Набор реагентов для определения статуса мутаций гена EGFR методом ПЦР-РВ (Тест-EGFR) по ТУ 9398-004-97638376-2015 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2017/6267 от 19.09.2017 · класс риска 2б

Производитель: ООО "ТестГен" (Россия)

Вид изделия: Рецептор эпидермального фактора роста генная мутация/экспрессия мРНК ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДАЮ 
Г енеральный директор 
ООО «ТестГен» 
А. Н. Тороповский 
«28» августа 2017 г
ИНСТРУКЦИЯ
Набор реагентов для определения статуса мутаций 
гена EGFR методом ПЦР-РВ (Тест-EGFR) 
по ТУ 9398-004-97638376-2015 в исполнениях:
1) «TecT-EGFR-12» на 12 определений,
2) «TecT-EGFR-24» на 24 определения
ТУ 9398-004-97638376-2015
‘ Версия 4 от 28.08.2017


--- стр. 2 ---
Содержание
1. Назначение........................................................................................3
2. Характеристика набора....................................................................5
3. Принцип действия............................................................................7
4 Аналитические и диагностические характеристики набора.........8
5. Перечень рисков, связанных с применением набора реагентов
«Тест-EGFR».........................................................................................9
6. Меры предосторожности при работе с набором..........................10
7. Оборудование и материалы,_необходимые при работе с
набором................................................................................................11
8. Анализируемые пробы...................................................................12
9. Подготовка компонентов набора для исследования....................14
10. Проведение анализа......................................................................15
11. Регистрация и интерпретация результатов.................................19
12. Условия хранения, транспортирования и эксплуатации
набора...................................................................................................21
13. Утилизация....................................................................................21
14. Гарантийные обязательства, контакты.......................................22


--- стр. 3 ---
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Назначение: Набор реагентов предназначен для профессио­
нального применения в медицинских учреждениях и клинико-диа­
гностических лабораториях онкологического профиля при обследо­
вании пациентов с диагнозом метастатический немелкоклеточный 
рак легкого (НМРЛ) III- IV стадии для качественного определения 
статуса мутаций L858R, Т790М и делеции (del) в 19 экзоне гена 
EGFR методом аллель-специфической ПНР в режиме реального 
времени в пробе свободно циркулирующей ДНК, содержащей опу­
холевую ДНК, вьщеленной из плазмы крови, для определения пока­
заний к таргетной терапии низкомолекулярными ингибиторами ти- 
розинкиназы EGFR и мониторинга ответа на них.
Клиническая значимость теста, выполняемого с помощью 
набора реагентов, состоит в определении показаний к таргетной те­
рапии (направленного лечения) и мониторинга ответа при патоло­
гии - метастатический немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ) III- 
IV стадии, с помощью выявления методом полимеразной цепной ре­
акции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией активирую­
щих мутаций L858R, Т790М и делеции в экзоне 19 гена EGFR.
Область применения набора реагентов - клиническая лабо­
раторная диагностика, онкология.
Материалом для проведения ПЦР служат пробы свободно 
циркулирующей ДНК, содержащей опухолевзчо ДНК, выделенной 
из плазмы крови.
Анализ для установления статуса мутаций L858R, Т790М и де- 
леций (del) в 19 экзоне гена EGFR рекомендуется проводить на 
поздних стадиях (III- IV стадия) немелкоклеточного рака легкого 
(НМРЛ), так как на ранних стадиях опухолевой прогрессии цирку­
лирующая опухолевая ДНК еще не попала в кровоток.^
' Еникеев Р.Ф., Гордиев М.Г., Моммаева М.С. Тестирование EGFR-мутаций 
при раке легкого. Собственный опыт / Р.Ф. Еникеев, М.Г. Г ордиев, М.С. 
Моммаева // Поволжский онкологический вестник. - 2012. - № 4. - С. 33-38.
3


