Набор реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов генов системы свертывания крови FGB и F13A1 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с детекцией кривых плавления (РеалБест-Генетика Гемостаз FGB/F13A1) по ТУ 9398-647-23548172-2016 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2018/7024 от 09.04.2018 · класс риска 2б

Производитель: АО "Вектор-Бест" (Россия)

Вид изделия: Система свертывания крови/фолатный цикл однонуклеотидные полиморфизмы генов ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Г еневалшый директор
•Д. Хусаинов 
2018 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения 
однонуклеотидных полиморфизмов генов системы свертывания крови FGB и F13A1 
методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени 
с детекцией кривых плавления 
«РеалБест-Генетика Гемостаз FGB/F13A1»
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов генов системы 
свертывания крови FGB и F13A1 методом полимеразной цепной реакции в режиме реально­
го времени с детекцией кривых плавления «РеалБест-Генетика Гемостаз FGB/F13A1» пред­
назначен для определения однонуклеотидных полиморфизмов G(-455)A гена FGB {фибрино­
ген, фактор I свертывания крови)  и G103T гена F13A1 (альфа-субъединица фактора XIII  
свертывания крови), ассоциированных с риском развития тромбофилии, методом полиме­
разной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с плавлением продуктов гибри­
дизации с флуоресцентной меткой с последующим анализом кривых плавления.
Результаты генотипирования, полученные с использованием данного набора реаген­
тов, могут быть использованы лечащим врачом в комплексной оценке риска развития тром­
бофилии (степень генетической предрасположенности к развитию тромбофилии).
Вьщеление ДНК из клинического материала (буккального эпителия, цельной крови) 
осуществляется с помощью наборов «РеалБест-Генетика ДНК-экспресс» или «РеалБест экс­
тракция 100».
Набор используется с регистрирующим амплификатором «CFX96» (фирма «Bio-Rad», 
США).
Набор реагентов рассчитан на проведение анализа 48 образцов, включая контрольные 
образцы.
Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: директором  
по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В.


--- стр. 2 ---
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода.
Принцип метода основан на амплификации выбранного участка ДНК человека и по­
следующей детекции кривых плавления гибридных комплексов продуктов ПЦР и специфич­
ных зондов. Процесс амплификации заключается в повторяющихся циклах: температурная 
денатурация ДНК-матрицы, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями 
ДНК-матрицы, синтез комплементарной цепи с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой.
После реакции амплификации понижение температуры приводит к гибридизации спе­
цифичного ДНК-зонда с продуктом амплификации и к снижению уровня флуоресцентного 
сигнала в пробирке. В процессе температурного плавления образовавшихся дуплексов про­
исходит высвобождение ДНК-зонда, несущего флуоресцентный краситель. В случае непол­
ной комплементарности ДНК-зонда и выбранного участка ДНК, температура плавления дуп­
лекса будет ниже, чем в случае полной комплементарности. Гибридизационный ДНК-зонд 
для детекции полиморфизма G(-455)A комплементарен мутантной последовательности гена 
FGB\ гибридизационный ДНК-зонд для детекции полиморфизма G103T комплементарен 
мутантной последовательности гена F13A1. Таким образом, для двух аллельных вариантов 
температуры плавления дуплексов зонда и продуктов амплификации отличаются, благодаря 
этому идентифицируется генотип («нормальная гомозигота», «гетерозигота», «мутантная 
гомозигота»).
2.2. Состав набора:
В состав набора входят следующие компоненты:
-контрольный образец 1 «Нормальная гомозигота» (KOI) - 1 пробирка, 1 мл;
- контрольный образец 2 «Мутантная гомозигота» (К02) - 1 пробирка, 1 мл;
- готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС), лиофилизированная - 48 пробирок;
- элюирующий раствор «Генетика» - 2 фл. по 12 мл.
Принадлежности:
- оптическая плёнка - 1 лист.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ*
3.1. Специфичность определения полиморфизмов G(-455)A гена FGB и G103T гена 
F13A1 определяется по стандартному образцу предприятия, СОН ДНК Гемоетаз (per. № 05- 
2-491).
Специфичность составляет 100 % при условии, что генотип образцов по полиморфиз­
мам G(-455)A гена FGB и G103T гена F13A1 в образцах № 1 и №2 определяется в соответ­
ствии с инструкцией к СОН.
3.2. Для KOI должно фиксироваться наличие одного пика плавления, соответствующе­


--- стр. 3 ---
го генотипу «Нормальная гомозигота».
3.3. Для К02 должно фиксироваться наличие одного пика плавления, соответствующе­
го генотипу «Мутантная гомозигота».
3.4. Диагностическая специфичность определения полиморфизмов генов системы свер­
тывания крови FGB и F13A1 еоставила:
- диагностическая специфичность определения полиморфизма G(-455)A гена FGB: 
клинические испытания, проведенные на 242 образцах от 222 пациентов, показали 100% 
специфичность (интервал 98,7 % - 100 %, с доверительной вероятностью 90 %);
- диагностическая специфичность определения полиморфизма G103T гена F13A1: кли­
нические иепытания, проведенные на 242 образцах от 222 пациентов, показали 100% специ­
фичность (интервал 98,7 % -100 %, с доверительной вероятностью 90 %).
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к  
искажению результатов ПЦР.
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 
№ 4н).
4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных 
болезней».
4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы 
вьщеления ДНК/РНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы ла­
бораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с матери­
алом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки.
4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором дозаторов пе­
ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За­
прещается их перемещение между рабочими местами.
4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре­
ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для 
дозаторов.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз­
ных образцов.
4.8. После окончания работ для дезинфекции и предотвращения контаминации вее ра­
бочие поверхности и оборудование следует подвергнуть действию бактерицидных УФ ламп 
в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфи-


