Набор реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов T(-786)C и G894T гена NOS3 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с детекцией кривых плавления (РеалБест-Генетика NOS3 Т(-786)C/G894T) по ТУ 9398-621-23548172-2016 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- - f * «УТВЕРЖДАЮ» )адьный директор М.Д. Хусаинов 2018 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов Т(-786)С и G894T генаУО^З методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с детекцией кривых плавления «РеалБест-Генетика NOS3 T(-786)C/G894T» 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов Т(-786)С и G894T гена NOS3 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с де текцией кривых плавления «РеалБест-Генетика NOS3 T(-786)C/G894T» предназначен для определения однонуклеотидных полиморфизмов Т(-786)С и G894T (Glu298Asp) гена синта зы окиси азота NOS3, ассоциированных с риском развития артериальной гипертензии, мето дом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с плавлением про дуктов гибридизации с флуоресцентной меткой с последующим анализом кривых плавления. Результаты генотипирования, полученные с использованием данного набора реагентов, могут быть использованы лечащим врачом в комплексной оценке риска развития сердечно сосудистых заболеваний (степень генетической предрасположенности к развитию артери альной гипертензии). Вьщеление ДНК из клинического материала (буккального эпителия, цельной крови) осуществляется с помощью наборов «РеалБест-Генетика ДНК-экспресс» или «РеалБест экс тракция 100». Набор используется с регистрирующим амплификатором «CFX96» (фирма «Bio-Rad», США). Набор реагентов рассчитан на проведение анализа 48 образцов, включая контрольные образцы. Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: директором по производству Ткачевым В. К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А. В. --- стр. 2 --- h § 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип метода. Принцип метода основан на амплификации выбранного участка ДНК человека и по следующей детекции кривых плавления гибридных комплексов продуктов ПЦР и специфич ных зондов. Процесс амплификации заключается в повторяющихся циклах: температурная денатурация ДНК-матрицы, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями ДНК-матрицы, синтез комплементарной цепи с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой. После реакции амплификации понижение температуры приводит к гибридизации спе цифичного ДНК-зонда с продуктом амплификации и к снижению уровня флуоресцентного сигнала в пробирке. В процессе температурного плавления образовавшихся дуплексов про исходит высвобождение ДНК-зонда, несущего флуоресцентный краситель. В случае непол ной комплементарности ДНК-зонда и выбранного участка ДНК, температура плавления дуп лекса будет ниже, чем в случае полной комплементарности. Гибридизационный ДНК-зонд для детекции полиморфизма Т(-786)С комплементарен мутантной последовательности гена NOS3; гибридизационный ДНК-зонд для детекции полиморфизма G894T комплементарен нормальной последовательности гена Таким образом, для двух аллельных вариантов температуры плавления дуплексов зонда и продуктов амплификации отличаются, благодаря этому идентифицируется генотип («нормальная гомозигота», «гетерозигота», «мутантная гомозигота»). 2.2. Состав набора: В состав набора входят следующие компоненты: - контрольный образец «Нормальная гомозигота» (KOI) - 1 пробирка, 1 мл; - контрольный образец «Мутантная гомозигота» (К02) - 1 пробирка, 1 мл; - готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС), лиофилизированная - 48 пробирок; - элюирующий раствор «Генетика» - 2 фл. по 12 мл. Принадлежности: - оптическая плёнка - 1 лист. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Специфичность определения полиморфизмов Т(-786)С и G894T гена NOS3 опре деляется по стандартному образцу предприятия, СОН ДНК Гипертония (per. № 05-2-654). Специфичность составляет 100 % при условии, что генотип по полиморфизмам Т(-786)С и G894T гена NOS3 в образцах № 1-4 определяется в соответствии с инструкцией к СОН. 3.2. Для KOI должно фиксироваться наличие одного пика плавления, соответствую щего генотипу «Нормальная гомозигота». --- стр. 3 --- 3.3. Для К02 должно фиксироваться наличие одного пика плавления, соответствую щего генотипу «Мутантная гомозигота». 3.4. Диагностическая специфичность определения полиморфизмов составила: - диагностическая специфичность определения полиморфизма Т(-786)С гена синтазы окиси азота NOS3: клинические испытания, проведенные на 225 образцах от 205 пациентов, показали 100% специфичность (интервал 98,6 % - 100 %, с доверительной вероятностью 90 %); - диагностическая специфичность определения полиморфизма G894T гена синтазы окиси азота NOS3: клинические испытания, проведенные на 225 образцах от 205 пациентов, показали 100% специфичность (интервал 98,6 % - 100 %, с доверительной вероятностью 90 %). 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к искажению результатов ПЦР. 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 № 4н). 