Набор реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов C825T гена GNB3 и G1675A гена AGTR2 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с детекцией кривых плавления (РеалБест-Генетика GNB3 C825T/AGTR2 G1675A) по ТУ 9398-619-23548172-2016 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- t «УТВЕРЖДАЮ» Г енеральный директор ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов С825Т гена GNB3 и G1675A гена AGTR2 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с детекцией кривых плавления «РеалБест-Генетика GNB3 C825T/AGTR2 G1675A» 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов С825Т гена GNB3 и G1675A гена AGTR2 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с детекцией кривых плавления «РеалБест-Генетика GNB3 C825T/AGTR2 G1675A» предназначен для определения однонуклеотидных полиморфизмов С825Т гена бета 3 субъ единицы G-белка GNB3 и G1675A гена рецептора типа 2 ангиотензина II AGTR2, ассоцииро ванных с риском развития артериальной гипертензии, методом полимеразной цепной реак ции (ПЦР) в режиме реального времени с плавлением продуктов гибридизации с флуорес центной меткой с последующим анализом кривых плавления. Результаты генотипирования, полученные с использованием данного набора реаген тов, могут быть использованы лечащим врачом в комплексной оценке риска развития сер дечно-сосудистых заболеваний (степень генетической предрасположенности к развитию ар териальной гипертензии). Выделение ДНК из клинического материала (буккального эпителия, цельной крови) осуществляется с помощью наборов «РеалБест-Генетика ДНК-экспресс» или «РеалБест экс тракция 100». Набор применяется с регистрирующим амплификатором «СРХ96» (фирма «Bio-Rad», США). Набор реагентов рассчитан на проведение анализа 48 образцов, включая контрольные образцы. Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Вест»: директором по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А. В. --- стр. 2 --- 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип метода. Принцип метода основан на амплификации выбранного участка ДНК человека и по следующей детекции кривых плавления гибридных комплексов продуктов ПЦР и специфич ных зондов. Процесс амплификации заключается в повторяющихся циклах: температурная денатурация ДНК-матрицы, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями ДНК-матрицы, синтез комплементарной цепи с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой. После реакции амплификации понижение температуры приводит к гибридизации спе цифичного ДНК-зонда с продуктом амплификации и к снижению уровня флуоресцентного сигнала в пробирке. В процессе температурного плавления образовавщихся дуплексов про исходит высвобождение ДНК-зонда, несущего флуоресцентный краситель. В случае непол ной комплементарности ДНК-зонда и выбранного участка ДНК, температура плавления дуп лекса будет ниже, чем в случае полной комплементарности. Гибридизационный ДНК-зонд для детекции полиморфизма С825Т комплементарен мутантной последовательности гена GNB3; гибридизационный ДНК-зонд для детекции полиморфизма G1675A комплементарен мутантной последовательности гена AGTR2. Таким образом, для двух аллельных вариантов температуры плавления дуплексов зонда и продуктов амплификации отличаются, благодаря этому идентифицируется генотип («нормальная гомозигота», «гетерозигота», «мутантная гомозигота»). 2.2. Состав набора: В состав набора входят следующие компоненты: - контрольный образец «Нормальная гомозигота» (KOI) - 1 пробирка, 1 мл; - контрольный образец «Мутантная гомозигота» (К02) - 1 пробирка, 1 мл; - готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС), лиофилизированная - 48 пробирок; - элюирующий раствор «Генетика» - 2 фл. по 12 мл. Принадлежности: - оптическая плёнка - 1 лист. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Специфичность определения полиморфизмов С825Т гена GNB3 и G1675A гена AGTR2 определяется по стандартному образцу предприятия, СОН ДНК Гипертония (per. № 05-2-654). Специфичность составляет 100% при условии, что генотип по полиморфизмам С825Т гена GNB3 и G 1675А гена AGTR2 в образцах № 1-4 определяется в соответствии с инструк цией к СОН. 3.2. Для KOI должно фиксироваться наличие одного пика плавления, соответствую --- стр. 3 --- щего генотипу «Нормальная гомозигота». 3.3. Для К 02 должно фиксироваться наличие одного пика плавления, соответствую щего генотипу «Мутантная гомозигота». 3.4. Диагностическая специфичность определения полиморфизмов составила: - диагностическая специфичность определения полиморфизма С825Т гена бета 3 субъ единицы G-белка GNB3: клинические испытания, проведенные на 225 образцах от 205 паци ентов, показали 100% специфичность (интервал 98,6 % - 100 %, с доверительной вероятно стью 90 %); - диагностическая специфичность определения полиморфизма G 1675А гена рецептора типа 2 ангиотензина II AGTR2.- клинические испытания, проведенные на 225 образцах от 205 пациентов, показали 100% специфичность (интервал 98,6 % - 100 %, с доверительной веро ятностью 90 %). 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к искажению результатов ПЦР. 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 № 4н). 