Набор реагентов для определения генетических полиморфизмов Del287 гена ACE и T704C гена AGT методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с детекцией кривых плавления (РеалБест-Генетика ACE Del287/AGT Т704C) по ТУ 9398-620-23548172-2016 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- -1ф «УТВЕРЖДАЮ» ^Генеральный директор ^ктор-Бест» _М.Д. Хусаинов 2018 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для определения генетических полиморфизмов Del287 генаТС£’ и Т704С гена ЛСГ методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с детекцией кривых плавления «РеалБест-Генетика АСЕ Del287/AGT Т704С» 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов для определения генетических полиморфизмов Del287 гена АСЕ и Т704С гена AGE методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с де текцией кривых плавления «РеалБест-Генетика АСЕ Del287/AGT Т704С» предназначен для определения генетических полиморфизмов Del287 гена ангиотензинпревращающего фер мента АСЕ и Т704С (Met235Thr) гена ангиотензиногена AGT, ассоциированных с риском развития артериальной гипертензии, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с плавлением продуктов гибридизации с флуоресцентной меткой с после дующим анализом кривых плавления. Результаты генотипирования, полученные с использованием данного набора реаген тов, могут быть использованы лечащим врачом в комплексной оценке риска развития сер дечно-сосудистых заболеваний (степень генетической предрасположенности к развитию ар териальной гипертензии). Вьщеление ДНК из клинического материала (буккального эпителия, цельной крови) осуществляется с помощью наборов «РеалБест-Генетика ДНК-экспресс» или «РеалБест экс тракция 100». Набор применяется с регистрирующим амплификатором «CFX96» (фирма «Bio-Rad», США). Набор реагентов рассчитан на проведение анализа 48 образцов, включая контрольные образцы. Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: директором по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В. --- стр. 2 --- 'W l l 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. Принцип метода. Принцип метода основан на амплификации выбранного участка ДНК человека и по следующей детекции кривых плавления гибридных комплексов продуктов ПЦР и специфич ных зондов. Процесс амплификации заключается в повторяющихся циклах; температурная денатурация ДНК-матрицы, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями ДНК-матрицы, синтез комплементарной цепи с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой. После реакции амплификации понижение температуры приводит к гибридизации спе цифичного ДНК-зонда с продуктом амплификации и к снижению уровня флуоресцентного сигнала в пробирке. В процессе температурного плавления образовавшихся дуплексов про исходит высвобождение ДНК-зонда, несущего флуоресцентный краситель. Варианты Ins287 и Del287 гена АСЕ отличаются по присутствию или отсутствию про тяжённого участка гена. Для детекции каждого аллеля используется отдельный зонд, специ фично связывающийся (полностью комплементарный) только со своим вариантом гена. Оба зонда несут одинаковый флуоресцентный краситель, но температуры плавления дуплексов зондов и продуктов амплификации отличаются, благодаря чему можно выявлять присут ствие каждого из аллелей независимо от другого и идентифицировать генотип («нормальная гомозигота», «гетерозигота», «мутантная гомозигота»). Для детекции полиморфизма Т704С используется один гибридизационный ДНК-зонд, который комплементарен нормальной последовательности гена AGT. В случае неполной комплементарности ДНК-зонда и выбранного участка ДНК, температура плавления дуплекса будет ниже, чем в случае полной комплементарности. Таким образом, для двух аллельных вариантов температуры плавления дуплексов зонда и продуктов амплификации отличаются, благодаря этому идентифицируется генотип по полиморфизму Т704С гена AGT («нормальная гомозигота», «гетерозигота», «мутантная гомозигота»). 2.2. Состав набора: В состав набора входят следующие компоненты: - контрольный образец «Нормальная гомозигота» (KOI) - 1 пробирка, 1 мл; - контрольный образец «Мутантная гомозигота» (К02) - 1 пробирка, 1 мл; - готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС), лиофилизированная - 48 пробирок; - элюирующий раствор «Генетика» - 2 фл. по 12 мл. Принадлежности: - оптическая плёнка - 1 лист. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Специфичность определения полиморфизмов Del287 гена АСЕ и Т704С гена AGT определяется по стандартному образцу предприятия, СОН ДНК Гипертония (per. № 05-2- --- стр. 3 --- Специфичность составляет 100 % при условии, что генотип по полиморфизмам Del287 гена АСЕ и Т704С гена AGT в образцах № 1-4 оцределяется в соответствии с ин струкцией к СОП. 3.2. Для KOI должно фиксироваться наличие одного пика плавления, соответствующе го генотипу «Нормальная гомозигота». 