MassChrom Набор реагентов для ЖХ-МС/МС анализа аминокислот и ацилкарнитинов в сухих пятнах крови (состав на 960 анализов) — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
CHROMSYSTEMSD I A G N O S T I C S B Y H P L C S L C - M S / M S
УТВЕРЖДАЮ» / “APPROVE”
Управляющий директор / Managing director
Михаэль Майер / Michael Meier
)
«16» ноября 2016/Nov 16, 2016
«Подтверждаю точность, правильность и
i hereby certify accuracy, correctness and
достоверность прилагаемого документа
reliability of attached document
И его содержания, переведенного
and them content translated
на русский язык»
into Russian
Инструкция по применению
MassChrom Набор реагентов для ЖХ-МС/МС анализа аминокислот и
ацилкарнитинов в сухих пятнах крови (состав на 960 анализов) варианты
исполнения: 55000, 55000/F
1-
--- стр. 2 ---
Оглавление
1. Наименование и состав продукта, информация для заказа..................................................................................- 4
2. Назначение.................................................................................................................................................................................. -10 •
5. Характеристичные массы аналитов и внутренних стандартов......................................................................-13 ■
б ЖХ-МС/МС система..................................................................................................................................................................-16 •
6.1 Приборные и инструментальные параметры:............................................................................................-16 -
6.2. Масс-спектрометрия:.............................................................................................................................................-17 -
6.3. Запуск ЖХ-МС/МС системы:...............................................................................................................................-18 -
6.4. Выключение:...............................................................................................................................................................-18 -
7.1. Сбор и хранение образцов пациентов:......................................................................................................... -19 -
7.2. Растворение внутреннего стандарта (сухого):..........................................................................................- 20 -
7.3. Растворение MassCheck Пятна высушенной крови Контроли для измерения аминокислот,
ацилкарнитинов уровень I, уровень II:.....................................................................................................................- 20 -
7.4. Процедура пробоподготовки.............................................................................................................................- 22 -
7.4.1. Пробоподготовиа без использования 96-местных фильтр - плашек (только для
определения аминокислот и ацилкарнитинов) ...............................................................................................- 22 -
7.4.2. Пробоподготовка с использованием 96-местных фильтр - плашек (только для
определения аминокислот и ацилкарнитинов)(вариант исполнения 55000/F) ............................- 23 -
7.4.3. Пробоподготовка для определения сукцинилацетона ...................................................................- 24 -
7.5 Хранение проб............................................................................................................................................................- 25 -
7.6 Дополнительное оборудование, не входяш,ее в набор реагентов...................................................- 25 -
8. Сбор и обработка данных.................................................. - 25
9. Контроль качества.....................................................................................................................................................................- 27
Ю.Референсные интервалы/пограничные значения........................................................................................................- 28
11. Коэффициенты пересчета.................................................................................................................................................- 30 ■
12. Информация об опасных соединениях..........................................................................................................................- 31 ■
12. Хранение и период годности реагентов.......................................................................................................................- 33 -
13. Утилизация................................................................................................................................................................................- 34 -
14. Примеры хроматограмм......................................................................................................................................................- 35 ■
14.1. Контрольный спектр аминокислот в пограничном диапазоне.....................................................- 35 -
14.2. Спектр образца пациента с фенилкетонурией (PKU)..........................................................................- 35 -
14.3. Контрольный спектр ацилкарнитинов в пограничном диапазоне .............................................- 36 -
14.4. Спектр образца пациента с MCADD.............................................................................................................- 36 -
14.5. Спектр образца пациента с VLCADD.............................................................................................................- 37 -
14.6. Спектр образца пациента с глутаровойацидемией типа I (GA I)................................................- 37 -
15. Валидация.................................................................................................................................................................................- 38 -
-2
--- стр. 3 ---
15.1. Пробоподготовка без сукцинилацетона:...................................................................................................- 38 ■
15.2. Пробоподготовка с сукцинилацетоном......................................................................................................-42 •
16. Возможные аналитические интерференции...............................................................................................- 46 •
17. Устранение проблем................................................................................................................................................-48 •
3-
--- стр. 4 ---
1. Н аи м ен ован и е и состав продукта, инф орм ация для заказа.
Каталожный номер: 55000
Наименование: MassChrom Набор реагентов для ЖХ-МС/МС анализа аминокислот и
ацилкарнитинов в сухих пятнах крови (состав на 960 анализов) вариант исполнения: 55000,
Состав набора:
I 1. Мобильная фаза (Mobile-phase) - (1*1 ОООмл/уп.);
2. Внутренний стандарт (сухой) (internal standard (lyoph.)) - (4*50мл/уп);
3. Внутренний стандарт для сукцинилацетона - (3*50мл/уп.);
4. Реагент для дериватизации (derivatisation reagent) - (1 *30мл/уп.);
5. Восстанавливающий буфер (Reconstitution buffer)- (1*100мл/уп.);
6 . Промывающий раствор (Rinsing solution) -(1*1 ОООмл/уп.);
7. Экстрагирующий буфер (Extraction buffer) - (1 *200мл/уп.);
8 . 96-луночный планшет (96 Well-plates) - (1*10шт./уп.);
9. Защитные пленки для 96-луночных планшетов (Protective sheets for 96 well-plates) -
(10 шт./уп.);
^ 10. MassCheck Пятна высушенной крови Контроли для измерения аминокислот,
ацилкарнитинов двухуровневые (I + II) (Amino Acids, Acylcamitines dried blood spot
control, bi- level (I + II)) -(2*3 пятна).
11. MassCheck Пятна высушенной крови Контроли для измерения аминокислот,
ацилкарнитинов уровень I - (1*3 пятна);
12. MassCheck Пятна высушенной крови Контроли для измерения аминокислот,
ацилкарнитинов уровень II - (1*3 пятна);
13. Прокалываемый адгезивный уплотнитель для 96-луночных планшетов - (1*10шт./уп.)
14. Калибровочная смесь для сукцинилацетона (аналит и внутренний стандарт) - (1*1мл/уп.)
15. Калибровочная смесь для сукцинилацетона (все аналиты) - (1*2мл/уп.)
16. Инструкция по применению - 1шт.
17. Упаковочный лист - 1 шт.
^ Каталожный номер: 55000/F
W Наименование: MassChrom Набор реагентов для ЖХ-МС/МС анализа аминокислот и
ацилкарнитинов в сухих пятнах крови (состав на 960 анализов) вариант исполнения: 55000/F
Состав набора:
1. Мобильная фаза (Mobile phase) - (1*1 ОООмл/уп.);
2. Внутренний стандарт (сухой) (internal standard (lyoph.)) - (4*50мл/уп);
3. Внутренний стандарт для сукцинилацетона - (3*50мл/уп.);
4. Реагент для дериватизации (derivatisation reagent) - (1 *30мл/уп.);
5. Восстанавливающий буфер (Reconstitution buffer) - (1 * 1 ООмл/уп.);
6 . Промывающий раствор (Rinsing solution) - (1 * 1000мл/уп.);
7. Экстрагирующий буфер (Extraction buffer) - (1 *200мл/уп.);
8. 96-луночный планшет (96 Well-plates) - (1 * Юшт./уп.);
I 9. Защитные пленки для 96-луночных планшетов (Protective sheets for 96 well-plates)_-
(10 шт./уп.);
10. 96-местные фильтр- плашки (96 Well filter plates) - (1*5шт./уп.);
■4-
--- стр. 5 ---
11. MassCheck Пятна высушенной крови Контроли для измерения аминокислот,
ацилкарнитинов двухуровневые (I + II) (Amino Acids, Acylcarnitines dried blood spot
control, bi- level (I + II)) - (2*3 пятна)
12. MassCheck Пятна высушенной крови Контроли для измерения аминокислот,
ацилкарнитинов уровень I - (1*3 пятна);
13. MassCheck Пятна высушенной крови Контроли для измерения аминокислот,
ацилкарнитинов уровень II - (1*3 пятна);
14. Прокалываемый адгезивный уплотнитель для 96-луночных планшетов - (1*10шт./уп.)
