--- стр. 1 ---
#
«УТВЕРЖДАЮ»
Г енеральный директор
■Бест»
М.Д. Хусаинов
2017 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для вьщеления ДНК из клинических образцов
«РеалБест ДНК-экстракция 3» (вариант 6x16)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для вьщеления ДНК из клинических образцов «РеалБест ДНК-
экстракция 3» (далее по тексту - набор) предназначен для вьщеления ДНК из клинических об
разцов: мочи, сыворотки (плазмы) крови и соскобов эпителиальных клеток.
Набор предназначен для применения с наборами для выявления нуклеиновых кислот
серии «РеалБест».
Набор рассчитан на выделение ДНК из 96 образцов, включая контрольные образцы.
Вариант 6x16 обеспечивает возможность проведения до 6 независимых процедур вьщеления
по 16 образцов в каждой, включая контрольные образцы.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода.
Принцип действия набора «РеалБест ДНК-экстракция 3» состоит в температурной об
работке пробы многокомпонентным лизирующим раствором, разрушающим комплексы нук
леиновых кислот с белками, с последующей сорбцией на магнитные частицы, покрытые си
ликагелем, спиртовой отмывкой и элюцией. После этого проба готова к постановке реакции
ПЦР.
Принцип анализа основан на вьщелении нуклеиновых кислот из пробы совместно с
предварительно внесённым внутренним контрольным образцом (ВКО) и проведении реак
ции амплификации выбранного фрагмента ДНК с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре
ального времени. Положительный контрольный образец (ПКО) входит в состав ПЦР-наборов
серии «РеалБест». ПКО проходит процедуру вьщеления наравне с биологическими пробами
и отрицательным контрольным образцом (ОКО).
Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: директором
по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В.
--- стр. 2 ---
2.2. Состав набора:
- лизирующий раствор - 6 флаконов по 10 мл;
- раствор для отмывки - 6 флаконов по 20 мл;
- элюирующий раствор - 6 флаконов по 12 мл;
- сорбент (суспензия магнитных частиц) - 2 флакона по 1 мл;
- внутренний контрольный образец (ВКО), лиофилизованный - 3 флакона;
- раствор для восстановления контрольных образцов (РВК) - 1 флакон, 4 мл;
- отрицательный контрольный образец (ОКО) - 2 флакона по 1 мл.
Принадлежности:
- пластиковые крыщки для флаконов с ВКО - 3 шт.
3. ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
3.1. Эффективность выделения ДНК Mycoplasma hominis - 100%. Эффективность вы
деления ДНК Mycoplasma hominis определяется по четырем образцам с содержанием ДНК
Mycoplasma hominis 100 копий в пробе, приготовленным из положительной биопробы стан
дартного образца предприятия СОН (per. № 05-2-440), как процентное содержание образцов,
определенных набором как положительные;
3.2. Эффективность вьщеления ДНК, определенная на 288 клинических образцах -
100 % (интервал 99,0 %-100 %, с доверительной вероятностью 90 %).
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к
искажению результатов ПЦР.
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012
№ 4н).
4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных
болезней».
4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы
выделения ДНК/РНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы ла
бораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с матери
алом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки.
4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором дозаторов пе
ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За
прещается их перемещение между рабочими местами.
4.6. Для проведения анализа необходимо использовать только одноразовые наконечни-
--- стр. 3 ---
т с фильтром для дозаторов.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз
ных образцов.
4.8. После окончания работ для дезинфекции и предотвращения контаминации все ра
бочие поверхности и оборудование следует подвергнуть действию бактерицидных УФ ламп
в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфи
цирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор «ДП-2Т»; 1-3%) раствор «Диабак»;
0,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «Мистраль»; 0,5-2% раствор «Велтолен»).
4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфициру
ющими средствами с последующей утилизацией (см. МУ 287-113 «Методические указания
по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского
назначения»).
4.10. При использовании набора образуются отходы классов А, Б и Г, которые класси
фицируются и уничтожаются (утилизируются) в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Са
нитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами». Дезин
фекцию наборов реагентов еледует проводить по МУ 287-113 «Методические указания по
дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назна
чения».
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
- ламинарный бокс 2 класса биологической защиты типа БАВп-01-«Ламинар-с»
- холодильник бытовой, поддерживающий температуру (2-8) °С;
- термошейкер («Thermo Shaker TS-ЮО», фирма BioSan, Латвия);
- отсасыватель медицинский (В-40, фирма «ВИСМА-ПЛАНАР», Беларусь);
- встряхиватель для пробирок типа «Вортекс» («Bio-Vortex V-1 plus», фирма «BioSan», Лат
вия);
- дозаторы одноканальные с переменным объёмом, со сменными наконечниками (фирма
«Biohit», Финляндия);
- перчатки медицинские одноразовые нестерильные неопудренные латексные или неопрено
вые (перчатки «NeoTouch», фирма «Ansell HealthCare», Германия);
- одноразовые наконечники для дозаторов с защитным фильтром /аэрозольным барьером/
(фирма «FinnTip», Финляндия);
- одноразовые наконечники для дозаторов (фирма «FinnTip», Финляндия);
- одноразовые полипропиленовые пробирки на 2 мл (фирма «SSI», кат. № 2340, США);
- магнитный штатив для вьщеления нуклеиновых кислот (АО «Вектор-Бест»);
- контейнер с дезинфицирующим раствором («Контейнер для сбора острого инструментария
--- стр. 6 ---
7.8. В каждую пробирку к осадку добавить 1000 мкл раствора для отмывки.
