--- стр. 4 ---
Символы, предусмотренные Директивой ЕС для применения в отношении средств
диагностики in vitro (IVDD, 98/79/ЕС)
Н а б о р р е а г е н т о в д л я о п р е д е л е н и я г л и к о з и л и р о в а н н о г о г е м о г л о б и н а
A le , г е м о г л о б и н о в А 2 и F н а а н а л и з а т о р е D -1 0
BUF
Буфер для элюции № 1
BUF
Буфер для элюции № 2
WSH DIL SOLN
Раствор для
промывки/разведения
CAL DIL SET
ANLT CRTR
Аналитический
картридж
DISK
Флоппи-диск
RESIN CAL SET
Смола Набор
кал ибраторо в/разбав ител я
Набор калибраторов
CAL 1
Калибратор 1-го
уровня
CAL CAL DIL RECON
Калибратор 2-го уровня Калибратор/разбавитель Восстановление с
помощью:
WB PRM DI Н2 0 SAMP ФЛАКОН USE
Затравка цельной крови Деионизированная вода Флаконы пробы Для использования с:
L20012103 Инструкция
--- стр. 5 ---
Н а б о р р е а г е н т о в д л я о п р е д е л е н и я г л и к о з и л и р о в а н н о г о г е м о г л о б и н а
A le , г е м о г л о б и н о в А 2 и F н а а н а л и з а т о р е D -1 0
СОДЕРЖ АНИЕ С траница
Назначение.................................................................................................................................................................2
Резюме и разъяснение теста.................................................................................................................................. 2
Принцип методики...................................................................................................................................................2
Компоненты набора................................................................................................................................................. 3
Дополнительные компоненты, которые можно приобрести у компании Био-Рад
.................................4
Необходимые дополнительные компоненты, которые не могут быть приобретены у компании
Био-Рад.......................................................................................................................................................................4
Меры предосторожности/предостережения......................................................................................................4
Взятие пробы и обращение с н е й ........................................................................................................................ 5
Приготовление и хранение реактивов.................................................................................................................5
Признаки нестабильности или ухудшения качества реактивов................................................................... 6
Методика.................................................................................................................................................................... 7
Выбор метода...................................................................................................................................................7
Установка комплекта повторного заказа новой партии (флоппи-диска обновления
набора)...............................................................................................................................................................7
Процедура подготовки аналитического картриджа...............................................................................7
Калибровка для определения гликированного
гемоглобина............................................................................................................................................... 7
Обычный прогон............................................................................................................................................. 8
Калибровка для определения гемоглобинов А2, F
Сертификация/отслеживаемость до эталонного материала и метода
............................................... 8
Требования контроля качества....................................................................................................................8
Инструкции в отношении интерпретации результатов.................................................................................. 9
Ограничения методики........................................................................................................................................... 9
Ожидаемый диапазон величин............................................................................................................................10
Рабочие характеристики.....................................................................................................................................1 1
Точность представления/воспроизведения............................. ................................................................1 1
Степень приближения к истинной величине ......................................................................................... 1 1
Линейность/Извлечение.............................................................................................................................12
Вещества, создающие помехи................................................................................................................... 12
Лабильный гемоглобин А \с................................................................................................................ 12
Липемические пробы.............................................................................................................................13
Желтуха.....................................................................................................................................................13
Гемоглобин F (H bF).............................................................................................................................. 14
Карбамилированный гемоглобин.......................................................................................................14
Форма отчета об исследовании пробы.............................................................................................................. 15
Информация о безопасности продукта............................................................................................................. 20
Информация о торговой марке........................................................................................................................... 20
Список литературы................................................................................................................................................ 20
L20012103 Инструкция
--- стр. 6 ---
Н а б о р р е а г е н т о в д л я о п р е д е л е н и я г л и к о з и л и р о в а н н о г о г е м о г л о б и н а
A le , г е м о г л о б и н о в А 2 и F н а а н а л и з а т о р е D -1 0
НАЗНАЧЕНИЕ
Наборы реагентов для определения гликированного гемоглобина D-10 компании Био-Рад предназначены для
определения процента гемоглобина A jc в цельной крови человека с помощ ью ионообменной
высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖ Х). Наборы реагентов предназначены для использования
в в анализаторе для определения гликированного гемоглобина D-10 компании Био-Рад.
Наборы реагентов предназначены для использования с целью диагностики in vitro.
РЕЗЮ М Е И РА ЗЪ ЯСН ЕН И Е ТЕСТА
Наборы реагентов для определения гликированного гемоглобина и гемоглобинов А2 и F рассчитаны на
проведение 400 тестов при определении гемоглобина A le и 200 тестов при определении гемоглобинов А2 и F.
Время анализа при определении H b A lc составляет 3 минуты и требует использования набора калибраторов для
определения гликированного гемоглобина H bA lc.
Время анализа при определении гемоглобинов А2 и F составляет 6 минут и требует использования набора
калибраторов для определения гемоглобинов А2 и F.
Проведение данных исследований не требует замены рабочих буферов, аналитической колонки и промывки
анализатора.
Сахарный диабет - это заболевание, характеризую щ ееся наличием гипергликемии, связанной с неспособностью
организма использовать глюкозу, присутствую щ ую в крови, для выработки энергии. При сахарном диабете I
типа прекращается выработка инсулина поджелудочной железой, в связи с чем глюкоза, присутствующ ая в
крови, не может поступать в клетки для их последую щ его использования с целью получения энергии. При
сахарном диабете II типа имеет место либо недостаточность выработки инсулина поджелудочной железой, либо
неспособность организма правильно использовать инсулин.1 О сложнения сахарного диабета, включая
поражения глаз, почек, нервов и крупных кровеносных сосудов сердца, головного мозга и конечностей,
характерны для обеих форм данного заболевания.2 Сахарным диабетом поражены более 5 % населения земного
шара.
