Набор реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов генов системы свертывания крови PAI-1 и ITGB3 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с детекцией кривых плавления (РеалБест-Генетика Гемостаз PAI-1/ITGB3) по ТУ 9398-641-23548172-2016 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2018/7025 от 09.04.2018 · класс риска 2б

Производитель: АО "Вектор-Бест" (Россия)

Вид изделия: Система свертывания крови/фолатный цикл однонуклеотидные полиморфизмы генов ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Г енеральный директор
,^Вектор-Бест»f/ лг' г.\' ‘ !__У  ‘
М.Д. Хусаинов
2018 г.
' v\ ■>'; ■52540-'-”,^
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения 
однонуклеотидных полиморфизмов генов системы свертывания крови PAI-1 и ITGB3 
методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени 
с детекцией кривых плавления 
«РеалБест-Генетика Гемостаз РАПЯТСВЗ»
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов генов системы 
свертывания крови PAI-1 и ITGB3 методом полимеразной цепной реакции в режиме реаль­
ного времени с детекцией кривых плавления «РеалБест-Генетика Гемостаз PAI-1/ITGB3» 
предназначен для определения однонуклеотидных полиморфизмов 5G(-675)4G гена РА1-1 
{серпин 1, эндотелиальный ингибитор активатора плазминогена) и Т1565С гена ITGB3 (гли­
копротеин интегрин бета-3, входящий в состав тромбоцитарного рецептора фибриноге­
на), ассоциированных с риском развития тромбофилии, методом полимеразной цепной реак­
ции (ПЦР) в режиме реального времени с плавлением продуктов гибридизации с флуорес­
центной меткой с последующим анализом кривых плавления.
Результаты генотипирования, полученные с использованием данного набора реаген­
тов, могут быть использованы лечащим врачом в комплексной оценке риска развития тром­
бофилии (степень генетической предрасположенности к развитию тромбофилии).
Выделение ДНК из клинического материала (буккального эпителия, цельной крови) 
осуществляется с помощью наборов «РеалБест-Генетика ДНК-экспресс» или «РеалБест экс­
тракция 100».
Набор используется с регистрирующим амплификатором «CFX96» (фирма «Bio-Rad», 
США).
Набор реагентов рассчитан на проведение анализа 48 образцов, включая контрольные
Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: директором
по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В.


--- стр. 2 ---
образцы.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода.
Принцип метода основан на амплификации выбранного участка ДНК человека и по- 
еледующей детекции кривых плавления гибридных комплексов продуктов ПЦР и специфич­
ных зондов. Процесс амплификации заключается в повторяющихся циклах: температурная 
денатурация ДНК-матрицы, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями 
ДНК-матрицы, синтез комплементарной цепи с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой.
После реакции амплификации понижение температуры приводит к гибридизации спе­
цифичного ДНК-зонда с продуктом амплификации и к снижению уровня флуоресцентного 
сигнала в пробирке. В процессе температурного плавления образовавшихся дуплексов про­
исходит высвобождение ДНК-зонда, несущего флуоресцентный краситель. В случае непол­
ной комплементарности ДНК-зонда и выбранного участка ДНК, температура плавления дуп­
лекса будет ниже, чем в случае полной комплементарности. Гибридизационный ДНК-зонд 
для детекции полиморфизма 5G(-675)4G комплементарен нормальной последовательности 
гена РА1-1; гибридизационный ДНК-зонд для детекции полиморфизма Т1565С 
комплементарен мутантной последовательности гена 1TGB3. Таким образом, для двух ал­
лельных вариантов температуры плавления дуплексов зонда и продуктов амплификации от­
личаются, благодаря этому идентифицируется генотип (нормальная гомозигота, гетерозиго­
та, мутантная гомозигота).
2.2. Состав набора:
В состав набора входят следующие компоненты:
- контрольный образец 1 «Нормальная гомозигота» (KOI) - 1 пробирка, 1 мл;
- контрольный образец 2 «Мутантная гомозигота» (К02) - 1 пробирка, 1 мл;
- готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС), лиофилизированная - 48 пробирок;
- элюирующий раствор «Генетика» - 2 фл. по 12 мл.
Принадлежности:
- оптическая плёнка - 1 лист.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ*
3.1. Специфичность определения полиморфизмов 5G(-675)4G гена PAI-1 и Т1565С ге­
на ITGB3 определяется по стандартному образцу предприятия, СОН ДНК Гемоетаз (per. № 
05-2-491).
Специфичность составляет 100 % при условии, что генотип образцов по полиморфиз­
мам 5G(-675)4G гена PAI-1 и Т1565С гена ITGB3 в образцах № 1 и №2 определяется в со­
ответствии с инструкцией к СОН.


--- стр. 3 ---
3.2. Для KOI должно фиксироваться наличие одного пика плавления, соответствую­
щего генотипу «Нормальная гомозигота».
3.3. Для К02 должно фиксироваться наличие одного пика плавления, соответствую­
щего генотипу «Мутантная гомозигота».
3.4. Диагностическая специфичность определения полиморфизмов генов системы свер­
тывания крови PAI-1 и ITGB3 составила:
- диагностическая специфичность определения полиморфизма 5G(-675)4G гена PAI-1: 
клинические испытания, проведенные на 242 образцах от 222 пациентов, показали 100% 
специфичность (интервал 98,7 % - 100 %, с доверительной вероятностью 90 %);
- диагностическая специфичность определения полиморфизма Т1565С гена ITGB3: 
клинические испытания, проведенные на 242 образцах от 222 пациентов, показали 100% 
специфичность (интервал 98,7 % - 100 %, с доверительной вероятностью 90 %).
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к  
искажению результатов ПЦР.
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 
№ 4н).
4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных 
болезней».
4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы 
выделения ДНК/РНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы ла­
бораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с матери­
алом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки.
4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором дозаторов пе­
ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За­
прещается их перемещение между рабочими местами.
4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре­
ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для 
дозаторов.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз­
ных образцов.
4.8. После окончания работ для дезинфекции и предотвращения контаминации все ра­
бочие поверхности и оборудование следует подвергнуть действию бактерицидных УФ ламп