15. Калибровочная смесь для сукцинилацетона (аналит и внутренний стандарт) - (1*1мл/уп.)
16. Калибровочная смесь для сукцинилацетона (все аналиты) - (1*2мл/уп.)
17. Инструкция по применению - 1шт.
18. Упаковочный лист - 1 шт.
Описание составляющих набора.
ажение Наименование Назначение Материал
изготовлен
ИЯ
Хим.
Состав
на
русском
языке
Размер
Мобильная фаза Предназнач Прозрачна Ацетон ит Объем:
(1x1000 мл/уп.) ена для я жидкость рил 1000 мл
Mobile Phase проведения без ярко (50- длина, не
(1/1000 ml) анализа на выраженно 100%) более: 24
(55001) ВЭЖХ-
системе
го запаха в
стеклянно
м флаконе
с
пластиково
й крышкой
см
радиус
флакона, не
более:4 см
радиус
крышки, не
более: 1,5
см
N
о
-5-
--- стр. 6 ---
'Внутренний стандарт
сухой
(4*50 мл/уп.)
Internal Standard,
lyophylized (4ps- 50
mi)
55004
Предназнач
ен для
количествен
ного
обсчета
концентрац
ИЙ
измеряемых
веществ
Лиофилизи
рованная
пудра в
стеклянно
м флаконе
с
пластиково
й крышкой
Объем:50
мл
длина, не
более: 4,5
см
радиус
флакона,не
более:
1,5см
радиус
крышки, не
более:1 см
размер
коробки:
высота, не
более 8см
длина, не
более 17 см
ширина, не
более 10 см
|Внутренний
стандарт для
сукцинилацетона
(3*50 мл/уп.)
Internal Standard for
Succinylacetone,lyoph
ilized
(3 ps - 50ml)
55044
Предназнач
ен для
количествен
ного
обсчета
концентрац
ий
сукцинилац
етона
Лиофилизи
рованная
пудра в
стеклянно
м флаконе
с
пластиково
й крышкой
Объем:50
мл
длина, не
более: 8,5
см
радиус
флакона, не
более: 2 см
радиус
крышки, не
более:
1,5см
размер
коробки:
высота, не
более 12см
длина, не
более 18 см
ширина, не
более 12 см
Реагент
для дериватизации,
(1x30 мл/уп.)
Derivatisation
Reagent (Ips- 30ml)
55005
Предназнач
ен для
проведения
реакции
дериватизац
ИИ в
процессе
пробоподго
товки
образцов
для анализа
Прозрачна
я жидкость
с ярко
выраженн
ым
запахом в
стеклянно
м флаконе
с
пластиково
й крышкой
Бутанол
1-
бутилаце
тат
Хлорово
дород
Объем:30
мл
длина, не
более: 7,5
см
радиус
флакона, не
более:
1,8см
радиус
крышки, не
--- стр. 7 ---
более:
1,5см.
Восстанавливающ Предназнач Прозрачна Бутанол Объем:100
И Й буфер ен для я жидкость (50- мл
(1х100 мл/уп.) проведения без ярко 100%) длина, не
Reconstitution Buffer восстановле выраженно п- более:
(Ips-lOOml) ния го запаха в бутилаце 10,5см
55006 образцов стеклянно тат радиус
после м флаконе (15-25%) флакона,не
упаривания с Хлорово более:
в процессе пластиково до род 2,8см
пробоподго
товки
й крышкой (3-10%) радиус
крышки, не
более:
1,5см
Промывающий Предназнач Прозрачна Ацетонит Объем:
раствор ен для я жидкость рил 1000 мл
(1x1000 мл/уп.) промывания без ярко (50- длина, не
Rinsing Solution иглы выраженно 100%) более:
(Ips-lOOOml) 55007 автосемпле
ра
хроматогра
фа (ВЭЖХ-
системы)
между
вколами
образцов
го запаха в
стеклянно
м флаконе
с
пластиково
й крышкой
24см
радиус
флакона, не
более: 5 см
радиус
крышки, не
более: 1,5
см
Экстрагирующий Предназнач Прозрачна Метанол Объем: 200
буфер ен для я жидкость (50- мл
(1x2 0 0 мл/уп.) проведения без ярко 100%) длина, не
Extraction Buffer экстракции выраженно более:
(lps-200ml) образцов в го запаха в 14см
55008 процессе
пробоподго
товки
стеклянно
м флаконе
с
пластиково
й крышкой
радиус
флакона, не
более:
3,8см
радиус
крышки, не
более:
1,5см
96-луночный Предназнач Планшет с - размер
планшет (1x10 ен для 96 лунками планшета
шт./уп.) процедуры из высота, не
96 Well plates пробоподго полупрозр более 2 см
Ipackage-lOps. товки ачного длина, не
55010 образцов пластика более 14 см
ширина, не
более 10 см
размер в
упаковке
высота, не
более 23 см
A
-7
--- стр. 8 ---
длина, не
более 30 см
ширина, не
более 12 см
Защитные пленки
для 96-луночных
планшетов - ( 1x10
шт./уп.)
Protective sheets for
96 \well plates
(Ipackage-lOps)
55011
Предназнач
ены для
накрывания
96-луночных
планшетов
во
избежание
испарения
реагентов в
процессе
пробоподго
товки
Полиэтиле
новые
пленки
Предназнач Планшет с
ены для 96 лунками
процедуры из
пробоподго полупрозр
товки ачного
образцов, с пластика с
возможност бумажным
ью и
фильтрации вставками-
образцов фильтрами
Размер
пленки
высота, не
более 0,1
см
длина, не
более 15 см
ширина, не
более 10 см
Размер
упаковки
высота, не
более 1 см
длина, не
более 19 см
ширина, не
более 11 см
1
о
96-местные
^^фильтр-плашки
(1x5 шт./уп.)
96 Well filter plates
(Ipackage-lOps)
55057
Размер
плашки:
высота, не
более 2 см
длина, не
более 14 см
ширина, не
более 10 см
Размер
упаковки ;
высота, не
более 14
см
длина, не
более 25 см
ширина, не
более 16 см
Прокалываемый
‘“ '•адгезивный
* ^уплотнитель для 96-
;луночных планшетов
/- (1*10шт./уп.)
