Набор реагентов для полуколичественного определения регуляторных аутоантител в сыворотке крови женщин детородного возраста (ЭЛИ-П-ТЕСТ-1) по ТУ 9398-001-56581782-01 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- Генеральный директор ООО «Биофарм-тест» ’ ’ УТВЕРЖ ДАЮ ” ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для полуколичественного определения регуляторных аутоантител в сыворотке крови женщин детородного возраста (ЭЛИ-П-ТЕСТ-1) 1. Н а з н а ч е н и е 1.1. Набор ЭЛИ-П-ТЕСТ-1 предназначен для полуколичественного определения содержания регуляторных аутоантител класса IgG, взаимодействующих с ОБМ , белком S100, белковыми фракциями АСВР-С и МР-С, в сыворотке крови женщин детородного возраста методом твердофазного иммуноферментного анализа. ОБМ (антиген-1) - основной белок миелина, участвующий в регуляции созревания нервных волокон и в регуляции созревания гемопоэтических клеток. S100 (антиген-2) - белок, участвующий в регуляции миграции нейробластов голов ного и спинного мозга и их функциональной дифференцировке. АСВР-С (антиген-3) - фракция негистоновых белков хроматина ткани мозга. МР-С (антиген-4) - фракция мембранных белков ткани мозга. Естественные аутоантитела к указанным белкам и белковым фракциям являются нормальными компонентами сыворотки крови и синтезируются у всех здоровых лиц в определенном диапазоне значений, мало подверженных индивидуальным колебаниям. Нарушение продукции указанных аутоантител в сыворотке крови женщин детородного --- стр. 2 --- возраста свидетельствует о повышенном риске аномального развития эмбриона и плода. 1.2. Набор ЭЛИ-П-ТЕСТ-1 предназначен для клинического использования в аку шерстве, гинекологии и иммунологии в качестве дополнительного метода оценки состоя ния организма женщин, а именно: а) для обследования женщин, планирующих беременность, в первую очередь групп риска, для выяснения состояния одного из иммунных звеньев регуляции эмбриогенеза за 1 -2 мес до планируемой беременности; б) для обследования женщин начиная с ранних сроков беременности до 21-23 не дель беременности с целью выявления пациентов, относимых к группам повышенного риска аномального развития эмбриона/плода, и проведения необходимых лечебно профилактических мероприятий; в) для контроля проводимой терапии. 1.3. Набор рассчитан на проведение анализа 70 образцов сыворотки крови в 3 по вторах (на каждом из 10 планшетов проводят тестирование 7 образцов анализируемой сыворотки крови и 1 образца контрольной сыворотки). 2. Х а р а к т е р и с т и к а н а б о р а 2.1. П р и н ц и п д е й с т в и я Принцип работы набора состоит в следующем. В лунках планшета, на поверхности которых сорбированы антигены 1, 2, 3 и 4, после добавления разведенных контрольной и анализируемых проб сьторотки крови и их инкубации устанавливается равновесие между связанными и свободными антителами к соответствующим антигенам. После удаления со держимого лунок и внесения в них раствора конъюгата кроличьих антител к IgG человека с пероксидазой хрена на связанных антителах происходит сорбция молекул конъюгата в количестве, прямо пропорциональном количеству связавшихся антител. После удаления избытка несвязанного конъюгата проводится ферментативная реакция для определения активности пероксидазы, входящей в состав конъюгата. Оценка проводится фотометриче ски при длине волны 450 нм, после чего рассчитывается относительная иммуноре активность определяемых антител в пробах, выраженная в процентах от иммунореактив ности контрольной сыворотки. 2.2. С о с т а в н а б о р а В состав набора входят: - 96-луночные полистироловые планшеты с сорбированными на поверхности лунок антигенами - 10 ш т.; 2 --- стр. 3 --- - контрольная сыворотка с известным содержанием антител к антигенам О БМ , S100, АСВР-С и МР-С - 1 пробирка (0,5 мл); - конъюгат (поликлональные кроличьи антитела к иммуноглобулинам класса G человека, меченные пероксидазой хрена) -1 пробирка (1,2 мл); - концентрат раствора для разведения проб (РРП), 10-кратный - 1 флакон (30 мл); - концентрат раствора для отмывки планшетов (РОП), 10-кратный - 1 флакон (250 мл); - концентрат цитратно-фосфатного буферного раствора с перекисью водорода 10- кратны й - 1 флакон (12 мл); - хромоген тетраметилбензидин (ТМ Б) -1 пробирка (1,2 мл); - стоп-реагент -1 флакон (30,0 мл). 