Набор реагентов для определения спор Bacillus anthracis в реакции латекс-агглютинации по ТУ 9398-112-78095326-2010 в составе (см. приложение на 1 листе): — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
<><9,
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от 20 г.№
УТВЕРЖДАЮ
Директор ГУН ГНД ПМБ
Дятлов
о г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для опред
B a cillu s an th ra cis в реакции латекс-агглю
1 Назначение
Набор реагентов для определения спор Bacillus anthracis в реакции латекс-
агглютинации (РЛА) предназначен для обнаружения спор Bacillus anthracis в чистых
культурах, а также в различных объектах окружающей среды, в которых предполагается
наличие спор.
2 Принцип метода
При смешивании латексного реагента с исследуемым образцом, при наличии в
последнем спор В. anthracis, они специфически взаимодействуют с моноклональными
антителами (МКА), сорбированными на латексе, что приводит к агглютинации латексных
частиц.
Область применения - клиническая лабораторная диагностика, научные
исследования. ь
3 Характеристика набора
В состав набора реагентов входят компоненты, представленные в таблице 1.
Таблица 1 - Состав набора реагентов
Наименование Количество
1. Планшет стрипованный 96-ти луночный для латекс-
агглютинации с U-образным профилем лунок
1 планшет
2. Латекс сибиреязвенный с иммобилизованными МКА к спорам
В. anthracis, лиофилизированный 5 флаконов
3. Взвесь убитой культуры сибиреязвенного микроба
В. anthracis СТИ-1 в споровой форме жидкая - 1,0 спор/мл
(положительный контроль).
1 флакон
4. Боратный буфер - сухая навеска:
• борная кислота - (ГОСТ 9656-75)
• натрий тетраборнокислый, 10-водный
1 флакон (0,77г)
--- стр. 2 ---
V
1
4. Аналитические и диагностические характеристики
Чувствительность. РЛА является не только качественным, но и полуколичественным
методом. При этом концентрация спор в исследуемом образце определяется по
предельному его разведению, дающему положительную реакцию. Предел выявления спор
В . anthracis методом РЛА составляет 2 хЮ^спор/мл и выше.
Специфичность. Латексный сибиреязвенный диагностикум не выявляет
гетерологичные культуры рода Bacillus в споровой форме в концентрации
1,0 х10*спор/мл и ниже. В виду наличия перекрестно-реагирующих антигенов у
представителей группы Bacillus, допускается при проведении РЛА с гетерологичными
штаммами положительная реакция не более, чем у 10 % от числа исследуемых штаммов.
Учет результатов проводят визуально по четырех крестовой системе (4+; 3+; 2+;
1+; «-») на светлом фоне при хорошем освещении.
Положительной считается реакция, оцениваемая не менее чем на 3+.
5. Меры предосторожности
Потенциальный риск применения тест-системы класса 3 по ГОСТ Р51609-2000. Работу
проводят в соответствии с СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II
групп патогенности (опасности)».
6. Оборудование и материалы
- холодильник бытовой;
- дозаторы автоматические;
- дистиллированная или деионизованная вода;
- отраслевой стандартный образец мутности ФГУП ГИСК им. Л. А. Тарасовича 10
единиц (ОСО 42-28-85П, соответствующего года выпуска).
- камера Горяева
- микроскоп
7. Способ применения
7.1. Один «Набор реагентов для определения спор Bacillus anthracis в реакции латекс-
агглютинации» рассчитан на 7 определений.
При проведении анализа нельзя использовать компоненты из наборов разных серий
или смещивать их в процессе приготовления растворов, а также нельзя использовать
компоненты по истечении их срока годности!
--- стр. 3 ---
('■' i s
Перед использованием все реагенты набора выдержать 30 мин при температуре от 20
до 24® С.
Для отбора исследуемых проб и компонентов применять автоматические пипетки с
погрешностью измерения объемом не более 5%.
8. Приготовление рабочих растворов (для реакции на одном планшете)
8.1. Для получения боратного буфера содержимое 1 флакона растворяют в 100 мл
дистиллированной или деионизованной воды. Посуда должна быть химически чистой.
Приготовленный буфер хранить не более 5 суток при плюс 4-6 ®С.
8.2. Для получения жидкого латекса сибиреязвенного содержимое 1 флакона с
высушенными латексными частицами растворяют в 0.5 мл дистиллированной или
деионизованной воды. Жидкий латекс сибиреязвенный стабилен в течение 7-10 суток
при температуре хранения плюс 4-6 ®С.
9. Подготовка исследуемого материала.
Анализируемые образцы - исследуемые бактериальные культурь?^. возбудителя
сибирской язвы в споровой форме и пробы из объектов окружающей среды, потенциалъно
содержащие возбудитель сибирской язвы в споровой форме.
9.1. Подготовка к исследованию «чистых» культур.
