Набор реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов C521T гена AGT и A1166C гена AGTR1 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с детекцией кривых плавления (РеалБест-Генетика AGT С521T/AGTR1 A1166C) по ТУ 9398-618-23548172-2016 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- «УТВЕРЖДАЮ» зальный директор гор-Бест» _М.Д. Хусаинов 2018 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов С521Т гена Д(СГ и А1166С теяг. AGTR1 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени е детекцией кривых плавления «РеалБест-Генетика AGT C521T/AGTR1 А1166С» 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов для определения однонуклеотидных полиморфизмов С521Т гена^ОГ и А1166С гена AGTR1 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени е детекцией кривых плавления «РеалБест-Генетика AGT C521T/AGTR1 А1166С» предназна чен для определения однонуклеотидных полиморфизмов С521Т (Thrl74Met) гена ангиотен- зиногена AGT и А1166С гена рецептора типа 1 ангиотензина II AGTR1, ассоциированных с риском развития артериальной гипертензии, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с плавлением продуктов гибридизации с флуоресцентной меткой с последующим анализом кривых плавления. Результаты генотипирования, полученные с использованием данного набора реаген тов, могут быть использованы лечащим врачом в комплексной оценке риска развития сер дечно-сосудистых заболеваний (степень генетической предрасположенности к развитию ар териальной гипертензии). Вьщеление ДНК из клинического материала (буккального эпителия, цельной крови) осуществляется с помощью наборов «РеалБест-Генетика ДНК-экспресс» или «РеалБест экс тракция 100». Набор применяется с регистрирующим амплификатором «СГХ96» (фирма «Bio-Rad», США). Набор реагентов рассчитан на проведение анализа 48 образцов, включая контрольные образцы. Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: директором по производству Ткачевым В. К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А. В. --- стр. 2 --- 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип метода. Принцип метода основан на амплификации выбранного участка ДНК человека и по следующей детекции кривых плавления гибридных комплексов продуктов ПЦР и специфич ных зондов. Процесс амплификации заключается в повторяющихся циклах: температурная денатурация ДНК-матрицы, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями ДНК-матрицы, синтез комплементарной цепи с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой. После реакции амплификации понижение температуры приводит к гибридизации спе цифичного ДНК-зонда с продуктом амплификации и к снижению уровня флуоресцентного сигнала в пробирке. В процессе температурного плавления образовавшихся дуплексов про исходит высвобождение ДНК-зонда, несущего флуоресцентный краситель. В случае непол ной комплементарности ДНК-зонда и выбранного участка ДНК, температура плавления дуп лекса будет ниже, чем в случае полной комплементарности. Гибридизационный ДНК-зонд для детекции полиморфизма С521Т комплементарен мутантной последовательности гена AGT, гибридизационный ДНК-зонд для детекции полиморфизма А1166С комплементарен нормальной последовательности т^шАСТК!. Таким образом, для двух аллельных вариантов температуры плавления дуплексов зонда и продуктов амплификации отличаются, благодаря этому идентифицируется генотип («нормальная гомозигота», «гетерозигота», «мутантная гомозигота»). 2.2. Состав набора: В состав набора входят следующие компоненты: - контрольный образец «Нормальная гомозигота» (KOI) - 1 пробирка, 1 мл; - контрольный образец «Мутантная гомозигота» (К02) - 1 пробирка, 1 мл; - готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС), лиофилизированная - 48 пробирок; - элюирующий раствор «Генетика» - 2 фл. по 12 мл. Принадлежности: - оптическая плёнка - 1 лист. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Специфичность определения полиморфизмов С521Т гена AGT и А1166С гена AGTR1 определяется по стандартному образцу предприятия, СОП ДНК Гипертония (per. № 05-2-654). Специфичность составляет 100 % при условии, что генотип по полиморфизмам С521Т гена лег и А1166С гена AGTR1 в образцах № 1-4 определяется в соответствии с инструкци ей к СОП. 3.2. Для KOI должно фиксироваться наличие одного пика плавления, соответствую --- стр. 3 --- щего генотипу «Нормальная гомозигота». 3.3. Для К02 должно фиксироваться наличие одного пика плавления, соответствую щего генотипу «Мутантная гомозигота». 3.4. Диагностическая специфичность определения полиморфизмов составила: - диагностическая специфичность определения полиморфизма С521Т гена ангиотен- зиногена AGT: клинические испытания, проведенные на 221 образце от 201 пациента, пока зали 100% специфичность (интервал 98,5 % - 100 %, с доверительной вероятностью 90 %); - диагностическая специфичность определения полиморфизма А1166С гена рецептора типа 1 ангиотензина 11 AGTR1.- клинические испытания, проведенные на 221 образце от 201 пациента, показали 100% специфичность (интервал 98,5 % - 100 %, с доверительной вероят ностью 90 %). 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к искажению результатов ПЦР. 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 № 4н). 