3.3. Для К02 должно фиксироваться наличие одного пика плавления, соответствующе го генотипу «Мутантная гомозигота». 3.4. Диагностическая специфичность определения генетических полиморфизмов соста вила: - диагностическая специфичность определения полиморфизма Del287 гена ангиотен- зинпревращающего фермента АСЕ\ клинические испытания, проведенные на 226 образцах от 206 пациентов, показали 100% специфичность (интервал 98,6 % - 100 %, с доверительной вероятностью 90 %); - диагностическая специфичность определения полиморфизма Т704С (Met235Thr) гена ангиотензиногена AGT\ клинические испытания, проведенные на 226 образцах от 206 паци ентов, показали 100% специфичность (интервал 98,6 % - 100 %, с доверительной вероятно стью 90 %). 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к искажению результатов ПЦР. 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 № 4н). 4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы вьщеления ДНК/РНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы ла бораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с матери алом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». 4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки. 4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором дозаторов пе ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За прещается их перемещение между рабочими местами. 4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре- 654). --- стр. 9 --- Biology, 2007, V. 131,P. 115-126. Rigat B., Hubert C., Alhenc-Gelas F. et al. An insertion/deletion polymorphism, in the angiotensin I-converting enzyme gene accounting for half the variance of serum enzyme levels // J Clin Invest., 1990, V. 86, N. 4, P. 1343-1346. Sanada H., Jones J.E., Jose P. Genetics of salt-sensitive hypertension // Current hypertension reports, 2011, V. 13, N. 1, P. 55-66. Staessen J., Wang, J.G., Brand E. et al. Effects of three candidate genes on prevalence and incidence of hypertension in a Caucasian population // Journal of hypertension, 2001, V. 19, N. 8, P. 1349-58. Wang J.G., Staessen J. Genetic polymorphisms in the renin-angiotensin system: relevance for susceptibility to cardiovascular disease // European journal of pharmacology, 2000, V. 410 (2- 3), P. 289-302. Zhu X., Bouzekri N., Southam L. et al. Linkage and association analysis of angiotensin I- converting enzyme (ACE)-gene polymorphisms with ACE concentration and blood pressure // Am J Hum Genet, 2001, V. 68, N. 5, P. 1139-48. 9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА 9.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспорт ных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида, при температуре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 25 °С не более 10 суток. 9.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или холо дильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной ре гистрацией температуры. 9.3. Срок годности набора - 12 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение наборов по истечении срока их годности. 9.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной ин струкции по применению набора. 10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА 10.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям нормативной и технической документации. Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности. 10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, воз никших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы. --- стр. 10 --- н 10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, те.'снические и функцио нальные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют норматив ной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем. По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест-Генетика АСЕ Del287/AGT Т704С», следует обращаться в АО «Вектор-Бест» по адресу: 6301 17, г. Новосибирск-! 17, а/я 492, тел. (383) 332-92-49, 227-60-30; тел./факс (383), 332-94-47, 332-94-44. E-mail: vlkohtkCcpvector-hest.ru Начальник отделения производства ПЦР-иаборов АО «Вектор-Бест» А.В. Трухина Директор по производству АО «Вектор-Бест» ЕС к. Ткачев Руководитель отдела Р.С. Годунов 10 --- стр. 11 --- ! ПРИЛОЖЕНИЕ 1 вши SмВ •в>О.Огвкое §вв ГЕНОТИП «Нормальная гомозигота» «Мутантная гомозигота» «Г етерозигота» Один пик плавле ния, отличается не более чем на 2 °С от KOI Один пик плавле ния, отличается не более чем на 2 °С отК02 Два пика плавления, отличаются не более чем на 2 °С от KOI иК02 АСЕ Del287 «РАМ» Ins/Ins Del/Del Ins/Del AGT Т704С «НЕХ» т/т С/С Т/С 11