--- стр. 4 ---
Принцип определения.
Анализ проводится методом аллель-специфической ГЩР в ре­
жиме реального времени. Продукты ПЦР исследуемого гена EGFR 
идентифицируются в 5'-экзонуклеазной реакции с помощью зонда 
меченного FAM. Набор содержит реагенты для анализа мутаций 
L858R, Т790М и делеций в экзоне 19 гена исследуемого EGFR и ре­
агенты для внутреннего эндогенного контроля (Норма). Внутрен­
ний эндогенный контроль (Норма) позволяет выявить наличие ин­
гибиторов ПЦР, которые могут приводить к ложноотрицательным 
результатам. ПЦР смеси состоят из всех необходимых реагентов. 
Набор также включает положительный контрольный образец (ПКО) 
и отрицательный контрольный образец (ОКО). В качестве положи­
тельного контрольного образца (ПКО) используют 5% ПКО, пред­
ставляющий собой смесь геномной ДНК из культуры клеток чело­
века линии Jurkat концентрацией 400 ГЭ/мкл и искусственно син­
тезированной вставки размером 300 п.н. в плазмидный вектор pAL- 
ТА с концентрацией 20 ГЭ/мкл, содержащей эквимолярную смесь 
мутаций L858R, Т790М и делеций.
Концентрация ПКО выбрана исходя из средних значений кон­
центрации свободно циркулирующей ДНК (200-500 копий/мкл рас­
твора ДНК), выделяемой из плазмы крови
Геномная ДНК из культуры клеток человека линии Jurkat, ис­
пользуемая для получения положительного контрольного образца, 
контрольного образца для определения чувствительности и внеш­
него контроля амплификации имеет отрицательный статус гена 
EGFR по мутациям L858R, Т790М и делециям (del) в 19 экзоне.
В качестве ОКО использ)чот воду деионизованную.
Делеции в 19 экзоне (Dell9) или замена L858R в 21 экзоне яв­
ляются активирующими мутацими гена EGFR связанными с чув­
ствительностью к ингибиторам тирозинкиназы (ТК), поэтому опу­
холи с мутациями Dell9 или L858R наиболее чувствительны к тера­
пии ингибиторами тирозинкиназы (ТК).
Назначение ингибиторов тирозинкиназы (ТК) больным НМРЛ 
с наличием мутаций Dell9 или L858R гена EGFR, является эффек­


--- стр. 5 ---
тивным методом лечения, приводящим к существенному сокраще­
нию размеров опухолевых очагов. Определение этих мутаций в 
плазме крови в динамике позволяет оценивать ответ на проводимзчо 
терапию.
Мутация Т790М связана с устойчивостью к ингибиторам ти- 
розинкиназы (ТК) и ответственна за резистентность к терапии инги­
биторами ТК. Выявление мутации Т790М позволяет оптимизиро­
вать тактику лечения, выявить опухоли, не чувствительные к прово­
димой терапии и своевременно назначить пациенту другой режим 
химиотерапии, что является клинически и экономически выгодным, 
учитывая необходимость длительного применения и высокую стои­
мость терапии.^
Показания к применению. Набор реагентов «Тест-EGFR» 
рекомендуется пациентам с диагнозом метастатический немелко­
клеточный рак легкого (НМРЛ) III- IV стадии для определения по­
казаний к таргетной терапии низкомолекулярными ингибиторами 
тирозинкиназы EGFR и мониторинга ответа на них.
Набор предназначен для профессионального применения 
в медицинских учреждениях и клинико-диагностических лабо­
раториях онкологического профиля. Профессиональный уро­
вень потенциальных пользователей - врач клинической лабо­
раторной диагностики, медицинский лабораторный техник.
Общее время проведения анализа составляет 2-2,5 ч.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
Набор реагентов «Тест-EGFR» выпускается в двух вари­
антах исполнения:
1) «Тест-EGFR-12» на 12 определений;
2) «TecT-EGFR-24» на 24 определения.
^ Real-time PCR and digital PCR approach for detecting EGFR status in plasma of pa­
tients with NSCLC / M. Gordiev [et al.] // Journal of Thoracic Oncology. - 2016. - V 
11. -N 4. - p. 124-125. doi:10.1016/S1556-0864(16)30263-5.
5