4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы выделения ДНК/РНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы ла бораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с матери алом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором дозаторов пе ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За прещается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продзжтов ПЦР в режиме ре ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для дозаторов. 4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз ных образцов. 4.8. После окончания работ для дезинфекции и предотвращения контаминации все ра бочие поверхности и оборудование следует подвергнуть действию бактерицидных УФ ламп --- стр. 8 --- вазоконстрикции, остановке клеточного цикла и апоптозу. AGTR2 является основным регу лятором синтеза альдостерона. Наиболее значимый полиморфизм G1675A затрагивает первый интрон гена и приводит в результате альтернативного сплайсинга к повышенной чувствительности рецептора к ангиотензину II, что проявляется его основными кардиоваскулярными эффектами и реализуется в патогенезе артериальной гипертензии и её осложнений. Более подробно ознакомиться с диагностической значимостью определения однонук леотидных полиморфизмов С825Т гена GNB3 и GI675A тенаАСТК2 можно в литературе: Карпов Р.С., Пузырев К.В., Кошельская О.А. и др. Полиморфные маркеры генов GNB3 (С825Т), AGTRI (AII66C) и АСЕ (A2350G и I/D) у больных артериальной гипертони ей, сочетающейся с сахарным диабетом типа 2 // Терапевтический архив, 2004, № 6, С. 30-35. Никитин А.Г., Чудакова Д.А., Спицина Е.В. и др. Ассоциация полиморфного маркера С825Т гена GNB3 с ишемической болезнью сердца // Генетика, 2007, Т. 43, № 8, С. 1129- 1133. Рябов Г.С., Казеннова Е.В., Бобков А.Ф. Аллель гена субъединицы В З G-белка (GNB3), ассоциированный с гипертонией, нарушениями липидного обмена и диабетом вто рого типа: частота встречаемости в России // Медицинская генетика, 2002, № 2, С. 95-96. Пузырев В.П., Карпов Р.С. Генетика артериальной гипертонии. Руководство по артериальной гипертонии / Под ред. Чазова Е.И., Чазовой И.Е. М.: МедиаМедика, 2005, 784 с. Guo L., Zhang L.L., Zheng В. et al. The C825T polymorphism of the G-protein РЗ subunit gene and its association with hypertension and stroke: an updated meta-analysis // PLoS ONE, 2013, V. 8 ,1 . 6, P. e65863. Nejatizadeh A., Kumar R., Stobdan T. et al. Association of GNB3 C825T polymorphism with plasma electrolyte balance and susceptibility to hypertension // Genet Mol Biol., 2011, V. 34, N. 4, P. 553-6. Rosskopf D., Busch S., Manthey 1., Siffert W. G protein beta 3 gene: structure, promoter, and additional polymorphisms // Hypertension, 2000, V. 36, N. 1, P. 33-41. Siffert W. G protein beta 3 subunit 825T allele, hypertension, obesity, and diabetic nephrop athy // Nephrol Dial Transplant., 2000, V. 15, N. 9, P. 1298-306. Siffert W. G protein polymorphisms in hypertension, atherosclerosis, and diabetes // Annu Rev Med., 2005, V. 56, P. 17-28. Zhang Y., Zhang K.X., Wang G.L. et al. Angiotensin II type 2 receptor gene polymorphisms and essential hypertension. // Acta Pharmacol Sin., 2003, V. 24, N. 11, P. 1089-93. Zhang M., Ma H., Wang B.S., Zhao Y.Z. Angiotensin II type 2 receptor gene polymor phisms and cardioprotective role in essential hypertension // Heart Vessels, 2006, V. 21, P. 95-101. 8 --- стр. 9 --- 9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА 9.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспорт ных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида, при температуре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 25 °С не более 10 суток. 9.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или холо дильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной ре гистрацией температуры. 9.3. Срок годности набора - 12 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение наборов по истечении срока их годности. 9.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной ин струкции по применению набора. 10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА 10.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям нормативной и технической документации. Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности. 10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, воз никших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы. 10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функцио нальные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют норматив ной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем. По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест-Генетика GNB3 C825T/AGTR2 G 1675А», следует обращаться в АО «Вектор-Бест» по адресу: 630117, г. Новосибирск-117, а/я 492, тел. (383) 332-92-49, 227-60-30; тел./факс (383), 332-94-47, 332-94-44. E-mail: plkobtk&yector-best. ru --- стр. 10 --- Начальник отделения производства ПЦР-наборов АО «Вектор-Бест» г А ’ А.В. Трухина Директор по производству АО «Вектор-Бест» В.К. Ткачев Руководитель отдела «Клинические исследования» ООО «Независимая лаборатория ИНВИТРО» м.п. Р.С. Годунов 1 0