Набор реагентов для определения активности низкомолекулярного гепарина (Ренапарин-тест) по ТУ 9398-033-05595541-2010 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДЕНА п р и к азом Р о сзд р а в н а д зо р а о т « » 2 0 1 0 2 0 1 0 г. «УТВЕРЖДАЮ» № ИНСТРУКЦИЯ по применению Набора реагентов для определения активности низкомолекулярного гепарина (Ренапарин-тест) 1. НАЗНАЧЕНИЕ Н а б о р р еа ген т о в для о п р ед ел ен и я а к ти в н ости н и зк о м о л ек у л я р н о го геп ар и на (Р ен а п а р и н -т ест ) п р ед н а зн а ч ен для к о л и ч ест в ен н о г о о п р ед ел ен и я ан ти -Х а и ан ти -П а ак ти в н ости в п р еп а р а та х и су б ст а н ц и я х н и зк о м о л ек у л я р н о го геп ари н а (Н М Г ) с и сп о л ь зо в а н и ем х р о м о г е н н ы х су б ст р а т о в . О п р е д е л е н и е и н ги б и р о в а н и я а к ти в н ости ф а к тор ов Х а и На является н а и б о л ее ч ув ств и тел ьн ы м и и н ф ор м ати в н ы м для о п р ед ел ен и я ак ти в н ости Н М Г . О д и н н а б о р п р ед н а зн а ч ен для п р о в ед ен и я 10 0 м и к р о а н а л и зо в при р а с х о д е 4 0 мкл ф ак тор а Х а и ф ак тор а П а н а о д н о о п р е д е л е н и е и л и 5 0 м ак р оан ал и зов при р а с х о д е 8 0 мкл ф ак тор а Х а и ф ак тор а Н а на о д н о о п р е д е л е н и е . 2.1. Принцип действия М е т о д о п р е д е л е н и я а к ти в н ости Н М Г о сн о в а н н а с п о с о б н о с т и к ом п л ек са ан т и тр о м б и н Ш -геп а р и н (А Т Ш -Н М Г ) н ей тр ал и зов ать ак ти в и ров ан н ы е ф акторы Х а А к ти в н о ст ь Н М Г в п р еп а р а та х и су б ст а н ц и я х о п р ед ел я ю т , добавляя к ним и збы ток ан ти ф ак тор а Н а III и ф ак тор а Х а и л и На. П р и эт о м п р о и с х о д и т и н ги б и р о вание ф ак тор ов Х а и л и Н а к о м п л ек со м А Т Ш -Н М Г п р о п о р ц и о н а л ь н о к ол и честву Н М Г в п р еп ар ате и л и су б ст а н ц и и . О ста в ш ееся к о л и ч ест в о ф ак тор а Х а или На ка та л и зи р у ет о т щ е п л е н и е п а р ан и тр оан и л и н а (p N A ) о т си н т е т и ч ес к и х х р о м о ген н ы х су б ст р а т о в . А б с о р б ц и я с в о б о д н о г о p N A , о п р ед ел я ем а я п р и д л и н е волны 4 0 5 нм, о б р а т н о п р о п о р ц и о н а л ь н а а н т и -Х а или ан ти -И а ак ти в н остя м Н М Г . П р о ц е с с и д е т п о с л ед у ю щ и м сх ем а м : 1. П р и о п р е д е л е н и и а н т и -Х а ак ти в н ости Н М Г : A T III (и зб ы то к ) + Н М Г = = > А Т Ш -Н М Г . А Т Ш -Н М Г + ф ак тор Х а (и зб ы т о к ) => A T III-Н М Г -Х а + ф а к т о р Х а (остаток ). Ф актор Х а (о ст а т о к ) + ф ак тор Х а -С у б ст р а т -p N A => П е п т и д + p N A . 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА и На. --- стр. 2 --- 2. П р и о п р е д е л е н и и ан ти -П а а к ти в н ости Н М Г : А Л И (и зб ы т о к ) + Н М Г => А Т Ш -Н М Г . А Т Ш -Н М Г + ф ак тор П а (и зб ы т о к ) => А Т Ш -Н М Г -П а + ф а к то р П а (остаток ). Ф актор П а (о ст а т о к ) + ф ак тор П а -С у б стр а т-p N A => П е п т и д + p N A . 