Набор реагентов для выявления ДНК цитомегаловируса и ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типов методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (РеалБест ДНК ЦМВ/ВПГ-1,2) по ТУ 9398-260-23548172-2010 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/11716 от 17.08.2011 · класс риска 2б

Производитель: АО "Вектор-Бест" (Россия)

Вид изделия: Множественные герпесвирусы человека нуклеиновые кислоты ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ»
Приказом Росздравнадзора Гон£раШ?йй директор
01  ____________ 20 __г. № ________ .Д^О_<^скто^-Бест>>
саинов 
! <2011  1 .
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов 
для выявления ДНК иитомегаловируса и ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типов 
методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времст!
РеалБест ДНК ЦМВ / ВПГ-1,2 
(комплект 1 )
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «РеалБест ДНК ЦМВ / ВПГ-К2» предназначен для выявления ДМК 
иитомегаловируса (ЦМВ) и ДНК вируса простого герпеса 1  и 2 типов (ВИГ-1,2). выделенной 
из клинических проб, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно- 
флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени.
Выделение ДНК из клинических проб проводится с помощью наборов: «РеалБест 
ДНК-экснресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «РеалБест ДНК-экстракция 3» и «РеалБест 
'жсгракция 100 ».
Ко\н 1лект 1  предназначен для применения с регистрируюпшми амплификагорами: «iQ 
iCycler». «iQ5 iCycler» и «СРХ96» (фирма Bio-Rad. США), «ДТ-96» (ООО «НПО ДИК- 
Технология», Россия) или их аналогами.
Комплект 1  рассчитан на ироведенис анализа 96 образцов, включая контрольные об­
разцы.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода.
Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фраг­
мента ДНК. заключающегося в повторяющихся циклах; температурная денатурация, отжиг 
праймеров с комлементарными последовательностями, достройка полинуклеотидных после­
довательностей с этих праймеров Тац-полимеразой.
И н с т р у к ц и я  с о с т а в л е н а  с о т р у д н и к а м и  З А О  « В е к т о р - Б е с т » :  Д и р е к т о р о м
п о  п р о и з в о д с т в у  Т к а ч е в ы м  В . К .  и  н а ч .  о т д е л е н и я  п р о и з в о д с т в а  П Ц Р  н а б о р о в  Т р у х и и о и  А . В .


--- стр. 2 ---
в  основе используемого метода регистрации лежит измерение флуоресценции в каж­
дом цикле ПЦР.
Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря использованию специ­
фичного для данного участка ДНК возбудителя инфекции гибридизационного ДНК-зонда, 
который в ходе реакции связывается с одной из цепей ДНК, обеспечивая дополнительную 
специфичность метода. ДИК-зонд содержит па 5  конце флуоресцентный краситель, а на 
3'конце -  гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуоресценции. В 
ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благодаря 5'-3'экзонуклеазной активности 
Taq-полимеразы, зонд расщепляется с 5 конца и происходит разобщение красителя и гасите­
ля, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресцен­
ции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образовав­
шихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определяется ис­
ходным количеством ДНК возбудителя инфекции в образце.
Учёт эффективности выделения ДНК ЦМВ и ДНК ВИГ-1,2 из образцов обеспечивает­
ся выделением ДНК из клинических проб совместно с предварительно внесённым неконку­
рентным внутренним контрольным образцом (ВКО).
2.2. Состав набора:
-  положительный контрольный образец универсатьный (НКО) -  на основе плазмид- 
ной ДНК со встройкой фрагментов ДНК ряда герпес вирусов и возбудителей ИППП, в том 
числе ДНК ЦМВ и ДНК ВИГ-1,2 -  1  флакон (1,0 мл);
-  готовая реакционная смесь для НЦР (ГРС). лиофилизированная -  96 пробирок (12 
Стрипов по 8 пробирок).
Набор дополнительно комплектуется;
-  стрипированными крышками для пробирок (12  стрипов по 8 штук) или оптической 
плёнкой -  3  листа.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Чувствительность -  определение 100 копий ДНК ЦМВ и ДНК ВПГ-1,2 в стан­
дартных образцах предприятия -  10 0 %.
3.2. Специфичность определения ДНК ЦМВ и ДНК ВНГ-1.2 (по стандартной панели 
предприятия отрицательных ДНК-экстрактов) -  100 %.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к ис­
кажению результатов ПЦР.
4.1. Потенциальный риск применепия набора -  класс 26 (ГОСТ Р 51609-2000).