Лечение сахарного диабета предусматривает длительное поддержание как можно более близкого соответствия
уровня глюкозы в крови ее нормальному уровню с целью минимизации риска отдаленных сосудистых
осложнений.'1 ’ 4 Одиночное определение уровня глюкозы в крови натощ ак свидетельствует о состоянии
пациента в период времени, непосредственно предш ествующ ий данному определению (в предыдущие
несколько часов), но не может охарактеризовать истинное состояние регуляции уровня глюкозы в крови.5 ’ 6
Точный показатель - среднюю концентрацию глюкозы в крови - можно определить путем измерения уровня
гемоглобина А]С (НЬА]С ) через каждые 2-3 месяца.3,5’ 6
О п р ед ел яем ы й гл и ко гем о гл о б и н H b A ic образуется в два этапа посредством неферментного гликирования
НЬА. Первый этап заклю чается в образовании нестабильного альдимина (лабильного гемоглобина А )с, или пре-
гемоглобина А |С ) - обратимой реакции между карбонильной группой глюкозы и N -концевым валином В-цепи
гемоглобина. Образование лабильного гемоглобина A ic прямо пропорционально концентрации глюкозы в
крови. В циркулирую щ их эритроцитах некоторое количество лабильного гемоглобина А ]с преобразуется в
стабильный кетоамин гемоглобин НЬА]С 7 (“преобразование А мадори”).
Уровень HbAïc пропорционален средней концентрации глюкозы и продолжительности циркуляции эритроцита.
В связи с этим, определение уровня НЬА)С было принято в качестве средства регулярного клинического
контроля состояния пациентов при сахарном диабете.7 М етоды определения уровня H bA ic включают в себя
электрофорез, иммунные тесты и хроматографию .
М етодика использования набора реагентов для определения гликированного гемоглобина A ic D-10 основана на
хроматографическом выделении НЬА)С в катионообменном картридже. Выделение H bA ic оптимизировано
таким образом, чтобы свести к минимуму помехи со стороны вариантов гемоглобина, лабильного гемоглобина
А 1 с и карбамилированного гемоглобина. Дополнительная информация представлена в разделах “Ограничения
методики” и “Рабочие характеристики”. Кроме того, программа определения гемоглобина А |С D-10
предусматривает автоматическое взятие пробы из пробирки с первичным образцом цельной крови с
последующим разведением пробы; время анализа одной пробы составляет 3 минуты.
Повыш ение уровней определяемых гемоглобинов А2 и F является критерием диагностики талассемии. Кровь
взрослого человека содерж ит гемоглобин А2, небольшой процент гемоглобина А2 и совсем незначительное
количество гемоглобина F. Лица, страдаю щ ие В-талассемией имеют уровень гемоглобина А2 - от 4 до 9% и
L20012103 Инструкция
--- стр. 7 ---
Н а б о р р е а г е н т о в д л я о п р е д е л е н и я г л и к о з и л и р о в а н н о г о г е м о г л о б и н а
A le , г е м о г л о б и н о в А 2 и F н а а н а л и з а т о р е D -1 0
гем оглобин F - от 1 до 5% . Д ан н ы й набор реаген тов предназначен для оп ред елен и я уровн ей гем оглобинов А2
и F.
ПРИНЦИП М ЕТОДИКИ
М етодика использования наборов реаген тов для оп ред елен и я гл икированного гем оглоб и н а A ic и гем оглобинов
А2 и F на ан али заторе D -10 о сн о в ан а на п ринципах ионообм енной вы сокоэф ф екти вн ой ж идкостной
хром атограф ии (В Э Ж Х ). А н ал и затор D -10 автом ати ч ески р азвод и т пробу, после чего о сущ ествл яется инъекция
пробы в аналитический картридж . А н ал и затор D -10 со зд ает в картри д ж е запрограм м и рован н ы й буф ерны й
град и ен т возрастаю щ ей к онцентрации ионов, благодаря котором у о сущ ествл яется разделен и е гем оглобинов на
основе их ионны х взаи м од ей стви й с м атериалом картридж а. Затем разделен н ы е гем оглобины проходят через
п роточную ячейку ф и льтерн ого ф отом етра, где осущ ествляю тся и зм ерения изм енений поглощ ения при длине
волны 415 нм.
П рограм м ное обесп ечен и е ан ал и затора D -10 о б есп еч и в ает обработку п ерви чн ы х данны х, получаем ы х при
каж дом анализе. Д ля к оли ч ествен н ого оп ред елен и я Н ЬА ]С и гем оглоб и н ов А 2 и F используется д вухуровн евое
калибрование. В связи с каж дой пробой вы даю тся отч ет о пробе и хром атограм м а. П лощ адь определяем ы х
гем оглобинов рассч и ты вается с пом ощ ью эксп он ен ц и ал ьн о м о д и ф и ц и рован н ого гауссова (E M G ) алгоритм а,
и склю чаю щ его площ ади пиков л аб и льн ого гем оглоб и н а A ic и карб ам и ли рован н ого гем оглобина при
определении площ ади пика гем огл об и н а A tc.
Н аборы реагентов для оп ред елен и я гли ки рован н ого гем огл об и н а и гем оглоб и н ов А 2 и F на анализаторе Д -10
п редназначены для и спользования в анализаторе для опред еления гли ки рован н ого гем оглобина D -10 Био-Рад.
КО М П О Н ЕН ТЫ НАБОРА
220-0201 Н абор реагентов для определения гликози ли рован н ого гем огл об и н а A le , гем оглобинов А2 и F
анализаторе Д - 10 («D -10 D u a l Program Reorder Pack»)
Д анны й набор со д ер ж и т п ринадлеж ности, рассч и тан н ы е на вы п олн ен и е 400 тестов для гем оглобина A le и 200
тестов для гем оглоб и н ов А 2 и F
R E F
Описание
2200210 * Б у ф ер D -10 Дуал д л я э л ю и р о в а н и я № 1. Д ве буты ли, сод ерж ащ и е 2000 мЛ Б ис-Т рис/ф осф атного
буф ера, pH 6,0. С од ерж ат < 0,05 % ази да натрия в качестве консерванта.
2200211 * Б у ф ер D -10 Дуал д л я э л ю и р о в а н и я № 2. О дн а буты ль, сод ерж ащ ая 1000 м Л Б ис-Т рис/ф осф атного
буф ера, pH 6,7. С о д ер ж и т < 0,05 % ази да натрия в кач естве консерванта.
2200112 * Р а с т в о р д л я п р о м ы в к и и р а з в е д е н и я D-10. О д н а буты ль, сод ерж ащ ая 1600 мЛ деионизированной
воды . С од ерж и т < 0,05 % ази да натрия в к ач естве консерванта.
2200212 * А н а л и т и ч е с к а я к о л о н к а D -10 Д уал. О дин кати он ооб м ен н ы й картридж разм ерам и 4,0 (внутренний
ди ам етр) х 30 мм.