Piearcable adhesive
seal for 96 well plates
(Ipackage-lOps)
55013
Предназнач
ены для
накрывания
96-луночных
планшетов
во
избежание
испарения
готовых
образцов в
процессе
анализа на
хроматограф
Полиэтиле
новые
листы
Размер
уплотнител
я:
высота, не
более 0,2
см
длина, не
более 15 см
ширина, не
более 10 см
Размер
упаковки:
высота, не
8
--- стр. 9 ---
/ :Калибровочная
^смесь для
|сукцинилацетона
(аналит и
внутренний
стандарт) -
(1*1мл/уп.)-
Tuning Mix for
Succinylacetone (Ips-
1ml)
55098
e (b
автосемплер
e)
более 1 CM
длина, не
более 18 см
ширина, не
более 11 см
1
2
Предназнач
ена для
калибровки
масс-
спектрометр
а для
количествен
ного
определени
я
сукцинилаце
тона
Прозрачна
я жидкость
без ярко
выраженн
ого запаха
в
стеклянно
м флаконе
с
пластиково
й крышкой
АцетонИТ
рил
Объем: 1
мл
длина, не
более:
4,5см
радиус
флакона, не
более:
1,8см
радиус
крышки, не
более: 1см
размер
коробки :
высота, не
более 5 см
длина, не
более 12 см
ширина, не
более 11 см
Калибровочная
смесь для
сукцинилацетона
все аналиты)-
(1*2мл/уп.);
Tuning Mix, incl. all
analytes (lps-2ml)
55099
Предназнач
ена для
калибровки
масс-
спектрометр
а для
количествен
ного
определени
я всех
определяем
ых веществ
Прозрачна
я жидкость
без ярко
выраженн
ого запаха
в
стеклянно
м флаконе
с
пластиково
й крышкой
Ацетон И Т
рил
Объем: 2
мл
длина, не
более: 6см
радиус
флакона, не
более:
1,3см
радиус
крышки, не
более:
1,5см
размер
коробки :
высота, не
более 7 см
длина, не
более 12 см
ширина, не
более 11 см
1
4
MassCheck Пятна
высушенной крови
Контроли для
измерения
аминокислот,
ацилкарнитинов
Предназнач
ены для
мониторинг
а
соответствия
точности
Фильтрова
льная
бумага с
зонами
(пятнами)
высушенно
Упаковка:
25*16 см
длина, не
более 26 см
ширина, не
более 17 см
9-
--- стр. 10 ---
двухуровневые (1 + результатов й крови Упаковка
11)-(1*3 пятна). анализов в индивидуал
MassCheck Amino нормальном ьная
0 - -
Acids, Acylcarnitines и длина, не
*ф:.. incl. Succinylacetone патологичес более 20
Dried Blood Spot ком с:м
■ ■ ч ■ Control Bi-Level (l+ll) диапазоне ширина, не
0191 более 15 см
Бумага :
длина, не
более 11 см
ширина, не
более 10 см
Все компоненты набора имеют герметичную упаковку, предотвращающую протекание
реагентов, растворов или намокание планшетов, пленок, уплотнителей и контрольных
материалов.
2. Назначение
(Только для лабораторной In Vitro диагностики)
MassChrom Набор реагентов для ЖХ-МС/МС анализа аминокислот и ацилкарнитинов в сухих пятнах
крови (состав на 960 анализов) варианты исполнения: 55000, 55000/F (далее по тексту Набор
реагентов MassChrom, MassChrom 55000 и MassChrom 55000/F) разработан для простого и быстрого
полуколичественного определения аминокислот, ацилкарнитинов, их метаболитов и сукциниацетона
в сухих пятнах крови для скрининга новорожденных на метаболические нарушения обмена
аминокислот и жирных кислот методом жидкостной хроматографии с тандемной масс-
спектрометрией (ЖХ-МС/МС).
3. Сфера применения
MassChrom Набор реагентов для ЖХ-МС/МС анализа аминокислот и ацилкарнитинов в
сухих пятнах крови (состав на 960 анализов) варианты исполнения: 55000, 55000/F
применяется с целью скрининга новорожденных для диагностики наследственных
нарушений обмена веществ, прежде чем данные нарушения могут навредить здоровью и
развитию ребенка в клинико-диагностических лабораториях. Данный Набор реагентов
MassChrom позволяет проводить только полуколичественное определение аналитов, поэтому
результаты этого скринингового метода не должны использоваться в качестве
подтверждающего теста. Для постановки окончательного диагноза, результаты скрининга
должны быть всегда подтверждены молекулярно-генетическими и иммуноферментными
методами или с помощью анализа аминокислот.
К наследственным нарушениям, которые могут быть диагностированы методом тандемной
масс-спектрометрией относятся: нарушения метаболизма аминокислот (фенилкетонурия и
болезнь кленового сиропа), нарушения метаболизма жирных кислот (например, средних и
длинноцепочечных ацил-СоАдегидрогеназы), а также органоацидемий. Эти заболевания
вызваны наследственными дефектами ферментов, приводящими к снижению или
подавлению ферментативной активности. Впоследствии, нерасщепленные вещества
-10-
--- стр. 11 ---
накапливаются в организме. Это может привести к накоплению токсических метаболитов,
которые могут вызывать дефекты органов и развитие системных заболеваний (амино-и
органоацидемий). Эти нарушения обмена веществ вызывают серьезные необратимые
повреждения у детей уже в течение нескольких дней после рождения. В случае
фенилкетонурии (ФКУ), это ведет к физической и умственной задержке развития. Зачастую,
поскольку эти дефекты наследственные, болезни не излечимы и терапия ограничивается
симптоматическим лечением. Тем не менее, если болезнь была диагностирована на раннем
этапе развития, т.е. в первые несколько дней жизни, дети, страдающие фенилкетонурией, в
состоянии жить нормальной жизнью при соблюдении диеты. Тирозинемия 1 типа ведет к
накоплению токсических метаболитов (особенно сукцинилацетона), что обуславливает
развитие тяжелой болезни печени в раннем детстве.
Лабораторный диагноз этих болезней ставится по значительно увеличенным или
сниженным значениям маркеров в крови новорожденного. Для этой цели берется кровь из
пятки на фильтровальную бумагу, высушивается и посылается в клинико-диагностическую
лабораторию.
На данный момент, с развитием метода тандемной масс-спектрометрии, возможно
отслеживать широкий спектр метаболических нарушений за одно исследование. Этот метод
позволяет надежно и быстро определять широкий спектр целевых соединений и их
концентраций. Из-за высокой селективности, для анализа не требуется ВЭЖХ-колонка, что
значительно сокращает время анализа (2 мин). Важно использовать меченые внутренние
стандарты во избежание ионных эффектов и для улучшения количественного расчета
концентраций полученных аналитов.
В зависимости от типа фильтровальной бумаги и гематокрита пробы, объем крови на
сухом пятне крови, предназначенном непосредственно для анализа (диск 3 мм в диаметре)
колеблется между 2,2-3,3 мкл крови. Это позволяет проводить только полуколичественное
определение аналитов, поэтому результаты этого скринингового метода не должны
использоваться в качестве подтверждающего теста. Для постановки окончательного
диагноза, результаты скрининга должны быть всегда подтверждены молекулярно-
генетическими и иммуноферментными методами или с помощью анализа аминокислот.
4. Принцип действия
При помощи Набора реагентов MassChrom выполняется полуколичественное
определение следующих аминокислот, их метаболитов и ацилкарнитинов;
Аминокислоты и метаболиты тирозина:
Аланин (Ala), аргинин (Arg), аспарагиновая кислота (Asp), цитруллин (Cit),
глутаминовая кислота (Glu), глицин (Gly), лейцин (Leu), метионин (Met), орнитин (От),
фенилаланин (Phe), пролин (Pro), тирозин (Туг), валин (Val), сукцинилацетон (SUCA)
Свободный каунитин и аиилкаунитины:
Свободный карнитин (СО), ацетилкарнитин (С2), пропионилкарнитин (СЗ),
бутирилкарнитин (С4), изовалерилкарнитин (С5), глютарилкарнитин (C5DC),
гексаноилкарнитин (С 6), октаноилкарнитин (С 8), деканоилкарнитин (СЮ),
додеканоилкарнитин (С 12), тетрадеканоилкарнитин (СИ), гексадеканоилкарнитин (С 16),
октадеканоилкарнитин (С 18).
