Набор реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов генов системы свертывания крови ITGA2 и F7 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с детекцией кривых плавления (РеалБест-Генетика Гемостаз ITGA2/F7) по ТУ 9398-648-23548172-2016 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2018/7023 от 09.04.2018 · класс риска 2б

Производитель: АО "Вектор-Бест" (Россия)

Вид изделия: Система свертывания крови/фолатный цикл однонуклеотидные полиморфизмы генов ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
директор
-'i.  о .  — — ''■^-Ьест»
М.Д. Хусаинов 
2018 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения 
однонуклеотидных полиморфизмов генов системы свертывания крови ITGA2 и F7 
методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени 
с детекцией кривых плавления 
«РеалБест-Генетика Гемостаз ITGA2/F7»
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов генов системы 
свертывания крови ITGA2 и F7 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального 
времени с детекцией кривых плавления «РеалБест-Генетика Гемостаз ITGA2/F7» предна­
значен для определения однонуклеотидных полиморфизмов С807Т гена ITGA2 (интегрин 
альфа-2, тромбоцитарный рецептор к коллагену)  и G10976A гена F7 {фактор VII сверты­
вания крови), ассоциированных с риском развития тромбофилии, методом полимеразной 
цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с плавлением продуктов гибридизации с 
флуоресцентной меткой с последующим анализом кривых плавления.
Результаты генотипирования, полученные с использованием данного набора реаген­
тов, могут быть использованы лечащим врачом в комплексной оценке риска развития тром­
бофилии (степень генетической предрасположенности к развитию тромбофилии).
Выделение ДНК из клинического материала (буккального эпителия, цельной крови) 
осуществляется с помощью наборов «РеалБест-Генетика ДНК-экспресс» или «РеалБест экс­
тракция 100».
Набор используется с регистрирующим амплификатором «CFX96» (фирма «Bio-Rad», 
США).
Набор реагентов рассчитан на проведение анализа 48 образцов, включая контрольные 
образцы.
Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: директором  
по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В.


--- стр. 2 ---
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода.
Принцип метода основан на амплификации выбранного участка ДНК человека и по­
следующей детекции кривых плавления гибридных комплексов продуктов ПЦР и специфич­
ных зондов. Процесс амплификации заключается в повторяющихся циклах: температурная 
денатурация ДНК-матрицы, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями 
ДНК-матрицы, синтез комплементарной цепи с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой.
После реакции амплификации понижение температуры приводит к гибридизации спе­
цифичного ДНК-зонда с продуктом амплификации и к снижению уровня флуоресцентного 
сигнала в пробирке. В процессе температурного плавления образовавшихся дуплексов про­
исходит высвобождение ДНК-зонда, несущего флуоресцентный краситель. В случае непол­
ной комплементарности ДНК-зонда и выбранного участка ДНК, температура плавления дуп­
лекса будет ниже, чем в случае полной комплементарности. Гибридизационный ДНК-зонд 
для детекции полиморфизма С807Т комплементарен мутантной последовательности гена 
1TGA2; гибридизационный ДНК-зонд для детекции полиморфизма G10976A комплементарен 
мутантной последовательности гена F7. Таким образом, для двух аллельных вариантов тем­
пературы плавления дуплексов зонда и продуктов амплификации отличаются, благодаря 
этому идентифицируется генотип (нормальная гомозигота, гетерозигота, мутантная гомози­
гота).
2.2. Состав набора:
В состав набора входят следующие компоненты:
-  контрольный образец 1  «Нормальная гомозигота» (KOI) - 1  пробирка, 1  мл;
- контрольный образец 2 «Мутантная гомозигота» (К02) - 1  пробирка, 1  мл;
- готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС), лиофилизированная - 48 пробирок;
- элюирующий раствор «Генетика» -  2 фл. по 12 мл.
Принадлежности:
-  оптическая плёнка - 1  лист.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ*
3.1. Специфичность определения полиморфизмов С807Т гена ITGA2 и G10976А гена 
F7 определяется по стандартному образцу предприятия, СОН ДНК Гемостаз (per. № 05-2- 
491).
Специфичность составляет 100 % при условии, что генотип образцов по полиморфиз­
мам С807Т гена ITGA2 и G10976A гена F7 в образцах № 1  и №2 определяется в соответствии 
с инструкцией к СОН.
3.2. Для KOI должно фиксироваться наличие одного пика плавления, соответствую­


--- стр. 3 ---
щего генотипу «Нормальная гомозигота».
3.3. Для К02 должно фиксироваться наличие одного пика плавления, соответствую- 
ндего генотипу «Мутантная гомозигота».
3.4. Диагностическая специфичность определения полиморфизмов генов системы 
свертывания крови ITGA2 и F7 составила:
- диагностическая специфичность определения полиморфизма С807Т гена ITGA2 (ин- 
тегрин альфа-2, тромбоцитарный рецептор к коллагену): клинические испытания, проведен­
ные на 242 образцах от 222 пациентов, показали 100% специфичность (интервал 98,7 % - 100 
%, с доверительной вероятностью 90 %);
- диагностическая специфичность определения полиморфизма G10976A гена F7 (фак­
тор VII свертывания крови): клинические испытания, проведенные на 242 образцах от 222 
пациентов, показали 100% специфичность (интервал 98,7 % - 100 %, с доверительной веро­
ятностью 90 %).
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к  
искажению результатов ПЦР.
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 
№ 4н).
4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных 
болезней».
4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы 
выделения ДНК/РНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы ла­
бораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с матери­
алом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки.
4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором дозаторов пе­
ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За­
прещается их перемещение между рабочими местами.
4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре­
ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для 
дозаторов.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз­
ных образцов.
4.8. После окончания работ для дезинфекции и предотвращения контаминации все ра­


--- стр. 8 ---
зяю тромбоцитов и других клеток, регуляцию экспрессии коллагена и коллагеназы, образо­
вание и упорядочивание новосинтезируемого внеклеточного матрикса. Полиморфизм С807Т 
гена ITGA2 не отражается на структуре белка, но у носителей аллеля 807Т значительно уве­
личивается количество рецепторов на поверхности тромбоцитов и, соответственно, возраста­
ет вероятность тромбообразования. Аллельный вариант 807Т ассоциирован с повышенным 
риском коронарной артериальной болезни, инфаркта миокарда, тромбозов. Для гомозигот 
807Т/Т отмечена манифестация инфаркта миокарда и инсультов в более раннем возрасте. 
Носители аллеля 807Т, особенно в гомозиготе 807Т/Т, менее чувствительны к антитромбо- 
цитарной терапии и требуют более агрессивных схем лечения. Ассоциация аллеля 807Т с не­
чувствительностью к аспирину наиболее выражена в азиатских популяциях и в меньшей сте­
пени проявляется у европеоидов.
Полиморфизм G10976A в гене F7 приводит к замене аминокислоты в белке, Arg353Gln, 
что отражается на нормальном синтезе и функционировании фактора VII свертывания крови. 
Как в гомозиготном, так и в гетерозиготном состоянии замена G10976А приводит к сниже­
нию количества активного фактора VII в крови, у гомозигот А/А активность фактора VII 
снижена на 72% от нормального уровня. Показано, что гетерозиготное носительство 
G10976A F7 снижает риск развития тромбозов и инфаркта миокарда в 2 раза, даже при нали­
чии атеросклероза коронарных сосудов. Таким образом, полиморфизм G10976А F7 является 
защитным фактором в развитии тромбозов и инфаркта миокарда.
Более подробно ознакомиться с диагностической значимостью определения однонук­
леотидных полиморфизмов С807Т гена ITGA2 и G10976A гена F7 можно в литературе:
Цветовская Г.А., Чикова Е.Д., Лифшиц Г.И. и др. Генетические факторы риска 
тромбофилии у женщин репродуктивного возраста в Западно-Сибирском регионе // 
Фундаментальные исследования. 2010. № 10. С.72-79.
Щепотина Е.Г., Прасолова М.А., Иванов М.К. Новые наборы реагентов для выявления 
однонуклеотидных полиморфизмов генов фолатного цикла и системы свертывания крови // 
Новости Вектор-Бест. 2013. Т.68. №2. С. 2-8.
Петриков А. С., Шойхет Я. Н., Белых В. И., Е.Ф. Котовщикова, И.Т. Перегудова, Г.И. 
Костюченко. Роль генетических полиморфизмов в возникновении венозных 
тромбоэмболических осложнений // Медицина и образование в Сибири : сетевое научное 
издание. 2012. № 4.
Пизова Н.В. Тромбофилии: генетические полиморфизмы и сосудистые катастрофы // М.: 
ИМА-ПРЕСС. 2013.248 с.
9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
9.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспорт-
8


--- стр. 9 ---
ных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного 
вида, при температуре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 25 °С не 
более 10 суток.
9.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться 
при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или холо­
дильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной ре­
гистрацией температуры.
9.3. Срок годности набора - 12 месяцев со дня выпуска. Не допуекается применение 
наборов по иетечении срока их годности.
9.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной ин­
струкции по применению набора.
10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
10.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям 
нормативной и технической документации.
Безопасноеть и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности.
10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, воз­
никших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, 
либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функцио­
нальные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют норматив­
ной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого 
дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем.
По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест-Генетика Гемостаз ITGA2/F7» 
следует обращаться в АО «Вектор-Бест» по адресу:
630117, г. Новосибирск-117, а/я 492,
тел. (383) 332-92-49, 227-60-30; тел./факс (383), 332-94-47, 332-94-44.
E-mail: plkobtk&,vector-best, ru
Начальник отделения 
АО «Вектор-Бест» С сс^ А.В. Трухина
Директор по производству 
АО «Вектор-Бест»
Руководитель отдела 
«Клинические иселедования»
ООО «Независимая лаборатория ИНВИТРО» 
м.п.
В.К. Ткачев
Р.С. Годунов


--- стр. 10 ---
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
в
u
Sм8-e-aоssnоC
88
ГЕНОТИП
«Нормальная
гомозигота»
«Мутантная
гомозигота» «Г етерозигота»
Один пик плавле­
ния, отличается 
не более 
чем на 2 °С 
от KOI
Один пик плавле­
ния, отличается 
не более 
чем на 2 °С 
отК02
Два пика 
плавления, 
отличаются 
не более 
чем на 2 °С 
от KOI иК02
ITG A 2 C807T «FAM» С/С Т/Т С/Т
F 7 G10976A «ROX» G/G А/А G/A
10