Набор реагентов для выявления в клиническом материале ДНК Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum и их дифференциации методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени "Уреаплазма-тест" по ТУ 21.20.23.110-008-53300432-2018 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДАЮ Г енеральный директор ^«Альфалаб» .А.Суворова 2018 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для выявления в клиническом материале ДНК Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum и их дифференциации методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени «Уреаплазма-тест» ВНИМАНИЕ! Изучите инструкцию перед началом работы --- стр. 2 --- ОГЛАВЛЕНИЕ 1. Н АЗН А Ч ЕН И Е............................................................................................. 3 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗДЕЛИЯ........................................................................................ 3 2.1. ПРИНЦИП М Е Т О Д А ............................................................................................... 3 2.2. ФОРМЫ ВЫ ПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ............................................................... 4 2.3. СОСТАВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ............................................................................................. 4 2.4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАК ТЕРИ СТИ К И ..................................................................... 5 3 . МЕРБ1 ПРЕДОСТОРОЖ НОСТИ .................................................................................. 5 4. ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И М АТЕРИАЛЫ...........................................................................6 5. ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО М АТЕРИ АЛА........................................................................................ g 6. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ......................................................................................................... .. 6.1. ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ КЛИНИЧЕСКОГО М АТЕРИ АЛА .....................................................8 6.2. ПЦР-АМ ПЛИФИКАЦИЯ........................................................................................................................ ... 6.3. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛБТАТОВ......................................................................................................... .. 6.4. АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛБТАТОВ........................................................................Ю 7. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ Н АБО РА .............................................11 8. УКАЗАНИЯ ПО УТИЛИЗАЦИИ............................................................................................................ .. СПИСОК СОКРАЩ ЕНИЙ.................................................................................................................... 13 СИМВОЛБ1, ИСПОЛБЗУЕМБ1Е В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ...................................................13 --- стр. 3 --- Набор «Уреаплазма-тест» предназначен для качественного обнаружения ДНК Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealytieum и их дифференциации методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Исследование на наличие ДНК Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealytieum проводится для выявления возбудителя уреаплазменной инфекции. Уреаплазменная инфекция, вызванная Ureaplasma parvum, и уреаплазменная инфекция, вызванная Ureaplasma urealytieum, имеют схожие клинические проявления. Однако для выбора оптимальной терапевтической стратегии необходимым условием является определение видовой принадлежности уреаплазм, которое возможно только на основе молекулярно генетических методов, в частности, метода ПЦР. Таким образом, своевременное выявление и одномоментная дифференциация Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealytieum способствуют достижению максимального терапевтического эффекта и снижают риск развития хронического уретрита, бесплодия и других возможных осложнений уреаплазменной инфекции. Материалом для исследования являются мазки из урогенитального тракта человека. Область применения набора - клиническая лабораторная диагностика, научные исследования. Только для исследований in vitro. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗДЕЛИЯ 2Л. ПРИНЦИП МЕТОДА 1. НАЗНАЧЕНИЕ Анализ образцов включает следующие этапы: 1. Пробоподготовка (выделение ДНК из образцов клинического материала). 2. Амплификация специфических фрагментов ДНК в ходе ПЦР-реакции. 3. Детекция продуктов амплификации в режиме реального времени. В процессе реакции происходит амплификация фрагмента ДНК Ureaplasma parvum и/или Ureaplasma urealytieum (при условии наличия указанных микроорганизмов в исходном клиническом материале) и амплификация фрагмента гена В-глобина человека (что служит в качестве контроля взятия биологического материала). Для амплификации специфических участков ДНК используются олигонуклеотиды и меченые олигонуклеотидные зонды Taqman. В присутствии фермента Taq-полимеразы происходит гибридизация олигонуклеотидов и зонда с комплементарным участком ДНК-мишени. Образование специфического продукта амплификации сопровождается отщеплением --- стр. 4 --- флуоресцентной метки (благодаря наличию у Taq-полимеразы 5’- экзонуклеазной активности) и появлению детектируемого флуоресцентного сигнала, регистрация которого проводится в режиме реального времени. Олигонуклеотидные зонды, используемые для детекции ДНК возбудителей уреаплазменной инфекции и детекции фрагмента ДНК человека (внутренний контроль), имеют флуоресцентные метки с разными спектрами поглощения и испускания, что позволяет проводить одновременную регистрацию флуоресценции по трём каналам (FAM, ROX и HEX). Интенсивность флуоресценции прямо пропорциональна количеству продуктов амплификации и, следовательно, нарастает с каждым последующим циклом. Набор предназначен для использования на амплификаторах детектирующих для постановки полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (MiniOpticon, BioRad, ДТ-96, ДНК-технология или другие амплификаторы с аналогичными техническими характеристиками). 2.2. ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ. Набор реагентов «Уреаплазма-тест» выпускается в четырех различных вариантах комплектации, которые отличаются по количеству определений, на которое рассчитан набор (48/96), и типу пробирок со смесью для амплификации (пробирки/стрипы): 1) комплект на 48 определений, смесь для амплификации в пробирках; 2) комплект на 48 определений, смесь для амплификации в стрипах; 3) комплект на 96 определений, смесь для амплификации в пробирках; 4) комплект на 96 определений, смесь для амплификации в стрипах; 2.3. СОСТАВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ На 48 определений: К омпонент набора реагентов Описание Объем, мкл Количество Смесь для амплификации Прозрачная бесцветная жидкость 10,0 48 пробирок объем ом 0,2 мл или 6 стрипов по 8 пробирок объемом 0,2 мл каждая Раствор Taq-полимеразы Прозрачная жидкость 300,0 2 пробирки объем ом 0,5 мл Положительны й контрольный образец (ПКО) Прозрачная жидкость 75,0 1 пробирка объем ом 0,5 мл Отрицательный контрольный образец (ОКО) Прозрачная жидкость 150,0 1 пробирка объемом 0,5 мл Комплект на 48 определений позволяет провести анализ 48-ми образцов контроли. ’ включая --- стр. 5 --- На 96 определений: К омпонент набора реагентов Описание Объем, мкл Количество Смесь для амплификации Прозрачная бесцветная жидкость 10,0 96 пробирок объемом 0,2 мл или 6 Стрипов по 8 пробирок объемом 0,2 мл каждая Раствор Taq-полимеразы Прозрачная жидкость 300,0 4 пробирки объем ом 0,5 мл Положительный контрольный образец (ПКО) Прозрачная жидкость 75,0 2 пробирки объем ом 0,5 мл Отрицательный контрольный образец (ОКО) Прозрачная жидкость 150,0 2 пробирки объем ом 0,5 мл Комплект на 96 определений позволяет провести анализ 96-ти образцов, включая контроли. 2.4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Аналитическая чувствительность. Нижний предел аналитической чувствительности набора реагентов — 1000 копий/мл. Для определения аналитической чувствительности используют контрольные образцы предприятия (КОП), представляющие собой полученные методом генной инженерии образцы плазмидной ДНК со встроенным фрагментом, специфичным для ДНК детектируемого микроорганизма. Концентрацию КОП измеряют спектрофотометрически на приборе NanoDrop2000. Аналитическая специфичность. Аналитическая специфичность набора реагентов «Уреаплазма-тест» подтверждена отсутствием регистрации экспоненциального роста флуоресцентного сигнала по каналам FAM и ROX в отрицательных контрольных образцах, а также отсутствием флуоресцентного сигнала по каналу FAM в образцах, содержащих ДНК Ureaplasma urealyticum и отсутствием флуоресцентного сигнала по каналу ROX в образцах, содержащих ДНК Ureaplasma parvum. Специфичность анализа при постановке теста с применением набора «Уреаплазма- тест» доказана методом секвенирования продуктов амплификации и подтверждена отсутствием неспецифических перекрестных реакций при тестировании образцов ДНК человека и панели образцов ДНК микроорганизмов, являющихся представителями нормальной микрофлоры урогенитального тракта, условно-патогенной и патогенной флоры (Lactobacillus spp, Escherichia coli, Gardnerella vaginalis, Candida alhicans. Mycoplasma hominis. Mycoplasma genitalium. Chlamydia trachomatis. Trichomonas vaginalis. Neisseria gonorrhoeae). --- стр. 6 --- Диагностическая чувствительность набора реагентов подтверждена в ходе клинических испытаний на выборке клинических образцов и составляет не менее 98 % (при расчете по формуле Бернулли с доверительной вероятностью 90%). Диагностическая специфичность набора реагентов по результатам клинических испытаний составила 97,72% для Ureaplasma parvum и 97,95% для Ureaplasma urealyticum. Диагностическую специфичность рассчитывали с учётом видовой принадлежности - отдельно для Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum; расчёт производили по формуле Бернулли с доверительной вероятностью 90%. 3. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 3.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 России от 06.06.2012 № 4н). 3.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. 3.3. Меры предосторожности - соблюдение правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот, при работе с материалом, содержащим микроорганизмы 1-1V групп патогенности». 3.4. Утилизация отходов производится в соответствии с СанПиН N2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами», сбор отходов осуществляется в одноразовые пакеты желтого цвета, предназначенные для утилизации медицинских отходов класса Б (ГОСТ Р 50962-96). 4. ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И МАТЕРИАЛЫ 1-й этап - вьщеление ДНК из клинического материала ВНИМАНИЕ! Комплект реагентов для выделения ДНК из биологического материала не входит в состав набора Для выделения ДНК из клинических образцов используются наборы реагентов, рекомендованные для использования в клинической лабораторной диагностике при анализе мазков из урогенитального тракта («ДНК-сорб-АМ», ООО «Некст-Био», Россия; «ЭДЭМ», НТК «Диаэм», Россия; «ДНК-ЭКСПРЕСС», НПФ «Литех», Россия и другие аналогичные комплекты реагентов). Экстракцию ДНК проводят согласно инструкции производителя набора реагентов. --- стр. 8 --- термостат программируемый (амплификатор) для проведения ПЦР с детекцией флуоресценции по двум каналам РАМ, ROX и HEX в режиме «реального времени». 5. ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА Материалом для исследования являются мазки из урогенитального тракта человека. Взятие, транспортирование и хранение исследуемого материала должно проводиться в строгом соответствии с методическими рекомендациями «Взятие, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики», разработанными ФБГУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Москва, 2012 г. Условия и срок хранения образцов биоматериала определяется типом транспортной среды, использованной для забора мазков. 6. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 6.1. ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА Для экстракции (вьщеления) ДНК из клинических образцов используются наборы реагентов, рекомендованные для использования в клинической лабораторной диагностике при анализе мазков из урогенитального тракта («ДНК-сорб-АМ», ООО «Некст-Био», Россия; «ЭДЭМ», НТК «Диаэм», Россия; «ДНК-ЭКСПРЕСС», НПФ «Литех», Россия и другие аналогичные комплекты реагентов). Экстракцию ДНК проводят согласно инструкции, прилагаемой к набору для выделения ДНК. Полученные образцы ДНК хранят в течение 1 недели при температуре от 2 до 8°С или в течение года при температуре не выше минус 16°С. 6.2. ПЦР-АМПЛИФИКАЦИЯ Общий объём реакционной смеси - 25 мкл, включая объём пробы ДНК - 5 мкл. 6.2.1. В штатив поставить необходимое количество пробирок/стрипов со смесью для амплификации (в соответствии с количеством проб и две пробирки для ПКО и ОКО); 6.2.2. В каждую пробирку, не повреждая слой воска, внести по 10 мкл тщательно перемешанного раствора Taq-полимеразы; --- стр. 9 --- 6.2.3. Закрыть крышки пробирок; 6.2.4. Поочередно открывая крышки пробирок внести в пробирки: 6.2.4.1. В одну из подготовленных пробирок внести 5 мкл ОКО; 6.2.4.2. В пробирки, предназначенные для анализа образцов, поочередно внести по 5 мкл анализируемых проб; 6.2.4.3. В оставшуюся пробирку внести 5 мкл ПКО. 6.2.5. Установить все пробирки в блок детектирующего амплификатора; 6.2.6. Запустить программу амплификации в соответствии с параметрами, указанными в таблице 1. Внимание! Для предотвращения контаминации при внесении в пробирки реагентов, образцов ДНК и контрольных образцов рекомендуется использовать только одноразовые наконечники с аэрозольными фильтрами. Таблица 1 - Условия проведения амплификации и детекции результатов Программа амплификации Температура Время Количество циклов 94°С 15 мин 1 94°С 10 сек 558°С 10 сек 72°С 10 сек 94°С 10 сек 4058°С 10 сек* 72°С 05 сек 10°С - хранение Детекция флуоресцентного сигнала Специфические продукты FAM и ROX Внутренний контроль HEX - детекция флуоресцентного сигнала 6.3. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ Детекция продуктов амплификации проводится в режиме реального времени с использованием детектирующего ПЦР-амплификатора согласно инструкции к прибору. - по каналу FAM регистрируется сигнал о накоплении продукта амплификации фрагмента ДНК Ureaplasma parvum; - по каналу ROX регистрируется сигнал о накоплении продукта амплификации фрагмента ДНК Ureaplasma urealyticum; 9 --- стр. 10 --- - по каналу HEX регистрируется сигнал о накоплении продукта амплификации фрагмента гена В-глобина человека (используется в качестве контроля взятия материала). 6.4. АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ 6.4.1. Анализ результатов проводят с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР с детекцией в режиме реального времени. Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции на соответствующем канале с пороговой линией, что определяет наличие (или отсутствие) для данной пробы значения порогового цикла Ct. Анализируемая проба считается положительной, если: график нарастания флуоресценции имеет форму экспоненциальной кривой; для пробы определено значение порогового цикла Ct по каналам РАМ, ROX и HEX; кривая флуоресценции по каналам РАМ, ROX и HEX пересекает пороговую линию на участке экспоненциального роста. Принцип интерпретации: 6.4.2. Принцип интерпретации: Учет результатов следует начинать с результатов амплификации положительного (ПКО) и отрицательного контрольных (ОКО) образцов. 6.4.2.1. Результаты анализа не учитываются, если: - Во время прохождения реакции детектирующий амплификатор не регистрирует экспоненциальный рост уровня флуоресценции по каналам FAM, ROX и HEX в пробирке с ПКО или полученные значения порогового цикла Ct для одного или всех каналов выше граничных, указанных во вкладыше к набору; в данной ситуации необходимо повторное исследование всех образцов; - Во время прохождения реакции детектирующий амплификатор не регистрирует экспоненциальный рост уровня флуоресценции по одному из каналов в пробирке с ПКО или полученные значения порогового цикла Ct выше граничных, указанных во вкладыше к набору; в данной ситуации необходимо повторное исследование всех образцов; - В пробирке с ОКО регистрируется экспоненциальный рост уровня флуоресценции по одному из каналов, либо по всем каналам флуоресценции. Необходимо принятие 10