избегать попадания стоп-ре агента и а оделсду и открытые участки т е ­
ла. При попадании - промыть большим количеством воды.
8. Р Е Г И С Т Р А Ц И Я  Р Е З У Л Ь Т А Т О В  
Результаты И Ф А  регистрировать с помощью спектрофотометра, измеряя опчиче- 
скую плотность (О П ) в двухволновом режиме: основной фильтр - 450 нм, референс- 
фильтр - в диапазоне 620-650 нм. Допустима регистрация результатов то.чько с фильтром 
450 нм.
Выведение спектрофотометра на ь[улевой уровень («бланк») осуществлять по воз­
духу.
9. У Ч Е Т  Р Е З У Л Ь Т А Т О В  Р Е А К Ц И И
Результаты исследований учитывать только в том случае, если средние значения 
ОП в лунках с контролем конъюгата и К ' не более 0,2, а в лунках с более, чем на 0.4 
превыщает значение О П ф (К“).
По результатам И Ф А  рассчитать значение 
O Y[„pt,m , по формуле:
On^yj,,,,, ^ О П ф (К ■ )  + 0,3, 
где ОПф(К~) ~ среднее значение О П для отрицательного контрольного образца.
Для интерпретации результатов исследования сывороток использовать 
коэффициент позитивности (К П ), который рассчитывается по формуле:
К П  ~ 0 F[((^ ;c,7 . офУОП кр тп '! 
где ОП„сс; о о р  - оптическая плотность в лунках с исследуемыми сыворотками.
Исследуемую сыворотку расценивают как отрицательную, если соответствующее ей 
значение К П  меньше 1,0. Исследуемую сыворотку расценивают как положительную, ecjiH 
соответствующее ей значение К П  превышает или равно 1,0.
10. С Р О К  ГО Д Н О С Т И . У С Л О В И Я  Х Р А Н Е Н И Я , Т Р А Н С П О Р Т И Р О В А Н И Я
10.1. Наборы хранить и транспортировать при температуре от 2 до 8 °С. Д опускаекя 
гранспортирование при температуре до 25 °С  не более 10 суток. Замораживание не допус­
кается.


--- стр. 9 ---
10.2, Срок годности набора реагентов -  12 месяцев со дня выпуска.
По вопросам, касающимся качества набора обращаться:
в ЗАО «Вектор-Бест» по адресу: 630559, п. Кольцово, Новосибирской обл. Новоси* 
бирского района, а/я 121, тел. (383) 336-92-49, 227-60-30. 227-67-64, тел./факс (383). 332- 
94-47, 332-94-44, 336-73-46. Eim ail: vbobtls@vectoi-besl.riu
и в Федеральное государственное учреждение науки Государственный НИИ 
стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л .А . Тара- 
севича Роспотребнадзора по адресу:
119002, Москва, пер. Сивцев Вражек, 41, тел. (495) 241-39-22.
Нач. отделения И Ф А  гепатита С Х / У
ЗА О  «Вектор-Бест» Ястребова
Генеральный директор
ЗА О  «Вектор-Бест» ___— М . Д .  Хусаинов