--- стр. 6 ---
Каждый набор «Tecr-EGFR-12» на 12 определений содержит 
реагенты, рассчитанные на проведение анализа 12 образцов с уче­
том положительных и отрицательных контролей.
Каждый набор «TecT-EGFR-24» на 24 определения содержит 
реагенты, рассчитанные на проведение анализа 24 образца с учетом 
положительных и отрицательных контролей.
Состав набора
Наборы реагентов на 12 и 24 определения включают:
№
пп
Название
реагюга Описание Исполнение
«TecT-EGFR-12» «Т ecT-EGFR-24»
1 ПЦР-смесь 
Норма, Норма
Прозрачная жид­
кость розового 
цвета
1 пробирка, 
(192 мкл)
1 пробирка, 
(384 мкл)
2 ПЦР-смесь del, 
del
Прозрачная жид­
кость розового 
цвета
1 пробирка, 
(288 мкл)
2 пробирки 
(по 288 мкл)
3 ПЦР-смесь 
L858R, L858R
Прозрачная жид­
кость розового 
цвета
1 пробирка, 
(288 мкл)
2 пробирки 
(по 288 мкл)
4 ПЦР-смесь 
Т790М, Т790М
Прозрачная жид­
кость розового 
цвета
1 пробирка, 
(288 мкл)
2 пробирки 
(по 288 мкл)
5 ПКО 0,5%, 
К+ 0,5%
Прозрачная бес­
цветная жид­
кость
1 пробирка, 
(400 мкл)
2 пробирки 
(по 400 мкл)
6 ПКО 5%, 
К+ 5%
Прозрачная бес­
цветная жид­
кость
1 пробирка, 
(400 мкл)
2 пробирки 
(по 400 мкл)
7 ПКО-1к 0%, 
К+ 1к 0%
Прозрачная бес­
цветная жид­
кость
1 пробирка, 
(150 мкл)
2 пробирки 
(по 150 мкл)
8 ПКО-Юк 0%, 
К+ 10к 0%
Прозрачная жид­
кость розового 
цвета
1 пробирка, 
(150 мкл)
' 2 пробирки 
(по 150 мкл)
9 ОКО, к-
Прозрачная бес­
цветная жид­
кость
1 пробирка, 
(1600 мкл)
2 пробирки 
(по 1600 мкл)
L


--- стр. 7 ---
№
ЦП
Название
реагента Описание Исполнение
«Tecr-EGFR-12» «Tecr-EGFR-24»
10 Т aq-полимераза, 
Taq
Прозрачная бес­
цветная жид­
кость
1 пробирка, 
(55 мкл)
1 пробирка, 
(ПО мкл)
Примечание:
- ТЖО 0,5% - содержит 400 ГЭ/мкл ДНК без мутации и 2 ГЭ/мкл ДНК с мутаци­
ями L858R, Т790М и делециями в эквимолярной концентрации
- ПКО 5% - содержит 400 ГЭ/мкл ДНК без мутации и 20 ГЭ/мкл ДНК с мутациями 
L858R, Т790М и делециями в эквимолярной концентрации
- ПКО-1к 0% - содержит 100 ГЭ/мкл ДНК без мутации (1 000 ГЭ на одну реакцию)
- ПКО-10к 0% - содержит 1000 ГЭ/мкл ДНК без мутации {10 000 ГЭ на одну ре­
акцию)
Наборы поставляются в двух вариантах - на 12 и на 24 опре­
деления, включая все положительные и отрицательные контроли. 
То есть, даже при условии единичных постановок анализов со всеми 
контролями реагентов в наборе варианта «12» или «24» достаточно 
реактивов для постановки 12 и 24 клинических образцов, соответ­
ственно. Допускается одновременная постановка нескольких кли­
нических образцов. В этом случае набором варианта «12» можно 
выполнить анализ до 24, а варианта «24» - до 48 клинических об­
разцов, т.к. при одновременной постановке нескольких образцов со­
кращаются расходы реактивов на положительные и отрицательные 
контроли.
3. Принцип действия
Определение статуса мутаций L858R, Т790М и делеции (del) в 
19 экзоне гена EGFR в препарате нуклеиновых кислот (НК), полу­
ченном из клинического образца, методом полимеразной цепной ре­
акции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией включает в 
себя три этапа:
1) ПЦР-амплификацию ДНК;
2) гибридизационно-флуоресцентную детекцию, которая про­
изводится во время прохождения ПЦР;
3) интерпретацию результатов.