--- стр. 3 ---
4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных 
болезней».
4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы 
выде;гения ДНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора­
торий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, 
содержащим микроорганизмы 1-1V групп патогенности».
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки.
4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе­
ременного обьема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За­
прещается их перемещение между рабочими местами.
4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре­
ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для 
пипеток.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз­
ных образцов.
4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности 
ламинарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных 
УФ ламп в течение 1  часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами 
дезинфицирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор ДП-2Т; 1-3% раствор «Диабак»;
0,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «Мистраль»).
4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфици­
рующими средствами с гюследующей утилизацией.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
-  амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени:
«iQ iCycler», «iQ5 iCycier», «СРХ96» (фирма Bio-Rad, США), «ДТ-96» (ООО «НПО 
ДНК-Тсхнология», Россия) или их аналог;
-  ПЦР-бокс или отдельный стол, освещаемый УФ-лампой (например, «ЦиклоТемп» 
фирмы СП «РТС», Россия):
-  холодильник бытовой, поддерживаюпщй температуру от 2 до 8 °С;
-  пипетки полуавтоматические (дозаторы механические) одноканальные с перемен­
ным объёмом, со сменными наконечниками (фирма Ленпипет, Россия; фирма Biohit, Фин­
ляндия);


--- стр. 8 ---
) ы  
сз


--- стр. 9 ---
УТВЕРЖДЕНА «УГВЕРЖДАЮ »
Приказом Росздравнадзора Ге>*ер^11нВтй^иректор
от____________20__г. №_______
Хусаинов1 ^ . ,
1 . ^ 0 1 1  г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов 
для выявления ДНК цитомегаловируса и ДНК вируса простого герпеса 1  и 2 типов 
методом полимеразной цепной реакции в режиме реачьного времени 
РеалБест ДНК ЦМВ / ВПГ-1,2 
(комплект 2)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «РеалБест ДНК ЦМВ / ВПГ-1.2» предназначен для выявления ДНК 
цитомег'аловируса (ЦМВ) и ДНК вируса простого герпеса 1  и 2 типов (ВПГ-К2). выделенной 
из клинических проб, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно- 
флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени.
Выделение ДНК из клинических проб проводится с помощью наборов: «РеалЬест 
ДНК-экспрссс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «РеалБест ДНК-эксгракция 3» и «РеалБест 
экстракция 100 ».
Комплект 2 предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами как 
ро'горного типа: «Rotor-Gene 3000», «Rotor-Gene 6000» (фирма Corbett Research. A bC TpajiH M ). 
так и планшетного типа: «iQ iCycler». «iQ5 iCycler». «СКХ96» (фирма Bio-Rad, США). «ДТ-96» 
(ООО «НПО ДНК-Технология», Россия) или их аналюгами.
Комплект 2 рассчитан на проведение анализа 100 образцов, включая контрольные об­
разцы.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метола.
Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фраг­
мента ДНК, заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, огжиг 
праймеров с комлементарными последовате;гьностями. достройка полинуклеотидных после­
довательностей с этих праймеров Taq-полимеразой.
И н с т р у к ц и я  с о с т а в л е н а  с о т р у д н и к а м и  З А О  « В с к т о р - Б е с т » :  Д и р е к т о р о м
п о  п р о и з в о д с т в у  Т к а ч е в ы м  В . К .  и  н а ч .  о т д е л е н и я  п р о и з в о д с т в а  П Ц Р  н а б о р о в  Т р у х и и о й  Л . В .


