Набор реагентов для выявления ДНК Mycoplasma hominis в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени «Микоплазма хоминис» по ТУ 9398-011-01058639-2015 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- «УТВЕРЖДАЮ» Генеральный директор ООО «Альфалаб» jl.A. Суворова ^ 2017 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для выявления ДНК Mycoplasma hominis в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени «Микоплазма хоминис» ВНИМАНИЕ! Изучите инструкцию перед началом работы --- стр. 2 --- ОГЛАВЛЕНИЕ 1. НАЗНАЧЕНИЕ.........................................................................................................................3 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗДЕЛИЯ............................................................................................3 2.1. ПРИНЦИП МЕТОДА...........................................................................................................3 2.2. ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ....................................................................4 2.3. СОСТАВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ........................................................................................4 2.4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.......................................................................5 3. МЕРБ1 ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ...........................................................................................5 4. ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТБ1 И МАТЕРИАЛЕ!..............................................................6 5. ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА............................................................................................7 6. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ........................................................................................7 6.1. ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА............................................7 6.2. ПЦР-АМПЛИФИКАЦИЯ.....................................................................................................8 6.3. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛБТАТОВ........................................................................................9 6.4. АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛБТАТОВ.............................................................9 7. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ НАБОРА.....................................10 8. УКАЗАНИЯ ПО УТИЛИЗАЦИИ........................................................ 11 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ........................................................................................................12 СИМВОЛБ1, ИСПОЛБЗУЕМБ1Е В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ..........................................12 --- стр. 3 --- 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов «Микоплазма хоминис» предназначен для качественного обнаружения ДНК Myeoplasma hominis (возбудителя микоплазменной инфекции) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией результатов амплификации в режиме реального времени. Материалом для исследования являются мазки из урогенитального тракта человека. Область применения набора реагентов - клиническая лабораторная диагностика, научные исследования. Только для исследований in vitro. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗДЕЛИЯ 2Л. ПРИНЦИП МЕТОДА Анализ образцов включает следующие этапы: 1. Пробоподготовка (выделение ДНК из образцов клинического материала). 2. Амплификация специфических фрагментов ДНК в ходе ПЦР-реакции. 3. Детекция продуктов амплификации в режиме реального времени. В процессе реакции происходит амплификация фрагмента ДНК Mycoplasma hominis (при условии наличия указанного микроорганизма в исходном клиническом материале) и амплификация фрагмента гена В-глобина человека (что служит в качестве контроля взятия биологического материала). Для амплификации специфического участка ДНК используются олигонуклеотиды и меченые олигонуклеотидные зонды Taqman. В присутствии фермента Taq-полимеразы происходит гибридизация олигонуклеотидов и зонда с комплементарным участком ДНК-мишени. Образование специфического продукта амплификации сопровождается отщеплением флуоресцентной метки (благодаря наличию