Аккуратно перемешать на вортексе, не допуская попадания жидкости на крышку пробирки.
Вьщержать 5 минут при температуре (18-25) °С.
7.9. Установить пробирки в магнитный штатив, выдержать 1 минуту.
7.10. Используя отдельный наконечник для каждого образца, максимально полно
отобрать надосадочную жидкость, не задевая осадок.
7.11. В каждую пробирку к осадку добавить по 600 мкл элюирующего раствора. .
Аккуратно перемешать на вортексе, не допуская попадания жидкости на крышку пробирки.
7.12. Поместить пробирки в в предварительно прогретый до 42°С термошейкер и
прогреть в течение 10 минут при 250 об/мин.
7.17. Установить пробирки в магнитный штатив на 1 минуту.
Пробы готовы к постановке ПЦР-анализа.
Внимание: выделенная ДНК может храниться при температуре (2-8) °С в течение 1
суток.
8. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
8.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспорт
ных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного
вида, при температуре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 25 °С не
более 1 о суток.
8.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться
при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или холо
дильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной ре
гистрацией температуры.
8.3. Срок годности набора - 12 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение
наборов по истечении срока их годности.
8.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной ин
струкции по применению набора.
9. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
9.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям
нормативной и технической документации.
Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности.
9.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, воз
никших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения,
либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
--- стр. 7 ---
/
9.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функцио
нальные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют норматив
ной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого
дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем.
По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест ДНК-экстракция 3», следует об
ращаться в АО «Вектор-Бест» по адресу:
630117, г. Новосибирск-117, а/я 492,
тел. (383) 332-92-49, 227-60-30; тел./факс (383), 332-94-47, 332-94-44.
E-mail: plkobtk(^,vector-best. ru
Начальник отделения
АО «Вектор-Бест» А.В. Трухина
Директор по производству
АО «Вектор-Бест» В.К. Ткачев
работе
[здрава России
Т.И. Поспелова
--- стр. 8 ---
л
/
--- стр. 9 ---
#
«УТВЕРЖДАЮ»
)альный директор
гор-Бест»
М.Д. Хусаинов
2017 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для выделения ДНК из клинических образцов
«РеалБест ДНК-экстракция 3» (вариант 2x48)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для вьщеления ДНК из клинических образцов «РеалБест ДНК-
экстракция 3» (далее по тексту - набор) предназначен для вьщеления ДНК из клинических
образцов: мочи, сыворотки (плазмы) крови и соскобов эпителиальных клеток.
Набор предназначен для применения с наборами для выявления нуклеиновых кислот
серии «РеалБест».
Набор рассчитан на выделение ДНК из 96 образцов, включая контрольные образцы.
Вариант 2x48 обеспечивает возможность проведения 2 независимых процедур выделения по
48 образцов в каждой, включая контрольные образцы.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принциц метода.
Принцип действия набора «РеалБест ДНК-экстракция 3» состоит в температурной об
работке пробы многокомпонентным лизирующим раствором, разрушающим комплексы нук
леиновых кислот с белками, с последующей сорбцией на магнитные частицы, покрытые си
ликагелем, спиртовой отмывкой и элюцией. После этого проба готова к постановке реакции
ПЦР.
Принцип анализа основан на вьщелении нуклеиновых кислот из пробы совместно с
предварительно внесённым внутренним контрольным образцом (ВКО) и проведении реак
ции амплификации выбранного фрагмента ДНК с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре
ального времени. Положительный контрольный образец (ПКО) входит в состав ПЦР-наборов
серии «РеалБест». ПКО проходит процедуру вьщеления наравне с биологическими пробами
и отрицательным контрольным образцом (ОКО).
Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: директором
по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В.
--- стр. 10 ---
2.2. Состав набора:
- лизирующий раствор - 2 флакона по 30 мл;
- раствор для отмывки - 2 флакона по 65 мл;
- элюирующий раствор - 2 флакона по 40 мл;
- сорбент (суспензия магнитных частиц) - 2 флакона по 1 мл;
- внутренний контрольный образец (ВКО), лиофилизованный - 3 флакона;
- раствор для восстановления контрольных образцов (РВК) - 1 флакон, 4 мл;
- отрицательный контрольный образец (ОКО) - 2 флакона по 1 мл.
Принадлежности:
- пластиковые крышки для флаконов с ВКО - 3 шт.
3. ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
3.1. Эффективность вьщеления ДНК Mycoplasma hominis - 100%. Эффективность вы
деления ДНК Mycoplasma hominis определяется по четырем образцам с содержанием ДНК
Mycoplasma hominis 100 копий в пробе, приготовленным из положительной биопробы стан
дартного образца предприятия СОН (per. № 05-2-440), как процентное содержание образцов,
определенных набором как положительные;
3.2. Эффективность выделения ДНК, определенная на 288 клинических образцах -
100 % (интервал 99,0 %-100 %, с доверительной вероятностью 90 %).