Данный Набор реагентов MassChrom разработан для простого и быстрого
полуколичественного определения аминокислот, ацилкарнитинов, их метаболитов и
-11
--- стр. 12 ---
сукциниацетона в сухих пятнах крови для скрининга новорожденных на метаболические
нарушения обмена аминокислот и жирных кислот методом жидкостной хроматографии с
тандемной масс-спектрометрией (ЖХ-МС/МС).
Принцип действия представлен на рис. 1-3
Рис.2 Дериватизация ацилкарнитинов до бутилового эфира ацилкарнитина
R = алкильная цепь (например, R = СНЗ для ацетилкарнитина).
0 О N--N N--NЛ .0, i + НО.. ^ 1 А -V ''—О 0 0
Рис. 3 Дериватизация сукцинилацетона до гидразонасукцинилацетона с образованием соответствующего
бутилового эфира.
-12
--- стр. 15 ---
в следующей таблице предетавлены дополнительные ацилкарнитины, их переходы
маесы и рекомендуемые изотопно-меченные внутренние стандарты. Данная информация
носит только рекомендательный характер, представляя данные текущей практики многих
скрининговых лабораторий. Н а б о р р е а г е н т о в M a s s C h r o m н е в а л и д и р о в а н д л я д а н н ы х а н а л и т о в !
А ц и л к а р н и т и н ы б е з м е ч е н ы х с т а н д а р т о в :
Вещество Метод измерения Изменение массы
СЗВС-Карнитин 360>85 СЗ-Карнитин-ОЗ
С4 ОН-Карнитин 304>85 С4-Карнитин-В3
С4ВС-Карнитин 374>85 С4-Карнитин-В3
С5:1-Карнитин 300>85 С5-Карнитин-В9
С 5 ОН-Карнитин 318>85 С5-Карнитин-В9
С8:1-Карнитин 342>85 С8-Карнитин-В3
С10:1-Карнитин 370>85 С10-Карнитин-ВЗ
С14:2-Карнитин 424>85 С14-Карнитин-ВЗ
С14:1-Карнитин 426>85 С14-Карнитин-ВЗ
С140Н-Карнитин 444>85 С14-Карнитин-ВЗ
С16:1-Карнитин 454>85 С16-Карнитин-ВЗ
С16:1 ОН-Карнитин 470>85 С16-Карнитин-ВЗ
С1 бОН-Карнитин 472>85 С16-Карнитин-ВЗ
С18:1-Карнитин 482>85 С18-Карнитин-ВЗ
С18:20Н-Карнитин 496>85 С18-Карнитин-ВЗ
С18:1 ОН-Карнитин 498>85 С18-Карнитин-ВЗ
С18 ОН-Карнитин 500>85 С18-Карнитин-ВЗ
-15
--- стр. 16 ---
6 Ж Х -М С / М С система
6.1 Приборные и инструментальные параметры:
Анализ на аминокислоты, ацилкарнитины требует наличие системы с насоеом для
высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ-насосом), инжектором и
тандемным масс-спектрометром подходящей чувствительности. Для предотвращения
изменения состава мобильной фазы (кат No. 55001), ее следует держать закрытой, даже во
время проведения процедуры. В качестве раствора для промывки иглы инжектора,
иепользуют промывающий раетвор (кат. No 55007). Для выполнения процедуры не требуетея
ни колонка для выеокоэффективной жидкостной хроматографии, ни термостат колонки. Для
подсоединения системы высокоэффективной жидкостной хроматографии к системе
тандемного масс-спектрометра следует использовать капиллярное дроссельное устройство с
фильтром предварительной очистки из полиэфирэфиркетона.
Инструментальные настройки:
Автосемплер:
Время анализа:
Градиент потока:
Промывная жидкость для иглы инжектора:
обьем вкола 10 мкл
1,7 мин
от 20 до 600 мкл/мин
промывающий раствор(кат. No 55007)
Градиентный профиль:
Ввиду разного свободного обьема отдельных хроматографических систем, профиль
градиента возможно придется изменить. Показанный профиль градиента необходим, как
основа для оптимизации. Окно времени сканирования системы тандемного масс-
спектрометра должно быть установлено на период времени, когда интенсивность сигналов
достигает своего максимального плато (приблизительно 0,25 - 1,25 мин).
Время, мин 0 0,24 0,25 1,24 1,25 1,50 1,51
Поток,
мкл/мин 200 200 20 20 600 200 200
Если система высокоэффективной жидкостной хроматографии не справляется с
постоянной скоростью потока, равной 2 0 мкл/мин, метод может быть запущен
альтернативно, с изократическим потоком, со скоростью 100 - 150 мкл/мин.
П р и м е ч а н и е : изократический метод снижает чувствительность.
Рис.4: Хроматограмма с градиентом потока.
-16
--- стр. 17 ---
6.2. Масс-спектрометрия:
Основы метода:
Масс-спектрометр определяет массу молекулы, измеряя отношение массы к заряду (m/z)
ее иона. С этой целью молекулы должны быть ионизированы. В технологии ЖХ-МС/МС,
ионизация электрораспылением считается легким способом создания ионов молекул.
Тандемный масс-спектрометр состоит из двух масс-спектрометров, соединенных
последовательно. В первом масс-спектрометре (МС 1) ионы разделяются по своему
отношению массы к заряду. Дальше ионы достигают реакционной ячейки, где после
столкновения с инертным газом (аргоном или азотом), они распадаются на фрагменты.
После этого второй масс-спектрометр (МС 2) анализирует характерные фрагменты распада
снова по отношению массы к заряду.
Было доказано, что различные методы измерения в технологии тандемной масс-
спектрометрии, надежны для различных моделей фрагментации;
Сканиуование потерь нейтральных частиц (NLS):
Многие бутилированные аминокислоты фрагментируются в реакционной ячейке, путем
выделения масляного эфира муравьиной кислоты с массой 102 дальтон. При определении
аминокислот в режиме сканирования потери нейтральных частиц, расстояние сканирования
первого и второго спектрометра составляет 102 единиц массы. Это генерирует селективный
масс-спектр для многих природных и кислых аминокислот.
Тем не менее, в данном режиме детектируются не все аминокислоты. Например,
цитруллин и орнитин, кроме масляного эфира муравьиной кислоты выделяют аммиак,
поэтому такие аминокислоты должны детектироваться сканированием потери нейтральных
частиц, с расстоянием 119 (102 -ь 17). С другой стороны, глицин следует определять в
режиме сканирования потери нейтральных частиц, с расстоянием 56, аргинин режиме
сканирования потери нейтральных частиц, с расстоянием 161.
Производителем рекомендуется выполнять количественное определение всех
аминокислот, которые не детектируются при сканировании нейтральных частиц на
расстоянии 10 2 , в режиме мониторинга множественных реакций.
Мониторинг множественных реакций (MRM):
В режиме MRM оба масс-спектрометра статически настроены на определенную массу.