у Taq-полимеразы 5’- экзонуклеазной активности) и появлению детектируемого флуоресцентного сигнала, регистрация которого проводится в режиме реального времени. Олигонуклеотидные зонды, используемые для детекции ДНК Mycoplasma hominis и детекции фрагмента ДНК человека (внутренний контроль) имеют флуоресцентные метки с разными спектрами поглощения и испускания, что позволяет проводить одновременную регистрацию флуоресценции по двум каналам (РАМ и HEX). Интенсивность флуоресценции прямо пропорциональна количеству продуктов амплификации и, следовательно, нарастает с каждым последующим циклом. Набор реагентов предназначен для использования на амплификаторах детектирующих для постановки полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (MiniOpticon, BioRad; ДТ-96 или другие амплификаторы с аналогичными техническими характеристиками). 3 --- стр. 4 --- 2.2. ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ. Набор реагентов «Микоплазма хоминис» выпускается в четырех различных вариантах комплектации, которые отличаются по количеству определений, на которое рассчитан набор реагентов (48/96), и типу пробирок со смесью для амплификации (пробирки/стрипы): 1) комплект на 48 определений, смесь для амплификации в пробирках; 2) комплект на 48 определений, смесь для амплификации в стрипах; 3) комплект на 96 определений, смесь для амплификации в пробирках; 4) комплект на 96 определений, смесь для амплификации в стрипах; 2.3. СОСТАВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ На 48 определений: Компонент набора реагентов Описание Количество, объем пробирки, объем , компонента Смесь для амплификации Прозрачная бесцветная жидкость 48 пробирок объемом 0,2 мл, содержащих по 10 мкл смеси каждая или 6 стрипов по 8 пробирок, содержащих 10 мкл смеси каждая Раствор Taq-полимеразы Прозрачная бесцветная жидкость 2 пробирки по 300 мкл Положительный контрольный образец (ПКО) Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка, 75 мкл Отрицательный контрольный образец (ОКО) Прозрачная бесцветная жидкость 1 пробирка, 150 мкл Комплект на 48 определений позволяет провести анализ 48-ми образцов, включая положительный и отрицательный контрольные образцы. На 96 определений: Компонент набора реагентов Описание Количество, объем пробирки, объем компонента Смесь для амплификации Прозрачная бесцветная жидкость 96 пробирок объемом 0,2 мл, содержащих по 10 мкл смеси каждая или 12 стрипов по 8 пробирок, содержащих 10 мкл смеси каждая Раствор Taq-полимеразы Прозрачная бесцветная жидкость 4 пробирки по 300 мкл Положительный контрольный образец (ПКО) Прозрачная бесцветная жидкость 2 пробирки по 75 мкл Отрицательный контрольный образец (ОКО) Прозрачная бесцветная жидкость 2 пробирки по 150 мкл Комплект на 96 положительный и определений позволяет провести анализ 96-ти образцов, включая отрицательный контрольные образцы. --- стр. 5 --- 2.4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ I Аналитическая чувствительность. Нижний предел аналитической чувствительности набора реагентов - 2000 копий/мл. Для определения аналитической чувствительности используют контрольные образцы предприятия (КОП), представляющие собой полученные методом генной инженерии образцы плазмидной ДНК со встроенным фрагментом, специфичным для ДНК детектируемого микроорганизма. Концентрацию КОП-1 измеряют спектрофотометрически на приборе NanoDrop2000. Аналитическая специфичность. Аналитическая специфичность набора реагентов «Микоплазма хоминис» подтверждена отсутствием регистрации экспоненциального роста флуоресцентного сигнала по каналу FAM в отрицательных контрольных образцах. Диагностическая чувствительность набора реагентов составляет не менее 98 % (при расчете по формуле Бернулли) и подтверждается в ходе клинических испытаний на f выборке клинических образцов. Диагностическая специфичность. Специфичность анализа при постановке теста с применением набора реагентов «Микоплазма хоминис» доказана методом секвенирования продуктов амплификации и подтверждена отсутствием неспецифических перекрестных реакций при тестировании образцов ДНК человека и панели образцов ДНК микроорганизмов, являющихся представителями нормальной микрофлоры урогенитального тракта, условно-патогенной и патогенной флоры (Lactobacillus spp, Escherichia coli, Gardnerella vaginalis, Candida albicans. Chlamydia trachomatis. Mycoplasma genitalium. Neisseria gonorrhoeae). 3. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 3.1. Потенциальный риск применения набора реагентов - класс 26 (Приказ М3 России от 06.06.2012 №4н). 3.2. Все компоненты набора реагентов в используемых концентрациях являются нетоксичными. 3.3. Меры предосторожности - соблюдение правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот, при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». 3.4. Утилизация отходов производится в соответствии с СанПиН N2.1.7.2790-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими --- стр. 6 --- отходами", сбор отходов осуществляется в одноразовые пакеты желтого цвета, предназначенные для утилизации медицинских отходов класса Б (ГОСТ Р 50962-96). 4. ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И МАТЕРИАЛЫ 1-й этап - выделение ДНК из клинического материала ВНИМАНИЕ! Комплект реагентов для выделения ДНК из биологического материала не входит в состав набора реагентов «Микоплазма хоминис» Для выделения ДНК из клинических образцов используются комплекты реагентов, рекомендованные для использования в клинической лабораторной диагностике при анализе мазков из урогенитального тракта («ДНК-сорб-АМ», ООО «Некст-Био», Россия; «ЭДЭМ», НТК «Диаэм», Россия; «ДНК-ЭКСПРЕСС», НПФ «Литех», Россия и другие аналогичные комплекты реагентов). Экстракцию ДНК проводят согласно инструкции производителя набора. , Необходимое оборудование: - ламинарный бокс 2-го класса защиты; центрифуга для пробирок вместимостью 1,5 мл на 3000 - 12000 об/мин; микроцентрифуга-вортекс на 1500 - 3000 об/мин; твердотельный термостат для пробирок вместимостью 1,5 мл типа Термит (ООО НПФ «ДНК-технология», Россия), поддерживающий температуру до + 99°С; пипетки-дозаторы переменного объема, позволяющие отбирать объемы жидкости 5-50; 20-200; 100-1000 мкл; одноразовые наконечники с аэрозольным фильтром 0,5 - 10; 20-200 мкл; емкость для сброса использованных наконечников, пробирок и других расходных материалов; контейнер с крышкой для дезинфицирующего раствора; отдельный халат, шапочки, обувь и перчатки резиновые или пластиковые, одноразовые по МУ 1.3.2569-09. 2-й этап - проведение ПЦР-амплификации и детекция продуктов амплификации в режиме реального времени с помощью набора реагентов «Микоплазма хоминис» Необходимое оборудование: - ПЦР-бокс с УФ-лампой; штатив «рабочее место» для стрипованных и обычных пробирок объемом 0,2 мл; 6 --- стр. 7 --- - микроцентрифуга-вортекс на 1500 - 3000 об/мин; пипетки-дозаторы переменного объема, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,5 - 10; 5-50; 20-200; 100-1000 мкл; - одноразовые наконечники с аэрозольным фильтром 0,5 - 10; 20-200 мкл; - холодильник с морозильной камерой для хранения исходных реагентов; отдельный халат, шапочки, обувь и перчатки резиновые или пластиковые, одноразовые по МУ 1.3.2569-09; емкость для дезинфицирующего раствора для сброса использованных наконечников, пробирок и других расходных материалов; - дезинфицирующий раствор; - термостат программируемый (амплификатор) для проведения ПЦР с детекцией флуоресценции по двум каналам РАМ и HEX в режиме «реального времени». 5. ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА и Материалом для исследования являются мазки из урогенитального тракта человека. Взятие, транспортирование и хранение исследуемого материала должно проводиться в строгом соответствии с методическими рекомендациями «Взятие, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики», разработанными ФБГУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Москва, 2012 г. Условия и срок хранения образцов биоматериала определяется типом транспортной среды, использованной для забора мазков. 6. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 6.1. ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА Для экстракции (выделения) ДНК из клинических образцов используются комплекты реагентов, рекомендованные для использования в клинической лабораторной диагностике («ДНК-сорб-АМ», ООО «Некст-Био», Россия; «ЭДЭМ», НТК «Диаэм», Россия; «ДНК-ЭКСПРЕСС», НПФ «Литех», Россия и другие аналогичные комплекты реагентов). Экстракцию ДНК проводят согласно инструкции, прилагаемой к набору для вьщеления ДНК. Полученные образцы ДНК хранят в течение 1 недели при температуре от 2 до 8°С или в течение года при температуре не выше минус 16°С. --- стр. 8 --- i . it 6.2. ПЦР-АМПЛИФИКАЦИЯ Общий объём реакционной смеси - 25 мкл, включая объём пробы ДНК - 5 мкл. 6.2.1. В штатив