--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от г. №
копия ВЕРНА
ГЕН.
fyjtal
УТВЕРЖДАЮ
Генеральный директор
. " ' " у/i-QAO «В ит^ Девелопмент Корпорэйшн»
..........
- .у
2011 г.
Е.Н.Схолль-Энгбертс
ИНСТРУКЦИЯ
ч-^^” ?^“®^м?^1^применению набора реагентов для определения концентрации
С-реактивно го белка (СРБ) в сыворотке крови
иммунотурбидиметрическим методом
(СРБ - Витал)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов СРБ-Витал предназначен для количественного определения концентрации С-
реактивного белка (СРБ) в сыворотке крови человека иммунотурбидиметрическим методом в клинико-
диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.
СРБ является неспецифическим белком острой фазы, который секретируется в кровь при
воспалительных процессах различного генеза, за исключением вирусных инфекций. Количественное
определение уровня СРБ в крови имеет важное диагностическое значение, т.к. повышение его
концентрации отражает интенсивность воспалительного процесса, а также используется для
дифференциальной диагностики первичных и вторичных иммунодефицитов и аутоиммунных
заболеваний. Особо важное значение имеет определение концентрации СРБ для дифференциальной
диагностики начальных стадий сердечной патологии, когда даже незначительное повышение уровня СРБ
в крови может свидетельствовать о высоком риске развития кардиологических заболеваний.
Набор рассчитан для проведения 100 или 500 определений при расходе по 500 мкл реагента 1 и 50
мкл реагента 2 на один анализ.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода
Определение основано на методе иммунотурбидиметрического анализа. Исследуемые,
калибровочные и контрольные образцы смешивают с буфером и антисывороткой к СРБ. В результате
иммунологической реакции формируются иммунные комплексы СРБ с соответствующими антителами, и
образуется мутная суспензия, оптическая плотность которой измеряется фотометрически при длине
волны 600 нм. Содержание СРБ в анализируемых образцах прямо пропорционально величине оптической
плотности исследуемых образцов и определяется по калибровочному графику.
2.2. Состав набора:
В состав набора входят следующие компоненты;
- реагент 1; {буфер [натрия фосфат двузамещенный, калия дигидрофосфат; 100 ммоль/л; натрия
хлорид, 154 ммоль/л] pH 7,43; полиэтиленгликоль, 60 г/л; натрия азид, 0,95 г/л}, готов к использованию - 1
флакон (100 мл) или 2 флакона (по 250 мл);
--- стр. 2 ---
ф
ф
- реагент 2: антисыворотка {фосфатный буфер [натрия фосфат двузамещенный, калия
дигидрофосфат; 100 ммоль/л; натрия хлорид, 154 ммоль/л] pH 7,43; козьи поликлональные антитела к СРБ
человека; натрия азид, 0,95 г/л), готов к использованию - 1 флакон (5 мл или 25 мл);
- калибровочные пробы на основе сыворотки крови человека, содержащие 0; 6,0; 12; 48; 120 и 220
мкг/мл СРБ человека; калибровочные пробы откалиброваны по Международному стандартному материалу
BCR-ERM-DA470 (RPPHS/IFCC); готовы к использованию - 6 флаконов (по 0,5 мл);
- контрольная сыворотка на основе сыворотки крови человека с известным содержанием СРБ, готова
к использованию - 1 флакон (0,5 мл).
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Перекрестная реакция используемой антисыворотки к СРБ с другими белками сыворотки крови
человека практически отсутствует.
Линейная область определения концентрации СРБ - в диапазоне концентраций от 6,0 до 220 мкг/мл,
отклонение от «линейности» - не более 8 %,
Чувствительность определения - не более 3,0 мкг/мл.
Коэффициент вариации результатов определений - не более 7 %.
Качество набора может проверяться по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам,
аттестованным данным методом.
Нормальная величина концентрации СРБ в сыворотке крови составляет не более 10 мкг/мл.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон нормальных величин СРБ для обследуемого
контингента людей.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора - класс 2а.
Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.
