Набор реагентов для выявления ДНК Токсоплазмы гондии (Toxoplasma gondii) методом полимеразной цепной реакции (ТОКС-ГЕН) по ТУ 9398-019-46482062-2008 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас 3 закупки, где это изделие полностью проходит по требованиям хотя бы в одной позиции.
| Закупка | Окончание подачи | Нач. цена |
|---|---|---|
| Поставка медицинских расходных материалов
№ 0387200002826001045 · БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ХАНТЫ-МАНСИЙСКОГО АВТОНОМНОГО ОКРУГА - ЮГРЫ "ОКРУЖНАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ БОЛЬНИЦА" · Ханты-Мансийский автономный округ — Югра |
09.11.2026 | 1 488 891 ₽ |
| Поставка медицинских изделий (реагенты)
№ 0136500001126005796 · ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ТВЕРСКОЙ ОБЛАСТИ "ЦЕНТР СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫХ ВИДОВ МЕДИЦИНСКОЙ ПОМОЩИ ИМЕНИ В.П. АВАЕВА" · Тверская область |
12.11.2026 | 975 085 ₽ |
| Поставка реагентов для диагностики гепатита С и оппортунистических инфекций
№ 0128200000126007043 · ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ВЛАДИМИРСКОЙ ОБЛАСТИ "ОБЛАСТНАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ ИНФЕКЦИОННАЯ БОЛЬНИЦА" · Владимирская область |
13.11.2026 | 372 897 ₽ |
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- Приказом Росздравнадзора Генеральный директор от ____ 200 г№ ЗЛ^^^Й^ЗНК-Технология» [.Ю.Трофимов 2008 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для выявления ДНК токсоплазмы гондии (Toxoplasma gondii) методом полимеразной цепной реакции (ТОКС-ГЕН) 1. НАЗНАЧЕНИЕ 1.1. Набор реагентов ТОКС-ГЕН предназначен для выявления ДНК токсоплазмы гондии (Toxoplasma gondii) методом полимеразной цепной реакции (НЦР) в биологическом материале человека (периферическая кровь, ликвор, биоптаты). 1.2. Набор может быть использован в клинико-диагностических лабораториях медицинских учреждений и научно-исследовательской практике. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2 Л ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ Набор реагентов ТОКС-ГЕН основан на использовании амплификации ДНК методом полимеразной цепной реакции (НЦР). Процесс амплификации УТВЕРЖ ДЕН А УТВЕРЖ ДАЮ --- стр. 2 --- заключается в повторяющихся циклах: температурной денатурации ДНК, отжига праймеров (затравок) с комплементарными последовательностями и последующей достройке полинуклеотидных цепей ДНК-полимеразой. В наборе ТОКС-ГЕН в смесь для амплификации добавлен внутренний контрольный образец (ВК), предназначенный для оценки эффективности протекания полимеразной цепной реакции. В наборах в формате «Flash» и «Real-time» в смесь для амплификации введены ДНК-зонды, каждый из которых содержит флуоресцентную метку и гаситель флуоресценции. В случае образования специфичного продукта ДНК-зонд разрушается, что ведет к возрастанию уровня флуоресценции, который фиксируется специальными приборами. ДНК-зонды, использующиеся для детекции продуктов амплификации искомого фрагмента генома токсоплазмы гондии и внутреннего контрольного образца (ВК), мечены флуоресцентными метками FAM и HEX соответственно, что позволяет раздельно регистрировать результаты амплификации фрагмента генома токсоплазмы гондии и внутреннего контрольного образца. Для анализа продуктов ПНР можно использовать детектирующие амплификаторы, специализированные детекторы флуоресценции (ПЦР-детекторы) или метод электрофореза в агарозном геле. Для повышения чувствительности и специфичности реакции предусмотрено применение «горячего» старта, который обеспечивается методикой приготовления реакционной смеси, состоящей из двух слоев, разделенных прослойкой из парафина. Смешение слоев и превращение их в амплификационную смесь --- стр. 4 --- w • смесь для амплификации, запечатанную парафином, по 20 мкл 100 пробирок; • минеральное масло, по 1,0 мл 2 пробирки; • раствор Taq-полимеразы, по 500 мкл 2 пробирки; • ПЦР-буфер, 200 мкл 1 пробирка; • положительный контрольный образец, 150 мкл 1 пробирка. В состав смеси для амплификации входят: ПЦР-буфер, дезоксирибонуклеотидтрифосфаты, праймеры, внутренний контрольный образец. В наборах форматов «Flash» и «Real-time» в состав смеси для амплификации входят флуоресцентные ДНК-зонды. ПЦР-буфер включен только в комплекты для набора формата «Flash». Комплект является специфичным для каждого формата («Flash», Real-time», «Форез»), Вариант №2 включает: • смесь для амплификации высушенную, 100 пробирок; • растворитель, по 1,5 мл 2 пробирки; • минеральное масло, по 1,0 мл 2 пробирки; • положительный контрольный образец, по 150 мкл 1 пробирка. г) комплект реагентов для детекции ДНК методом электрофореза включает: • смесь для электрофореза - 1 пакет (16,9 г); • агарозный гель - 5 пластин. Комплект используется в наборе формата «Форез». 