--- стр. 10 ---
в  основе используемого метода регистрации лежит измерение флуоресценции в каж­
дом цикле ПЦР.
Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря использованию специ­
фичного для данного участка ДНК возбудителя инфекции гибридизационного ДНК-зонда, 
который в ходе реакции связывается с одной из цепей ДНК, обеспечивая дополнительную 
специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5' конце флуоресцентный краситель, а на 3' 
конце -  гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуоресценции. В  
ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благодаря 5 -3' экзонуклеазной активности 
Taq-полимеразы, зонд расщепляется с 5'конца и происходит разобщение красителя и гасите­
ля, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресцен­
ции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образовав- 
ншхся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определяется ис­
ходным количеством ДНК возбудителя инфекции в образце.
Учёт эффективности выделения ДНК ЦМВ и ДНК ВНГ-1,2 из образцов обеспечивает­
ся выделением ДНК из клинических проб совместно с предварительно внесённым неконку­
рентным внутренним контрольным образцом (ВКО).
2.2. Состав набора:
-  положительный контрольный образец универсальный (ПКО) -  на основе плазмид- 
ной ДНК со встройкой фрагментов ДНК pH Z ia герпес вирусов и возбудителей ИППП, в том 
числе ДНК ЦМВ и ДНК ВНГ-1,2 -  1  флакон (1,0 мл);
-  реакционная смесь для ПЦР (PC), лиофилизированная -  10 пробирок, каждая на 10 
определений:
-  раствор для восстановления (РВ) -  2 флакона (по 2,0 мл).
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Чувствительность —  определение 100 копий ДНК ЦМВ и ДНК ВПГ-1,2 в стан­
дартных образцах предприятия -  100 %.
3.2. Специфичность определения ДНК ЦМВ и ДНК ВПГ-1,2 (по стандартной панели 
пре1Щриятия отрицательных ДНК-экстрактов) -  100%.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к ис­
кажению результатов ПЦР.
4.1. Потенциальный риск применения набора -  класс 26 (ГОСТ Р 51609-2000).
4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных


--- стр. 11 ---
оолезней».
4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы 
выделения ДНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора­
торий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, 
содержапщм микроорга 1шзмы I-IV групп патогенности».
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки.
4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе­
ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За­
прещается их перемещение между рабочими местами.
4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре­
ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для 
пипегок.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз­
ных образцов.
4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности 
ламинарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных 
УФ ламп в течение 1  часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами 
дезинфицирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор ДП-2Т; 1-3% раствор «Диабак»; 
0,5% раствор «Лизафин»: 0,5-1% раствор «Мистраль»).
4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфици­
рующими средствами с последующей утилизацией.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
-  амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени роторного 
типа: «Rotor-Gene 3000», «Rotor-Gene 6000» (фирма Corbett Research, Австралия) или нлан- 
щетного типа: «iQ iCycler», «iQ5 iCycler», «CFX96» (фирма Bio-Rad. США), «ДТ-96» (ООО 
«НПО ДНК-Технология», Россия) или их аналог;
-  ПЦР-бокс или отдельный стол, освещаемый УФ-лампой (например, «ЦиклоТемп» 
фирмы СП «РТС», Россия);
-  холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С;
-  микроцентрифута типа «Eppendorf MiniSpin» (фирма Eppendorf, Германия);
-  пипетки полуавтоматические (дозаторы механические) одноканальные с перемен­
ным объемом, со сменными наконечниками (фирма Лснпипет. Россия; фирма Biohit, Фин­
ляндия);
-  перчатки медицинские одноразовые нестерильные неопудренные латексные или не- 
опреновые (перчатки «NeoTouch», фирма Ansell HeahhCare, Германия);
3


--- стр. 16 ---
срок годности набора -  12 месяцев со дня выпуска.
По вопросам, касающимся качества набора, следует обращаться в ЗАО «Вектор- 
Бест» по адресу:
630559, Новосибирская область, Новосибирский район, п. Кольцово, а/я 121, 
тел. (383) 336-73-46, 332-37-58. тел./факс (383), 336-60-30, 332-67-52.
E-mail: vbobtk@vector-best.ru.
Начальник отделения 
ЗАО «Вектор-Бест» ^  i С  [  А.В. Трухина
Директор по производству 
ЗАО «Вектор-Бест» В.К. Ткачев
«СОГЛАСОВАНО»
зав. кафедрой клинической 
лабораторной диагностики 
ГОУ ДНО «РМАПО Росздрава»
/ / /
Д.М.Н., профессор Долгов В.В. 
« » /  20 г.
с / f