МС 1 выбирает молекулярный ион; выводя ионы с разными массами. После фрагментации с
реакционной ячейке, МС 2 детектирует характеристики фрагмента молекулярного иона.
Режим MRM гарантирует высокую селективность и высокую чувствительность обоих МС.
В основном, все аналиты можно детектировать в режиме MRM. Недостатком данного
метода измерения является длительная оптимизация системы тандемного масс-спектрометра
для каждого отдельного перехода массы.
Рис. 5: Фрагментация иона бутилового эфира фенилачанина при отщеплении бутилового эфира муравьиной
кислоты (нейтрапьный остаток 102).
-17
--- стр. 18 ---
Сканирование материнского иона (PIS):
Бутилированные ацилкарнитины образуют характерный фрагментарный ион е m/z = 85 в
реакционной ячейке. При определении ацилкарнитинов и евободного карнитина во время
сканирования иона-предшественника, МС 2 статически установлен на m/z=85, в то время,
как МС 1 сканирует на молекулярные ионы. Это генерирует селективный масс-спектр для
дериватизированныхацилкарнитинов и свободного карнитина.
Рис. 6: Фрагментация иона бутильных ацилкарнитинов при отщеплении характеристичного иона m/z=85
К=алкил (например, R=CH3 для ацетилкарнитина).
6.3. Запуск ЖХ-МС/МС системы:
-до начала аналитической серии вакуумные насосы ЖХ-МС/МС системы должны
проработать хотя бы 8 ч.
-промойте систему 10 мл мобильной фазы при скорости потока 2 0 0 мкл/мин.
-вводите приготовленные контроли несколько раз, пока не появятся две одинаковые
концентрации и интенсивности сигнала.
-теперь можно начинать анализ.
Для правильного обращения с ЖХ-МС/МС системой прочтите Руководство по
эксплуатации системы. П р и н е о б х о д и м о с т и п р о й д и т е о б у ч а ю щ и й к у р с с п р е д с т а в и т е л е м к о м п а н и и !
6.4. Выключение:
Когда система не используется, насос высокоэффективной жидкостной хроматографии
можно отключить, подвижная фаза может оставаться в хроматографической системе. Нет
риска образования солей на уплотнениях насоса. Вакуумные насосы системы тандемного
масс-спектрометра должны работать все время. Чтобы продлить срок службы источника
ионизации и мультипликатора, система тандемного масс-спектрометра должна быть
переведена в режим ожидания.
-18-
--- стр. 19 ---
7. П робопод готовка
П р е д у п р е ж д е н и е : При использовании набора реагентов MassChrom учитывайте,
пожалуйста, рекомендательную информацию в главе 10 о вредных соединениях.
7.1. Сбор и хранение образцов пациентов:
Забор крови у новорожденных должен быть между 48 и 72 ч после рождения. Кровь
капают на фильтровальную бумагу и высушивают. Кровь необходимо брать из пятки
младенца.
В зависимости от типа фильтровальной бумаги и гематокрита пробы, объем крови на
сухом пятне крови, предназначенном непосредственно для анализа (3 мм в диаметре)
колеблется между 2,2-3,3 мкл крови.
Срок хранения сухих пятен крови составляет 21 день при комнатной температуре
(+20...+25°С) или в прохладном месте (+2...+8°С).
Для более длительного хранения до 6 месяцев защитите образцы от влаги и заморозьте
ниже температуры -18°С.
Избегайте температуры выше ЗТ^’С. Это может привести к занижению концентрации
некоторых аминокислот.
Н е л ь з я и с п о л ь з о в а т ь Э Д Т Л - и л и к р о в ь с г е п а р и н о м , п о с к о л ь к у м о ж н о п о л у ч и т ь л о ж н ы й р е з у л ь т а т !П р и з а б о р е к р о в и о б я з а т е л ь н о и с п о л ь з у й т е з а щ и т н ы е п е р ч а т к и .
Краткое описание сбора проб крови:
1. Протрите часть пятки для забора крови антисептиком. Осушите пятку стерильным
тампоном.
2. Проколите пятку младенца стерильным скарификатором. Кончик скарификатора
должен быть меньше 2 мм, более глубокие проколы могут повредить кость.
Прокалывание осуществлять в соответствии с инструкцией по применению
применяемого скарификатора.
3. Сотрите первую каплю крови стерильным тампоном.
4. Капните следующую большую каплю крови на фильтровальную бумагу.
Подождите, пока кровь не пропитает бумагу полностью и не заполнит отмеченный
кружок. Не прикасайтесь к одному и тому же месту фильтровальной бумаги два
раза. Это изменит объем крови на участок и может привести к ложно-
патологическим результатам.
5. Заполните каждый из следующих кругов каплями крови. Процедура должна быть
выполнена в соответствии с правилами лечебного учреждения.
6 . Осушите пятна крови в течение 4 ч на сухой, горизонтальной и не абсорбирующей
поверхности при комнатной температуре.
7. Отправьте сухие фильтровальные бумаги в лабораторию в течение 24 ч.
Рекомендуется использовать фильтровальную бумагу FDA и ей эквивалентную
(например, Whatman 903).
19-
--- стр. 20 ---
7.2. Растворение внутреннего стандарта (сухого):
Внутренний стандарт (сухой) (каталожный номер 55004) используется как
калибровочный стандарт для каждого образца и готовится на основе меченых соединений,
полученных от сертифицированного поставгцика. После растворения определенное
количество внутреннего стандарта добавляется к пробе и проводится полная
пробоподготовка.
Лиофилизированный внутренний стандарт растворяется в 50 мл экстрагируюгцего буфера
(Каталожный номер 55008). Для этого, откройте бутылку внутреннего стандарта, долейте 5
мл экстрагируюгцего буфера. Оставьте стоять при комнатной температуре 5 мин, изредка
мешайте. Перенесите содержимое бутылки в 50 мл мерную колбу. Смойте внутренний
стандарт 2 раза по 5 мл экстрагирующим буфером с бутылки и перенесите в колбу. Долейте
в колбу экстрагирующий буфер до 50 мл и тщательно перемешайте. И з б е г а й т е п о п а д а н и я п р я м ы х с о л н е ч н ы х л у ч е й !
Фактические концентрации зависят от партии и записаны в сопровождающем стандарт
информационном листке.
Предупреждение: Внутренний стандарт (сухой) был изготовлен из объединенной цельной
крови человека, при тестировании всей крови получен отрицательный результат на
антитела к ВИЧ 1+2. ДНК вирусов ВИЧ, HCV и НВ¥(ПЦР-исследования), поверхностный
антиген гепатита В (HBs), антитела к НВс, антитела к вирусу гепатита С и сифшису
(РПГА.ТРНА). В связи с тем, что не существует ни одного метода тестирования,
который даст абсолютную гарантию того, что продукты, содержащие материачы
полученные от человека, не будут содержать возбудителей инфекционных заболеваний,
такую потенциальную опасность заражения следует принимать во внимание. Данный
продукт также может содержать неизвестные возбудители или другие патогены, д.чя
которых не существует утвержденных исследований. Все продукты, содержащие
материачы по.чученные от человека, считаются содержащи.\т потенциальных
возбудителей инфекций. Соответственно, при работе с данным продуктом следует
применять те же .меры, как при работе с потенциачьно инфицированными образцами
пациентов.