2.3 Время проведения анатиза - 4 ч. --- стр. 5 --- 2.4 Набор рассчитан на проведение 100 определений, включая анализ неизвестных образцов, положительных контрольных образцов и отрицательных контрольных образцов. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1 СПЕЦИФИЧНОСТЬ АНАЛИЗА В образцах биологического материала человека, содержащих ДНК токсонлазмы гондии, ПЦР-детектор (формат «Flash») или детектирующий амплификатор (формат «Real-time») должны регистрировать положительный результат. При использовании метода гель-электрофореза (формат «Форез»), должна быть видна полоса оранжево-красного цвета, соответствующая фрагменту генома токсоплазмы гондии размером 250 п.н. (пар нуклеотидов). В образцах биологического материала, не содержащих ДНК токсоплазмы гондии, ПЦР-детектор или детектирующий амплификатор должны регистрировать отрицательный результат. При использовании метода гель-электрофореза полоса оранжево-красного цвета, соответствующая фрагменту генома токсоплазмы гондии 250 п.н. отсутствует, а полоса, соответствующая внутреннему контрольному образцу размером 560 н.н., должна быть отчетливо видна. 3.2 ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ АНАЛИЗА: 200 геном-эквивалентов ДНК токсоплазмы гондии на 1 мл образца. 4 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 4.1 Меры предосторожности - соблюдение «Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и яичной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно- --- стр. 6 --- w эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.). 4.2 Потенциальный риск применения набора - класс 26 (ГОСТ Р 51609- 2000). 4.3 Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. 4.4 При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые перчатки без талька. 4.5 При работе с набором следует использовать только новые наконечники и пробирки. 4.6 Не допускается использование одних и тех же наконечников при обработке различных образцов биологического материала. 4.7 Выделение ДНК следует проводить в ПЦР-боксах или в ламинарных шкафах с выключенным ламинарным потоком. Приготовление реакционной смеси следует проводить в ПЦР-боксах. 4.8 При использовании набора формата «Форез» для предотвращения контаминации, этапы выделения ДНК, проведения ПЦР и электрофорез следует проводить в раздельных помещениях или тщательно изолированных зонах, снабженных комплектами полуавтоматических пипеток, халатами и прочими принадлежностями. 4.9 Все лабораторное оборудование, в том числе пипетки, штативы, лабораторная посуда, халаты, головные уборы и пр., а также растворы реагентов должны быть строго стационарными. Запрещается их перемещение из одного помещения в другое. --- стр. 7 --- 4.10 Химическая посуда и оборудование, которые используются при работе с набором, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно. 4.11 Обработку помещений проводят в соответствии с требованиями СП 1.2.731-99. Все поверхности в лаборатории (рабочие столы, штативы, оборудование и др.) ежедневно подвергают влажной уборке с применением дезинфицирующих/моющих средств, регламентированных санитарными правилами. 4.12 Поверхности рабочих столов, а также помещений, в которых проводится ПЦР, следует обрабатывать бактерицидными облучателями до и после проведения работ в течение 1 часа. 4.13 Запрещается снимать крышку с электрофоретической камеры, если она подключена к источнику питания. 4.14 При работе с включенным трансиллюминатором необходимо пользоваться защитным экраном или специальной защитной маской. 5 ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ Организация работы ПЦР-лаборатории, оборудование и материалы должны соответствовать Методическим указаниям МУ 1.3.1888-04. При работе с набором реагентов ТОКС-ГЕН требуются следующие оборудование и материалы: • амплификатор (для форматов «Форез» и «Flash») или детектирующий амплификатор (для формата «Real-time»); • центрифуга со скоростью вращения ротора 13000 об/мин; --- стр. 8 --- микроцентрифуга/вортекс со скоростью вращения 1000-3000 об/мин; холодильник бытовой; пробирки одноразовые пластиковые объемом 1,5 мл; пипетки автоматические одноканальные с переменным объёмом 0,5- 10 мкл, 2,0-20 мкл, 20-200 мкл, 200-1000 мкл; • одноразовые наконечники