2200215 * Д и с к е т а с п р о г р а м м о й сод ерж и т парам етры програм м ы определения гем оглобина А2 и
гем оглобина F.
2200128 * Н а б о р к а л и б р а т о р о в D -10 Дуал. О дин н абор состои т из трех ф л акон ов с калибратором 1-го уровня,
трех ф лаконов с калибратором 2-го уровня и одной буты ли с разбавителем калибратора.
Ф лаконы кал и братора со д ер ж ат ли оф и л и зи рован н ы й гем оли зат эритроцитов человека с
гентам ицином , тоб рам и ц и н ом и Э Д ТА в качестве консервантов. В каж дом ф лаконе
восстановленны й объем равен 7 мЛ. Б уты ль с разбавителем к али братора сод ерж и т 100 мЛ
д еи о н и зи р о ван н о й воды и < 0,05 % ази да натрия в к ач естве консерванта. А ннотация к набору
калибраторов.
2200218 * Н аб о р к а л и б р а т о р о в D - Í0 Д уал д л я о п р е д е л е н и я г е м о г л о б и н о в А 2, F , А 1С . О дин набор состоит из
трех ф лакон ов с кали братором 1-го уровня, тр ех ф л акон ов с калибратором 2-го уровня и одной
буты ли с разбави телем калибратора. Ф лаконы к али братора со д ерж ат лиоф илизированны й
гем оли зат эри троц и тов ч ел о века с гентам ицином , тоб рам и ц и н ом и Э Д Т А в качестве
L20012103 Инструкция
--- стр. 13 ---
Н а б о р р е а г е н т о в д л я о п р е д е л е н и я г л н к о з и л н р о в а н н о г о г е м о г л о б и н а
A le , г е м о г л о б и н о в А 2 и F н а а н а л и з а т о р е D -1 0
Т р е б о в а н и я к о н т р о л я к а ч е с т в а
В соответстви и с треб ов ан и ям и н ад леж ащ ей л аб ораторн ой практики, о д и н раз в 24 часа в прогон следует
вклю чать ди абети ч ески е и нед и аб ети ческ и е кон трольн ы е пробы . В случае неполучения ож идаем ы х
контрольны х величин сл едует вы п ол н и ть п овторны й прогон.
И Н СТРУ КЦ И И В О ТН О Ш ЕН И И И Н ТЕРП РЕТА Ц И И РЕЗУЛЬТА ТО В
Д ля получения п ри ем лем ы х результатов сл ед ует со б л ю д ать следую щ и е требования:
1. С и стем а D -10 п рош ла калибрование. Д ля В аш и х справок при ем лем ы е ди ап азоны наклон а и отсечения
п редставлены во В клады ш е к набору кал и браторов наборов оп ред елен и я гли ки рован н ого гем оглобина
A le
2. О бщ ая площ адь каж дого ан ал и за д о л ж н а варьировать в п ред елах д и ап азо н а о т 1,0 д о 4,0 м иллиона
мкВ • сек.
Если площ адь вы ходит за п ределы этого ди ап азона, то результаты сооб щ ать не следует.
3. П ики правильно и дентиф ицированы . Д ля В аш и х сп равок окн а врем ени удерж и ван и я определяем ого
ком п он ен та указаны во В к л ад ы ш е к А н ал и ти ч еском у картридж у оп ред елен и я гем оглобина А |С D-10.
4. В еличины контроля к ач ества не вы ходят за п ределы у стан овл ен н ого ди ап азона.
5. Д иапазон сооб щ аем ы х результатов: диапазон сооб щ аем ы х уровн ей Н Ь А 1 с при и спользовании набора
реагентов - о т 3,8 до 18,5 % . Э тот ди ап азон бы л устан овлен на осн ован и и данны х, представленны х в
разделе “Р абоч и е х арак тери сти к и ” . В целом , эти д ан н ы е показы ваю т, что линейны й диапазон
прим енения набора реаген тов составляет от 3,8 до 18,5 % H b A ic. Е сли результат вы ходит за пределы
ди ап азона сооб щ аем ы х уровней, то вели чи н а
% гем огл об и н а А [с сн абж ается звезд очкой (*) и не долж на
сообщ аться.
О ГРА Н ИЧЕН ИЯ М ЕТО ДИ КИ
Р а з в е д е н и е п р о б ы
Н орм альная концентрация общ его гем огл об и н а соответствует общ ей площ ади, равной прим ерно 2,5 м иллиона
мкВ • сек. Бы ло осущ ествл ен о развед ен и е п роб цельной крови пациентов м алого, среднего и больш ого объем ов
с получением общ и х п лощ ад ей от 1,0 до 4,0 м и лли он ов мкВ * сек. Э ти пробы прогоняли с использованием
набора реагентов для оп ред елен и я гли ки рован н ого гем оглобина, с ц елью подтверж ден и я того, что общ ая
площ адь не влияет на результат. Р еком ен дуем ы й ди ап азон об щ и х площ адей со ставл яет от 1,0 д о 4,0 м иллионов
мкВ • сек. Если площ адь пробы вы ход и т за пределы о ж и д аем ого д и ап азон а, то пробу сл едует п редварительно
разбавить вручную в соответстви и с и нструкциям и, п ред ставлен н ы м и в разделе “П одготовка п робы ” .
Если площ адь пробы сн ова оказы вается за пределам и ож и д аем ого диап азона, то пробу следует повторно
развести таким образом , чтобы о н а оказалась в д и ап азоне об щ и х площ адей о т 1,0 д о 4,0 м иллионов, и
осущ естви ть повторны й прогон.
П Р И М Е Ч А Н И Е : В некот орых случаях при высоких значениях общей площ ади и гемоглобина A ic пробы
(например, при гемоглобине А /с > равном 15% и общей площади, равной 4 Ы), пик гемоглобина А /с мож ет быть
элюирован за пределы уст ановленного окна удерж ивания. В этих случаях проба долж на быть разведена до
площади, равной примерно 2,5 М, с последующ им осущ ествлением повт орного прогона.