2.2. Состав набора В со ст а в н а б о р а в х о д я т сл е д у ю щ и е к ом п он ен ты : 1. А н т и т р о м б и н III (1 M E /ф л а к о н ), л и о ф и л ь н о в ы су ш ен н ы й - 3 ф лакона. 2. Ф актор Х а (1 5 н к а т/ф л ак он ), л и о ф и л ь н о в ы су ш ен н ы й - 1 ф лакон. 3. Ф актор П а (т р о м б и н ) (2 0 M E /ф л а к о н ), л и о ф и л ь н о в ы су ш ен н ы й - 1 ф лакон. 4. Х р о м о г ен н ы й су б ст р а т дл я ф ак тор а Х а , л и о ф и л ь н о вы суш ен н ы й - 2 ф лакона. 5. Х р о м о г ен н ы й су б ст р а т для ф ак тор а П а, л и о ф и л ь н о вы суш ен н ы й - 2 ф лакона. 6. Р а б о ч и й ст а н д а р т н ы й о б р а зе ц Н М Г (Р С О Н М Г ) - 1 ф л ак он . 7. Б уф ер н ы й р а ств о р т р и с -H C L , к он ц ен тр и р о в а н н ы й - 1 ф л ак он (5 ,0 м л). 8. Б ы чий сы в о р о т о ч н ы й ал ь б у м и н (Б С А ) - 1 ф л ак он (1 ,0 г). 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Л и н ей н о ст ь о п р ед ел я ем ы х зн а ч ен и й а н т и -Х а а к ти в н ости Н М Г для к и н ети ч еск о го м е т о д а - в д и а п а зо н е о т 0 ,1 5 д о 0 ,0 2 5 M E /м л , дл я м ет о д а п о о д н о й точ к е - в д и а п а зо н е о т 0 ,2 д о 0 ,0 4 M E /м л , о т к л о н ен и е от л и н ей н о ст и - н е б о л е е 10% . Л и н ей н о ст ь о п р ед ел я ем ы х зн а ч ен и й ан ти -П а а к ти в н ости Н М Г для к и н ети ч еск о го м е т о д а - в д и а п а зо н е о т 0 ,0 5 д о 0 ,0 1 M E /м л , дл я м е т о д а п о о д н о й точ к е - в д и а п а зо н е о т 0 ,0 5 д о 0 ,0 1 5 M E /м л , о т к л о н ен и е о т л и н ей н о ст и - н е б о л е е 10%. К о эф ф и ц и ен т вар и ац и и р езу л ь та т о в о п р ед ел ен и я а н т и -Х а и анти-П а актив н о сти Н М Г - н е б о л е е 10% . Ч у в ств и тел ь н о сть о п р ед ел ен и я а н т и -Х а а к ти в н ости - н е б о л е е 0 ,0 5 М Е /м л. Ч у в ств и тел ь н о сть о п р ед ел ен и я ан ти -П а а к ти в н ости - н е б о л е е 0,01 М Е /м л. Д о п у ст и м ы й р а зб р о с р езу л ь та т о в п р и и сп о л ь зо в а н и и р а зн ы х н а б о р о в о д н о й сер и и - н е б о л е е 10% . 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 4 .1 . П о тен ц и а л ь н ы й р и ск п р и м ен ен и я н а б о р а - к л асс 2а. 4 .2 . П р и р а б о т е с н а б о р о м с л е д у е т н адев ать о д н о р а зо в ы е р ези н о в ы е или п ласти к овы е п ер ч атк и , т.к. в со ст а в н а б о р а в х о д я т к о м п о н ен ты крови человек а, к оторы е с л е д у е т р ассм атр и в ать как п о т ен ц и а л ь н о и н ф и ц и р о в а н н ы е, сп о со б н ы е д л и т ел ь н о е врем я со х р а н я ть и п ер едав ать В И Ч , в и р у с геп ати та или л ю б о й д р у го й в о зб у д и т ел ь в и р у сн о й и н ф ек ц и и . 4 .3 . М ер ы п р е д о с т о р о ж н о с т и при р а б о т е с н а б о р о м - с о б л ю д е н и е «П равил у стр ой ст в а, т ех н и к и б е з о п а с н о с т и , п р о и зв о д ст в ен н о й са н и тар и и , п р о т и в о эп и д е м и ч еск о го р е ж и м а и л и ч н о й ги ги ен ы п р и р а б о т е в л а б о р а т о р и я х (о т д ел ен и я х , о т д ел а х ) са н и т а р н о -э п и д ем и о л о г и ч еск и х у ч р е ж д е н и й си ст ем ы М и н и ст ер ст в а зд р а в о о х р а н ен и я С С С Р » (М о ск в а , 1981 г.). --- стр. 3 --- 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ - А в т о м а т и ч еск и й к о а гу л о м ет р с н а б о р о м п л а сти к о в ы х кю вет; - сп ек т р о ф о т о м ет р для ск ан и р ован и я 9 6 -л у н о ч н ы х п л ан ш етов ти п а М ул ь тискан; - т ер м о ш ей к ер дл я 9 6 -л у н о ч н ы х п л ан ш етов , п о д д е р ж и в а ю щ и й тем п ер а т у ру 37°С; - весы ан ал и ти ч еск и е; - м еш алк а м агн и тн ая; - п и п етк и п о л у а в т о м а т и ч еск и е о дн о к а н а л ь н ы е п ер е м е н н о г о о б ъ ем а , п о зв о л я ю щ и е от б и р а ть о б ъ ем ы ж и д к о ст и 5 -5 0 мкл; 2 0 -2 0 0 мкл; 2 0 0 -1 0 0 0 мкл; - п и п етк и п о л у а в т о м а т и ч еск и е м н огок ан ал ь н ы е п е р е м е н н о г о о б ъ ем а , п о зв о л я ю щ и е о тб и р а ть о б ъ ем ы ж и д к о ст и 5 -5 0 м кл и 2 0 -2 0 0 мкл; - м ер н ы е к ол бы в м ест и м о ст ь ю 10 м л, к л асс т о ч н о ст и 1 -1 0 0 -2 ; - м ер н ая к о л б а в м ест и м о ст ь ю 2 5 м л, класс т о ч н о ст и 1 -1 0 0 -2 ; - м ер н ая к о л б а в м ест и м о ст ь ю 100 м л, к л асс т о ч н о ст и 1 -1 0 0 -2 ; - м ер н ая к о л б а в м ест и м о ст ь ю 2 5 0 м л, к л асс т о ч н о ст и 1 -1 0 0 -2 ; - п р о б и р к и п л асти к ов ы е с кры ш кам и в м ест и м о ст ь ю 1,5 и 3 ,0 мл; - п р о б и р к и п л асти к ов ы е с кры ш кам и в м е ст и м о ст ь ю 10 мл; - 9 6 -л у н о ч н ы е п ланш еты ; - в о д а ди ст и л л и р ов ан н ая ; - к и сл ота у к су сн а я л едян ая; - п ер чатк и р ези н о в ы е и л и п л асти к овы е. 6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ Д ля ан ал и за и сп о л ь зу ю т го т о в у ю л ек а р ст в ен н у ю ф о р м у п р еп ар ата Н М Г или су б ст а н ц и ю Н М Г , р а зв е д е н н у ю р а б о ч и м б у ф ер н ы м р а ст в о р о м д о активности п р и б л и зи тел ь н о 0,1 М Е /м л а н т и -Х а и 0 ,0 5 М Е /м л ан ти -И а. 7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА А н а л и з а н т и -Х а и ан ти -П а а к ти в н ости в п р еп а р а т е или су б ст а н ц и и Н М Г м о ж н о п р о в ест и и л и к и н ети ч еск и м м е т о д о м с п р и м ен ен и ем ав т ом ати ч еск ого коа- гул ом етр а, и л и п о к о н еч н о й т оч к е с п р и м ен ен и ем ск а н и р у ю щ его сп ек т р о ф о т о м етра. --- стр. 5 --- 5 Раствор хромогенного субстрата для фактора Ха. В один флакон с хромогенным субстратом для фактора Ха внести 6,0 мл дистиллированной воды и растворить содержимое при комнатной температуре (18-25°С) при осторожном покачивании. Реагент готов к проведению анализа че рез 15 мин после растворения. Раствор РСО НМГ Во флакон с лиофильно высушенным РСО НМГ внести 1,0 мл дистиллиро ванной воды и растворить содержимое при комнатной температуре и при осто рожном покачивании. Полученный раствор имеет активность 10,6 ME/мл анти-Ха и 3,1 ME/мл анти-Иа. Реагент готов к проведению анализа через 15 мин после рас- С 7.1.3. Построение калибровочных графиков 7.1.