--- стр. 17 ---
УТВЕРЖДЕНА 
Приказом Росздравиадзора
от 20 г. №
«У ТВ ЕРЖ Д А Ю »
/ГеиерадьньШ^^
^  '- Ч
)  ^< < & ек ест»
1Й^М.Д- Хусаииов 
. ^  -  2011 г.
ИНСТРУКЦИЯ
110  применению набора реагентов 
для выявления ДМК цитомегаловируса и ДНК вируса простого герпеса 1  и 2 типов 
методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени 
РсалБест ДНК ЦМВ / ВПГ-1,2 
(комплект 1)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «РеалБест ДНК ЦМВ / ВПГ-1.2» предназначен для выявления ДНК 
цитомегачовируса (ЦМВ) и ДНК вируса простого герпеса 1  и 2 типов (ВПГ-1,2). выделенной 
из клинических проб, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с (ибрилизационно- 
флуоресцентиой детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени.
Выделение ДНК из клинических проб проводится с помощью наборов: «РссшБсст 
ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «РеалБест ДНК-экстракция 3» и «РсалБсст 
экстракция 100 » .
Комплект 1  предназначен для применения с регистрирующими амплификаюрами; «iQ 
iCycler». «iQ5 iCycler» и «CFX96» (фирма Bio-Rad. США), «ДТ-96» (ООО «НПО ДНК- 
TexнoJЮГия». Россия) или их аналогами.
Комплект 1  рассчитан на проведение анализа 96 образцов, включая контрольн{> 1е об­
разцы.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода.
Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фраг­
мента ДНК. заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, огжиг 
праймеров с комлементарными последовательностями, достройка полинуклеотидных после­
довательностей с этих праймеров Тац-полимеразой.
И н с т р у к ц и я  с о с т а в л е н а  с о т р у д н и к а м и  З А О  « В е к т о р - В е с у п » :  Д и р е к т о р о м
п о  п р о и з в о д с т в у  Т к а ч е в ы м  В . К .  и  н а ч .  о т д е л е н и я  п р о и з в о д с т в а  П Ц Р  н а б о р о в  Т р у х и и о й  Л . В .


--- стр. 18 ---
в основе используемого метода регистрации лежит измерение флуоресценции в каж­
дом цикле ПЦР.
Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря использованию специ­
фичного для данного участка ДНК возбудителя инфекции гибридизационного ДНК-зонда, 
который в ходе реакции связывается с одной из цепей ДНК, обеспечивая дополнительнуто 
специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5'конце флуоресцентный краситель, а на
3  конце -  гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуоресценции. В  
ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благодаря 5'-3'экзонуклеазной активности 
Тац-полимсразы, зонд расщепляется с 5'конца и происходит разобщение красителя и гасите­
ля, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресцен­
ции. Нри этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образовав- 
щихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определяется ис­
ходным количеством ДНК возбудителя инфекции в образце.
Учёт эффективности выделения ДНК ЦМВ и ДНК ВНГ-1,2 из образцов обеспечивает­
ся выделением ДНК из клинических проб совместно с предварительно внесённым неконку­
рентным внутренним контрольным образцом (ВКО).
2.2. Состав набора:
-  положительный контрольный образец универсальный (ПКО) -  на основе плазмид- 
ной ДНК со встройкой фрагментов ДНК ряда герпес вирусов и возбудителей ИППП, в том 
числе ДНК ЦМВ и ДНК ВПГ-1,2 -  1  флакон (1,0 мл);
-  готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС). лиофилизированная -  96 пробирок (12 
стрипов по 8 пробирок).
Набор дополнительно комплектуется:
-  стрипированными крыщками для пробирок (12  стрипов по 8 штук) или оптической 
плёнкой -  3  листа.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Чувствительность -  определение 100 копий ДНК ЦМВ и ДНК ВПГ-1,2 в ста|{- 
дартных образцах предприятия -  100 %.
3.2. Специфичность определения ДНК ЦМВ и ДНК ВПГ-1,2 (по стандартной панели 
предприятия отрицательных ДНК-экстрактов) -  100 %.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Внимание! Несоблюдение приведенных ниже требований может привести к ис­
кажению результатов ПЦР.
4.1. Потенциальный риск применения набора -  класс 26 (ГОСТ Р 51609-2000).