3. А н а л и т и ч е с к и е и д и а г н о с т и ч е с к и е х а р а к т е р и с т и к и ^ 3.1. Чувствительность набора. Набор позволяет полуколичественно определять со держание в сьшоротке крови аутоантител класса IgG к ОБМ, белку S100, фракциям АСВР- С и МР-С в диапазоне от -90% до +400% от значений контрольной сьш оротки. 3.2. Границы физиологического (нормального) уровня антител к антигенам ОБМ , S100, АСВР-С и МР-С находятся в диапазоне от -25% до +30% от значений контрольной сыворотки. Это заключение сделано на основании анализа образцов сыворотки крови в первом триместре беременности у 700 клинически здоровых женщин с физиологическим течением беременности и родивших клинически здоровых детей, 3.3. Значения оптической плотности лунок, содержащих контрольную сыворотку, находятся в диапазоне 0,2-0,5 единиц оптической плотности (ОП). ^ 4. М е р ы п р е д о с т о р о ж н о с т и 4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 2а. 4.2. Все компоненты набора, за исключением стоп-реагента (серная кислота), в ис пользуемых концентрациях не токсичны. 4.3. Серная кислота при попадании на кожу и слизистые вызывает раздражение и ожоги. Поэтому в случае ее попадания на кожные или слизистые покровы следует немед ленно тщательно см ьггь большим количеством проточной воды. 4.4. Меры предосторожности - соблюдение «Правил устройства, техники безопас ности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреж дений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.). 3 --- стр. 4 --- 4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластико вы е перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепа тита и другие возбудители вирусных инфекций. 4.6. Использовавшиеся материалы следует утилизовать как потенциально инфици рованные. Все жидкие отходы должны быть обеззаражены перед сливом в канализацию, например, обработкой 3% раствором хлорамина или автоклавированием в течение 15 мин при температуре +120° С. Ф лаконы, использовавшиеся для хранения анализируемых об разцов, также должны быть обеззаражены. 5. О б о р у д о в а н и е и м а т е р и а л ы - Фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять величину оптиче ской плотности раствора в лунках планшета при длине волны 450 нм; - термостат, подцерживаюший температуру+37+1 °С и +5611*^0; - устройство для отмывки планшетов; - пипетки полуавтоматические одноканальные со сменяемыми наконечниками, по зволяющие отбирать объемы жидкости 10; 20; 200; 1000; 1500; 2000 и 3000 м кл; - пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, по зволяющая отбирать объемы жидкости 25; 90; 100 и 200 мкл; - микрошприц вместимостью 25 м кл; - цилиндры мерные вместимостью 10; 100 и 1000 мл; - мешалка магнитная; - колбы стеклянные с пробками вместимостью 10; 100 и 1000 м л; - вода дистиллированная; - пробирки вместимостью 5-10 м л; - перчатки резиновые или пластиковые. 6. А н а л и з и р у е м ы е о б р а з ц ы Образцы сыворотки крови могут храниться при температуре +2-8‘ ^ С не более 7 дней или при температуре -20°С не более 3 мес. Перед проведением анализа образцы сы воротки крови следует прогреть при температуре +56°С в течение 30 мин. Все разведения реагентов представлены для проведения анализа на одном планше те (7 образцов анализируемой сыворотки и 1 образец контрольной сыворотки). 6.1. Приготовление рабочего РРП. При выпадении осадка солей в концентрате РРП необходимо прогреть его при тем- 4 --- стр. 5 --- пературе +30-40 до полного растворения осадка. В колбу вместимостью 100 мл внести 3,0 мл РРП, добавить 27 мл дистиллированной воды и перемешать. Полученный рабочий раствор можно хранить при температуре +2-8°С не более 7 дней. 6.2. Подготовка разведений анализируемых сывороток крови. Образцы сыворотки крови могут храниться при температуре +2-8°С не более 7 дней или при температуре -20° С не более 3 мес. Перед проведением анализа образцы сыворот ки крови следует прогреть при температуре +56” С в течение 30 мин; к 10 мкл каждой из анализируемых сьгоороток крови нужно добавить по 2000 мкл рабочего РРП (см. п. 7.1.) и тщательно перемешать. Разведения анализируемых сывороток крови готовить непосред ственно перед использованием; хранению не подлежат. 6.3. Подготовка разведения контрольной сыворотки. Контрольную сыворотку не прогревать! В пробирку вместимостью 5,0 мл внести ^ 10 мкл контрольной сыворотки, добавить 2000 мкл рабочего РРП (см п. 7.1.) и тщательно перемешать. Разведение контрольной сыворотки готовить непосредственно перед исполь зованием; хранению не подлежит. 6.4. Приготовление рабочего РОП. В колбу вместимостью 1000 мл внести 25 мл концентрата РОП, добавить 225 мл дистиллированной воды и перемешать. Полученный рабочий раствор можно хранить при температуре +2-8°С не более 7 дней. 6.5. Приготовление рабочего разведения конъюгата, В колбу вместимостью 10 мл внести 100 мкл конъюгата, добавить 10 мл рабочего РРП (см п. 7.1) и тщательно перемешать. Разведение конъюгата готовить непосредственно ^ перед использованием; хранению не подлежит. 6.6. Приготовление раствора ТМ Б. В колбу вместимостью 10 мл внести 9,0 мл дистиллированной воды, добавить 1,0 мл концентрата цитратно-фосфатного буферного раствлра (ЦФР), 100 мкл ТМ Б и пере меш ать. Полученный раствор можно хранить при комнатной температуре (+18-25^С) в тем ном месте не более 20 минут, 7. П р о в е д е н и е а н а л и з а 7.1. В лунки планшета внести по 100 мкл разведенных контрольной и анализируе мых сывороток крови (см. п. 7.3 и 7.2, соответственно) в соответствии со схемой, закры ть --- стр. 6 --- планшет крыш кой и инкубировать в течение 14-16 ч при температуре +2-8°С. Схема Расположение сорбированных антигенов в лунках планшета и схема внесения контроль ной и анализируемых сывороток в лунки планшета Антигены: А-1 (лунки 1-12) А-2 (лунки 1-12) А-3 (лунки 1-12) А-4 (лунки 1-12) А-4 (лунки 1-12) А-3 (лунки 1-12) А-2 (лунки 1-12) А-1 (лунки 1-12) Обозначения: Слева от схематического изображения планшета указан порядок распо ложения лунок планшета, содержащих сорбированные антигены по горизонтальным ря дам планшета; на схематическом изображении планшета указан порядок внесения кон трольной сыворотки (Кс) и семи образцов анализируемых сывороток крови (цифры 1 - 7). 7.2. По окончании инкубации содержимое лунок стряхнуть и 4-кратно отмыть ра бочим РОП (см п. 7.4.), внося в лунки по 200 мкл раствора с помощью многоканальной пипетки или вошера, каждый раз удаляя содержимое лунок стряхиванием. Время выпол нения процедуры не должно превышать 15 мин. 7.3. Сразу после завершения отмывки во все лунки внести по 100 мкл рабочего раз ведения конъюгата (см п. 7.5); (время выполнения процедуры - не более 5 мин), закры ть планшет крыш кой и инкубировать в течение 1,5 ч при температуре + Ъ Т С . 7.4. Содержимое лунок стряхнуть и отмыть так, как это указано в п. 8.3. 7.5. Сразу после завершения отмывки во все лунки внести по 90 мкл раствора ТМ Б для проявления реакции (см п. 7.6). Время выполнения процедуры - не более 2 мин. 7.6. Инкубировать планшет в темноте при комнатной температуре (+18-25°С) в те чение 5-10 мин, после чего остановить реакцию добавлением 25 мкл стоп-реагента в каж дую лунку (после появления окраски бледно-синего цвета в лунках с контрольной сыво роткой). Время выполнения процедуры - не более 2 мин. 7.7. Измерить оптическую плотность (ОП) растворов в лунках при длине волны 450 нм на фотометре вертикального сканирования в течение 5-10 мин после остановки реакции. В том случае, если невозможно провести измерение ОП в течение указанного времени, планшеты можно хранить в темном месте при +2-8® С не более 30 мин. --- стр. 7 --- 8 , Ре г и с т р а ц и я р е з у л ь т а т о в 8.1. Рассчитать средние арифметические значения величин ОП для контрольной сыворотки и для образцов анализируемых сывороток крови.. 8.2. Рассчитать иммунореактивность анализируемых образцов сыворотки крови с каждым из антигенов ОБМ , S100, АСВР-С и МР-С по формулам: 7 1(а-1) X 100 - 100; 1(к1) 1(а-2) X 100 - 100; 1(к2) 1(а-3) X 100 -1 0 0 ; 1(кЗ) 1(а-4) X 100 - 100; 1(к4) где: 1(а-1) - величина оптической плотности анализируемой сыворотки крови в лунках, содержащих антиген-1 ; 1(а-2) - величина оптической плотности анализируемой сыворотки крови в лунках, со держащих антиген-2; 1(а-3) - величина оптической плотности анализируемой сыворотки крови в лунках, со держащих антиген-3; 1(а-4) - величина оптической плотности анализируемой сыворотки крови в лунках, со держащих антиген-4; 1(к1) - величина оптической плотности контрольной сыворотки крови в лунках, содер жащих антиген-1 ; 1(к2) - величина оптической плотности контрольной сыворотки крови в лунках, содер жащих антиген-2; 1(кЗ) - величина оптической плотности контрольной сыворотки крови в лунках, содер жащих антиген-3; 1(к4) - величина оптической плотности контрольной сыворотки крови в лунках, содер жащих антиген-4. Для расчетов может бьггь использована соответствующая компьютерная програм ма. --- стр. 8 --- 9. У ч е т р е з у л ь т а т о в а н а л и з а 9.1. Если относительные значения иммунореактивности анализируемой сыворотки крови с любым из антигенов лежат в диапазоне от -25 до +30 % , предполагается, что сы воротка получена от женщины, относящейся к группе нормореактивных. 