З.1. Калибровочный график для определения анти-Ха активности Приготовить серию разведений РСО НМГ с активностью 10,6 ME/мл анти- С 7.1.З.2. Калибровочный график для определения анти-П активности Приготовить серию разведений РСО НМГ с активностью 3,1 ME/мл анти-На по следующей схеме: Ха по следующей схеме: Разведение Реагенты ^ в 7,5 раз 1,413 МЕ/мл анти-Ха в 75 раз 0,141 МЕ/мл анти-Ха в 1 1 2 раз 0,094 МЕ/мл анти-Ха в 168,75 раз 0,063 МЕ/мл анти-Ха в 253,125 раз 0,042 МЕ/мл анти-Ха в 379,68 раз 0,028 МЕ/мл анти-Ха РСО НМГ, мл 0 , 1 - - - - - Рабочий буферный раствор, мл 0,65 1 , 8 0,5 0,5 0,5 0,5 Перемешать и перенести в следую щую про бирку 0 , 2 1 , 0 1 , 0 1 , 0 1 , 0 творения. ______________________7.1.2. Стабильность реагентов Реагенты 2-8°С 18-25и С -40и С Раствор антитромбина III 3 сут 1 сут 6 мес Раствор фактора Ха 3 сут 1 сут 6 мес Раствор фактора На 3 сут 1 сут 6 мес Растворы хромогенных субстратов 1 0 сут 2 сут 6 мес Рабочий буферный раствор 7 сут 8 ч - Раствор РСО НМГ 1 сут 1 сут 3 мес --- стр. 6 --- 6 Разведение Реагенты ^ в 7,5 раз 0,413 МЕ/мл анти-Иа в 75 раз 0,041 МЕ/мл анти-Иа в 112 раз 0,028 МЕ/мл анти-Иа в 168,75 раз 0,018 МЕ/мл анти-Иа в 253,125 раз 0,012 МЕ/мл анти-Иа в 379,68 раз 0,008 МЕ/мл анти-Па РСО НМГ, мл од - - - - - Рабочий буферный раствор, мл 0,65 1,8 0,5 0,5 0,5 0,5 Перемешать и перенести в следую щую про бирку 0,2 1,0 1,0 1,0 1,0 В пяти последних разведенных образцах обоих графиков провести опреде ление оптической плотности по методу, описанному ниже. Построить 2 калибровочных графика, на которых по оси абсцисс (линейной) отложить величины, соответствующие оптическим плотностям, а по оси ординат (логарифмической) - соответствующие анти-Ха или анти-Па активности РСО НМГ. Провести линии калибровочных графиков, которые в выбранных координа тах должны представлять собой прямые линии в диапазоне анти-Ха активности от 0,15 до 0,025 ME/мл или анти-Па активности от 0,05 до 0,01 ME/мл. Коэффици енты корреляции линии графиков не должны быть ниже 0,98. 7.1.4. Метод определения анти-Ха и анти-П активности Внести в программу автоматического коагулометра следующие параметры: - количество раствора АТ III - 40 мкл; - количество разведенного раствора РСО НМГ (калибровочный график) или исследуемого разведенного образца препарата (субстанции) НМГ - 40 мкл; - количество раствора фактора Ха или фактора На - 80 мкл; - время экспозиции - 2 мин; - количество хромогенного субстрата для исследования анти-Ха активности или анти-Иа активности - 90 мкл; - температура проведения реакции - 37°С; - время реакции - 90 сек; - число измерений - 2 . Внести в кюветы автоматического коагулометра все приготовленные рас творы (из пп. 6 и 7.1.1). При длине волны 405 нм и при температуре 37°С провести кинетическое измерение оптической плотности разведенных растворов РСО НМГ (калибровоч ный график) или разведенных растворов исследуемого препарата (субстанции) НМГ. --- стр. 7 --- По калибровочным графикам определить искомую активность препарата (субстанции) НМГ. 7.2. АНАЛИЗ ПО КОНЕЧНОЙ ТОЧКЕ 7.2.1. Приготовление реагентов 70% раствор кислоты уксусной. В мерную колбу вместимостью 100 мл внести 20 мл дистиллиролванной во ды, 70 мл кислоты уксусной ледяной, довести объем до метки дистиллированной водой и перемешать. Раствор можно хранить при комнатной температуре (18-25°С) не более 3 мес. Все остальные реагенты готовить так, как это описано в п. 7.1.1. 7.2.2. Приготовление серии разведений РСО НМГ 200 мкл раствора РСО НМГ с активностью 10,6 ME/мл анти-Ха и 3,1 МЕ/мл анти-Иа поместить в мерную колбу вместимостью 10 мл. Добавить до метки ра бочий буферный раствор и перемешать (раствор препарата сравнения Si; анти-Ха активность - 0,212 МЕ/мл, анти-Па активность - 0,062 МЕ/мл). 1.0 мл раствора Si поместить в пробирку вместимостью 1,5 мл. Добавить 0,5 мл рабочего буферного раствора и перемешать (раствор препарата сравнения S 2 ; анти-Ха активность - 0,141 МЕ/мл, анти-Па активность - 0,041 МЕ/мл). 1.0 мл раствора S 2 поместить в пробирку вместимостью 1,5 мл. Добавить 0,5 мл рабочего буферного раствора и перемешать (раствор препарата сравнения S 3 ; анти-Ха активность - 0,094 МЕ/мл, анти-Иа активность - 0,0277 МЕ/мл) 1.0 мл раствора S 3 поместить в пробирку вместимостью 1,5 мл. Добавить 0,5 мл рабочего буферного раствора и перемешать (раствор препарата сравнения S 4 ; анти Ха активность - 0,0628 МЕ/мл, анти-На активность - 0,0184 МЕ/мл). 1.0 мл раствора S 4 поместить в пробирку вместимостью 1,5 мл. Добавить 0,5 мл рабочего буферного раствора и перемешать (раствор препарата сравнения S 5; анти-Ха активность - 0,0418 МЕ/мл, анти-Иа активность - 0,0123 МЕ/мл). 1.0 мл раствора S 5 поместить в пробирку вместимостью 1,5 мл. Добавить 0,5 мл рабочего буферного раствора и перемешать (раствор препарата сравнения S e , анти-Ха активность - 0,0278 МЕ/мл, анти-Иа активность - 0,0082 МЕ/мл). Растворы Si - Sö использовать сразу после приготовления. 7.2.3. Приготовление серии разведений исследуемого препарата НМГ. В мерную колбу вместимостью 10 мл внести 9,0 мл дистиллированной во ды, 100 мкл препарата (или субстанции) НМГ, перемешать и довести дистиллиро ванной водой до метки (раствор 1 ). В мерную колбу вместимостью 10 мл внести 9,0 мл дистиллированной во ды, 1 0 0 мкл раствора 1 , перемешать и довести дистиллированной водой до метки (раствор 2 ). 200 мкл раствора 2 поместить в пробирку вместимостью 3,0 мл. Добавить 1 , 8 мл рабочего буферного раствора и перемешать (раствор исследуемого препа рата НМГ Ti 5 рассчитанная активность препарата НМГ около 0,1 МЕ/мл).