Набор реагентов для выявления ДНК Trichomonas vaginalis в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени "Трихомонас вагиналис" по ТУ 9398-007-01058639-2015 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- «УТВЕРЖДАЮ» Генеральный директор ООО «Альфалаб» ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для выявления ДНК Trichomonas vaginalis в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени «Трихомонас вагиналис» ВНИМАНИЕ! Изучите инструкцию перед началом работы --- стр. 2 --- ОГЛАВЛЕНИЕ 1. НАЗНАЧЕНИЕ...................................................................................................................................3 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗДЕЛИЯ...................................................................................................3 2.1. ПРИНЦИП МЕТОДА....................................................................................................................3 2.2. ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ .........................................................................4 2.3. СОСТАВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ................................................................................................4 2.4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ..............................................................................5 3. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ....................................................................................................6 4. ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И МАТЕРИАЛЫ....................................................................6 5. ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.....................................................................................................8 6. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ................................................................................................8 6.1. ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА................................................8 6.2. ПЦР-АМПЛИФИКАЦИЯ.............................................................................................................. 8 6.3. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ................................................................................................9 6.4. АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ...................................................................9 7. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ НАБОРА .........................................11 8. УКАЗАНИЯ ПО УТИЛИЗАЦИИ ............................... 11 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ..................................................................................................................12 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ..............................................12 2 --- стр. 3 --- 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов «Трихомонас вагиналис» предназначен для качественного обнаружения ДНК Trichomonas vaginalis в образцах биоматериала человека методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией результатов амплификации в режиме реального времени. Набор предназначен для выявления ДНК Trichomonas vaginalis - возбудителя урогенитального трихомониаза - наиболее распространенной инфекции, передаваемой половым путем (ИППП). Trichomonas vaginalis - простейший одноклеточный паразит. Материалом для исследования являются мазки из урогенитального тракта человека. Область применения набора - клиническая лабораторная диагностика, научные исследования. Только для исследований in vitro. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗДЕЛИЯ 2.1. ПРИНЦИП МЕТОДА Анализ образцов включает следующие этапы: 1. Пробоподготовка (выделение ДНК из образцов клинического материала); 2. Амплификация специфических фрагментов ДНК в ходе ПЦР-реакции; 3. Детекция продуктов амплификации в режиме реального времени. В процессе реакции происходит амплификация фрагмента ДНК Trichomonas vaginalis (при условии наличия указанного микроорганизма в исходном клиническом материале) и амплификация фрагмента гена В-глобина человека (что служит в качестве контроля взятия биологического материала). Для амплификации специфического участка ДНК используются олигонуклеотиды и флуоресцентно меченные олигонуклеотидные зонды Taqman. В присутствии фермента Taq-полимеразы происходит гибридизация олигонуклеотидов и зонда с комплементарным участком ДНК-мишени. Образование специфического продукта амплификации сопровождается отщеплением флуоресцентной метки (благодаря наличию у Taq-полимеразы 5’- экзонуклеазной активности) и появлением детектируемого флуоресцентного сигнала, регистрация которого проводится в режиме реального времени. Олигонуклеотидные зонды, используемые для детекции ДНК Trichomonas vaginalis и детекции фрагмента ДНК человека (внутренний контроль) имеют флуоресцентные метки с разными спектрами поглощения и испускания, что позволяет проводить одновременную регистрацию флуоресценции по двум каналам (FAM и HEX). Интенсивность 3 --- стр. 4 --- флуоресценции прямо пропорциональна количеству продуктов амплификации и, следовательно, нарастает с каждым последующим циклом. Набор предназначен для использования на амплификаторах детектирующих для постановки полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (MiniOpticon, BioRad; ДТ-96, ДНК-технология или другие амплификаторы с аналогичными техническими характеристиками). 