А н о м а л ь н а я п р о д о л ж и т е л ь н о с т ь ж и з н и э р и т р о ц и т а
П робы пациентов с гем оли ти ческой анем ией д аю т п он и ж ен н ы е величины гли ки рован н ого гем оглобина в связи
с укороченной п родол ж и тельн остью ж изни эритроцита. Э тот эф ф ек т зави си т о т тяж ести анем ии. П робы
пациентов с полицитем ией или после перенесенной операции удал ен и я селезен ки м огут давать повы ш енны е
уровни гл икированного гем огл об и н а из-за н есколько увел и чен н ой продол ж и тел ьн ости ж изни эр и тр о ц и то в .1 0
В а р и а н т ы г е м о г л о б и н а
В еличины Н Ь А |С , пол учен н ы е с пом ощ ью набора реаген тов оп ред елен и я гем оглоб и н а А [с д л я проб крови
пациентов с признаком H bS и б ольн ы х ди абетом с признаком НЬС, не им ели к аки х-л и б о клинически значим ы х
отличий от величин, п олучен н ы х с пом ощ ью б оратн ого аф ф и н н ого м етода, серти ф и ц и рован н ого N G SP. П ри
и сследовании образцов крови пац и ен тов с признаком НЬС, не стр ад аю щ и х ди абетом , м огут бы ть получены
результаты ниж е о ж и д аем ого уровня. Т и п и чн ы е хром атограм м ы , п олучаем ы е у пац и ен тов с признаком H bS и
пациентов с признаком НЬС, представлены на рис. 5 и 6. П ри редко встречаю щ ихся гом озиготны х ф орм ах (SS
или С С ) НЬА отсутствует; в связи с этим , к акой -л и б о величины H b A ic получить невозм ож но.
L20012103 Инструкция
--- стр. 14 ---
П робы пациентов с прочим и ан ом альн ы м и вариантам и гем оглоб и н а, вклю чая H bG , Н ЬН и гем оглобин У эйна, с
пом ощ ью использования н аб о р а реаген тов оп ред елен и я гем оглоб и н а А )С не изучали. Д ля получения
п олож ительного подтверж ден и я в отнош ении л ю бого к он кретн ого вари ан та гем огл об и н а требую тся
альтерн ати вн ы е м етоды разделения.
О Ж И ДА ЕМ Ы Й ДИАПАЗОН В ЕЛИ ЧИ Н
Д и а п а з о н ы г е м о г л о б и н а А ^ 1 1
С целью ин терп ретац и и результатов м огут б ы ть и сп ользован ы д и ап азоны Н ЬА ]С , указан н ы е ниж е; однако, при
оценке степени контроля уровня глю козы в крови сл едует такж е учи ты вать такие ф акторы как
продолж и тельн ость сахарн ого ди аб ета, соб лю ден и е схем ы терап и и и во зр аст пациента. П ри вед ен н ы е величины
неприм еним ы к берем енны м ж енщ инам . У казан и е “Р еком ен дуется п ри н яти е м ер” д ол ж н о вы полняться с
учетом ин ди ви дуальн ы х особенностей пациента. Т акие м еры м огут вкл ю чать в себя интенсивное обучение
пациента м етодам сам остоятел ьн ого лечения сахарного ди абета, взаи м оп ом ощ ь б ольн ы х сахарны м диабетом
при проведении леч ен и я, направление к эндокринологу, изм енение ф арм акотерап и и , п ереход к более
тщ ательном у сам остоятел ьн ом у к он тролю уровня глю козы в крови или у чащ ен и е к он тактов с пациентом .
Г ем оглобин А ¡с (%) С т епень конт роля ур о вн я глю козы
> 8 Р еком ендуется принятие Mepf
< 7 Ц елевой уровень^
< 6 Н ед и аб ети ч ески й у ровен ь
t Высокий ри ск развит ия ослож нений в отдаленном периоде - т аких как ретинопатия, нефропатия,
нейропатия и кардиопат ия Указание "Рекомендует ся принят ие м е р ” долж но выполняться с учетом
индивидуальных особенностей пациента.
/ Присутствует некоторая опасность гипогликемической реакции у больных диабетом I типа. У некоторых
лиц с отсутствием т олерант ност и к глю козе и больных "субклиническим" диабетом этот диапазон
мож ет соот вет ст воват ь повы ш енному уровню HbA¡c.
Р а с ч е т с р е д н е г о у р о в н я г л ю к о з ы в п л а з м е ( С У Г П )
Р асчет среднего уровня глю козы в п лазм е (С У Г П ) за п оследние 60 дней н а основании величины Н ЬА [С дает
возм ож ность получить д оп олн и тел ьн ую кли н и ч ескую и нф орм ацию . Н а осн ован и и ан али за полученны х в
исследовании D C C T еж ек вартальн ы х величин H b A jc и соответствую щ и х п роф илей глю козы в капиллярной
крови, построенны х по сем и точ кам , бы ла вы вед ен а ли н ей н ая регресси я, используем ая для расчета С У ГП .
Э тот расчет не м ож ет бы ть осущ ествл ен на основе величин м енее сп ец и ф и чн ы х показателей (общ его Н ЬА | и
общ его гл икированного гем оглобина), п оскольку корреляция ф ракций Н ЬА ]а и Н ЬА |ь с длительны м контролем
уровня глю козы очень сом н и тельн а. К ром е того, известно, что н егл и кози л и рован н ы е аддукты , связанны е с
почечной нед остаточностью , алкоголи зм ом , и т.д., у вел и ч и ваю т ф ракции Н Ь А |а и Н Ь А ]Ь, приводя к завы ш ению
П -55данны х.
Д ля расчета С У Г П на о сн ован и и величины Н Ь А |С сл ед ует и сп ол ьзовать следую щ ее уравн ен и е линейной
регрессии:
Р асчет ная вел и ч и н а С У Г П = 35,6 (% Н ЬА¡J - 77,3
Н а б о р р е а г е н т о в д л я о п р е д е л е н и я г л и к о з и л и р о в а н н о г о г е м о г л о б и н а
A le , г е м о г л о б и н о в А 2 и F н а а н а л и з а т о р е D -1 0
Н Ь А/с (%) Р асчет ная вели чи н а С У Г П (мг/дЛ)
6.0 135
7,0* 170
9.0 240
* Ц елевой уровень, уст ановленны й Ам ериканской ассоциацией диабет а (ADA).
Н е д и а б е т и ч е с к и й ( н о р м а л ь н ы й ) д и а п а з о н
Н ед и аб ети ч ески е (н орм альн ы е) уровни долж н ы устан авл и ваться каж дой л аб оратори ей исходя из характеристик
исследуем ой популяции.