--- стр. 8 ---
с пробами ДНК проводятся реакции амплификации участков 
гена EGFR в реакционном буфере при помощи специфичных к этим 
участкам ДНК праймеров и фермента Taq-полимеразы. В составе 
реакционной смеси для амплификации присутствуют аллель-специ- 
фичные праймеры и флуоресцентно-меченые олиго-нуклеотидные 
зонды, которые гибридизуются с комплементарным участком ам- 
плифицируемой ДНК-мишени и разрушаются Taq-полимеразой, в 
результате чего происходщт нарастание интенсивности флуоресцен­
ции. Это позволяет регистрировать накопление специфического 
продукта амплификации путем измерения интенсивности флуорес­
центного сигнала. Детекция флуоресцентного сигнала осуществля­
ется непосредственно в ходе ПЦР с помощью амплификатора с си­
стемой детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального 
времени».
4 Аналитические и диагностические характеристики
набора
4.1 Аналитические характеристики:
Аналитическая специфичность
Специфичен по отноше­
нию к мутациям L858R, 
Т790М и делеции (del) в 
19 экзоне гена EGFR
Аналитическая чувствительность 1 копия гена EGFR в 1 
мкл раствора ДНК
Диапазон определяемых концен­
траций ДНК
от 1 до 1000 копий гена 
EGFR в 1 мкл раствора 
ДНК
Результат теста, соответствзто- 
щий норме
Отсутствие мутаций 
L858R, Т790М и делеции 
(del) в 19 экзоне гена 
EGFR


--- стр. 9 ---
4.2 Диагностические характеристики:
Диагностическая специфичность - 96,0 % с доверительной ве­
роятностью 90%
Диагностическая чувствительность - 88,1 % с доверительной 
вероятностью 90%
Доля ложноотрицательных результатов - 11,9 % с доверитель­
ной вероятностью 90%
Специфичность анализа определяется олигонуклеотидными 
затравками (праймерами), подобранными к гомологичным )^асткам 
генов, а также специфичными флуоресцентными олигонуклеотид­
ными зондами для гибридизации с комплементарными участками 
ампликонов (специфических продуктов амплификации), что исклю­
чает перекрестные реакции.
5. Перечень рисков, связанных с применением набора 
реагентов «Тест-EGFR»
В похраничную зону риска вопши опасности:
- потеря функциональных свойств реагентов, входящих в 
набор, из-за транспортирования, хранения или эксплуатации в 
несоответствующих условиях;
- утилизация набора с нарушением соответствующих мер 
безопасности и дезактивации;
- перекрестная контаминация образцов;
- загрязнение материалов ингибирующими веществами;
- контаминация реакционных смесей с образцами исследуемой 
ДНК содержимым из пробирок ПКО 0,5% или 5%, или продуктами 
ПЦР;
- невыполнение требований по пробоподготовке, проведению 
анализов и утилизации, в следствии работы с набором 
неквалифицированным персоналом.
В области недопустимой зоны риски не выявлены.
Совокупный остаточный риск применения медицинского из­
делия «Набор реагентов для определения статуса мутаций гена 
EGFR методом ПЦР-РВ (Тест-EGFR) по ТУ 9398-004-97638376-


--- стр. 10 ---
1
1
1
2015 в исполнениях: 1) «Tecx-EGFR-12» на 12 определений, 2) 
«TecT-EGFR-24» на 24 определения», производства ООО «ТестГен» 
является допустимым, польза от его применения превышает риск.
6. Меры предосторожности при работе с набором
Класс в зависимости от потенциального риска применения - 
26 в соответствии с номенклатурной классификацией медицинских 
изделий, утверждаемой приказом Министерства здравоохранения 
Российской Федерации от 06.06.2012 N 4н.
Все составные части и реагенты, входящие в состав набора ре­
агентов «Тест- EGFR», относятся к 4 классу опасности (вещества 
малоопасные) в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 «ССБТ. Вредные 
вещества. Классификация и общие требования безопасности».
Реагенты, входяпще в набор «Тест-EGFR» обладают низкой 
упругостью пара, и исключают возможность ингаляционного отрав­
ления.
Реагенты, входящие в набор «Тест- EGFR» не токсичны, по­
скольку готовятся путём смешивания отдельных нетоксичных ком­
понентов.
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей мо­
лекулярно-биологические (ПЦР) исследования клинического мате­
риала с соблюдением санитарно-эпидемических правил СанПиН 
2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обра­
щению с медицинскими отходами». Следовать рекомендациям, из­
ложенным в МУ 287-113 МУ 1.3.2569-09. При работе всегда следует 
выполнять следующие требования:
- Удалять неиспользованные реактивы в соответствии с п. 4.28 
СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования 
к обращению с медицинскими отходами».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации 
(пробирок, содержащих продукты ПЦР) недопустимо открывание 
пробирок и разбрызгивание содержимого, поскольку это может 
привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, 
оборудования и реагентов.
10