поставить необходимое количество пробирок/стрипов со смесью для амплификации (в соответствии с количеством проб и две пробирки для ПКО и ОКО); 6.2.2 В каждую пробирку, не повреждая слой воска, внести по 10 мкл тщательно перемешанного раствора Taq-полимеразы; 6.2.3. Закрыть крышки пробирок; 6.2.4. Поочередно открывая крышки пробирок внести в пробирки: 6.2.4.1. В одну из подготовленных пробирок внести 5 мкл ОКО; 6.2.4.2. В пробирки, предназначенные для анализа образцов, поочередно внести по 5 мкл анализируемых проб; 6.2.4.3. В оставшуюся пробирку внести 5 мкл ПКО. , 6.2.5. Установить все пробирки в блок детектирующего амплификатора; 6.2.6. Запустить программу амплификации в соответствии с параметрами, указанными в таблице 1. Внимание! Для предотвращения контаминации при внесении в пробирки реагентов, образцов ДНК и контрольных образцов рекомендуется использовать только одноразовые наконечники с аэрозольными фильтрами. Программа амплификации Температура Время Количество циклов 94°С 15 мин 1 94°С 10 сек 58°С 10 сек 572°С 10 сек 94°С 10 сек 58°С *10 сек 40 72°С 05 сек 10°С - хранение Детекция флуоресцентного сигнала Специфический продукт ГАМ Внутренний контроль HEX - детекция флуореецентного сигнала 8 --- стр. 9 --- Детекция продуктов амплификации проводится в режиме реального времени с использованием детектирующего ПЦР-амплификатора согласно инструкции к прибору. по каналу РАМ регистрируется сигнал о накоплении продукта амплификации фрагмента ДНК Mycoplasma hominis; по каналу HEX регистрируется сигнал о накоплении продукта амплификации фрагмента гена 6-глобина человека (используется в качестве контроля взятия материала). 6.4. АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ 6.3. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ if 6.4.1. Анализ результатов проводят с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР с детекцией в режиме реального времени. Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции на соответствующем канале с пороговой линией, что определяет наличие (или отсутствие) для данной пробы значения порогового цикла Ct. Анализируемая проба считается положительной, если: график нарастания флуоресценции имеет форму экспоненциальной кривой; - для пробы определено значение порогового цикла Ct по каналам РАМ и HEX; кривая флуоресценции по каналам РАМ и HEX пересекает пороговую линию на участке экпоненциального роста. 6.4.2. Принцип интерпретации: Учет результатов следует начинать с результатов амплификации положительного (ПКО) и отрицательного контрольных (ОКО) образцов. 6.4.2.1. Результаты анализа не учитываются, если: Во время прохождения реакции детектирующий амплификатор не регистрирует экспоненциальный рост уровня флуоресценции по каналам РАМ и HEX в пробирке с ПКО или полученные значения порогового цикла Ct для одного или обоих каналов выще граничных, указанных во вкладыще к набору; в данной ситуации необходимо повторное исследование всех образцов; Во время прохождения реакции детектирующий амплификатор не регистрирует экспоненциальный рост уровня флуоресценции по одному из каналов в пробирке с ПКО или полученные значения порогового цикла Ct выще граничных, указанных во --- стр. 13 --- ■t Прошито в К О Л И Ч61 |<Альфалаб» листов Суворова М.А. --- стр. 14 --- ООО «Альфалаб» Паспорт качества № 190515-03 Стр. 1 из 1 Название набора Набор реагентов для выявления ДНК Mycoplasma hominis в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени «Микоплазма хоминис» Дата изготовления: Серия набора: Количество наборов в серии: Срок годности: Условия хранения: 18.05.2015 03 эксп. 10 18.11.2015 2-8 °С Результаты контроля ОТК: Органолептические показатели: Смесь для амплификации Прозрачная бесцветная жидкость Раствор Taq-полимеразы Прозрачная бесцветная жидкость Положительный контрольный образец ПКО Прозрачная бесцветная жидкость f Отрицательный контрольный образец (ОКО) Прозрачная бесцветная жидкость Технические характеристики: Параметры оценки Канал Наличие флуоресценции Положительный контрольный образец (ПКО) Регистрация экспоненциального роста флуоресцентного сигнала по каналам РАМ и HEX РАМ/НЕХ +/+ Отрицательный контрольный образец (ОКО) Отсутствие флуоресцентного сигнала каналам РАМ и HEX РАМ/НЕХ Аналитическая чувствительность Не более 2000 копий/мл Заключение: соответствует требованиям ТУ 9398 - 011/С0Ш^39 - 2015 Дата выдач Штамп ОТК: 19.05.2015 --- стр. 15 --- ООО «Альфалаб» Паспорт