Реагенты 1 и2 содержат токсичное соединение ~ натрия азид. Следует избегать попадания реагентов
1 и 2 на кожу и слизистые; в случае попадания их на кожу и слизистые необходимо промыть пораженные
участки большим количеством проточной воды.
Меры предосторожности - соблюдение «Правила устройства, техники безопасности,
производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях
(отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения
СССР» (Москва, 1981 г).
При работе с набором необходимо надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к.
кровь человека является потенциально инфицированным материалом, способным длительное время
сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции,
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ,
НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ:
Автоматический (полуавтоматический) биохимический анализатор или спектрофотометр, длина
волны 340 нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм;
пипетки полуавтоматические одноканальные, позволяющие отмерять объемы жидкости 0,03, 0,05
и 0,5 мл;
пробирки вместимостью 3,0-5,0 мл;
перчатки резиновые или пластиковые.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Свежая негемолизированная сыворотка крови человека.
Сыворотку крови следует отделить от форменных элементов не позднее, чем через 1 ч после забора
крови.
--- стр. 3 ---
Образцы сыворотки крови можно хранить при температуре 2-8®С не более 2 сут; при необходимости
более длительного хранения (до 3 мес) - при температуре минус 20°С и ниже. Повторное замораживание
образцов не допускается,
7. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Компоненты набора и исследуемые образцы сыворотки крови выдержать при комнатной температуре
(18-25°С) в течение времени не менее 30 мин.
Реагент 1 , реагент 2, калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к использованию.
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Приготовить и промаркировать соответствующим образом по одной пробирке для каждой
калибровочной пробы, для контрольной (холостой) пробы, для контрольной сыворотки и для каждого
образца анализируемого образца сыворотки крови.
Внести в соответствующие пробирки, кроме пробирки с контрольной (холостой) пробой, по 0,5 мл
реагента 1; в пробирку с контрольной (холостой) пробой внести 0,53 мл реагента 1 . Добавить в
соответствующие пробирки для калибровочных проб и контрольной сыворотки по 0,03 мл калибровочных
проб и контрольной сыворотки, в остальные пробирки - по 0,03 мл исследуемых образцов сыворотки крови.
Тщательно перемешать содержимое пробирок и измерить оптическую плотность (0П|)
калибровочных проб, контрольной сыворотки и анализируемых образцов сыворотки крови против
контрольной (холостой) пробы при длине волны 340 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм при
комнатной температуре (18-25°С).
Добавить во все пробирки по 0,05 мл реагента 2 (антисыворотка), тщательно перемешать пробы,
инкубировать при комнатной температуре в течение 5 мин (точно!), после чего измерить оптическую
плотность (ОП 2) калибровочных проб, контрольной сыворотки и анализируемых образцов сыворотки крови
против контрольной (холостой) пробы при длине волны 340 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм,
9. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Вычислить изменение оптической плотности калибровочных проб (ДОП) по формуле:
Д 0П =0П 2-0П ,
Построить калибровочный график зависимости ОП от концентрации СРБ в калибровочных пробах,
откладывая на оси ординат величины ОП калибровочных проб, а на оси абсцисс - их концентрацию.
Вычислить ДОП=ОП 2 - ОП1 для опытных проб и контрольной сыворотки и определить по калибро
вочному графику содержание СРБ в исследуемых образцах сыворотки крови и в контрольной сыворотке.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Набор должен храниться при температуре 2-8°С в упаковке предприятия-изготовителя в сухом месте
в течение всего срока годности. Допускается хранение набора при температуре до 25°С не более 5 сут.
Замораживание компонентов набора не допускается.
Срок годности набора — 2 года.
Реагент 1, реагент 2, калибровочные пробы и контрольную сыворотку после вскрытия флаконов
можно хранить при температуре 2-8®С в темном месте не более 4 недель.
Для отбора и добавления анализируемых проб и компонентов набора рекомендуется использовать
полуавтоматические одноканальные пипетки, аттестованные на точность по значению средней дозы и
сходимости результатов пипетирования.