L20012103 Инструкция
--- стр. 15 ---
В Т ретьем национальном и ссл ед ован и и здоровья и питания, п роведен н ом в С Ш А , бы ли исследованы 20
и сп ы туем ы х в возрасте > 20 л е т с н орм альны м уровн ем глю козы в плазм е натощ ак, не им евш ие ранее
ди агн ости рован н ого сахарн ого ди абета. В еди ч и н ы Н ЬА ]Соп ред еляли с пом ощ ью си стем ы Б ио-Р ад Д И А М А Т ™ .
В звеш енны й средний уровен ь H b A ) Q для пац и ен тов с н орм альны м уровнем глю козы в плазм е натощ ак (п =
5694) составил 5,17 % (стан д ар тн о е откл он ен и е - 0,45 %^. 95 % дов ер и тел ьн ы й и нтервал (средняя ± 2
стан д артн ы х о ткл он ен и я) составил о т 4,27 % д о 6,07 % H b A ic.
П оскольку н абор реагентов для оп ред ел ен и я гли ки рован н ого гем оглоб и н а серти ф и ц и рован N G SP, этот
норм альны й ди ап азон м ож ет бы ть использован в качестве этал он а д о тех пор, пока лаб оратори ей не будет
п роанализировано д остаточн ое коли чество проб, п озволяю щ ее оп ред ел и ть свои соб ствен н ы е норм альны й и
ди абети ч ески й диапазоны , репрезен тативн ы е для м естной исследуем ой популяции.
РА БО ЧИ Е ХАРА КТЕРИ СТИ КИ
T о ч н о с т ь п р е д с т а в л е н и я /в о с п р о и з в е д е н и я
Т очн ость пред ставлен и я/восп рои зведен и я, обесп ечи ваем ая набором реагентов, бы ла оц ен ен а в одном
и сследовании, проведенном в соответствии с руководством N C C L S Е Р5-Т 2 “О ценка точности
п ред ставл ен и я/восп рои зведен и я, обесп ечи ваем ой приборам и, используем ы м и в клинической хим ии” ,
адаптированны м N G S P для прим енения в серти ф и кац и и м етодов оп ред елен и я гликогем оглобина. В этом
исследовании двум я ан ал и заторам и D -10 бы ло вы полнено 40 п рогонов за 20 раб очи х дней. П ри каж дом
прогоне осущ ествлялся двухкратн ы й анализ али к вот н орм ал ьн ы х и д и аб ети ч ески х проб. Р езультаты данного
и сследования точности пред ставл ен и я/восп рои зведен и я при веден ы в табли ц е 1.
Т о ч н о с т ь к а к с т е п е н ь п р и б л и ж е н и я к и с т и н н о й в е л и ч и н е
Н а б о р р е а г е н т о в д л я о п р е д е л е н и я г л и к о з и л и р о в а н н о г о г е м о г л о б и н а
A le , г е м о г л о б и н о в А 2 и F н а а н а л и з а т о р е D -1 0
Таблица 1. Результаты исследования т очност и как ст епени приближ ения к истинной величине.
Здоровы й пациент Больной сахарным
диабетом
Средняя (% А 1 с ) 6,0 10,3
В пределах прогона (вариационный коэффициент, %) 0,81 0,48
М ежду отдельными днями (вариационный коэффициент, % ) 2,66 1,81
М ежду отдельными прогонами (вариационный коэффициент, %) 2,35 1,65
Общая точность как степень приближения к истинной величине
(вариационный коэффициент, %)
3,64 2,49
Бы ло осущ ествлен о сравн ен и е использования н аб ора реаген тов для оп ред елен и я гликированного
гем оглобина: D -10, 400 (D -10 R eoder P ack, 400 T est) и н аб ора реаген тов для оп ред елен и я гем оглобина A ic
в анализаторе В А Р И А Н Т ™ II. О дно сравн и тельн ое и сслед ован и е бы л о п роведен о на пробах 40 пациентов.
См. рис. 1.
L20012103 Инструкция
--- стр. 28 ---
Символы , предусмотренные Директивой ЕС для применения в отношении средств
диагностики in vitro (IVDD, 98/79/ЕС)
Наборы реагентов и реагенты для определения гликозилированного гемоглобина на анализаторе D-10
B U F
Буфер для элюции № 1
B U F
Буфер для элюции № 2
WSH DIL SOLN
Раствор для
п ро м ы вк и/раз веден ия
CAL DIL SET
A N L T C R T R
Аналитический
картридж
DISK
Флоппи-диск
R E S IN
Смола
CAL SET
Набор
калибраторов/разбавителя
Набор калибраторов
C A L 1
Калибратор 1-го
уровня
C A L C A L DIL R E C O N
Калибратор 2-го уровня Кал ибратор/разбав ител ь Восстановление с
помощью:
W B P R M D I Н 20 S A M P ФЛАКОН USE
Затравка цельной крови Деионизированная вода Флаконы пробы Для использования с:
L20012103 Инструкция
--- стр. 29 ---
Наборы реагентов н реагенты для определения глнкозилнрованного гемоглобина на анализаторе Р-Ю
СОДЕРЖ АНИЕ Страница
Назначение.................................................................................................................................................................2
Резюме и разъяснение теста.................................................................................................................................. 2
Принцип методики...................................................................................................................................................2
Компоненты набора................................................................................................................................................. 3
Дополнительные компоненты, которые можно приобрести у компании Био-Рад
.................................4
Необходимые дополнительные компоненты, которые не могут быть приобретены у компании
Био-Рад...................................................................................................................................................................... 4
Меры предосторожности/предостережения......................................................................................................4
Взятие пробы и обращение с н е й ........................................................................................................................ 5
Приготовление и хранение реактивов.................................................................................................................5
Признаки нестабильности или ухудшения качества реактивов...................................................................6
Методика....................................................................................................................................................................7
Выбор метода.................................................................................................................................................. 7
Установка комплекта повторного заказа новой партии (флоппи-диска обновления
набора)...............................................................................................................................................................7
Процедура подготовки аналитического картриджа
.............................................................................. 7
Калибрование...................................................................................................................................................7
Обычный прогон............................................................................................................................................. 8
Установка дополнительного комплекта реактивов............................................................................... 8
Сертификация/отслеживаемость до эталонного материала и метода...............................................8
Требования контроля качества....................................................................................................................8
Инструкции в отношении интерпретации результатов.................................................................................. 9
Ограничения методики........................................................................................................................................... 9
Ожидаемый диапазон величин............................................................................................................................10
Рабочие характеристики.....................................................................................................................................1 1
Точность представления/воспроизведения.............................................................................................1 1
Степень приближения к истинной величине..........................................................................................1 1
Линейность/Извлечение............................................................................................................................. 12
Вещества, создающие помехи................................................................................................................... 12
Лабильный гемоглобин A jc .................................................................................................................12
Липемические пробы.............................................................................................................................13
Желтуха.....................................................................................................................................................13
Гемоглобин F (H bF).............................................................................................................................. 14
Карбамилированный гемоглобин.......................................................................................................14
Форма отчета об исследовании пробы.............................................................................................................. 15
Информация о безопасности продукта............................................................................................................. 20
Информация о торговой марке.................................
