Набор реагентов для выявления ДНК Neisseria gonorrhoeae в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени "Гонорея-тест" по ТУ 9398-014-01058639-2015 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДАЮ Г енеральный директор ООО «Альфалаб» .А.Суворова 2017г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для выявления ДНК Neisseria gonorrhoeae в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени «Г онорея-тест» ВНИМАНИЕ! Изучите инструкцию перед началом работы --- стр. 2 --- ОГЛАВЛЕНИЕ 1. НАЗНАЧЕНИЕ.........................................................................................................................3 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗДЕЛИЯ............................................................................................3 2.1. ПРИНЦИП МЕТОДА...........................................................................................................3 2.2. ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ....................................................................4 2.3. СОСТАВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ........................................................................................4 2.4. АНАЛР1ТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.......................................................................5 3. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ...........................................................................................6 4. ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И МАТЕРИАЛЫ..............................................................6 5. ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА............................................................................................8 6. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ........................................................................................8 6.1. ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА............................................8 f 6.2. ПЦР-АМПЛИФИКАЦИЯ.....................................................................................................8 6.3. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ........................................................................................9 6.4. АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ............................................................10 7. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ НАБОРА......................................11 8. УКАЗАНИЯ ПО УТИЛИЗАЦИИ.......................................................... 12 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ........................................................................................................13 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ...........................................13 --- стр. 3 --- Набор реагентов «Гонорея-тест» предназначен для обнаружения ДНК Neisseria gonorrhoeae (возбудителя гонококковой инфекции) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией результатов амплификации в режиме реального времени. Материалом для исследования являются мазки из урогенитального тракта человека. Гонорея относится к группе инфекций, передаваемых половым путем (ИППП). Neisseria gonorrhoeae - грамотрицательные диплококки бобовидной формы; заражение гонококковой инфекцией преимущественно происходит при половом контакте. Область применения набора - клиническая лабораторная диагностика, научные исследования. Только для исследований in vitro. 1. НАЗНАЧЕНИЕ 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗДЕЛИЯ 2Л. ПРИНЦИП МЕТОДА Анализ образцов включает следующие этапы: 1. Пробоподготовка (выделение ДНК из образцов клинического материала); 2. Амплификация специфических фрагментов ДНК в ходе ПЦР-реакции; 3. Детекция продуктов амплификации в режиме реального времени. В процессе ПЦР-реакции происходит амплификация фрагмента ДНК Neisseria gonorrhoeae (при условии наличия указанного микроорганизма в исходном клиническом материале) и амплификация фрагмента гена В-глобина человека (что служит в качестве контроля взятия биологического материала). Для амплификации специфического участка ДНК используются олигонуклеотиды и флуоресцентно меченные олигонуклеотидные зонды Taqman. В присутствии фермента Taq-полимеразы происходит гибридизация олигонуклеотидов и зонда с комплементарным участком ДНК-мишени. Образование специфического продукта амплификации сопровождается отщеплением флуоресцентной метки (благодаря наличию у Taq-полимеразы 5’- экзонуклеазной активности) и появлением детектируемого флуоресцентного сигнала, регистрация которого проводится в режиме реального времени. Олигонуклеотидные зонды, используемые для детекции ДНК Neisseria gonorrhoeae и детекции фрагмента ДНК человека (внутренний контроль), имеют флуоресцентные метки с разными спектрами поглощения и испускания, что позволяет проводить одновременную 3 --- стр. 4 --- регистрацию флуоресценции по двум каналам (FAM и HEX). Интенсивность флуоресценции прямо пропорциональна количеству продуктов амплификации и, следовательно, нарастает с каждым последующим циклом. Набор реагентов предназначен для использования на амплификаторах детектирующих для постановки полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (MiniOpticon, BioRad; ДТ-96, ДНК-технология или другие амплификаторы с аналогичными техническими характеристиками). 2.2. ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ Набор реагентов «Гонорея-тест» выпускается в четырех различных вариантах комплектации, которые отличаются по количеству определений, на которое рассчитан набор (48/96), и типу пробирок со смесью для амплификации (пробирки/стрипы): 1) комплект на 48 определений, смесь для амплификации в пробирках; 2) комплект на 48 определений, смесь для амплификации в стрипах; 3) комплект на 96 определений, смесь для амплификации в пробирках; 4) комплект на 96 определений, смесь для амплификации в стрипах; 2.3. СОСТАВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ На 48 определений: Компонент набора реагентов Описание Объем, мкл Количество Смесь для амплификации Прозрачная бесцветная жидкость 10,0 48 пробирок объемом 0,2 мл или 6 стрипов по 8 пробирок объемом 0,2 мл каждая Раствор Taq-полимеразы Прозрачная жидкость 300,0 2 пробирки объемом 0,6 мл Положительный контрольный образец (ПКО) Прозрачная жидкость 75,0 1 пробирка объемом 0,5 мл Отрицательный контрольный образец (ОКО) Прозрачная жидкость 150,0 1 пробирка объемом 0,5 мл • Комплект на 48 определений позволяет провести анализ 48-ми образцов, включая положительный и отрицательный контрольные образцы. --- стр. 5 --- На 96 определений: Компонент набора реагентов Описание Объем, мкл Количество Смесь для амплификации Прозрачная бесцветная жидкость 10,0 96 пробирок объемом 0,2 мл или 6 стрипов по 8 пробирок объемом 0,2 мл каждая Раствор Taq-полимеразы Прозрачная жидкость 300,0 4 пробирки объемом 0,6 мл Положительный контрольный образец (ПКО) Прозрачная жидкость 75,0 2 пробирки объемом 0,5 мл Отрицательный контрольный образец (ОКО) Прозрачная жидкость 150,0 2 пробирки объемом 0,5 мл Комплект на 96 определений позволяет провести анализ 96-ти образцов, включая положительный и отрицательный контрольные образцы. ^ 2.4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Аналитичеекая чувствительность. Нижний предел аналитической чувствительности набора реагентов - 1000 копий/мл. Для определения аналитической чувствительности используют контрольные образцы цредприятия (КОП), представляющие собой полученные методом генной инженерии образцы плазмидной ДНК со встроенным фрагментом, специфичным для ДНК детектируемого микроорганизма. Концентрацию КОП измеряют спектрофотометрически на приборе NanoDrop2000. Аналитическая специфичность. Аналитическая специфичность набора реагентов «Г онорея-тест» подтверждена отсутствием регистрации экспоненциального роста флуоресцентного сигнала по каналу FAM в отрицательных контрольных образцах. Диагностическая чувствительность набора реагентов составляет не менее 98 % (при расчете по формуле Бернулли) и подтверждается в ходе клинических испытаний на выборке клинических образцов. Диагностическая специфичность. Специфичность анализа при постановке теста с применением набора «Гонорея-тест» доказана методом секвенирования продуктов амплификации и подтверждена отсутствием неспецифических перекрестных реакций при тестировании образцов ДНК человека и панели образцов ДНК микроорганизмов, являющихся представителями нормальной микрофлоры урогенитального тракта, условно- 5 --- стр. 6 --- патогенной и патогенной флоры (Lactobacillus spp, Escherichia coli, Gardnerella vaginalis, Candida albicans, Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum, Ureaplasma urealyticum. Chlamydia trachomatis. Trichomonas vaginalis. Mycoplasma genitalium). 3. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 3.1. Потенциальный риск применения набора реагентов - класс 26 (Приказ М3 России от 06.06.2012 №4н). 3.2. Все компоненты набора реагентов в используемых концентрациях являются нетоксичными. 3.3. Меры предосторожности - соблюдение правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих’ методы амплификации нуклеиновых кислот, при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». 3.4. Утилизация отходов производится в соответствии с СанПиН N2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами», сбор отходов осуществляется в одноразовые пакеты желтого цвета, предназначенные для утилизации медицинских отходов класса Б (ГОСТ Р 50962-96). 4. ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И МАТЕРИАЛЫ 1-й этап - выделение ДНК из клинического материала ВНИМАНИЕ! Комплект реагентов для выделения ДНК из биологического материала не входит в состав набора Для выделения ДНК из клинических образцов используются наборы реагентов, рекомендованные для использования в клинической лабораторной диагностике при анализе мазков из урогенитального тракта («ДНК-сорб-АМ», ООО «Некст-Био», Россия; «ЭДЭМ», НТК «Диаэм», Россия; «ДНК-ЭКСПРЕСС», НПФ «Литех», Россия и другие аналогичные комплекты реагентов). Экстракцию ДНК проводят согласно инструкции производителя набора реагентов. Необходимое оборудование: ламинарный бокс 2-го класса защиты; --- стр. 8 --- 5. ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА Материалом для исследования являются мазки из урогенитального тракта человека. Взятие, транспортирование и хранение исследуемого материала должно проводиться в строгом соответствии с методическими рекомендациями «Взятие, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики», разработанными ФБГУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Москва, 2012 г. Условия и срок хранения образцов биоматериала определяется типом транспортной среды, использованной для забора мазков. 6. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 6.1. ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА f Для экстракции (выделения) ДНК из клинических образцов используются наборы реагентов, рекомендованные для использования в клинической лабораторной диагностике при анализе мазков из урогенитального тракта («ДНК-сорб-АМ», ООО «Некст-Био», Россия; «ЭДЭМ», НТК «Диаэм», Россия; «ДНК-ЭКСПРЕСС», НПФ «Литех», Россия и другие аналогичные комплекты реагентов). Экстракцию ДНК проводят согласно инструкции, прилагаемой к набору для выделения ДНК. Полученные образцы ДНК хранят в течение 1 недели при температуре от 2 до 8°С или в течение года при температуре не выше минус 16°С. 6.2. ПЦР-АМПЛИФИКАЦИЯ Общий объём реакционной смеси - 25 мкл, включая объём пробы ДНК - 5 мкл. 6.2.1. В штатив поставить необходимое количество пробирок/стрипов со смесью для амплификации (в соответствии с количеством проб и две пробирки для ПКО и ОКО); 6.2.2. В каждую пробирку, не повреждая слой воска, внести по 10 мкл тщательно перемешанного раствора Taq-полимеразы; 6.2.3.Закрыть крышки пробирок; 6.2.4. Поочередно открывая крышки пробирок внести в пробирки; 6.2.4.1. В одну из подготовленных пробирок внести 5 мкл ОКО; 6.2.4.2. В пробирки, предназначенные для анализа образцов, поочередно внести по 5 мкл анализируемых проб; 8 --- стр. 9 --- щ 6.2.4.3. В оставшуюся пробирку внести 5 мкл ПКО. 6.2.5. Установить все пробирки в блок детектирующего амплификатора; 6.2.6, Запустить программу амплификации в соответствии с параметрами, указанными в таблице 1. Внимание! Для предотвращения контаминации при внесении в пробирки реагентов, образцов ДНК и контрольных образцов рекомендуется использовать только одноразовые наконечники с аэрозольными фильтрами. _____Таблица 1 - Условия проведения амплификации и детекции результатов_____ Программа амплификации Температура Время Количеетво циклов 94°С 15 мин 1 94°С 10 сек 58°С 10 сек , 572°С 10 сек 94°С 10 сек 58°С *10 сек 40 72°С 05 сек 10°С - хранение Детекция флуоресцентного сигнала Специфический продукт Внутренний контроль FAM HEX детекция флуоресцентного сигнала 6.3. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ Детекция продуктов амплификации проводитея в режиме реального времени с иепользованием детектирующего ПЦР-амплификатора еогласно инструкции к прибору; - по каналу РАМ регистрируется сигнал о накоплении продукта амплификации фрагмента ДНК Neisseria gonorrhoeae; по каналу HEX регистрируется сигнал о накоплении продукта амплификации фрагмента гена В-глобина человека (используется в качестве контроля взятия материала). --- стр. 10 --- 6.4. АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ 6.4.1. Анализ результатов проводят с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР с детекцией в режиме реального времени. Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции на соответствующем канале с пороговой линией, что определяет наличие (или отсутствие) для данной пробы значения порогового цикла Ct. Анализируемая проба считается положительной, если: график нарастания флуоресценции имеет форму экспоненциальной кривой; для пробы определено значение порогового цикла Ct по каналам РАМ и HEX; кривая флуоресценции по каналам РАМ и HEX пересекает пороговую линию на участке экспоненциального роста. 6.4.2. Принцип интерпретации: Учет результатов следует начинать с результатов амплйфикации положительного (ПКО) и отрицательного контрольных (ОКО) образцов. 6.4.2.1. Результаты анализа не учитываются, если: Во время прохождения реакции детектирующий амплификатор не регистрирует экспоненциальный рост уровня флуоресценции по каналам РАМ и HEX в пробирке с ПКО или полученные значения порогового цикла Ct для одного или обоих каналов выще граничных, указанных во вкладыще к набору; в данной ситуации необходимо повторное исследование всех образцов; Во время прохождения реакции детектирующий амплификатор не регистрирует экспоненциальный рост уровня флуоресценции по одному из каналов в пробирке с ПКО или полученные значения порогового цикла Ct выще граничных, указанных во вкладыше к набору; в данной ситуации необходимо повторное исследование всех образцов; В пробирке с ОКО регистрируется экспоненциальный рост уровня флуоресценции по одному из каналов, либо по всем каналам флуоресценции. Необходимо принятие мер для устранения контаминации в ПЦР- лаборатории и повторное исследование всех образцов. В пробирке с ПКО регистрируется экспоненциальный рост уровня флуоресценции по каналам FAM и HEX; в пробирке с ОКО не регистрируется рост уровня флуоресценции по каналам FAM и HEX; в пробирке с анализируемым образцом не регистрируется рост уровня флуоресценции по каналу HEX или значение порогового цикла Ct превышает граничное значение 10 14^ --- стр. 14 --- --- стр. 15 --- О О О « А л ь ф а л а б » Паспорт качества № 190515-03 Стр. 1 из 1 Название набора Набор реагентов для выявления ДНК Neisseria gonorrhoeae в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени «Г онорея-тест» Дата изготовления: Серия набора: Количество наборов в серии: Срок годности: Условия хранения: 18.05.2015 03 эксп. 10 18.11.2015 2-8 °С Результаты контроля ОТК: Органолептические показатели: Смесь для амплификации Прозрачная бесцветная жидкость Раствор Taq-полимеразы Прозрачная бесцветная жидкость Положительный контрольный образец ПКО Прозрачная бесцветная жидкость ? Отрицательный контрольный образец (ОКО) Прозрачная бесцветная жидкость Технические характеристики: П а р а м е т р ы о ц е н к и К а н а л Н а л и ч и е ф л у о р е с ц е н ц и и П ол ож ител ьн ы й контрольны й о б р а зе ц (П К О ) Регистрация эк сп о н ен ц и а л ь н о го р оста ф л у о р есц ен тн о го сигнал а по каналам Р А М и H E X Р А М /Н Е Х +/+ О трицательны й контрольны й о б р а зе ц (О К О ) О тсутств и е ф л у о р есц ен тн о го си гн ал а каналам Р А М и H E X Р А М /Н Е Х А налитическая чувствительность Н е б о л е е 100 0 копи й/м л Заключение: соответствует требованиям ТУ 9398 - 014 - 01058639 - 2015 Дата выдачи паспорта Штамп ОТК: /6 /К 19.05.2015 --- стр. 16 --- О О О « А л ь ф а л а б » Паспорт качества № 210515-04 Стр. 1 из 1 Название набора Набор реагентов для выявления ДНК Neisseria gonorrhoeae в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени «Г онорея-тест» Дата изготовления; Серия набора: Количество наборов в серии: Срок годности: Условия хранения: 20.05.2015 04 эксп. 10 20.11.2015 2-8 °С Результаты контроля ОТК: Органолептические показатели: Смесь для амплификации Прозрачная бесцветная жидкоеть Раствор Taq-полимеразы Прозрачная беецветная жидкость Положительный контрольный образец ПКО Прозрачная бесцветная жидкость Отрицательный контрольный образец (ОКО) Прозрачная бесцветная жидкость Технические характеристики: П а р а м е т р ы о ц е н к и К а н а л Н а л и ч и е ф л у о р е с ц е н ц и и П олож ительн ы й контрольны й о б р а зе ц (П К О ) Р егистрация эк сп он ен ц и ал ь н ого р оста ф л у о р есц ен т н о го сигнал а по каналам Р А М и H E X Р А М /Н Е Х +/+ О трицательны й контрольны й о б р а зе ц (О К О ) О тсутств и е ф л у о р есц ен тн о го си гн ал а каналам Р А М и H E X Р А М /Н Е Х А налитическая ч ув ствител ьность Н е б о л ее 100 0 коп и й /м л Заключение: соответствует требованиям ТУ 9398 - 014 - 01058639 - 2015 Дата выдачи па Штамп ОТК: щ 21.05.2015 '0 / 1 ОТ1Г)ю --- стр. 17 --- ООО «Альфалаб» Паспорт качества № КОП/014/150515-03 Стр. 1 из 2 Название набора Комплект контрольных образцов предприятия (КОП) для набора реагентов для выявления ДНК Neisseria gonorrhoeae в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени «Г онорея-тест» Дата изготовления: 14.05.2015 Серия: 03 Комплектноть / КОП-1-5 Количество образцов в серии: КОП-2 - 5 Срок годности: 14.11.2015 Условия хранения: не выше минус 16°С ОПИСАНИЕ Материалом для изготовления КОП являются образцы плазмидной ДНК, полученные методом генной инженерии с использованием продуктов специфической амплификации участка генома детектируемого микроорганизма Амплифицированные фрагменты встраивают в плазмиды путем лигирования, полученные конструкции используют для трансформации Е.соИ. Культуру Е.соИ выращивают на селективных средах; плазмидную ДНК со встроенными фрагментами очищают с помощью наборов для очистки плазмидной ДНК. Концентрация образцов плазмидной ДНК измеряется спектрофотометрически на приборе NanoDrop2000. Специфичность используемых конструкций участку генома Neisseria gonorrhoeae подтверждена методом автоматического секвенирования ДНК. В комплект контрольных образцов для набора «Гонорея-тест» входят: - Контрольный образец предприятия №1 (КОП-1), - Контрольный образец предприятия №2 (КОП-2), каждый из которых представляет собой водный раствор, содержащий плазмидную ДНК со встроенным фрагментом, специфическим для генома Neisseria gonorrhoeae. Органолептические показатели: КОП-1 Прозрачная бесцветная жидкость коп- 2 Прозрачная бесцветная жидкость Технические характеристики*: К о н ц ен тр а ц и я , нг/м кл** С о о тв етст в и е к он ц ен тр ац и и сп ец и ф и ч еск о го ф р а гм ен та , к оп и й /м л *** КОП-1 1,2x10^-7 1000 коп-2 24,0 2x10^11 *Должны соответствовать ТУ 9398 - 014 - 01058639 - 2015 (технические условия устанавливают количество КОП, требуемых для контроля качества конкретного набора реагентов, и их допустимую концентрацию); **Концентрация образцов плазмидной ДНК измеряется спектрофотометрически на приборе NanoDrop2000; ***Рассчитана по формуле копий/мл = (Na*C*10^*10‘^) / (W*L), где число Авогадро Na = 6,02* 10^^, копий/моль; С - концентрация образца плазмидной ДНК, нг/мкл; W - средний --- стр. 18 --- вес нуклеотидной пары, г/моль*п.н.; L - длина специфического фрагмента, п.н. (пар нуклеотидов). Условия применения: КОП предназначены для тестирования производимых ООО «Альфалаб» наборов реагентов, используются в процессе приемки серии наборов реагентов отделом ОТК и при проведении технических испытаний для контроля аналитической чувствительности согласно ТУ. Условия хранения: при температуре не выше минус 16°С. Условия транспортирования: при температуре от 2 до 8°С. Стабильность: Контрольные образцы стабильны при условии хранения при температуре не выше минус 16°С в течение всего срока годности (6 месяцев); при температуре от 2 до 8°С - в течение 1 месяца. Заключение: Соответствует требованиям производственного регламента №3 и ТУ 9398 - 014 - 01058639 - 2015 Контрольные образцы готовы к применению. Использовать согласно ТУ 9398 - 014 - 01058639 - 2015. Дата выдачи паспорта: 15.05.2015 Штамп^ОЬ^О'' Информация о производителе: ООО «Альфалаб», 197376 Санкт-Петербург, улица Академика Павлова, 14а --- стр. 19 --- Прошито и п в количе Ю «Альфалаб» листов Суворова М.А. i