Суок хранения раствоуенного внутреннего стандарта:
Растворенный внутренний стандарт можно хранить до 3 недель, при соблюдении
следующих условий: плотно закрытым, в защищенном от воздействия солнечных лучей
месте и в охлажденном состоянии (при температуре от +2 до +8°С).
7.3. Растворение MassCheck Пятна высушенной крови Контроля для
измерения аминокислот, ацилкарнитинов уровень I, уровень II:
Из MassCheck контролей пятен высушенной крови уровня I (Каталожный номер 0192) и
уровня II (Каталожный номер 0193), готовят образцы, аналогичные образцам пациента.
Приготовленные контроли включают в каждую аналитическую серию для мониторинга
правильности и точности системы.
В сумке для хранения на молнии содержится MassCheck контроли пятен высушенной
крови уровня I и уровня II, пакетики с осушителем, индикатор влаги. Каждый контроль
находится в своей сумке для хранения на молнии.
Состояние индикатора влаги необходимо проверять каждый раз при открытии сумки.
Если цвет индикатора влаги изменился с синего на розовый на 50 %, пакетики с осушителем
необходимо регенерировать, высушив их в печи при температуре 60 °С в течение 4 часов.
Извлекать контрольный материал из сумки для хранения (температура - 18 °С) следует с
осторожностью. Во избежание конденсации пакетов, необходимо, чтобы перед открытием,
они согрелись до комнатной температуры (20-25 ^С).
-20-
--- стр. 24 ---
7.4.3.Пробоподготобка для определения сукиинтаиетона
1. Подготовка образца:
Выдавите 3 мм диск сухого пятна крови в ячейку 96-луночного планшета.
2. Экстракция аминокислот и ацилкарнитинов:
Добавьте 200 мкл растворенного внутреннего стандарта (см.гл.5.2.). Закройте
планшет пленкой и перемешайте при 600 об/мин в течение 2 0 минут при
комнатной температуре.
3. Перенос:
Удалите защитную пленку с планшета. Перенесите супернатант в новую
ячейку планшета.
4. Экстракция сукциншацетона:
Добавьте 150 мкл внутреннего стандарта для сукцинилацетона (Каталожный
номер 55044) к оставшимся пятнам крови. Закройте планшет защитной
пленкой и перемешайте при 600 об/мин при 60°С в течение 30 мин.
П р и м е ч а н и е : Супернатант из пункта 3 может быть инкубирован без
защитной пленки, что сократит время упаривания.
В а ж н о : Следите за температурой во время инкубации (бО^С).
5. Перенос/упаривание:
Удалите защитную пленку с планшета. Перенесите супернатант в новую
ячейку планшета. Упаривайте при 60*^С и 600 об/мин в токе воздуха досуха.
В а ж н о : Плашка должна быть сухой. Влага помешает дериватизации!
6 .
7.
Дериватизация:
Добавьте 60 мкл реагента для дериватизации. Закройте плашку защитной
пленкой и инкубируйте при 60°С и 600 об/мин в течение 15 минут.
Упаривание:
Упаривайте при 60**С и 600 об/мин в токе воздуха досуха.
В а ж н о : Будьте осторожны и не пересушите пробы во избежание потерь!
В н и м а н и е : В процессе упаривания испаряется дериватизирующий реагент.
Всегда работайте в вытяжном шкафу!
8. Растворение элюата:
9. Добавьте 100 мкл восстанавливающего буфера. Перемешайте при 600 об/мин
в течение 1 минуты.
10. Ввод пробы:
Введите 10 мкл элюата в ЖХ-МС/МС систему.
11. Контроль качества:
Правильность и точность анализов должна быть отслежена постановокй
контрольных материалов, а именно: MassCheck Пятна высушенной крови
Контроли для измерения аминокислот, ацилкарнитинов уровень I - (1*3
пятна) (кат. No 0192) и MassCheck Пятна высушенной крови Контроли для
измерения аминокислот, ацилкарнитинов уровень II - (1*3 пятна).- кат. №
0193).
В а ж н о : Используйте только соответствующие реагенты, планшеты и защитные
пленки для пробоподготовки. Вариации в пробоподготовке могут сказаться на
качестве результатов анализа.
24
--- стр. 25 ---
7.5 Хранение проб
Элюаты/пробы могут храниться при комнатной температуре (+20...+25°С) 7 дней или
охлажденными (при температуре +2...+8°С) 14 дней (в стеклянных светозащитных виалах).
Для более длительного хранения заморозьте при температуре -18*^С пробу. Растаявшие после
заморозки пробы необходимо хорошо перемешать перед вводом.
7.6 Дополнительное оборудование, не входящее в набор реагентов.
MassChrom Набор реагентов для ЖХ-МС/МС анализа аминокислот и ацилкарнитинов в
сухих пятнах крови для скрининга новорожденных требует дополнительного оборудования,
не входящего в состав набора:
-тандемный масс-спектрометр с программным обеспечением (Shimadzu LCMS-8040
или аналог);
-ВЭЖХ-система с насосом, инжектором и автосэмплером (Shimadzu LC30 или аналог);
-ручной или автоматический компостер (панчер), 3 мм в диаметре;
-шейкер с термостатом для экстракции и дериватизации проб, например ThermoShaker
PST-60HL-4, компания 1аЬ4уои;
-горячий воздух для выпаривания проб;
-дозатор или многоканальный дозатор, 60-200 мкл (Biohit или аналог);
-вытяжной шкаф;
-мерная колба вместимостью 50 мл.
8.Сбор и обработка д анны х
Внутренний стандарт используется как индивидуальный калибратор для каждой пробы,
поэтому матричные эффекты снижены до минимума. Для этой цели проба (контроль,
образец) смешивается с определенным количеством внутреннего стандарта (фактические
концентрации зависят от партии и записаны в сопровождающем стандарт информационном
листке).
Точный объем крови необходим для успешного количественного обсчета проб. Объем
крови на проколотом круге зависит от диаметра круга, гематокрита образца и материала
фильтровальной бумаги. При прокалывании 3 мм, гематокрите 0,35-0,45 и фильтровальной
бумаги Whatman 903 средний объем крови 3,1 мкл.
При использовании других диаметров кругов (объемов проб) концентрации
внутреннего стандарта должны быть скорректированы.
До начала полуколичественного анализа образца пациента рекомендуется провести
несколько тестовых анализов. Для этого введите приготовленный контроль несколько раз,
пока два последовательных масс-спектра не покажут почти идентичные значения
концентрации и интенсивности сигналов (для независимости от условий ЖХ-МС/МС,
приготовленные контроли должны вводиться в ходе всей аналитической серии проб и в
конце тоже). После этого можно начинать аналитическую процедуру.