..........................................................................................20
Список литературы................................................................................................................................................ 20
L20012103 Инструкция
--- стр. 30 ---
Наборы реагентов и реагенты для определения гликозилнроваиного гемоглобина на анализаторе 0-10
НАЗНАЧЕНИЕ
Наборы реагентов для определения гликозилированного гемоглобина D-10 компании Био-Рад предназначены
для определения процента гемоглобина A jc в цельной крови человека с помощью ионообменной
высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Наборы реагентов предназначены для использования
в в анализаторе для определения гликозилированного гемоглобина D-10 компании Био-Рад.
Наборы реагентов предназначены для использования с целью диагностики in vitro.
РЕЗЮ М Е И РА ЗЪ ЯСН ЕН И Е ТЕСТА
Сахарный д и а б е т-это заболевание, характеризующееся наличием гипергликемии, связанной с неспособностью
организма использовать глюкозу, присутствующую в крови, для выработки энергии. При сахарном диабете I
типа прекращается выработка инсулина поджелудочной железой, в связи с чем глюкоза, присутствующая в
крови, не может поступать в клетки для их последующего использования с целью получения энергии. При
сахарном диабете II типа имеет место либо недостаточность выработки инсулина поджелудочной железой, либо
неспособность организма правильно использовать инсулин .1 Осложнения сахарного диабета, включая
поражения глаз, почек, нервов и крупных кровеносных сосудов сердца, головного мозга и конечностей,
характерны для обеих форм данного заболевания .2 Сахарным диабетом поражены более 5 % населения земного
шара.
Лечение сахарного диабета предусматривает длительное поддержание как можно более близкого соответствия
уровня глюкозы в крови ее нормальному уровню с целью минимизации риска отдаленных сосудистых
осложнений .3 ,4 Одиночное определение уровня глюкозы в крови натощак свидетельствует о состоянии
пациента в период времени, непосредственно предшествующий данному определению (в предыдущие
несколько часов), но не может охарактеризовать истинное состояние регуляции уровня глюкозы в крови .5 ,6
Точный показатель - среднюю концентрацию глюкозы в крови - можно определить путем измерения уровня
гемоглобина А )с (НЬА]С ) через каждые 2-3 месяца .3 ,5 ,6
Определяемый гликогемоглобин HbAjc образуется в два этапа посредством неферментного гликирования НЬА.
Первый этап заключается в образовании нестабильного альдимина (лабильного гемоглобина А |С , или пре-
гемоглобина А]С ) - обратимой реакции между карбонильной группой глюкозы и N-концевым валином 13-цепи
гемоглобина. Образование лабильного гемоглобина А]С прямо пропорционально концентрации глюкозы в
крови. В циркулирующих эритроцитах некоторое количество лабильного гемоглобина А (с преобразуется в
стабильный кетоамин гемоглобин HbAi c 7 (“преобразование Амадори”).
Уровень HbAic пропорционален средней концентрации глюкозы и продолжительности циркуляции эритроцита.
В связи с этим, определение уровня НЬА]С было принято в качестве средства регулярного клинического
контроля состояния пациентов при сахарном диабете .7 Методы определения уровня HbAic включают в себя
электрофорез, иммунные тесты и хроматографию.
Методика использования набора реагентов для определения гликозилированного гемоглобина A k D-10
основана на хроматографическом выделении НЬА1 с в катионообменном картридже. Выделение НЬА]С
оптимизировано таким образом, чтобы свести к минимуму помехи со стороны вариантов гемоглобина,
лабильного гемоглобина А )с и карбамилированного гемоглобина. Дополнительная информация представлена в
разделах “Ограничения методики” и “Рабочие характеристики”. Кроме того, программа определения
гемоглобина А]С D-10 предусматривает автоматическое взятие пробы из пробирки с первичным образцом
цельной крови с последующим разведением пробы; время анализа одной пробы составляет 3 минуты.
П РИНЦИП М ЕТОДИКИ
Методика использования наборов реагентов для определения гликозилированного гемоглобина А ]с на
анализаторе D-10 основана на принципах ионообменной высокоэффективной жидкостной хроматографии
(ВЭЖХ). Анализатор D-10 автоматически разводит пробу, после чего осуществляется инъекция пробы в
аналитический картридж. Анализатор D-10 создает в картридже запрограммированный буферный градиент
возрастающей концентрации ионов, благодаря которому осуществляется разделение гемоглобинов на основе их
ионных взаимодействий с материалом картриджа. Затем разделенные гемоглобины проходят через проточную
ячейку фильтерного фотометра, где осуществляются измерения изменений поглощения при длине волны
415 нм.
L20012103 Инструкция
--- стр. 31 ---
Программное обеспечение анализатора D-10 обеспечивает обработку первичных данных, получаемых при
каждом анализе. Для количественного определения НЬА]С используется двухуровневое калибрование. В связи с
каждой пробой выдаются отчет о пробе и хроматограмма. Площадь гемоглобина A k рассчитывается с
помощью экспоненциально модифицированного гауссова (EMG) алгоритма, исключающего площади пиков
лабильного гемоглобина А |С и карбамилированного гемоглобина при определении площади пика гемоглобина
А )с.
Набор реагентов для определения гликозилированного гемоглобина A lc D-10 предназначен для использования
в анализаторе для определения гликозилированного гемоглобина D-10 Био-Рад.
К О М П О Н Е Н Т Ы Н А Б О Р А
Наборы реагентов и реагенты для определения гликозилированного гемоглобина на анализаторе D-I0
220-0101 Н аб о р р е а г е н т о в д л я о п р ед ел ен и я гл и к о зи л и р о в а н н о г о гем о гл о б и н а (D-10
H em o g lo b in A lc P ro g ra m R e o rd e r P ack )
Данный набор содержит принадлежности, рассчитанные на выполнение 400 тестов:
R E F Описание
*Рабочий буфер D-10 № 1. Две бутыли, содержащие 2000 мЛ Бис-Трис/фосфатного буфера, pH 6,0. Содержат
< 0,05 % азида натрия в качестве консерванта.