--- стр. 8 ---
гена Р'Цепи фибриногена FGB не меняет структуру белка, но за счёт активизации тран­
скрипции увеличивает его количество в крови (на 10-30%), что может спровоцировать из­
лишнее тромбообразование. Уровень фибриногена также повышается в течение беременно­
сти, при инфекционных и воспалительных процессах, ожогах, приёме эстрагенов и оральных 
контрацептивов, операционных вмешательствах, онкологии. Соответственно, при наличии 
подобных дополнительных факторов риска на фоне наличия неблагоприятного полиморфиз­
ма G(-455)A FGB вероятность образования тромбов повышается. Для людей с повышенным 
уровнем фибриногена риск инсульта выше в 2-3 раза по сравнению с людьми с нормальной 
концентрацией фибриногена. Вклад полиморфизма G(-455)A в повышение уровня фибрино­
гена и риска тромбофилии дозозависимый, т.е. эффект наиболее силен при гомозиготном ге­
нотипе А/А, но проявляется, хоть и слабее, при гетерозиготном варианте G/A. Показаны ас­
социации наличия аллеля -45 5А FGB с повышенным риском инфаркта миокарда, ишемиче­
ского инсульта и инфарктами церебральных сосудов, периферического атеросклероза. Паци­
енты с инсультом, носители аллеля -455А, характеризуются многоочаговостью поражений, 
риск увеличивается в 2,6 раза в среднем и более чем в 4 раза для пациентов с некомпенсиро­
ванной гипертонией.
Фактор свертывания крови XIII при активации тромбином сшивает нити фибрина, 
усиливая механическую прочность кровяного сгустка и препятствуя фибринолизу. Поли­
морфизм G103T в гене F13A1, кодирующем альфа-субъединицу фактора XIII приводит к за­
мене аминокислоты в белке, Val34Leu, вариант 34Leu более склонен к активизации тромби­
ном. Аллель 103Т ассоциирован со снижением риска тромбозов, коронарной болезни сосу­
дов и атеросклероза. Вариант 34Leu реже встречаетея у пациентов, перенёсших инфаркт 
миокарда или ишемический инсульт, по сравнению с контрольной группой. Протективный 
эффект варианта 103Т проявляется как в гомозиготном, так и в гетерозиготном состоянии. В 
то же время, избыточная активация фактора XIII у носителей аллеля 103Т приводит к изме­
нению структуры сгустка, фибриновые нити более тонкие и поры между волокнами меньше. 
Такое строение тромбов является фактором риска спонтанных субарахноидальных кровоиз­
лияний, кровотечений из внутренних органов, повторяющихся спонтанных абортов.
Более подробно ознакомиться с диагностической значимостью определения однонук­
леотидных полиморфизмов G(-455)A гена FGB и G103T гена F13A1 можно в литературе:
Цветовская Г.А., Чикова Е.Д., Лифшиц Г.И. и др. Генетические факторы риска 
тромбофилии у женщин репродуктивного возраста в Западно-Сибирском регионе // 
Фундаментальные исследования. 2010. № 10. С.72-79.
Щепотина Е.Г., Прасолова М.А., Иванов М.К. Новые наборы реагентов для выявления 
однонуклеотидных полиморфизмов генов фолатного цикла и системы свертывания крови // 
Новости Вектор-Бест. 2013. Т.68. №2. С. 2-8.


--- стр. 9 ---
Петриков А. С., Шойхет Я. Н., Белых В. И., Е.Ф. Котовщикова, И.Г. Перегудова, Г.И. 
Костюченко. Роль генетических полиморфизмов в возникновении венозных 
тромбоэмболических осложнений // Медицина и образование в Сибири : сетевое научное 
издание. 2012. № 4.
Пизова Н.В. Тромбофилии: генетические полиморфизмы и соеудиетые катастрофы // М.: 
ИМА-ПРЕСС. 2013.248 с.
9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
9.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспорт­
ных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного 
вида, при температуре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 25 °С не 
более 1 о суток.
9.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться 
при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или холо­
дильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной ре­
гистрацией температуры.
9.3. Срок годности набора - 12 месяцев со дня выпуска. Не допуекается применение 
наборов по истечении срока их годности.
9.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной ин- 
етрукции по применению набора.
10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
10.1. производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям 
нормативной и технической документации.
Безопасность и качество изделия гарантируются в течение веего срока годности.
10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, воз­
никших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, 
либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функцио­
нальные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют норматив­
ной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого 
дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем.
По вопросам, касаюшимся качества набора «РеалБест-Еенетика Гемостаз FGB/F13A1» 
следует обращатьея в АО «Вектор-Бест» по адресу:
630117, г. Новосибирск-117, а/я 492,
тел. (383) 332-92-49, 227-60-30; тел./факс (383), 332-94-47, 332-94-44.
E-mail: plkobtk&,vector-best, ru


--- стр. 10 ---
Начальник отделения 
АО «Вектор-Бест» А.В. Трухина
Директор по производству 
АО «Вектор-Бест»
Руководитель отдела 
«Клинические исследования»
ООО «Независимая лаборатория ИНВИ 
м.п.
ii
в.к. Ткачев
Р.С. Годунов
10