--- стр. 13 ---
процедуру получения плазмы. Для получения плазмы кровь (не ме­
нее 8-10 мл) отбирают в пробирку с ЭДТА или ЦФДА. Закрытую 
пробирку с кровью несколько раз переворачивают. В течение 24 ч с 
момента взятия крови следует отобрать плазму и перенести в новую 
пробирку. Для этого пробирку с кровью центрифугируют 10-15 мин 
при 2000-3OOOg, после чего аккуратно отбирают верхний слой 
плазмы и переносят его в отдельную одноразовую пробирку, избе­
гая попадания в отбираемый материал сгустков лейкоцитов и слоев 
с эритроцитами. Плазму центрифугируют 15 минут при 13000g или 
10 минут при 16000g (при отсутствии высокоскоростной центри­
фуги допускается проводить второе центрифугирование при 3000g), 
вновь отбирают верхний слой в отдельную пробирку, не затрагивая 
осадка на дне пробирки. Полученную плазму можно йспользовать 
для выделения ДНК или заморозить при температуре не выше ми­
нус 70°С для дальнейшего использования. Выделять ДНК следует 
не менее чем из 1 мл плазмы (рекомендуется 2-3 мл) и растворять в 
конечном объеме не менее 100 мкл.
8.2 Интерферирующие вещества и ограничения по исполь­
зованию анализируемого материала
Использование для проведения ПЦР-исследования биологиче­
ского материала, содержащего избыточное количество примесей в 
виде слизи, крови, гноя и др. может приводить к ингибированию ре­
акции амплификации.
Для выделения препарата нуклеиновых кислот (НК) из клини­
ческого образца, необходимой для проведения ПЦР-анализа чи­
стоты, рекомендуется использовать наборы для выделения, указан­
ные в п. 8.1 настоящей инструкхщи.
Для контроля эффективности экстракции ДНК и возможного 
ингибирования ПЦР в наборе реагентов предусмотрено использова­
ние внешнего контроля амплификации (ВКО ПКО-10к 0%), пред­
ставляющий собой геномную ДНК из культуры клеток-человека ли­
нии Jurkat (производства «СибЭнзим», Россия) концентрацией 1000 
копий гена EGFR в 1 мкл. Для проведения внешнего контроля ам­
плификации необходимо добавить 10 мкл ДНК (ВКО) в реакцию 
амплификации с праймерами на «Норму». Прохождение реакции
13


--- стр. 14 ---
говорит о достаточной эффективности экстракции нуклеиновых 
кислот и отсутствии ингибиторов ПЦР.
При отсутствии реакции результат следует считать недосто­
верным, и в этом случае для данного исследуемого образца реко­
мендуется провести повторное выделение ДНК для проведения 
ПЦР-анализа.
Ограничения по использованию анализируемого матери­
ала:
- Для исследования не пригодны образцы плазмы крови, взя­
тые в пробирки с гепарином в качестве антикоагулянта.
- Анализируемый материал не подлежит использованию при 
нарушении условий хранения и транспортировки (температура, 
продолжительность, многократное замораживание-оттаивание).
- Не допускается использование образцов, загрязнённых по­
сторонним биологическим материалом.
- Не брать в работу гемолизированную и хилезную кровь. При 
постановке анализа таких образцов могут получиться недостовер­
ные результаты.
8.3 Условия возможного хранения анализируемых образ­
цов
Полученная ДНК должна храниться при температуре +4°С и 
использоваться для анализа в течение 12 часов.
9. Подготовка компонентов набора для исследования
ВНИМАНИЕ! При работе с ДНК необходимо использовать 
только одноразовые стерильные пластиковые расходные матери­
алы, имеющие специальную маркировку «DNase-free».
Подготовка пробирок для проведения амплификации
Выбор пробирок для амплификации зависит от используемого 
амплификатора. Для внесения в пробирки реагентов, 'проб ДНК и 
контрольных образцов используются одноразовые наконечники с 
фильтрами.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует сме­
шивать непосредственно перед проведением анализа. Смешивать
14