*Рабочий буфер D-10 № 2. Одна бутыль, содержащая 1000 мЛ Бис-Трис/фосфатного буфера, pH 6,7.
Содержит < 0,05 % азида натрия в качестве консерванта.
*Раствор для промывки и разведения D-10. Одна бутыль, содержащая 1600 мЛ деионизированной воды.
Содержит < 0,05 % азида натрия в качестве консерванта.
♦Аналитическая колонка D-10. Один катионообменный картридж размерами 4,0 мм (внутренний диаметр) х
30 мм.
* Дискета с программой содержит параметры программы определения гемоглобина Ajc D-10.
*Набор калибраторов D -10. Один набор состоит из трех флаконов с калибратором 1-го уровня, трех флаконов
с калибратором 2-го уровня и одной бутыли с разбавителем калибратора. Флаконы калибратора
содержат лиофилизированный гемолизат эритроцитов человека с гентамицином, тобрамицином
и ЭДТА в качестве консервантов. В каждом флаконе восстановленный объем равен 7 мЛ.
Бутыль с разбавителем калибратора содержит 100 мЛ деионизированной воды и < 0,05 % азида
натрия в качестве консерванта. Аннотация к набору калибраторов.
♦Праймер Четыре флакона лиофилизированного гемолизата эритроцитов человека с гентамицином,
тобрамицином и ЭДТА в качестве консервантов. В каждом флаконе восстановленный объем
равен 1,0 мЛ.
Микропробирки. 100 полипропиленовых пробирок объемом 1,5 мЛ с прокалываемыми крышками.
Термобумага один рулон.
* не поставляется отдельно
* Компоненты не продаются по отдельности .
R E F 220-0109, Д о п о л н и т е л ь н ы й н аб о р р е а ге н т о в д л я о п р ед ел ен и я
г л и к о зи л и р о в а н н о г о ге м о гл о б и н а A ic (D-10 Hemoglobin A lc Supplem ental Reagent
Pack)
Данный набор реагентов используется в качестве дополнения к набору реагентов для определения
гликозилированного гемоглобина (D-10 Hemoglobin A lc R eorder Pack, 400 Test)
с целью обеспечения пользователей с низким объемом тестов буферными растворами и раствором для
промывки/разведения на 400 тестов.
L20012103 Инструкция
--- стр. 32 ---
Наборы реагентов и реагенты для определения гликозилированного гемоглобина на анализаторе 0-10
R E F
220 -0 110*
220 -0 1 1 1*
220 -0 1 12*
Описание
Рабочий буфер 0 - 1 0 № 1. Две бутыли, содержащие 2000 мЛ Бис-Трис/фосфатного буфера, pH
6,0. Содержат < 0,05 % азида натрия в качестве консерванта.
Рабочий буфер Б -Ю № 2. Одна бутыль, содержащая 1000 мЛ Бис-Трис/фосфатного буфера,
pH 6,7. Содержит < 0,05 % азида натрия в качестве консерванта.
Раствор для пром ы вки/разведения В-10. Одна бутыль, содержащая 1600 мЛ
деионизированной воды. Содержит < 0,05 % азида натрия в качестве консерванта.
* Компоненты не продаются по отдельности.
П РИ М ЕЧ А Н И Е: Система 0 -1 0 рассчит ы вает уровни буферных раст воров и отходов исходя из того, что
объем т ест ов составляет не м енее 200 в м есяц и не менее 4 проб за один прогон . П ользоват ели с низким
объемом т ест ов полност ью расходую т буферные раст воры и заполняют наруж ный резервуар для отходов
еще до появления на дисплее соот вет ст вую щ их предост ерегаю щ их сообщений. П еред каж дым прогоном
проверяйте визуально уровни буферных раст воров и уровень отходов в резервуаре для отходов.
Д О П О Л Н И Т Е Л ЬН Ы Е К О М П О Н Е Н Т Ы , К О Т О РЫ Е М О Ж Н О П РИ О БРЕ С Т И У КО М П А Н И И БИ О
РАД
R E F
220-0297
220-0375
740
120
Описание
Адаптер ф лакона пробы, 10 х 1,5 мЛ
Т ерм ограф ическая бумага D-10, 10 рулонов
Д вухуровневый контроль сахарного диабета Липочек®, 6 х 0,5 мЛ
Л инейны й набор стандартов для определения гемоглобина А(с Лифочек® (по одному для
каждого из 4 уровней), 4 х 0,5 мЛ
Н ЕО БХ О Д И М Ы Е Д О П О Л Н И Т Е Л Ь Н Ы Е К О М П О Н ЕН ТЫ , К О Т О РЫ Е НЕ М ОГУТ БЫ Т Ь
П РИ О БРЕ Т Е Н Ы У КО М П А Н И И БИО -РА Д
Описание
П ипетки, 5 мкЛ, 0,5 мЛ, 1 мЛ, 7 мЛ
Д еионизированная вода
О дноразовые перчатки
М ЕРЫ П РЕ Д О С Т О РО Ж Н О С ТИ / П РЕ Д О С Т Е РЕ Ж Е Н И Я
1. Любые материалы человеческого происхождения следует считать инфицированными и обращаться с ними
с использованием типичных процедур, обеспечивающих биологическую безопасность.
2. В местах выполнения операций с пробами пациентов и реактивами данного теста не следует курить, а
также принимать пищу или напитки.
3. Не пользуйтесь пипеткой с помощью рта.
4. При выполнении операций с какими бы то ни было реактивами и пробами, а также при эксплуатации
системы Э-Ю, пользуйтесь средствами персональной защиты.
5. Удаляйте все отходы в соответствии с применимыми федеральными и/или местными правилами.
6. Некоторые реактивы содержат азид натрия, который может взаимодействовать с медной или свинцовой
сантехникой с образованием взрывоопасных азидов металлов. При удалении этих реактивов следует
проявлять осторожность. При удалении через канализацию следует проливать канализационную трубу
большими объемами воды во избежание накопления азидов.
7. Удаляемые или обрабатываемые отходы, содержащие пробы пациентов или биологические продукты,
следует считать биологически опасными.