9.2. Если относительные значения иммунореактивности анализируемой сыворотки крови с любым из антигенов менее -35% и при этом с остальными антигенами не превы шают +30%, предполагается, что сыворотка получена от женщины, относящейся к группе гипореактивпых. 9.3. Если относительные значения иммунореактивности анализируемой сыворотки с любым из антигенов более +40% (но не более +90%) и при этом с остальными антигена ми не менее -25%, предполагается, что сыворотка получена от женщины, относящейся к группе гиперреактивпых. 9.4. Если относительные значения иммунореактивности анализируемой сыворотки с любым из антигенов более +100% и при этом с остальными антигенами не менее +35% , предполагается, что сыворотка получена от женщины, относящейся к группе с выражен ной гиперреактивностью. 9.5. В том случае, если наблюдается сочетание относительных значений иммуноре активности анализируемой сыворотки с любыми из антигенов выше и ниже эмпирически установленных границ нормы, предполагается, что сыворотка получена от женщины, от носящейся к группе с разнонаправленными изменениями. 9.6. У женщин, относившихся к группе нормореактивных, условия развития эм бриона и плода являются оптимальными, риск осложнений беременности и рождения де тей с пороками развития минимален. У женщин, относящихся к группе гипореактивных, возможно наличие небольших Оотклонений в иммунном звене регуляции эмбриона/плода, риск осложнений течения бе ременности и рождения детей с пороками развития невелик. У женщин, относящихся к группе гиперреактивных, возможно наличие умеренных изменений в иммунном звене регуляции эмбриона/плода и риск осложнений течения бе ременности и рождения ребенка с пороками развития повышен. У женщин, относящихся к группе с выраженной гиперреактивностью, вероятны существенные изменения в иммунном звене регуляции эмбриона/плода; риск осложнений течения беременности и рождения ребенка с пороками развития значительно повышен. У женщин, относящихся к группе с разнонаправленными изменениями, возможны отклонения в иммунном звене регуляции эмбриона/плода и риск осложнений течения бе ременности, а также рождения ребенка с пороками развита. Степень этого риска зависит 8 --- стр. 9 --- О Т степени и характера наблюдаемых отклонений в содержании исследуемых антител. Если женщина не относится к группе нормы, ей рекомендуется пройти дополни тельное обследование (в первую очередь на наличие инфекции и эндокринно метаболических изменений). 10. Условия ХРАНЕНИЯ и ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА 10.1. Набор ЭЛИ-П-ТЕСТ-1 должен храниться в упаковке предприятия- изготовителя при температуре +2-8 в течение всего срока годности. Допускается хра нение набора при температуре +25 не более 4 дней.и транспортируют при +2-10 ^ С . 10.2. Срок годности набора - 6 месяцев. 10.3. Концентраты РРП, РОП, цитратно-фосфатного буферного раствора с переки сью водорода после вскрытия флакона можно хранить при температуре +2-8 не более 2 мес. 10.4. Рабочие РРП и РОП можно хранить при температуре +2-8 не более 7 дней, 10.5. Стоп-реагент после вскрытия флакона можно хранить в плотно закрытом виде при комнатной температуре (+18-25 ^ С ) не более 2 мес. 10.6. Контрольную сыворотку после вскрытия пробирки можно хранить при темпе ратуре +20^С не более 3 мес. Разведенная контрольная сыворотка хранению не подлежит, 10.7. Конъюгат кроличьих антител к IgG человека с пероксидазой хрена после вскрьггия пробирки можно хранить при температуре -20^С не более I мес. Рабочее разве дение конъюгата хранению не подлежит. 10.8. Раствор ТМБ после вскры тия флакона можно хранить при температуре +2-8^С в течение всего срока годности набора. 10.9. Для проведения анализа не следует использовать мутные и сильно гемолизи- рованные сыворотки. 10.10. Запрещается использовать стоп-реагенты из наборов производства других фирм. Для получения достоверных данных необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора По вопросам, касающимся качества набора ЭЛИ-П-ТЕСТ-1, следует обращаться в ООО «Биофарм-тест» (111020, г, М осква, Госпитальная площадь, д. 2, стр. 37; тел. (499) 263 16 28; факс (499) 180 80 46. 9