Исследуемые культуры выращивают на голодном L-arape Луриа (Луриа-Бертани)
при температуре (35+1) ® С в течение 7-10 суток, получая споровые формы
микроорганизмов. Образование спор оценивают путем просмотра в микроскопе с
помощью фазово-контрастного устройства раздавленной или висячей капли, а также
мазков, окрашенных по Цилю-Нильсену. Если рост типичный, отсутствует посторонняя
микрофлора, а в мазке обнаруживают 90-98% отдельно расположенных
розовоокрашенных спор и единичные красные и синие споры, культура считается зрелой.
Концентрацию спор определяют путем их подсчета в камере для счисления форменных
элементов крови с сеткой Горяева. Для этого выращенную культуру микроорганизмов
бактериологической петлей переносят в пробирку со стерильным физиологическим
раствором и доводят мутность до 10 ед по стандартному образцу мутности (ОСО 42-28-85
П), что соответствует 1x10* спор/мл. Из этого разведения заполняют камеру. Дают спорам
осесть в течение 4-5 минут. После этого производят подсчет епор под микроскопом.
Количество спор подсчитывают не менее чем в 10 больших квадратах, расположенных по
--- стр. 4 ---
а о (
диагонали. Находят среднее арифметическое число спор в одном большом квадрате.
Число спор в 1 см^ (N) суспензии вычисляют по формуле:
N= 250 000 X п X р,
где п - среднее количество спор в одном большом квадрате,
р - кратность разведения споровой суспензии.
Исходя из результатов подсчета в камере Горяева и объема споровой суспензии,
рассчитывают количество физиологического раствора так, чтобы готовая культура
микроорганизмов содержала lxl0^ спор/мл. Обеззараживание споровых культур
проводят добавлением мертиолята натрия до концентрации 1:1000. Время инактивации
составляет 24 часа при комнатной температуре 20*^-22'^С.
9.2. Взятие проб из объектов окружающей среды.
Взятие материала из объектов окружающей среды, подготовку материала для
исследования следует проводить согласно методическим указаниям МУК 4.2.29-06-08
«Лабораторная диагностика и обнаружение возбудителя сибирской язвы», М., 2008.
9.3. Проведение реакции латекс-агглютинации.
Во все лунки планшета вносят по 25 мкл боратного буфера. В лунки первого
вертикального ряда дозатором, кроме лунки А1 и Н1 вносят по 25 мкл исследуемых
взвесей или исследуемый материал. Для определения концентрации спор В. anthracis в
исследуемых образцах в лунки А1 вносят 25мкл взвеси убитой сибиреязвенной культуры
в споровой форме (положительный контроль). Начиная е первого в^ртгйс'ального ряда
делают последовательные двукратные разведения переносом по 25 мкл из одной лунки в
другую. Из последних лунок по 25мкл удаляют. В качестве отрицательного контроля
используют лунки с Н1 по Н12. Затем во все лунки добавляли по 25мкл латекса
сибиреязвенного, планшет осторожно встряхивают и оставляют при комнатной
температуре на 1,5 - 2,0 часа. Срок годности неиспользованного планшета неограничен.
10. Учет результатов реакции.
Учет результатов проводят визуально по четырех крестовой системе на светлом фоне
при хорошем освещении.
^4+ - все частицы латекса агглютинированы, равномерно покрывают дно лунки, образуя
«зонтик».
3+ - Агглютинированы почти все частицы латекса, что выражается в уменьшении
диаметра «зонтика».
2+ - Агглютинированна половина латексных частиц.
1+ - Большинство частиц не агглютинировано и осело на дно лунки, но диаметр
«пуговицы» пока еще отличается от «точки».
--- стр. 5 ---
и ,-
«-» - Признаков агглютинации нет, латексные частицы осели на дно лунки в виде
«точки» ярко синего цвета в центре лунки.
Положительной считается реакция, оцениваемая не менее чем на 3+.
Концентрацию спор В. anthracis в исследуемых образцах из объектов внешней среды
определяют по образованию «зонтиков», как описано выше и путем сравнения их с
результатами РЛА с разведениями контрольной взвеси убитой культуры В. anthracis в
споровой форме.
11. Транспортирование и хранение.
Тест-систему транспортируют всеми видами крытого транспорта при соблюдении
условий хранения. Допускается транспортирование при температуре от 2 до 25 °С не
более 7 суток.
Хранят в герметично закрытой упаковке в защищенном от света месте при
температуре от 2 до 8 °С.
12. Срок годности.
Срок годности - 6 месяцев.
По вопросам, касающимся качества набора реагентов в течение срока годности
следует обращаться в адрес предприятия-изготовителя: 142279, Московская обл.,
Серпуховский р-н, Оболенск, ФГУП «Государственный научный цецтр прикладной
микробиологии и биотехнологии», тел: 8(4967)31-19-15.
Зам .директора по научно-производственной работе
СОГЛ^
А.П.Шепелин
«СОГЛАСОВАНО»
Зав.кафедрой
ДПО «РМАПО»
ессор
В.В.Долгов
ск НИПЧИ
, Балахонов
2010 г.
М.П.
П о,^пись
удостоверяю; специалист по
кадровой работе ГОУ ДПО
РМАПО Росзд_р,ава
подпись: