Набор реагентов для выявления ДНК микобактерий туберкулеза человеческого и бычьего видов (Mycobacterium tuberculosis - Mycobacterium bovis complex) и дифференциации Mycobacterium tuberculosis от Mycobacterium bovis complex методом полимеразной цепной реакции (МИКО-ГЕН) по ТУ 9398-007-46482062-2008 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас 1 закупка, где это изделие полностью проходит по требованиям хотя бы в одной позиции.
| Закупка | Окончание подачи | Нач. цена |
|---|---|---|
| Поставка медицинских расходных материалов
№ 0387200002826001046 · БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ХАНТЫ-МАНСИЙСКОГО АВТОНОМНОГО ОКРУГА - ЮГРЫ "ОКРУЖНАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ БОЛЬНИЦА" · Ханты-Мансийский автономный округ — Югра |
09.11.2026 | 1 481 664 ₽ |
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДЕНА УТВЕРЖДАЮ Приказом Росздравнадзора Генеральный директор от 200 г № уЙ ^^Ш ^^!1Н К -Т ехнология» [.ЮТрофимов ^ ^ , ^ _______2008 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для выявления ДНК микобактерий туберкулеза человеческого и бычьего видов (Mycobacterium tuberculosis - Mycobacterium bovis complex) и дифференциации Mycobacterium tuberculosis от Mycobacterium bovis методом полимеразной цепной реакции (МИКО-ГЕН) L НАЗНАЧЕНИЕ 1.1. Набор реагентов МИКО-ГЕН предназначен для выявления ДНК микобактерий туберкулеза человеческого и бычьего видов (Mycobacterium tuberculosis - Mycobacterium bovis complex) и дифф^>енциации Mycobacterium tuberculosis от Mycobacterium bovis методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в биологическом материале человека (M O iqpO T a, бронхо*альвболярный лаваж, хирургический материал (содержимое туб^жуломы)). 1.2. Набор может быть использован в клшшко-'Диагностических лаборап^шях медацинских учр&кдеии& и научно-исхшедовагельсксй практике. --- стр. 2 --- 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1 ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ Набор реагентов МИКО-ГЕН основан на использовании амплификации ДНК методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Процесс амплификации заключается в повторяюпщхся циклах: температурной денатурации ДНК, отжига праймеров (затравок) с комплементарными последовательностями и последующей достройке полинуклеотидных цепей ДНК-полимеразой. В наборе МРЖО-ГЕН в смесь для амплификации добавлен внутренний контрольный образец (ВК), предназначенный для оценки эффективности протекания полимеразной цепной реакции. В наборах в формате «Flash» и «Real-time» в смесь для амплификации введены ДНК-зонды, каждый из которых содержит флуоресцентную метку и гаситель флуоресценции. В случае образования специфичного продукта Д Ж -зонд разрушается, что ведет к возрастанию уровня флуоресценции, который фиксируется специальными приборами. Д Ж -зонды , использующиеся для детекции продуктов амплификации искомого фрагмента генома микобактерий туберкулеза человеческого и бычьего видов и внутреннего контрольного образца (ВК), мечены флуоресцентньши метками FAM и HEX соответственно, что позволяет раздельно регистрировать результаты амплификации фрагмента генома вшкобакт^>ий туберкулеза человеческого и бычьего ввдов и внутреннего контрольного образца. Для анализа продуктов ПЦР можно использовагь дегектщ)ующие амшшфикаторы^ спедиализировашше деггекгсфы ф 1^<фесденции (ПЦР-детекторы) или метод эяектрофсфеза в аг^юзном геде. --- стр. 3 --- Для повышения чувствительности и специфичности реакции предусмотрено применение «горячего» старта, который обеспечивается методикой приготовления реакционной смеси, состоящей из двух слоев, разделенных прослойкой из парафина. Смешение слоев и превращение их в амплификационную смесь происходит только при плавлении парафина, что исключает неспецифический отжиг праймеров на ДНК-мишени при начальном прогреве пробирки. 2.2 СОСТАВ НАБОРА В зависимости от способа детекции результатов амплификации набор выпускается в трёх форматах: формат «Flash» предназначен для детекции результатов ПЦР после окончания амплификации с использованием ПЦР-детектора; формат «Real-time» предназначен для детекции результатов ПЦР во время амплификации с помощью детектирующих амплификаторов; формат «Форез» предназначен для детекции результатов ПЦР после окончания амплификации методом электрофореза в агарозном геле. Набор состоит из четырех комплекгов: а) комплект реагентов для выделения нуклеиновых кислот (Проба-НК), включает: • лизирующий раствор, 30 мл 1 флакон; • реагент для преципитации, 40 мл 1 флакон; • промывочный раствор № 1,50 мл 1 флакон; • промывочный раствор № 2,30 мл 1 флакон; • буфер для растворения, по 1,25 мл 4 пробирки. --- стр. 4 --- Комплект является универсальным для всех форматов. б) комплект реагентов для ПЦР-амплификации ДНК микобактерий туберкулеза человеческого и бычьего видов: • смесь для амплификации, запечатанную парафином, по 20 мкл 100 пробирок; • раствор Taq-полимеразы, по 500 мкл 2 пробирки; • ПЦР-буфер, 200 мкл 1 пробирка; • минеральное масло, по 1,0 мл 2 пробирки; • положительный контрольный образец, 150 мкл 1 пробирка. В состав смеси для амплификации входят: ПЦР-буфер, дезоксирибонуклеотидтрифосфаты, праймеры, внутренний контрольный образец. В наборах форматов «Flash» и «Real-time» в состав смеси для амплификации входят флуоресцентные /ЩК-зонды. ПЦР-буфер включен только в комплекты для набора формата «Flash». Комплект является специфичным для каждого формата («Flash», Real-time», «Форез»). в) комплект реагентов для дифференциации ДНК Mycobacterimn tuberculosis от Mycobacterimn bovis: • смесь для амплификации, запечатанную п^зафином, по 20 мкл 100 пробирок; • минеральноемасло,по 1,0 мл 2 проб^ки; • раствор Тац-полимфазы, по 500 мкл 2 щюбщжи; • пояожигеяьный кошрольный образец, 150 мкл 1 пробщжа. --- стр. 5 --- в состав смеси для амплификации входят: ПЦР-буфер, дезоксирибонуклеотидтрифосфаты, праймеры, внутренний контрольный образец. Комплект выпускается только в формате «Форез». г) комплект реагентов для детекции ДНК методом электрофореза включает: • смесь для электрофореза -1 пакет (16,9 г); • агарозный гель - 5 пластин. Комплект используется в наборе формата «Форез». 2.3 Время проведения анализа -4 ч. 2.4 Набор рассчитан на проведение 100 определений, включая анализ неизвестных образцов, положительных контрольных образцов и отрицательных контрольных образцов. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1 СПЕЦИФИЧНОСТЬ АНАЛИЗА В образцах биологического материала человека, содержащих ДНК микобактерий туберкулеза, ПЦР-детекгор (формат «Flash») или детектирующий амплификатор (формат «Real-time») должны регистрировать положительный результат. При использовании метода гель-элекгрофореза (формат «Форез»), должна быть ввдна полоса оранжево-красного цвета, соответствующая фрагменту генома микобактерий туберкулеза размером 330 п.н. (пар нуклеотидов). В образцах биологического материала, не содержащих ДНК микоба 1Сгерий тyбqpItyлeзa, ПЦР-детектор (формат «Flasb>) или детекпфующий амплификатор (формат «Real-time») должны регисфироватъ отрицательный результат. При использовании метода гель-электрофореза (формат «Форез») полоса с^анжево^ iqpacHoro цвета, соответсхвующая ф|Ш 1^ е т у генома микобактерий туб^|дглеза --- стр. 6 --- размером 330 п.н., отсутствует, а полоса, соответствующая внутреннему контрольному образцу размером 900 п,н,, должна быть отчетливо видна. При использовании комплекта реагентов для дифференциации ДНК Mycobacterium tuberculosis от Mycobacterium bovis в образцах биологического материала, содержащих Д Ж Mycobacterium tuberculosis, должна быть видна полоса оранжево-красного цвета, соответствующая фрагменту генома Mycobacterium tuberculosis размером 263 п.н. В образцах биологического материала, содержащих ДНК Mycobacterium bovis, полоса оранжево-красного цвета, соответствующая фрагменту генома Mycobacterium tuberculosis размером 263 п.н., должна отсутствовать. 3.2 ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ АНАЛИЗА; 200 геном-эквивалентов ДНК микобактерий туберкулеза человеческого и бычьего видов на 1 мл образца. 4 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 4.1 Меры предосторожности - соблюдение «Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно- эпидемиологических учреадений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.). 4.2 Потенциальный риск применения набора - класс 2а (ГОСТ Р 51609- 2000). 4.3 Все компоненты набора в используемых концетграциях являются нетоксичными. --- стр. 8 --- дезинфицирующих/моющих средств, регламентированных санитарными правилами. 4.12 Поверхности рабочих столов, а также помещений, в которых проводится ПЦР, следует обрабатывать бактерицидными облучателями до и после проведения работ в течение 1 часа. 4.13 Запрещается снимать крышку с электрофоретической камеры, если она подключена к источнику питания. 4.14 При работе с включенным трансиллюминатором необходимо пользоваться защитным экраном или спещ 1альной защитной маской. 5 ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ Организащм работы ПЦР-лаборатории, оборудование и материалы должны соответствовать Методическим указаниям МУ 1.3.1888-04. При работе с набором реагентов МИКО-ГЕН требуются следующие оборудование и материалы; • амплификатор (для форматов «Форез» и «Flash») или детектирующий амплификатор (для формата «Real-time»); • центрифуга со скоростью вращения ротора 13000 об/мин; • термостат твердотельный на 50 °С; • мюфоцентрифуга/вортекс со скоростью вращения 1000-3000 об/мин; • холодильник бытовой; • пробирки одноразовые пластиковые объемом 1,5 мл; • пипетки автоматические одноканальные с переменным объемом 0^5- 10 мкл, 2,0-20 мкл, 20-200 мкл, 200-1000 мкл; ‘ 8 --- стр. 9 --- • одноразовые наконечники с фильтром для автоматических пипеток с маркировкой “RNAase-free, DNAase-free” объемом 1-20 мкл; 1-200 мкл; 100-1000 мкл; • одноразовые наконечники с аэрозольным барьером для автоматических пипеток объёмом 1-20 мкл; • одноразовые перчатки медицинские; • физиологический раствор (0,9% NaCl) стерильный; • 10% раствор трехзамещенного фосфорнокислого натрия; • 1М раствор НС1; • 5% раствор хлорамина; • дистиллированная вода. При работе с набором в формате «Flash» для детекции результатов требуется: • ПЦР-детектор. При детекции методом электрофореза (формат «Форез») требуются: • источник постоянного тока; • камера для электрофореза; • трансиллюминатор; • колба мерная вместимостью 1,0 л; • дистиллированная вода; • стальная проволока диаметром 1,0 мм. --- стр. 10 --- 6 АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ К пробе мокроты или бронхо-альвеолярному лаважу добавить равный объем 10% трехзамещенного фосфорнокислого натрия х 12 НгО, интенсивно встряхнуть. Смесь инкубировать в течение 18-24 ч при температуре 37°С, затем нейтрализовать 1М НС1 до pH 6,8-7,4 и центрифугаровать в течение 20 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость слить в 5% раствор хлорамина для обеззараживания, а суспендированный в дистиллированной воде осадок перенести в пластиковую пробир 1су объёмом 1,5 мл и использовать для выделения ДНК. 7 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 1.1 ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ БИОЛОтЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА Примечание. В случает выпадения осадка в лизирующем растворе флакон прогреть при 65 °С до полного растворения осадка. 7.1.1 Промаркировать необходимое количество новых пластиковых пробирок объемом 1,5 мл с учетом пробирок для отрицательного контрольного образца «К-». 7.1.2 Внести по 300 мкл лизирующего раствора, не касаясь края пробирок. 7.1.3 Добавить в пробирки для исследуемых образцов 100 мкл исследуемого образца. В пробирку, промаркированную «К-», добавшъ 100 »асл отрицательного контрольного образца. 7.1.4 Плотно закръш, 1фышки пробирок, п^>емешать на вс^ггексе в течение 3-5 с. 1 0 --- стр. 15 --- Таблица 4. Формат «Форез», Режим амплификации для амплификатора №№ п.п. Tejvraq)aTypa Время Количество циклов 1. 94 »С 1 мин 30 с 1 94 «С 20 с 2. 6 7 -С 5 с 5 72 »С 5 с 94 "С 5 с 3. 6 7 -С 5 с 40 7 2 -С 5 с 4. 10-С Хранение Продукты амплификации можно хранить при температуре 2-8 °С в течение 5 суток. Примечание: При работе с наборами в формате «Flash» готовые нормировочные пробирки («ФОН») допускается использовать многократно при каждой детекции результатов ПЦР с реакционными пробирками из той же серии комплекта реагентов для ПЦР-амплификации ДНК. Нормировочные пробирки хранить при 2-8 °С в течение 1 месяца в темном месте. При проведении детекции пробирки должны иметь комнатную температуру (18-25 °С), для чего за 1 ч до 1фоведения детекции их необходимо достать из холодильника. 8 ?ЕШСТТАЦЩ?ЕЗШ>ТАТ0ВАМПШФИКА1Щ1 8.1 РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АМПЛИФИКАЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПЦР-ДЕТЕКТОРА После прохождения реакции амплификации пробщрки поместить в ПЦР> д& тсктор, оформить протокол и провести регистрацию результатов в соответствии с инструкцией к прибору (пороговые значения для специфического щюдукга составляют 1J5-2,10, для мугрентего контроои ~ 2,50). 1 5 --- стр. 16 --- 8.2 РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АМПЛИФИКАЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДЕТЕКТИРУЮЩИХ АМПЛИФИКАТОРОВ ДТ-322, ДТ-96 Регистрация сигаала флуоресценции проводится прибором автоматически во время амплификации. Оформление протокола (тип анализа «Качественный») и анализ результатов проводится в соответствии с инструкцией к прибору (см. «Руководство по эксплуатации» для ДТ-322, ДТ-96). ДНК-зонды, используюпщеся для детекции продуктов амплификации фрагмента генома микобактерий туберкулеза и внутреннего контрольного образца, мечены флуоресцентными метками РАМ и HEX соответственно. 8.3 РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АМ ПЖФИКАЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДЕТЕКТИРУЮЩЕГО АМПЛИФИКАТОРА ICYCLER IQ (ВЮ-RAD LABORATORffiS) Регистрация сигнала флуоресценции проводится прибором автоматически во время амплификации. Оформление протокола и анализ результатов проводится в соответствии с инструкцией к прибору (см. «Руководство пользователя» для iCycler iQ). ДНК-зонды, использующиеся для детекции продуктов амплификации фрагмента генома микобактерий туберкулеза и внутреннего кошрольного о ^азц а, мечены флуоресцешшши метками РАМ и HEX соответственно. 8.4 РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АМПЛИФИКАЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА 8.4.1 Открыть 1фышки пробирок с продуктами амплификации и проколоть в п ^тф и н е отверстие диаметром прим^)но 2-3 мм с помощью сталшой проволоки. 1 6 --- стр. 17 --- После прокалывания каждой пробирки проволоку промыть в емкости с водопроводной водой. 8.4.2 Для приготовления буфера для электрофореза содержимое пакета со смесью для электрофореза перенести в мерную колбу объёмом 1 л, добавить приблизительно 700 мл дистиллированной воды, перемешать до полного растворения и довести дистиллированной водой до метки. Примечание. Буферный раствор для электрофореза можно хранить при комнатной температуре (18-25 °С) в течение 1 недели или при температуре 2-8 °С в течение 1 мес. 8.4.3 Заполнить камеру для электрофореза буферным раствором для электрофореза и поместить пластину с агарозным гелем в камеру для электрофореза. Примечание. Буферный раствор для электрофореза должен покрывать пластину с гелем слоем приблизительно 3-5 мм. При работе с агарозным гелем следует обязательно надевать резиновые перчатки! 8.4.4 Осторожно внести 7,0 мкл продуктов амплификации из каждой амплификационной пробирки в соответствующую лунку агарозного геля под буферный раствор. 8.4.5 Установить 1фып 1ку камеры для электрофореза и подключить источник постоянного тока. Электрофорез проводить 1фи напряжении 20 вольт/см в течение 10 мин (при пшрнне камеры 10 см напряжение, устанавливаемое в источнике постоянного тока, должно быть приблизительно равно 200 В). 8.4.6 После окончаеня элеюрофс^еза отключить источник постоянного тока, снятыфьшшу с камеры. . 17 --- стр. 18 --- 8.4.7 Вынуть пластину с агарозным гелем из камеры для электрофореза, снять гель с пластины, подцепив его с края, и поместить на экран трансиллюминатора. 8.4.8 Надеть защитную маску или установить защитный экран, включить трансиллюминатор и проанализировать полученные результаты. Продукт амплификации виден в ультрафиолетовом свете (длина волны 254 нм или 310 нм) в виде светящейся полосы красно-оранжевого цвета. 9 УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ 9-1 УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ С ПОМОЩЬЮ ПЦР-ДЕТЕКТОРА ИЛИ ДЕТЕКТИРУЮЩЕГО АМПЛИФИКАТОРА 9.1.1 Учет и интерпретация результатов реакции осуществляется автоматически с помощью программного обеспечения, поставляемого с ПЦР- детектором или детектирующим амплификатором. 9.1.2 В биологических образцах, содержащих ДНК микобактерий туберкулеза (специфический продукт): • программа ПЦР-детектора фиксирует положительный результат. Ре:^льтат амплификации внутреннего контрольного образца в этом случае в учет не принимается; • детектирующий амплификатор регистрирует экспоненциальный рост уровня флуоресценции для специфического щюдукта, 9.1.3 В биологических образцах, не содержащих ДНК микобактерий туберкулеза: 1 8 --- стр. 19 --- • программа ПЦР-детектора при положительном результате амплификации внутрершего контрольного образца фиксирует отрицательный результат; • детектируюпщй амплификатор регистрирует экспоненциальный рост уровня флуоресценции внутреннего контрольного образца и отсутствие экспоненциального роста кривой для специфического продукта. 9.1А Результат оценивается как недостоверный в случае; • отрицательного результата на наличие ДНК микобактерий туберкулеза и отрицательного результата амплификации внутреннего контрольного образца (ПЦР-детектор); • отсутствия экспоненциального роста уровня флуоресценции для специфического продукта и для внутреннего контрольного образца (детектирующий амплификатор). Недостоверный результат может быть вызван присутствием ингибиторов в препарате ДНК, полученном из клинического материала; неверным выполнением протокола анализа; несоблюдением температурного режима амплификации и др. В этом случае требуется либо повторная постановка амплификации препарата ДНК, либо повторное выделение препарата ДНК, либо повторное взятие клинического материала. 9.1.5 Программа ПЦР-детектора фиксирует сомнительный результат в случае, если значение для специфического продукта пшадает в зону неопределенности результатов (результат амплификации внутреннего кошрольного образца в учет не принимается). В этом случае необходимо повторить исследование данного о^>азца (см.п.9Л.4). ■ 1 9 '