4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами 111-1V групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы выделения ДНК/РНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы ла бораторий, исследующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материа лом, содержащим микроорганизмы 1-1V групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором дозаторов пе ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За прещается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для дозаторов. 4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз ных образцов. 4.8. После окончания работ для дезинфекции и предотвращения контаминации все ра бочие поверхности и оборудование следует подвергнуть действию бактерицидных УФ ламп в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфи --- стр. 8 --- лиальной NO-синтазы, обуславливая предрасположенность к сердечно-сосудистым заболе ваниям. Замена Т(-786)С в регуляторной области гена NOS3 приводит к снижению уровня мРНК и, соответственно, снижению продукции белка. Исследования показали ассоциацию наличия аллеля С и предрасположенности к спазму коронарных артерий. Сочетание с дефек тами факторов свертывания крови усиливает риск развития сердечно-сосудистой патологии. Полиморфизм G894T приводит к замене аминокислоты Glu298Asp в белке. Мутант ные гомозиготы Т/Т имеют повышенный риск развития нарушений коронарного кровообра щения, ишемической болезни сердца, инфаркта миокарда и ишемического инсульта. Нали чие аллеля Т является потенциальным независимым фактором, повышающим риск развития гипертензии при беременности. Более подробно ознакомиться с диагностической значимостью определения однонук леотидных полиморфизмов Т(-786)С и G894T гена можно в литературе: Минушкина Л.О., Затейщиков Д.А., Затейщикова А.А. и др. Полиморфизм гена эндоте лиальной NO-синтетазы и гипертрофия миокарда у больных артериальной гипертонией // Кардиология, 2002, № 3, С. 30-34. Пузырев В.П., Карпов Р.С. Генетика артериальной гипертонии. Руководство по артери альной гипертонии / Под ред. Чазова Е.И., Чазовой И.Е. М.: МедиаМедика, 2005, 784 с. Чистяков Д.А., Воронько О.Е., Савостьянов Г.В. Полиморфные маркеры генов эндоте лиальной NO-синтазы и сосудистого рецептора ангиотензина II и предрасположенность к ишемической болезни сердца // Генетика, 2000, Т. 36, № 12, С. 1707-1711. Casas J.P., Bautista L.E., Humphries S.E. et al. Endothelial nitric oxide synthase genotype and ischemic heart disease: meta-analysis of 26 studies involving 23028 subjects // Circulation, 2004, V. 109,N. 11,P. 1359-65. Conen D., Glynn R.J., Buring J.E. et al. Association of renin-angiotensin and endothelial nitric oxide synthase genepolymorphisms with blood pressure progression and incident hyperten- sion:prospective cohort study // J Hypertens., 2008, V. 26, N. 9, P. 1780-6. Gatti R.R., Santos P.S., Sena A.A. et al. The interaction of AGT and NOS3 gene polymor phisms with conventional risk factors increases predisposition to hypertension // J Renin Angioten sin Aldosterone Syst., 2012, V. 12., P.360-368. Medica I., Kastrin A., Peterlin B. Genetic polymorphisms in vasoactive genes and preeclamp sia: a meta-analysis // European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology, 2007, V. 131, P. 115-126. Pacanowski M.A., Zineh I., Cooper-Dehoff R.M. et al. Genetic and pharmacogenetic associa tions between NOS3 polymorphisms, blood pressure, and cardiovascular events in hypertension // Am J Hypertens., 2009, V. 22, N. 7, P. 748-53. g --- стр. 9 --- й » 9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА 9.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспорт ных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида, при температуре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 25 °С не более 10 суток. 9.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или холо дильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной ре гистрацией температуры. 9.3. Срок годности набора - 12 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение наборов по истечении срока их годности. 9.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной ин струкции по применению набора. 10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА 10.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям нормативной и технической документации. Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности. 10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, воз никших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы. 10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функцио нальные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют норматив ной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем. По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест-Генетика NOS3 T(-786)C/G894T», следует обращаться в АО «Вектор-Бест» по адресу: 630117, г. Новосибирск-117, а/я 492, тел. (383) 332-92-49, 227-60-30; тел./факс (383), 332-94-47, 332-94-44. E-mail: plkobtk&,vector-best. ru L --- стр. 10 --- Т " Начальник отделения Производства ПЦР наборов АО «Вектор-Бест» А.В. Трухина Директор по производству АО «Вектор-Бест» Руководитель отдела «Клинические исследования» ООО «Независимая лаборатория ИНВИТРО» м.п. В.К. Ткачев Р.С. Годунов 10