качества № 210515-04 Стр. 1 из 1 Название набора Набор реагентов для выявления ДНК Mycoplasma hominis в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени «Микоплазма хоминис» Дата изготовления: Серия набора: Количество наборов в серии: Срок годности: Условия хранения: 20.05.2015 04 эксп. 10 20.11.2015 2-8 °С Результаты контроля ОТК: Органолептические показатели: Смесь для амплификации Прозрачная бесцветная жидкость Раствор Taq-полимеразы Прозрачная бесцветная жидкость Положительный контрольный образец ПКО Прозрачная бесцветная жидкость f Отрицательный контрольный образец (ОКО) Прозрачная бесцветная жидкость Технические характеристики: Параметры оценки Канал Наличие флуоресценции Положительный контрольный образец (ПКО) Регистрация экспоненциального роста флуоресцентного сигнала по каналам РАМ и HEX РАМ/НЕХ +/+ Отрицательный контрольный образец (ОКО) Отсутствие флуоресцентного сигнала каналам РАМ и HEX РАМ/НЕХ -/- Аналитическая чувствительность Не более 2000 копий/мл Заключение: соответствует требованиям ТУ 9398-011 -01058639-2015 Дата выдачи и Штамп ОТК 21.05.2015 --- стр. 16 --- ООО «Альфалаб» Паспорт качества № КОП/011/150515-03 Стр. 1 из 2 К о м п л ек т к о н т р о л ь н ы х о б р а зц о в п р ед п р и я т и я (К О П ) Название для набора реагентов для выявления ДНК Mycoplasma hominis в набора клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени «Микоплазма хоминис» Дата изготовления: 14.05.2015 Серия: 03 Комплектноть / КОП-1-5 Количество образцов в серии: КОП-2 - 5 Срок годности: 14.11.2015 Условия хранения: не выше минус 16°С ОПИСАНИЕ Материалом для изготовления КОП являются образцы плазмидной ДНК, полученные методом генной инженерии с использованием продуктов специфической амплификации участка генома детектируемого микроорганизма Амплифицированные фрагменты встраивают в плазмиды путем лигирования, полученные конструкции используют для трансформации Е.соИ. Культуру Е.соИ выращивают на селективных средах; плазмидную ДНК со встроенными фрагментами очищают с помощью наборов для очистки плазмидной ДНК. Концентрация образцов плазмидной ДНК измеряется спектрофотометрически на приборе NanoDrop2000. Специфичность используемых конструкций участку генома Mycoplasma hominis подтверждена методом автоматического секвенирования ДНК. В комплект контрольных образцов для набора «Микоплазма хоминис» входят: - Контрольный образец предприятия №1 (КОП-1), - Контрольный образец предприятия №2 (КОП-2), каждый из которых представляет собой водный раствор, содержащий плазмидную ДНК со встроенным фрагментом, специфическим для генома Mycoplasma hominis. Органолептические показатели: КОП-1 Прозрачная бесцветная жидкость коп- 2 Прозрачная бесцветная жидкость Технические характеристики*: Концентрация, нг/мкл** Соответствие концентрации специфического фрагмента, копий/мл*** КОП-1 5,2x10^-7 2000 коп-2 20,8 8x10^10 * Должны соответствовать ТУ 9398 - 011 - 01058639 - 2015 (технические условия устанавливают количество КОП, требуемых для контроля качества конкретного набора реагентов, и их допустимую концентрацию); **Концентрация образцов плазмидной ДНК измеряется спектрофотометрически на приборе NanoDrop2000; ***Рассчитана по формуле копий/мл = (Na*C*10^*10'^) / (W*L), где число Авогадро Na = 6,02*10^^, копий/моль; С - концентрация образца плазмидной ДНК, нг/мкл; W - средний --- стр. 17 --- вес нуклеотидной пары, г/моль*п.н.; L - длина специфического фрагмента, п.н. (пар нуклеотидов). Условия применения: КОП предназначены для тестирования производимых ООО «Альфалаб» наборов реагентов, используются в процессе цриемки серии наборов реагентов отделом ОТК и при проведении технических испытаний для контроля аналитической чувствительности согласно ТУ. Условия хранения: при температуре не выше минус 16°С. Условия транспортирования; при температуре от 2 до 8°С. Стабильность: Контрольные образцы стабильны при условии хранения при температуре не выше минус 16°С в течение всего срока годности (6 месяцев); при температуре от 2 до 8°С - в течение 1 месяца. Заключение: Соответствует требованиям производственного регламента №3 и ТУ 9398-011 -01058639-2015 Контрольные образцы готовы к црименению. Использовать согласно ТУ 9398 - 011- 01058639 - 2015. Дата выдачи паспорта: 15.05.2015 Штамп ОТК: Информация о производителе: ООО «Альфалаб», 197376 Санкт-Петербург, улица Академика Павлова, 14а --- стр. 18 --- Проши 00 «Альфалаб» Суворова М.А. листов