--- стр. 15 ---
реагенты из расчета на необходимое число реакций, включающее 
тестирование исследуемых и контрольных образцов, необходимо 
согласно расчетным таблицам.
1. До начала работы следует полностью разморозить при 
комнатной температуре все реагенты набора и осадить капли с 
крышек пробирок.
2. После размораживания тщательно перемешать содержимое 
пробирок (встряхнув пробирки на вортексе в течение нескольких се­
кунд или же перевернув 10 раз), стряхнуть содержимое пробирок на 
дно на центрифуге.
3. Отобрать необходимое количество пробирок для амплифи­
кации исследуемых и контрольных образцов ДНК. Тип пробирок, 
Стрипов или плашек выбрать в зависимости от используемого при­
бора.
10. Проведение анализа
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
A) ПЦР-амплификация ДНК;
Б) гибридизационно-флуоресцентная детекция продуктов ам­
плификации в режиме «реального времени»;
B) интерпретация результатов (подробно описано в главе 11).
А) ПЦР-амплификация ДНК
(производится в ЗОНЕ ПЦР - помещении для проведения ре­
акции ПЦР-амшшфикации)
Общий объем реакции - 20 мкл.
ВНИМАНИЕ! Запрещено изменять объем реакции. При 
изменении объёма чувствительность метода резко снижается!!!
1. Для приготовления реакционной смеси необходимо в от­
дельных стерильных пробирках смешать из расчета на одну реак­
цию все необходимые компоненты согласно расчетным таблицам. 
Необходимо использовать отдельный наконечник с ^розольным 
барьером для каждого компонента реакции каждой пробы.
2. При работе с малыми объемами вязких жидкостей (таких 
как Taq-полимераза) рекомендуется готовить микс для 5-10 реак-
15


--- стр. 16 ---
ций, чтобы отбирать автоматической пипеткой не менее 1 мкл жид­
кости. Отбирайте из пробирки нужный объем, не опуская наконеч­
ник глубоко в реагент, чтобы не отобрать избыточный объем фер­
мента за счет его попадания на внешнюю поверхность наконечника.
Приготовление реакционных смесей
Тест
Мастефмнкс
Реакционная 
смесь (мкл)
Taq
(мкл)
ОКО
(мкл)
Всего проби­
рок
Н о р м а 4 0,2 5,8 4
d e l 4 0,2 5,8 6
L 8 5 8 R 4 0,2 5,8 6
Т 7 9 0 М 4 0,2 5,8 6
Рекомендуемый порядок расположения реакций
96-луночный планшет
Тест 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 И 12
Н о р м аоко пко-
1к
пко
-10к 01 02 03
d e l око пко-
0,5%
пко
-5% 01 01 01 02 02 02 03 03 03
L 8 5 8 Rоко пко-
0,5%
ПКО
-5% 01 01 01 02 02 02 03 03 03
Т 7 9 0 Моко пко-
0,5%
ПКО
-5% 01 01 01 02 02 02 03 03 03
16
I


--- стр. 17 ---
3. Внести по 10 мкл каждого мастермикса в соответствующие 
лунки согласно рекомендованному порядку размещения реакций.
4. Внести по 10 мкл раствора ОКО в реакции ОКО.
5. Внести по 10 мкл смеси стандартов ПКО в реакции ПКО.
6. Внести по 10 мкл образцов в контрольную и мутационные 
реакции.
7. Заклеить ПЦР-планшет/закрыть пробирки, убедиться, что 
все крышки или пленка прилегают плотно.
8. Открутить ПЦР-планшет/пробирки, чтобы собрать реакци­
онную смесь на дне лунок, сохраняя правильную, ориентацию 
плашки или серии пробирок.
Б) Гибридизационно-флуоресцентная детекция продуктов 
амплификации в режиме «реального времени»
1. Установить пробирки в реакционный модуль прибора для 
ПЦР в «реальном времени». Обратите внимание, что приборы для 
ПЦР в «реальном времени» должны обслуживаться, калиброваться 
и использоваться в соответствии с рекомендациями производителя. 
Использование данного набора в неоткалиброванном приборе мо­
жет оказать влияние на рабочие характеристики теста
2. Запрограммировать прибор для выполнения соответствую­
щей программы амплификации и детекции флуоресцентного сиг­
нала согласно описанию для данного прибора.
17


--- стр. 18 ---
Программа амплификации для приборов 
«ДНК-Т ехнология»
Стадия Температура, °С Время Всего циклов
1 95 2 мин 1
2 94 10 сек
60
3 62 “I:- 60 сек
Программа амплификации для приборов 
других фирм
Стадия Температура, °С Время Всего циклов
1 95 2 мин 1
2 94 10 сек
60
3 60 i] } 60 сек
3. Запустить выполнение программы амплификации с детек­
цией флуоресцентного сигнала на стадии 3.
4. По окончании выполнения программы приступить к ана­
лизу результатов.
18