--- стр. 19 ---
4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных 
болезней».
4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы 
выделения ДНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора­
торий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, 
содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки.
4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе­
ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За­
прещается их перемещение между рабочими местами.
4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре­
ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для 
пипеток.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавле]ши раз­
ных образцов.
4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности 
ламинарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных 
УФ ламп в течение 1  часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами 
дезинфицирующими средствами (такими, как; 0,2% раствор ДН-2Т; 1-3% раствор «Диабак»;
0,5% раствор «Лизафин»; 0.5-1% раствор «Мистраль»).
4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфици­
рующими средствами с последующей утилизацией.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
-  амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени;
«iQ iCycler», «iQ5 iCycler», «СРХ96» (фирма Bio-Rad, США), «ДТ-96» (ООО «НПО 
ДНК-Технология», Россия) или их аналог;
-  ПЦР-бокс или отдельный стол, освещаемый УФ-лампой (например, «ЦиклоТемп» 
фирмы СП «РТС», Россия);
-  холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С;
-  пипетки полуавтоматические (дозаторы механические) одноканальные с перемен­
ным объёмом, со сменными наконечниками (фирма Леннипет, Россия; фирма Biohit, Фин­
ляндия);


--- стр. 23 ---
10.1. Транспортирование набора должно проводиться при температуре от 2 до 8 °С. 
Допускается транспортирование при температуре до 25 °С не более 10 суток. Замораживание 
набора не допускается.
10.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно проводиться при 
температуре от 2 до 8 °С в течение всего срока годности. Замораживание набора не допуска­
ется.
10.3. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной 
инструкции по применению набора.
10.4. Запрещается использовать компоненты из наборов разных серий.
И . ГАРАНТИИ ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Предприятие-изготовитель гарантирует соответствие набора требованиям техниче­
ских условий при соблюдении условий транспортирования, хранения и применения, уста­
новленных техническими условиями и настоящей инструкцией по применению.
Срок годности набора -  12 месяцев со дня выпуска.
По вопросам, касающимся качества набора, следует обращаться в ЗАО «Вектор- 
Бест» по адресу:
630559, Новосибирская область. Новосибирский район, п. Кольцове, а У я  121,
тел. (383) 336-73-46. 332-37-58, тел./факс (383). 336-60-30, 332-67-52.
E-mail: vbobtk@vector-best.ru.
отрицательные.
10. УСЛОВИЯ ТРА Н СП О РТИ РО ВАН И Я, ХРАНЕНИЯ И П РИ М ЕН ЕН И Я НАБОРА
Начальник отделения 
ЗАО «Вектор-Бест» i C a t  А.В. Трухина
Директор по производству 
ЗАО «Вектор-Бест» В.К. Ткачев
Зам. директора по научной работе 
ГУЗМ НИИ СП им. Н.В. Склифосовского 
профессор, д.м.н.
■ '  •  - : о = г ! ( с г с
'W W .“ i^O#yMOB


--- стр. 24 ---
УТВЕРЖДЕНА 
Приказом Росздравнадзора
«У ТВ ЕРЖ Д А Ю »
иректор
от 20 г. №
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов 
д л я выявления ДНК цитомегаловируса и ДНК вируса простого герпеса 1  и 2 типов 
методом полимеразной цепной реакции в режиме реа.' 1ьного времени 
РеалБест ДНК ЦМВ / ВПГ-1,2 
(комплект 2)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «РеалБест ДНК ЦМВ / ВПГ-1.2» предназначен для выявления ДНК 
HHTOMerajmBHpyca (ЦМВ) и ДНК вируса простого герпеса 1  и 2 типов (ВПГ-1.2). выделенно^1 
из клинических проб, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизапионно- 
флуорссцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реалыюго времени.
Выделение ДНК из клинических проб нрово,' 1ится с помощью наборов: «РеалБест 
ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «РеалБест ДНК-экстракция 3» и «РеалБест 
экстракция 100 ».
Комплект 2 предназначен для применения с регистрируюпщми амплификаторами как 
ро'горного типа: «Rotor-Gene 3000», «Rotor-Gene 6000» (фирма Corbett Research. Австрсшия). 
гак и планшетного типа: «iQ iCycler», «iQ5 iCycler», «CFX96» (фирма Bio-Rad, США). «ДТ-96» 
(ООО «НПО ДНК-Технология», Россия) или их аналогами.
Комплект 2 рассчитан на проведение анализа 100 образцов, включая контрольные об­
разцы.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода.
Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фраг­
мента ДНК. заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг 
праймеров с комлементарными носледовательностями, достройка полинуклеотидных после­
довательностей с этих праймеров Тац-полимеразой.
И / 1 с  т р у к ц  и я  с о с т а в л е н а  с о  т р у д и  и к а м  и  З А О  « В е к т о р - Е е  с  т  » :  Д и р е  к т о р о .  \  t
п о  п р о и з в о д с т в у  Т к а ч е в ы м  В . К .  и  н а ч .  о т д е л е н и я  п р о и з в о д с т в а  П Ц Р  н а б о р о в  Т р у х и н о й  А . В .