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к
искажению результатов ПЦР.
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012
№ 4н).
4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных
болезней».
4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы
выделения ДНК/РНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы ла
бораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с матери
алом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки.
4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором дозаторов пе
ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За
прещается их перемещение между рабочими местами.
4.6. Для проведения анализа необходимо использовать только одноразовые наконечни
--- стр. 11 ---
ки с фильтром для дозаторов.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз
ных образцов.
4.8. После окончания работ для дезинфекции и предотвращения контаминации все ра
бочие поверхности и оборудование следует подвергнуть действию бактерицидных УФ ламп
в течение 1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфи
цирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор «ДП-2Т»; 1-3% раствор «Диабак»;
0,5%раствор «Лизафин»; 0,5-1%раствор «Мистраль»; 0,5-2%раствор «Велтолен»).
4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфициру
ющими средствами с последующей утилизацией (см. МУ 287-113 «Методические указания
по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского
назначения»).
4.10. При использовании набора образуются отходы классов А, Б и Г, которые класси
фицируются и уничтожаются (утилизируются) в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Са
нитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами». Дезин
фекцию наборов реагентов следует проводить по МУ 287-113 «Методические указания по
дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назна
чения».
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
- ламинарный бокс 2 класса биологической защиты типа БАВп-01-«Ламинар-с»
-холодильник бытовой, поддерживающий температуру (2-8) °С;
-термощейкер («Thermo Shaker TS-ЮО», фирма BioSan, Латвия);
- отсасыватель медицинский (В-40, фирма «ВИСМА-ПЛАНАР», Беларусь);
- встряхиватель для пробирок типа «Вортекс» («Bio-Vortex V-1 plus», фирма «BioSan», Лат
вия);
- дозаторы одноканальные с переменным объёмом, со сменными наконечниками (фирма
«Biohit», Финляндия);
- перчатки медицинские одноразовые нестерильные неопудренные латексные или неопрено
вые (перчатки «NeoTouch», фирма «Ansell Healthcare», Германия);
- одноразовые наконечники для дозаторов с защитным фильтром /аэрозольным барьером/
(фирма «FinnTip», Финляндия);
- одноразовые наконечники для дозаторов (фирма «FinnTip», Финляндия);
- одноразовые полипропиленовые пробирки на 2 мл (фирма «SSI», кат. № 2340, США);
- магнитный штатив для выделения нуклеиновых кислот (АО «Вектор-Бест»);
- контейнер с дезинфицирующим раствором («Контейнер для сбора острого инструментария
--- стр. 14 ---
7.8. В каждую пробирку к осадку добавить 1000 мкл раствора для отмывки.
Аккуратно перемешать на вортексе, не допуская попадания жидкости на крышку пробирки.
Выдержать 5 минут при температуре (18-25) °С.
7.9. Установить пробирки в магнитный штатив, выдержать 1 минуту.
7.10. Используя отдельный наконечник для каждого образца, максимально полно
отобрать надосадочную жидкость, не задевая осадок.
7.11. В каждую пробирку к осадку добавить по 600 мкл элюирующего раствора. .
Аккуратно перемешать на вортексе, не допуская попадания жидкости на крышку пробирки.
7.12. Поместить пробирки в в предварительно прогретый до 42°С термошейкер и
прогреть в течение 10 минут при 250 об/мин.
7.17. Установить пробирки в магнитный штатив на 1 минуту.
Пробы готовы к постановке ПЦР-анализа.
Внимание: выделенная ДНК может храниться при температуре (2-8) °С в течение
1 суток.
8. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
8.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспорт
ных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного
вида, при температуре (2-8) °С. Допускаетея транспортирование при температуре до 25 °С не
более 1 о суток.
8.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться
при температуре (2-8) °С в течение всего ерока годности в холодильных камерах или холо
дильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной ре-
гиетрацией температуры.
8.3. Срок годности набора - 12 месяцев ео дня выпуека. Не допуекается применение
наборов по истечении срока их годности.
8.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной ин
струкции по применению набора.
9. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
9.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям
нормативной и технической документации.
Безопасноеть и качество изделия гарантируютея в течение всего ерока годности.
9.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, воз
никших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения,
либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
--- стр. 15 ---
9.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функцио
нальные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют норматив
ной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого
дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем.
По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест ДНК-экстракция 3», следует об
ращаться в АО «Вектор-Бест» по адресу:
о
630117, г. Новосибирск-117, а/я 492,
тел. (383) 332-92-49, 227-60-30; тел./факс (383), 332-94-47, 332-94-44.
E-mail: plkobtk&yector-best. ru
Начальник отделения
АО «Вектор-Бест» А.В. Трухина
Директор по производству
АО «Вектор-Бест» В.К. Ткачев
Т.И. Поспелова
--- стр. 16 ---
N
/