--- стр. 8 ---
разрушения внеклеточного матрикса. Полиморфизм 5G(-675)4G в промоторе гена PAI-J 
приводит к увеличенной экспрессии белка PAI-1 и, соответственно, к снижению тромболи­
тической активности плазмы, риск тромбозов возрастает. Аллель -675 4G ассоциирован с 
развитием ишемической болезни сердца и инфарктом миокарда, его влияние усиливается 
при сочетании с другими полиморфизмами, такими как Т1565С в гене ITGB3 и G(-455)A в 
гене FGB. Обнаружение аллельного варианта -675 4G в гетерозиготном состоянии 5G/4G в 
отсутствии других полиморфизмов или предрасполагающих к развитию патологии факторов 
не имеет самостоятельного диагностического значения. Для гомозиготного варианта -675 
4G/4G показано увеличение риска привычного невынашивания беременности, тяжёлого ге- 
стоза, особенно на поздних сроках, преэклампсии, нарушения функции плаценты, гипоксии 
и задержки развития плода. Риек гестоза возрастает в ряду генотипов 5G/5G < 5G/4G < 
4G/4G. Показано, что генотип -675 4G/4G ассоциирован с увеличенным риском септического 
шока при менингококковой инфекции, хотя и не влияет на частоту заражения; эффект, по- 
видимому, связан с нарушением фибринолиза. Носители гомозиготного генотипа -675 
5G/5G, напротив, ввиду увеличенного уровня фибринолитической активности, имеют повы­
шенный риск развития аневризмы брюшной аорты.
Ген ITGB3 кодирует гликопротеин интегрин бета-3, входящий с состав тромбоцитар- 
ного рецептора, ответственного за агрегацию и адгезию тромбоцитов и ряд сигнальных вза­
имодействий. Полиморфизм Т1565С в гене ITGB3 приводит к замене аминокислоты 
ЬеиЗЗРго в белке, что обусловливает повышенную адгезию тромбоцитов и, соответственно, 
увеличивает риск тромбофилии и сосудистых патологий. Показано, что у пациентов с пере­
несённым инфарктом миокарда или с нестабильной стенокардией вариант 1565С встречается 
более чем в 2 раза чаще, чем в контрольной группе. У носителей аллеля 1565С значительно 
возрастает риск раннего развития острого коронарного синдрома в возрасте до 60 лет. Отме­
чено, что негативное влияние аллеля 1565С усиливается в сочетании с наличием аллеля 4G 
гена PAI-1, особенно у мужчин. Также увеличение риска ишемической болезни для носите­
лей аллеля 1565С более выражено на фоне диабета. Есть ассоциация генотипа 1565 С/С с 
увеличенным риском переломов бедра у женщин после менопаузы. В группе женщин с при­
вычным невынашиванием беременности в 2 раза больше частота аллеля 1565С и в 4 раза 
больше частота встречаемости генотипа 1565 С/С, чем в контрольной группе.
Более подробно ознакомиться с диагностической значимостью определения однонук­
леотидных полиморфизмов 5G(-675)4G гена PAI-1 и Т1565С гена ITGB3 можно в литературе:
Цветовская Г.А., Чикова Е.Д., Лифшиц Г.И. и др. Генетические факторы риска 
тромбофилии у женщин репродуктивного возраста в Западно-Сибирском регионе // 
Фундаментальные исследования. 2010. № 10. С.72-79.


--- стр. 9 ---
/  Щепотина Е.Г., Прасолова М.А., Иванов М.К. Новые наборы реагентов для выявления 
однонуклеотидных полиморфизмов генов фолатного цикла и системы свертывания крови // 
Новости Вектор-Бест. 2013. Т.68. №2. С. 2-8.
Петриков А. С., Шойхет Я. Н., Белых В. И., Е.Ф. Котовщикова, И.Е. Перегудова, Г.И. 
Костюченко. Роль генетических полиморфизмов в возникновении венозных 
тромбоэмболических осложнений // Медицина и образование в Сибири : сетевое научное 
издание. 2012. № 4.
Пизова Н.В. Тромбофилии: генетические полиморфизмы и сосудистые катастрофы // М.: 
ИМА-ПРЕСС. 2013. 248 с.
9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
9.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспорт­
ных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного 
вида, при температуре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 25 °С не 
более 10 суток.
9.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться 
при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или холо­
дильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной ре­
гистрацией температуры.
9.3. Срок годности набора - 12 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение 
наборов по истечении срока их годности.
9.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной ин­
струкции по применению набора.
10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
10.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям 
нормативной и технической документации.
Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности.
10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, воз­
никших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, 
либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функцио­
нальные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют норматив­
ной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого 
дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем.
По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест-Генетика Гемостаз PAI-1/ITGB3» 
следует обращаться в АО «Вектор-Бест» по адресу;
630117, г. Новосибирск-117, а/я 492,


--- стр. 10 ---
Начальник отделения 
АО «Вектор-Бест» ^ А.В. Трухина
Директор по производству 
АО «Вектор-Бест» В.К. Ткачев
Руководитель отдела
Р.С. Годунов
10