2.2. ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ Набор реагентов «Трихомонас вагиналис» выпускается в четырех различных вариантах комплектации, которые отличаются по количеству определений, на которое рассчитан набор (48/96), и типу пробирок со смесью для амплификации (пробирки/стрипы): 1) комплект на 48 определений, смесь для амплификации в пробирках; 2) комплект на 48 определений, смесь для амплификации в стрипах; 3) комплект на 96 определений, смесь для амплификации в пробирках; 4) комплект на 96 определений, смесь для амплификации в стрипах; 2.3. СОСТАВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ На 48 определений: Компонент набора Описание Объем, мкл Количество Смесь для амплификации Прозрачная бесцветная жидкость 10,0 48 пробирок объемом 0,2 мл или 6 стрипов по 8 пробирок объемом 0,2 мл каждая Раствор Taq-полимеразы Прозрачная жидкость 300,0 2 пробирки объемом 0,6 мл Положительный контрольный образец (ПКО) Прозрачная жидкость 75,0 1 пробирка объемом 0,5 мл Отрицательный контрольный образец (ОКО) Прозрачная жидкость 150,0 1 пробирка объемом 0,5 мл Комплект на 48 определений позволяет провести анализ 48-ми образцов, включая положительный и отрицательный контрольные образцы. 4 --- стр. 5 --- На 96 определений: I Компонент набора Описание Объем, мкл Количество Смесь для амплификации Прозрачная бесцветная жидкость 10,0 96 пробирок объемом 0,2 мл или 6 стрипов по 8 пробирок объемом 0,2 мл каждая Раствор Taq-полимеразы Прозрачная жидкость 300,0 4 пробирки объемом 0,6 мл Положительный контрольный образец (ПКО) Прозрачная жидкость 75,0 2 пробирки объемом 0,5 мл Отрицательный контрольный образец (ОКО) Прозрачная жидкость 150,0 2 пробирки объемом 0,5 мл Комплект на 96 определений позволяет провести анализ 96-ти образцов, включая положительный и отрицательный контрольные образцы. , 2.4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Аналитическая чувствительность. Нижний предел аналитической чувствительности набора реагентов - 1000 копий/мл. Для определения аналитической чувствительности используют контрольные образцы предприятия (КОП), представляющие собой полученные методом генной инженерии образцы плазмидной ДНК со встроенным фрагментом, специфичным для ДНК детектируемого микроорганизма. Концентрацию КОП-1 измеряют спектрофотометрически на приборе NanoDrop2000. Аналитическая специфичность. Аналитическая специфичность набора «Трихомонас вагиналис» подтверждена отсутствием регистрации экспоненциального роста флуоресцентного сигнала по каналу FAM в отрицательных контрольных образцах. Специфичность анализа при постановке теста с применением набора «Трихомонас вагиналис» доказана методом секвенирования продуктов амплификации и подтверждена отсутствием неспецифических перекрестных реакций при тестировании образцов ДНК человека и панели образцов ДНК микроорганизмов, являющихся представителями нормальной микрофлоры урогенитального тракта, условно-патогенной и патогенной флоры (Lactobacillus spp, Escherichia coli, Gardnerella vaginalis, Candida albicans, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis). --- стр. 6 --- Диагностическая чувствительность набора реагентов составляет не менее 98 % (при расчете по формуле Бернулли с доверительной вероятностью 90%) и подтверждается в ходе клинических испытаний на выборке клинических образцов. Диагностическая специфичность набора реагентов рассчитывается на основе данных, полученных в ходе клинических испытаний на выборке клинических образцов; расчёт показателя производится по формуле Бернулли с доверительной вероятностью 90%. 3. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 3.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 России от 06.06.2012 №4н). 3.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. 3.3. Меры предосторожности - соблюдение правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот, при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». 3.4. Утилизация отходов производится в соответствии с СанПиН N2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами», сбор отходов осуществляется в одноразовые пакеты желтого цвета, предназначенные для утилизации медицинских отходов класса Б (ГОСТ Р 50962-96). 4. ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И МАТЕРИАЛЫ 1-й этап - выделение ДНК из клинического материала ВНИМАНИЕ! Комплект реагентов для выделения ДНК из биологического материала не входит в состав набора Для выделения ДНК из клинических образцов используются комплекты реагентов, рекомендованные для использования в клинической лабораторной диагностике при анализе мазков из урогенитального тракта («ДНК-сорб-АМ», ООО «Некст-Био», Россия), «ЭДЭМ», НТК «Диаэм», Россия) и другие аналогичные комплекты реагентов). Экстракцию ДНК проводят согласно инструкции производителя набора. Н е о б х о д и м о е об о руд ован и е: ламинарный бокс 2-го класса защиты; - центрифуга для пробирок вместимостью 1,5 мл на 3000 - 12000 об/мин; 6 --- стр. 8 --- 5. ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА Взятие, транспортирование и хранение исследуемого материала должно проводиться в строгом соответствии с методическими рекомендациями «Взятие, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики», разработанными ФБГУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Москва, 2012 г. Материалом для исследования являются мазки из урогенитального тракта человека. Максимальный срок хранения образцов биоматериала не более 24 часов при 4 - 8°С. 6. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 6Л. ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА Для экстракции (выделения) ДНК из клинических образцов используются комплекты реагентов, рекомендованные для использования в клинической лабораторной диагностике («ДНК-сорб-АМ», ООО «Некст-Био», Россия; «ЭДЭМ», НТК «Диаэм», Россия и другие аналогичные комплекты реагентов). Экстракцию ДНК проводят согласно инструкции, прилагаемой к набору для выделения ДНК. 6.2. ПЦР-АМПЛИФИКАЦИЯ Общий объём реакционной смеси - 25 мкл, включая объём пробы ДНК - 5 мкл. 6.2.1. В штатив поставить необходимое количество пробирок/стрипов со смесью для амплификации (в соответствии с количеством проб и две пробирки для ПКО и ОКО); 6.2.2. В каждую пробирку, не повреждая слой воска, внести по 10 мкл тщательно перемешанного раствора Taq-полимеразы; 6.2.3.Закрыть крышки пробирок; 6.2.4. Поочередно открывая крышки пробирок внести в пробирки: 6.2.4.1. В одну из подготовленных пробирок внести 5 мкл ОКО; 6.2.4.2. В пробирки, предназначенные для анализа образцов, поочередно внести по 5 мкл анализируемых проб; 8 --- стр. 9 --- 6.2.4.3. В оставшуюся пробирку внести 5 мкл ПКО. 6.2.5. Установить все пробирки в блок детектирующего амплификатора; 6.2.6. Запустить программу амплификации в соответствии с параметрами, указанными в таблице 1. Внимание! Для предотвращения контаминации при внесении в пробирки реагентов, образцов ДНК и контрольных образцов рекомендуется использовать только одноразовые наконечники с аэрозольными фильтрами. Таблица 1 - Условия проведения амплификации и детекции результатов Программа амплификации Температура Время Количество циклов 94°С 15 мин 1 94°С 20 сек 4558°С 20 сек 72°С 10 сек 10°С - хранение Детекция флуоресцентного сигнала Специфический продукт FAM Внутренний контроль HEX 6.3. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ Детекция продуктов амплификации проводится в режиме реального времени с использованием детектирующего ПЦР-амплификатора согласно инструкции к прибору: по каналу FAM регистрируется сигнал о накоплении продукта амплификации фрагмента ДНК Trichomonas vaginalis; - по каналу HEX регистрируется сигнал о накоплении продукта амплификации фрагмента гена В-глобина человека (используется в качестве контроля взятия материала). 6.4. АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ 6.4.1. Анализ результатов проводят с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР с детекцией в режиме реального времени. Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции на соответствующем канале с пороговой 9 --- стр. 10 --- линией, что определяет наличие (или отсутствие) для данной пробы значения порогового цикла Ct. Анализируемая проба считается положительной, если: график нарастания флуоресценции имеет форму экспоненциальной кривой; для пробы определено значение порогового цикла Ct; кривая флуоресценции пересекает пороговую линию на участке экпоненциального роста. 6.4.2. Принцип интерпретации: Учет результатов следует начинать с результатов амплификации положительного (ПКО) и отрицательного контрольных (ОКО) образцов. 6.4.2.1. Результаты анализа не учитываются, если: Во время прохождения реакции детектирующий амплификатор не регистрирует экспоненциальный рост уровня флуоресценции по каналам FAM и HEX в пробирке с ПКО; в данной ситуации необходимо повторное исследование всех образцов; Во время прохождения реакции детектирующий амплификатор не регистрирует экспоненциальный рост уровня флуоресценции по одному из каналов в пробирке с ПКО; в данной ситуации необходимо повторное исследование всех образцов; В пробирке с ОКО регистрируется экспоненциальный рост уровня флуоресценции по одному из каналов, либо по всем каналам флуоресценции. Необходимо принятие мер для устранения контаминации в ПЦР- лаборатории и повторное исследование всех образцов. В пробирке с ПКО регистрируется экспоненциальный рост уровня флуоресценции по каналам FAM и HEX; в пробирке с ОКО не регистрируется рост уровня флуоресценции по каналам FAM и HEX; в пробирке с анализируемым образцом не регистрируется рост уровня флуоресценции по каналу HEX; для такого образца процедура исследования должна быть проведена повторно, начиная со стадии выделения ДНК. При повторении результата делается вывод о плохом качестве взятия клинического материала, образец должен быть взят повторно. 6.4.2.2. Результаты анализа учитываются, если: Во время прохождения амплификации регистрируется экспоненциальный рост уровня флуоресценции по каналам FAM и HEX в пробирке с положительным контрольным образцом; 10