-25-
--- стр. 26 ---
Аминокислоты и метаболит тирозина (SUCA):
Внутренний стандарт Концентрация
мкг/л (мкмоль/л)
Соотношение концентраций в
образце (мкмоль/л): 200 мкл
внутреннего стандарта/3.1 мкл
крови
Аланин-В4 0,57 (6,08) 392
Аргинин-В7 0,28 (1,57) 101
Аспарагиновая кислота-ВЗ 0,91 (6,71) 433
Цитруллин-В2 0,28 (1,59) 102
Глутаминовая кислота-В5 0,96 (6,29) 406
Глицин 0,85 (10,9) 702
Лейцин-ВЗ 0,83 (6,21) 400
Метионин-ВЗ 0,37 (2,41) 155
Орнитин-Вб 0,55 (3,99) 257
Фенилаланин-В 5 0,53 (3,21) 20 2
Пролин-В7 0,53 (3,12) 278
Тирозин-В4 0,86 (4,66) 301
Валин-В8 0,060 (0,355) 301
А ц и л к а р н и т и н ы и с в о б о д н ы й к а р н и т и н :
Внутренний стандарт Концентрация
мкг/л (мкмоль/л)
Соотношение концентраций в
образце (мкмоль/л): 200 мкл
внутреннего стандарта/ЗЛ мкл
1фШВИ
С0-Карнитин-В9 0,060 (0,355) 22,9
С2-Карнитин-В3 0,037 (0,179) 11,5
СЗ-Карнитин-ВЗ 0,010 (0,046) 2,98
С4-Карнитин-В3 0,005 (0,022) 1,43
С5-Карнитин-В9 0,006 (0,0 2 2) 1,42
С5ВС-Карнитин-В6 0,005 (0,019) 1,20
Сб-Карнитин-ВЗ 0,006 (0,0 2 2) 1,41
С8-Карнитин-В3 0,006 (0,0 2 2) 1,42
С10-Карнитин-ВЗ 0,007 (0,023) 1,46
С12-Карнитин-ВЗ 0,008 (0,0 2 2) 1,43
С14-Карнитин-ВЗ 0,008 (0,0 2 1) 1,39
С16-Карнитин-ВЗ 0,017 (0,042) 2,73
С18-Карнитин-ВЗ 0,016 (0,037) 2,36
М е т а б о л и т т и р о з и н а ( S u c A ) :
Внутренний стандарт Концентрация
мкг/л (мкмоль/л)
Соотношение концентраций
в образце (мкмоль/л): 150
мкл внутреннего
стандарта/ЗЛ мкл крови
Сукцинилацетон-' 0,020 (0,124) 5,98
26
--- стр. 27 ---
При использовании других диаметров кругов (объемов проб) концентрации внутреннего
стандарта должны быть скорректированы.
Для независимости от условий ЖХ-МС/МС приготовленные контроли должны вводиться
в ходе всей аналитической серии проб и в конце тоже.
Для правильного обращения с приборами обратитесь к производителю данных приборов.
Концентрации аналитов в пробах рассчитываются в соответствии со следующим
принпипом:
• Интенсивность сигнала вещества А в спектре образца=Аофа 5е^
• Интенсивность сигнала внутреннего стандарта в спектре образца = I S o o p a s e i i• Концентрация С внутреннего стандарта = С с т а н д а р т
Концентрация С а „ а л и т , о б р а з е ц В образце рассчитывается как:
С ш а л и т , о д р а з е ц { м к м о л ь ! л ) = у . С с т а н д а р тШ о д р а з е ц
9. К он тр ол ь качества
Точность и правильность анализов может быть отслежена путем включения в каждый
аналитический цикл контролей, а именно MassCheck Пятна высушенной крови Контроли для
измерения аминокислот, ацилкарнитинов двухуровневые (I + П)-(2*3 пятна); MassCheck
Пятна высушенной крови Контроли для измерения аминокиелот, ацилкарнитинов уровень I -
(1*3 пятна); MassCheck Пятна высушенной крови Контроли для измерения аминокислот,
ацилкарнитинов уровень II - (1*3 пятна) (далее по тексту Контроли MassCheck, Контроль
MassCheck уровень I, Контроли MassCheck уровень II, Контроли MassCheck двухуровневые).
Каталожные номера соответственно 0191, 0192, 0193.
Данные контроли MassCheck для измерения аминокислот, ацилкарнитинов разработаны для
мониторинга правильности и точности аналитических процедур для полуколичеетвенного
определения аминокислот и ацилкарнитинов в сухих пятнах крови.
Контроли MassCheck сделан на основе цельной крови человека и должен рутинно
использоваться в соответствие с руководством по применению, описанные в данной
инструкции, а также на информационном листе, которые идет вместе с контролями
MassCheek.
При работе с данными контролями MassCheck следует применять те же меры безопасности,
как при работе с потенциально инфицированными образцами пациентов.
В обязательном порядке используйте защитные перчатки. Использовать только обученными
работниками.
Условия хранения
Контроли MassCheck хранятся при температуре ниже -18°С до срока годности, указанного на
упаковке. Срок годности составляет 2 года с даты производства.
Контроли MassCheck упаковываются в zip-пакеты на молнии вместе е пакетиками с
Осушителем и индикатором влаги. Состояние индикатора влаги необходимо проверять
каждый раз при открытии сумки. Если цвет индикатора влаги изменился с синего на
розовый на 50 %, пакетики с осушителем необходимо регенерировать, высушив их в печи
при температуре 60°С в течение 4 часов.
27
--- стр. 28 ---
Извлечение контролем MassCheck из zip-пакетов при - 18 °С следует выполнять с
осторожностью. Во избежание конденсации zip-пакетов, необходимо, чтобы перед
открытием zip-пакеты согрелись до комнатной температуры.
Индикатор с записью температуры крепится на zip-пакеты. Постепенное изменение цвета от
белого к черному указывает на то, что на индикаторе достигнута соответствующая
температура.
Избегайте прямых солнечных лучей и продолжительного воздействия высоких температур!
Используемые контроли MassCheck храните хорошо закрытыми и сухими при температуре
ниже - 18 до даты, указанной на этикетке.
Спецификация
Объем цельной крови, приходящийся на пятно диаметром 3мм составляет 3.1мкл±Ю%
Присваивание ожидаемых диапазонов
Средние значения, представленные в приложении 1, определены при помощи контролем
MassCheck уровень 1 и уровень 2. Референтные значения представляют собой средние
значения - утроенное стандартное отклонение. Эти данные специфичны для данных
контролем MassCheck (определенный уровень лота). Каждая лаборатория должна установить
собственные референтные значения используемого метода с помощью анализа полученных
данных.
Предупреждение
Данный продукт изготовлен из объединенной целъной крови человека, при тестировании
всей крови получен отрицателъный резулътат на антитела к ВИЧ 1+2, ДНК вирусов
ВИЧ, HCV и HBV (ПЦР-исследования), поверхностный антиген гепатита В (HBs), антитела к
НВс, антитела к вирусу гепатита С и сифилису (РИГА, ТРНА).
В связи с тем, что не существует ни одного метода тестирования, который даст абсолютную
гарантию того, что продукты, содержащие материалы полученные от человека, не будут
содержать возбудителей инфекционных заболеваний, такую потенциальную опасность
заражения следует принимать во внимание.
Мы рекомендуем рассматривать любой материал, полученный от человека, считать как
потенциально опасный. Соответственно, при работе с данным продуктом следует
применять те же меры, как при работе с потенциально инфицированными образцами
пациентов.
Ю .Реф еренсны е интервалы /пограни чн ы е значения
*Пограничные значения (99,5% перцентили), указанные в таблице ниже, были
определены в рамках экспериментального исследования 1500 новорожденных, в скрининг-
центре госпиталя университета Лейпцигана MassChrom на Наборе реагентов для ЖХ-
МС/МС анализа аминокислот и ацилкарнитинов в сухих пятнах крови (состав на 960
анализов) варианты исполнения: 55000.