4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами 111-1V групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы выделения ДНК/РНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы ла бораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с матери алом, содержащим микроорганизмы 1-1V групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором дозаторов пе ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За прещается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для дозаторов. 4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз ных образцов. 4.8. После окончания работ для дезинфекции и предотвращения контаминации все ра бочие поверхности и оборудование следует подвергнуть действию бактерицидных УФ ламп в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфи- --- стр. 8 --- гипертонической болезни, в том числе с ранним началом, у носителей аллелей 704С и 521Т повышен риск инфаркта миокарда на фоне гормональной заместительной терапии, показаны ассоциации с ранней манифестацией отказа почек при некомпенсированной гипертонии, наблюдается склонность к нефропатии у пациентов с диабетом 1 типа. AGTR1 (Рецептор типа 1 ангиотензина II). Рецептор экспрессируется на поверхно сти клеток гладкой мускулатуры сосудов и клеток надпочечников. Активация AGTR1 при связывании с ангиотензином приводит к вазоконстрикции, симпатической активации и син тезу альдостерона. Полиморфизм А1166С характеризуется нуклеотидной заменой в регуля торной области гена, что приводит к усиленной экспрессии AGTR1. Данный полиморфизм обуславливает увеличение риска гипертонии. У носителей мутантного генотипа для сниже ния давления могут успешно применяться блокаторы AGTR1. Более подробно ознакомиться с диагностической значимостью определения однонук леотидных полиморфизмов С521Т гена AGT и А1166С гена AGTR1 можно в литературе: Затейщиков Д.А., Минушкина Л.О., Кудряшова О.Ю. Полиморфизм генов N0- синтетазы и рецептора ангиотензина 111 -го типа и эндотелиальный гемостаз у больных ише мической болезнью сердца // Кардиология, 2000, № 11, С. 28-32. Макеева О.А., Пузырев К.В., Павлюкова Е.Н. и др. Полиморфизм генов АСЕ и AGTR1 в патогенезе гипертрофии левого желудочка у человека // Молекулярная биология, 2004, Т. 38, С. 990-996. Мустафина О.Е., Насибуллин Т.Р., Хуснутдинова Е.К. Ассоциация полиморфизма М174Т гена ангиотензиногена с эссенциальной гипертонией у русских и татар Башкортоста на // Молекулярная биология, 2002, Т. 36, С. 599-604. Пузырев В.П., Карпов Р.С. Генетика артериальной гипертонии. Руководство по арте риальной гипертонии / Под ред. Чазова Е.И., Чазовой И.Е. М.: МедиаМедика, 2005, 784 с. Bonnardeaux А., Davies Е., Jeunemaitre X. et al. Angiotensin 11 type 1 receptor gene poly morphisms in human essential hypertension // Hypertension, 1994, V. 24, N. 1, P. 63-69. Jiang X., Sheng H., Li J., Xun P. et al. Association between renin-angiotensin system gene polymorphism and essential hypertension: a community-based study // J Hum Hypertens., 2009, V. 23, P. 176-181. V an Geel P.P, Pinto Y.M., Voors A.A et al. Angiotensin 11 type 1 receptor A1166C gene polymorphism is associated with an increased response to angiotensin 11 in human arteries // Hyper tension, 2000, V. 35, P. 717-721. Wang J.G., Staessen J. Genetic polymorphisms in the renin-angiotensin system: relevance for susceptibility to cardiovascular disease // European journal of pharmacology, 2000, V. 410 (2- 3), P. 289-302. --- стр. 9 --- Wang W.Y., Zee R.Y., Morris B.J. Association of angiotensin II type I receptor gene poly morphism with essential hypertension // Clin Genet., 1997, V. 51, N. 1, P. 31-34. 9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА 9.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспорт ных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида, при температуре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 25 °С не более 10 суток. 9.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или холо дильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной ре гистрацией температуры. 9.3. Срок годности набора - 12 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение наборов по истечении срока их годности. 9.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной ин струкции по применению набора. 10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА 10.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям нормативной и технической документации. Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности. 10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, воз никших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы. 10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функцио нальные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют норматив ной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем. По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест-Генетика AGT C521T/AGTR1 А1166С», следует обращаться в АО «Вектор-Бест» по адресу: 630117, г. Новосибирск-117, а/я 492, тел. (383) 332-92-49, 227-60-30; тел./факс (383), 332-94-47, 332-94-44. E-mail: plkobtk(a)vector-best. ru --- стр. 10 --- Начальник отделения производства ПЦР-наборов АО «Вектор-Бест» Ql C ^ А.В. Трухина Директор по производству АО «Вектор-Бест» Г - в.к. Ткачев Руководитель отдела «Клинические исследования» ООО «Независимая лаборатория ИНВИТРО^ м.п. Р.С. Годунов