--- стр. 25 ---
в  основе используемого метода регистрации лежит измерение флуоресценции в каж­
дом цикле ПЦР.
Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря использованию специ­
фичного для данного участка возбудителя инфекции гибридизационного ДНК-зонда,
который в ходе реакции связывается с одной из цепей ДНК, обеспечивая дополнительную 
специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5' конце флуоресцентный краситель, а на 3' 
конце -  гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуоресценции. В 
ходе полимеразного синтеза комплементар^юй цепи, благодаря 5'-3' экзонуклеазной активности 
Тац-полимеразы, зонд расщепляется с 5  конца и происходит разобщение красителя и гасите­
ля, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию сигната флуоресцен­
ции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образовав­
шихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определяется ис­
ходным количеством ДНК возбудителя инфекции в образце.
Учёт эффективности выделения ДНК ЦМВ и ДНК ВНГ-1,2 из образцов обеспечивает­
ся выделением ДНК из клинических проб совместно с предварительно внесённым неконку­
рентным внутренним контрольным образцом (ВКО),
2.2.  Состав набора:
~ положительный контрольный образец универсальный (ПКО) -  на основе плазмид- 
ной ДНК со встройкой фрагментов ДНК ряда герпес вирусов и возбудителей ИНПП, в том 
числе ДНК ЦМВ и ДНК ВНГ-1,2 -  1  флакон (1,0 мл):
-  реакционная смесь для НЦР (PC), лиофилизированная -  10 пробирок, каждая на 10 
определений:
-  раствор для восстановления (РВ) -  2 флакона (по 2,0 мл).
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Чувствительность -  определение 100 копий ДНК ЦМВ и ДНК ВНГ-1,2 в стан­
дартных образцах предприятия -  100 %.
3.2. Специфичность определения ДНК ЦМВ и ДНК ВНГ-1,2 (по стандартной панели 
предприятия отрицательных ДНК-экстрактов) -  100%.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к ис­
кажению результатов ПЦР.
4.1. Потенциальный риск применения набора -  класс 26 (ГОСТ Р 51609-2000).
4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных


--- стр. 26 ---
болезней».
4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы 
выделения ДЫК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора­
торий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, 
содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки.
4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе­
ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За­
прещается их перемещение между рабочими местами.
4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре­
ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для 
пипеток.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз­
ных образцов.
4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности 
ламинарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидньгк 
УФ ламп в течение 1  часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами 
дезинфицирчтощими средствами (такими, как; 0,2% раствор ДП-2Т; 1-3% раствор «Диабак»;
0,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «Мистраль»).
4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфици­
рующими средствами с последующей утилизацией.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
-  амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени роторного 
типа: «Rotor-Gene 3000», «Rotor-Gene 6000» (фирма Corbett Research, Австралия) или план- 
шетно 1'о типа: «iQ iCycler», «iQ5 iCycler». «CFX96» (фирма Bio-Rad, США), «ДТ-96» (ООО 
«НПО ДНК-Технология», Россия) или их ана;юг;
-  ПЦР-бокс или отдельный стол, освещаемый УФ-лампой (например, «ЦиклоТемп» 
фирмы СП «РТС», Россия);
-  холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С;
-  микроцентрифуга типа «Eppendorf MiniSpin» (фирма Eppendorf, Германия):
-  пипетки полуавтоматические (дозаторы механические) одноканальные с перемен­
ным объемом, со сменными наконечниками (фирма Ленпипет, Россия; фирма Biohit, Фин­
ляндия);
-  перчатки медицинские одноразовые нестерильные неопудренные латексные или не- 
опреновые (перчатки «NeoTouch», фирма Ansell HealthCare, Германия);