с фильтром для автоматических пипеток с маркировкой “RNAase-free, DNAase-free” объемом 1-20 мкл; 1-200 мкл; 100-1000 мкл; • одноразовые наконечники с аэрозольным барьером для автоматических пипеток объёмом 1-20 мкл; • одноразовые перчатки медицинские; • физиологический раствор (0,9% NaCl) стерильный. При работе с набором в формате «Flash» для детекции результатов требуется: • ПЦР” Детектор. При детекции методом электрофореза (формат «Форез») требуются: • источник постоянного тока; • камера для электрофореза; • трансиллюминатор; • колба мерная вместимостью 1,0 л; • дистиллированная вода; • стальная проволока диаметром 1,0 мм. термостат твердотельный на 50 °С; --- стр. 9 --- Ликвор, биоптаты забрать в стерильных условиях, перенести в пластиковые пробирки вместимостью 1500 мкл. Пробирки тщательно закрыть. Взятие крови проводится в пластиковые пробирки объемом 2,5 мл с добавленной в качестве антикоагулянта динатриевой солью этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в конечной концентрации 2 мг/мл. Для перемешивания содержимого пробирку переворачивают 2-3 раза. В качестве антикоагулянта допускается также использование цитрата натрия. ВНИМАНИЕ! Не допускается использование гепарина в качестве антикоагулянта. Транспортировать и хранить образцы крови до начала исследования при температуре 2-8 °С в течение 6 ч, ликвор и биоптаты при температуре 2-8 °С в течение 24 ч. 7 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 7.1 ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА При выделении ДНК из ликвора и биоптатов выполнить пп.7.1.1-7.1.2, при выделении ДНК из периферической крови сразу перейти к п.З. 7.1.1 Центрифугировать пробирку, содержащую анализируемый материал, при 13000 об/мин в течение 10 мин при комнатной температуре (18-25 °С). 7.1.2 Удалить надосадочную жидкость, оставив в пробирке примерно 50 мкл (осадок + жидкая фракция). 7.1.3 Одновременно с выделением ДНК из биологического материала необходимо подготовить отрицательный контрольный образец «К-». Для этого в 6 АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ --- стр. 15 --- w Продукты амплификации можно хранить при температуре 2-8 °С в течение 5 суток. Примечание: При работе с наборами в формате «Flash» готовые нормировочные пробирки (ФОН) допускается использовать многократно при каждой детекции результатов ПЦР с реакционными пробирками из той же серии комплекта реагентов для ПЦР-амплификации ДНК. Нормировочные пробирки хранить при 2-8 °С в течение 1 месяца в темном месте. При проведении детекции пробирки должны иметь комнатную температуру (18-25 °С), для чего за 1 ч до проведения детекции их необходимо достать из холодильника. 8 РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АМПЛИФИКАЦИИ 8.1 РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АМПЛИФИКАЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПЦР-ДЕТЕКТОРА После прохождения реакции амплификации пробирки поместить в ПЦР- детектор, оформить протокол и провести регистрацию результатов в соответствии с инструкцией к прибору (пороговые значения для специфического продукта составляют 1,75-2,10, для внутреннего контроля - 2,50). 8.2 РЕГИСТРАЦР1Я РЕЗУЛЬТАТОВ АМПЛИФИКАЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДЕТЕКТИРУЮЩИХ АМПЛИФИКАТОРОВ ДТ-322, ДТ-96 Регистрация сигнала флуоресценции проводится прибором автоматически во время амплификации. Оформление протокола (тип анализа «Качественный») и анализ результатов проводится в соответствии с инструкцией к прибору (см, «Руководство по эксплуатации» для ДТ-322, ДТ-96). ДНК-зонды, использующиеся для детекции продуктов амплификации фрагмента токсоплазмы гондии и 15 --- стр. 16 --- внутреннего контрольного образца, мечены флуоресцентными метками FAM и HEX соответственно. 8.3 РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АМПЛИФИКАЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДЕТЕКТИРУЮЩЕГО АМПЛИФИКАТОРА ICYCLER IQ (BIO-RAD LABORATORIES) Регистрация сигнала флуоресценции проводится прибором автоматически во время амплификации. Оформление протокола и анализ результатов проводится в соответствии с инструкцией к прибору (см. «Руководство пользователя» для iCycler iQ). ДНК-зонды, использующиеся для детекции продуктов амплификации фрагмента генома токсоплазмы гондии и внутреннего контрольного образца, мечены флуоресцентными метками РАМ и HEX соответственно. 