**Пограничные значения (99,5% перцентили), указанные в таблице ниже, были
определены в рамках экспериментального исследования 2500 новорожденных, в
медицинском университете Вены, на факультете педиатрии и подростковой медицины на
Наборе реагентов для ЖХ-МС/МС анализа аминокислот и ацилкарнитинов в сухих пятнах
крови (состав на 960 анализов) варианты исполнения: 55000.
28
--- стр. 29 ---
Аминокислоты и метаболит тирозина (SucA):
Аналит Пограничное значение
(мкмоль/л)*
Пограничное значение
(мкмоль/л)**
Аланин-В4 743 561
Аргинин-DV 35 47
Аспарагиновая кислота-ВЗ 270 147
Цитруллин-В2 33 34
Глутаминовая кислота-В5 710 800
Глицин-13С2, 15N 717 834
Лейцин -D3 270 226
Метионин-ВЗ 22 45
Орнитин-Вб 350 258
Фенилаланин-В 5 92 92
Пролин-В7 - 441
Тирозин-В4 225 197
Валин-В8 198 191
Сукцинилацетон-1ЗС5 - 1.16
А ц и л к а р н и т и н ы и с в о б о д н ы й к а р н и т и н :
Аналит Пограничное значение
{мкмоль/л>*
Пограничное значение
(мкмоль/л)**
С0-Карнитин-В9 60.3 49.8
СО, нижнее значение 5.2 8.0
С2-Карнитин-В3 47.8 57.3
СЗ-Карнитин-ВЗ 4.72 4.88
С4-Карнитин-В3 0.81 0.62
С5-Карнитин-В9 0.45 0.46
С5ВС-Карнитин-В6 0.34 0.22
Сб-Карнитин-ВЗ 0.16 0.13
С8-Карнитин-В3 0.19 0.11
С10-Карнитин-ВЗ 0.26 0.21
С12-Карнитин-ВЗ 0.41 0.56
С14-Карнитин-ВЗ 0.43 0.38
С16-Карнитин-ВЗ 5.06 5.81
С18-Карнитин-ВЗ 2.59 1.58
Эти пограничные значения только ориентировочные и могут изменяться в зависимости от
группы пациентов и используемой МС/МС системы. Каждая скрининговая лаборатория
должна определять свои собственные пограничные значения в экспериментальном
исследовании в консультации с экспертом по обмену веществ.
-29
--- стр. 46 ---
16. В озм ож н ы е аналитические интерф еренции
1.
2.
Изолейцин перекрывается с лейцином. Измеренная концентрация в пробе
сумма обоих аминокислот.
это
3.
5.
7.
Гидроксипролин перекрывается с лейцином. Стандартное значение
гидроксипролина пренебрежительно мало по сравнению с лейцином.
Гидроксипролин не должен искажать концентрацию лейцина в процессе рутинного
анализа.
Метионинсульфон перекрывается с тирозином. Метионинсульфон является
продуктом распада метионина. Стандартная концентрация метионина у младенцев
составляет прим. 20 мкмоль/л. Максимальная концентрация метионинсульфона не
превышает этого значения. Патологический уровень тирозина составляет примерно
300 мкмоль/л. Метионинсульфон не должен искажать концентрацию тирозина в
процессе рутинного анализа
Метионинсульфоксид перекрывается с метионином. Метионинсульфоксид
является продуктом окисления метионина. 1пу1уометионинсульфоксид
восстанавливается белком метионинсульфоксоксид-редуктазой до метионина. В
условиях inyiyo не должно быть патологических концентраций метионина,
вызванных высокими концентрациями метионинсульфоксида.
Аспарагин перекрывается с орнитином. Максимальная концентрация аспарагина у
младенцев 140 мкмоль/л. только концентрации аспарагина выше 300 мкмоль/л
приводят к увеличенному орнитину на 20 %. Аспарагин не должен вызывать
ложно-увеличенных концентраций орнитина в течение рутинных измерений
Из-за образования дибутилового эфира глутаминовая кислота перекрывается с С2-
карнитином. Однако, стандартные значения глутаминовой кислоты в младенцах не
приводят к значительным повешениям концентраций С2-карнитина. Глутаминовая
кислота не должна вызывать ложно-увеличенных концентраций С2-карнитина в
течение рутинных измерений.
Примеси в пластиковых материалах (96-луночный планшет, защитные пленки),
используемых в пробоподготовке, могут мешать некоторым ацилкарнитинам,
приводя к завышенным результатам. Данный MassChrom® Набор реагентов
содержит все требуемые реагенты и материалы, которые не дают помех при
анализе.
У пациентов с парентеральным питанием с заменой тирозина ацетилтирозином
концентрация тирозина может быть низкой. Возросший показатель Phe/Tyr может
ложно показать на фенилкетонурию, даже если концентрация фенилаланина в
норме.
У пациентов, принимающих пивалиновую кислоту как антибиотик, может быть
завышен С5-карнитин, поскольку образуется пивалилкарнитин (изомер
изовалерилкарнитина). Даже если не существует никакой метаболической болезни,
может быть ложно выявлена изовалериановая ацидемия (IVА).
46
--- стр. 47 ---
гарантии производителя.
Технические характеристики набора реагентов гарантируются при условии соблюдения
рекомендаций по хранению, и при использовании надлежащим образом, в соответствии с
инструкцией по применению.
При возникновении гарантийного случая и по вопросам технической поддержки
обращаться к производителю на горячую линию в Мюнхене (тел.; +(49) 89 18930-0, факс:
+(49) 89 18930-199; e-mail: “mailbox@chromsystems.de”)H4H уполномоченному
представителю производителя на территории Российской Федерации (тел. тел.: +7 (495) 510-
43-51, chromolab@gmail.com)
47.
--- стр. 48 ---
17. У стран ен и е проблем
Проблема Возможная причина Мера
Г радиентный
профиль не
генерируется
1. ВЭЖХ насос
2. Воздух в системе
3. Поток не стабилен
1. Проверьте насос (воздух, течь)
2. Дегазируйте ВЭЖХ-систему
3. Проверьте насос
Перекрывающиеся
пики
1. Инжектор загрязнен
2. Виалы автосамплера
загрязнены
3. Уплотнители виал
1. Почистите метанолом или
введите 10 раз мобильную
фазу
2. Используйте новые виалы или
очистите валы метанолом
3. Используйте другие
уплотнители
Нет сигнала 1. Инжектор поврежден
2. Насос поврежден
3. МС/МС-система не
готова
1. Проверьте инжектор
2. Проверьте насос
3. Проверьте МС/МС-систему
Низкая
чувствительность
1. Загрязнен ионный
источник
2. Загрязнен масс-
спектрометр
3. У течка клапана
инжектора
4. Умножитель не работает
1. Почистите ионный источник
2. Почистите масс-спектрометр
3. Проверьте инжектор
4. Замените умножитель
Низкая
интенсивность
сигнала
1. Условия дериватизации
не оптимальные
2. Стадия выпаривания не
окончена
1. Проверьте время и
температуру дериватизации
2. Осушите пробу
Нет вакуума 1. Вакуумный насос
поврежден
2. Утечка вакуумной
системы
1. Проверьте все вакуумные
насосы
2. Проверьте вакуумные
соединения и переходы
Нет газоснабжения 1. Поврежден генератор
азота
2. Поврежден компрессор
3. Газовый баллон пустой
4. Давление газа
недостаточно
1. Проверьте генератор азота
2. Проверьте компрессор
3. Замените газовый баллон
4. Настройте давление газа
-48-