8.4 РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АМПЛИФИКАЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА 8.4.1 Открыть крышки пробирок с продуктами амплификации и проколоть в парафине отверстие диаметром примерно 2-3 мм с помощью стальной проволоки. После прокалывания каждой пробирки проволоку промыть в емкости с водопроводной водой. 8.4.2 Для приготовления буфера для электрофореза содержимое пакета со смесью для электрофореза перенести в мерную колбу объёмом 1 л, добавить приблизительно 700 мл дистиллированной воды, перемешать до полного растворения и довести дистиллированной водой до метки. 16 --- стр. 17 --- Примечание. Буферный раствор для электрофореза можно хранить при комнатной температуре (18-25 °С) в течение 1 недели или при температуре 2-8 °С в течение 1 мес. 8.4.3 Заполнить камеру для электрофореза буферным раствором для электрофореза и поместить пластину с агарозным гелем в камеру для электрофореза. Примечание. Буферный раствор для электрофореза должен покрывать пластину с гелем слоем приблизительно 3-5 мм. При работе с агарозным гелем следует обязательно надевать резиновые перчатки! 8.4.4 Осторожно внести 7,0 мкл продуктов амплификации из каждой амплификационной пробирки в соответствующую лунку агарозного геля под буферный раствор. 8.4.5 Установить крышку камеры для электрофореза и подключить источник постоянного тока. Электрофорез проводить при напряжении 20 вольт/см в течение 10 мин (при ширине камеры 10 см напряжение, устанавливаемое в источнике постоянного тока, должно быть приблизительно равно 200 В). 8.4.6 После окончания электрофореза отключить источник постоянного тока, снять крышку с камеры. 8.4.7 Вынуть пластину с агарозным гелем из камеры для электрофореза, снять гель с пластины, подцепив его с края, и поместить на экран трансиллюминатора. 8.4.8 Надеть защитную маску или установить защитный экран, включить трансиллюминатор и проанализировать полученные результаты. Продукт 17 --- стр. 18 --- амплификации виден в ультрафиолетовом свете (длина волны 254 нм или 310 нм) в виде светящейся полосы красно-оранжевого цвета. 9 УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ 9.1 УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ С ПОМОЩЬЮ ПЦР-ДЕТЕКТОРА ИЛИ ДЕТЕКТИРУЮЩЕГО АМПЛИФИКАТОРА 9.1.1 Учет и интерпретация результатов реакции осуществляется автоматически с помощью программного обеспечения, поставляемого с ПЦР- детектором или детектирующим амплификатором. 9.1.2 В биологических образцах, содержащих ДНК токсоплазмы гондии (специфический продукт): • программа ПЦР-детектора фиксирует положительный результат. Результат амплификации внутреннего контрольного образца в этом случае в учет не принимается; • детектирующий амплификатор регистрирует экспоненциальный рост уровня флуоресценции для специфического продукта. 9.1.3 В биологических образцах, не содержащих ДНК токсоплазмы гондии: • программа ПЦР-детектора при положительном результате амплификации внутреннего контрольного образца фиксирует отрицательный результат; • детектирующий амплификатор регистрирует экспоненциальный рост уровня флуоресценции внутреннего контрольного образца и отсутствие экспоненциального роста кривой для специфического продукта. 9.1.4 Результат оценивается как недостоверный в случае: 18 --- стр. 19 --- • отрицательного результата на наличие ДНК токсоплазмы гондии и отрицательного результата амплификации внутреннего контрольного образца (ПЦР-детектор); • отсутствия экспоненциального роста уровня флуоресценции для специфического продукта и для внутреннего контрольного образца (детектирующий амплификатор). Недостоверный результат может быть вызван присутствием ингибиторов в препарате ДНК, полученном из клинического материала; неверным выполнением протокола анализа; несоблюдением температурного режима амплификации и др. В этом случае требуется либо повторная постановка амплификации препарата ДНК, либо повторное выделение препарата ДНК, либо повторное взятие клинического материала. 9.1.5 Программа ПЦР-детектора фиксирует сомнительный результат в случае, если значение для специфического продукта попадает в зону неопределенности результатов (результат амплификации внутреннего контрольного образца в учет не принимается). В этом случае необходимо повторить исследование данного образца (см.п.9.1.4). 9.1.6 При получении положительного результата (ПЦР-детеюгор) или экспоненциального роста флуоресценции (детектирующий амплификатор) для специфического продукта в отрицательном контрольном образце «К-» результаты всей постановочной серии бракуют. В этом случае необходимо проведение специальных мероприятий для устранения контаминации. 19