8. Операции с химическими реактивами следует осуществлять в соответствии с правилами надлежащей
лабораторной практики.
9. Дополнительная информация о безопасности и предостережения в отношении химических рисков
представлены в разделе “Информация о безопасности продукта”.
L20012103 Инструкция
--- стр. 33 ---
10. При расплескивании следует незамедлительно и тщательно удалять весь проливаемый материал.
Дезинфицируйте места проливов биологически опасных материалов. Удаляйте все инфицированные
материалы соответствующим образом.
11. Не используйте набор после истечения срока его годности. Срок годности указан на коробке с набором.
12. Не допускайте взаимной замены крышек и пробок флаконов или бутылок, так как это приводит к
перекрестному загрязнению реактивов.
13. Каждая единица цельной крови, использованная при производстве калибраторов, и затравка цельной крови
были испытаны с помощью методов, одобренных Управлением по санитарному надзору за качеством
пищевых продуктов и медикаментов (FDA), и дали отрицательный результат в анализах на ВИЧ-1, ВИЧ-2,
гепатит В (вирус гепатита В), гепатит С (вирус гепатита С) и сифилис. Однако, ни один метод анализа не
может предоставить полной гарантии отсутствия этих или других инфекционных агентов в продуктах,
содержащих исходный человеческий материал. В соответствии с правилами надлежащей лабораторной
практики, любой исходный человеческий материал следует считать потенциально зараженным любым
инфекционным агентом; в связи с этим, с калибраторами и затравкой цельной крови следует обращаться с
соблюдением тех же мер предосторожности, которые применяются в отношении образцов, получаемых от
пациентов.
14. Для обеспечения адекватной работы данного продукта требуется соблюдение протокола, приведенного в
этом документе.
15. Никогда не смешивайте содержимое разных бутылок, содержащих один и тот же реактив, так как это может
привести к загрязнению реактива и нарушить работу продукта.
16. Пробки флаконов калибратора и затравки изготовлены из сухого натурального каучука.
17. Не используйте разбавитель калибратора для предварительного разведения проб пациентов.
ВЗЯТИЕ ПРОБЫ И ОБРАЩЕНИЕ С НЕЙ
Вид пробы
Цельная кровь, капиллярная кровь
Меры предосторожности при взятии пробы
Любые материалы человеческого происхождения следует считать инфицированными и обращаться с ними с
использованием типичных процедур, обеспечивающих биологическую безопасность.
Добавки к пробе, консерванты
Пробы цельной крови следует собирать в вакуумные пробирки для сбора проб с ЭДТК.
Хранение проб
Пробы цельной крови можно хранить в течение периода до 7 дней при температуре 2-8 °С.
Подготовка пробы
1. Перед проведением анализа следует дождаться, пока температура пробирки с пробой не достигнет 15-
30 °С (комнатной температуры). При комнатной температуре пробы стабильны в течение 3 дней.
Какой-либо подготовки пробы не требуется. Смешивание не оказывает какого-либо влияния на
получаемую величину HbAic, если вся площадь умещается в пределах диапазона измерений. Пробирки
с пробой загружают в штатив для проб D-10 и помещают в систему D-10. Штриховые коды проб
должны быть обращены к задней стенке прибора. Должны быть использованы специальные вкладыши в
штативы для пробирок диаметром 12, 13 и 14 мм. Удалите все вкладыши для пробирок диаметром 16
мм. Для использования пригодны пробирки высотой 75-100 мм.
2. Если проба находится в пробирке неподходящего размера или типа, а также если количество пробы,
присутствующее в пробирке, составляет менее 2,0 мЛ, то проба должна быть предварительно
разбавлена. Для предварительного разбавления необходимо перенести пипеткой 1,5 мЛ раствора для
промывки/разведения во флакон объемом 1,5 мЛ, снабженный этикеткой, а затем добавить в него 5 мкЛ
пробы цельной крови. Закройте флакон с пробой крышкой и тщательно перемешайте. Используйте
адаптер для флаконов с пробой, рассчитанный на флаконы объемом 1,5 мЛ.
Транспортировка проб
Наборы реагентов и реагенты для определения гликозилированного гемоглобина на анализаторе D-10
L20012103 Инструкция
--- стр. 34 ---
Наборы реагентов и реагенты для определения гликозилированного гемоглобина на анализаторе 0-10
Все пробы человеческого происхождения следует транспортировать в соответствии с национальными и
международными правилами транспортировки.
П РИ ГО ТОВЛЕН И Е И Х РАНЕНИЕ РЕАКТИВОВ
Назначаемые величины и диапазоны указаны во вкладыше, прилагаемом к партии калибраторов и контролен.
Для обеспечения оптимальной работы программы, при переходе к использованию другой партии реактивов
и/или картриджей необходимо устанавливать параметры, взятые из соответствующего флоппи-диска.
При установке или смене буферов, раствора для промывки/разведения и аналитической колонки следует
соблюдать процедуры, описанные в 4-м разделе Руководства по эксплуатации 0-10.
Р абочие буф еры и р аств о р д л я п р о м ы в к и /р азв ед ен и я
1. Перед проведением анализа следует дождаться, пока температура буферов и раствора для
промывки/разведения не достигнет 15-30 °С (комнатной температуры). Перед установкой каждой
бутыли перемешивайте ее содержимое, плавно переворачивая вверх дном.
2. Буферы и раствор для промывки/разведения остаются стабильными до даты истечения срока годности
при их хранении без вскрытия емкости при температуре 15-30 °С. После вскрытия бутылей эти
реактивы сохраняют стабильность в течение 8 недель при их хранении при температуре 15-30 °С.
3. При использовании нового набора реагентов установите по одной бутыли каждого реактива и следуйте
процедуре “ У ст ан о в к а нового набора р еаген то в новой п ар ти и ”, описанной в разделе “М етодика”.
После 200 инъекций устанавливайте новую бутылку Буф ера № 1.
4. После установки Буфера № 1 заново устанавливайте уровень для данного реактива.
5. Допускается взаимная замена растворов для промывки/разведения между наборами реагентов разных
партий.
П рай м ер
При установке новой аналитической колонки используйте свежие аликвоты праймера.
1. Праймер остается стабильным до даты истечения срока годности при его хранении без вскрытия
емкости при температуре 2-8 °С.
2. Приготовьте праймер путем добавления во флакон 1 мЛ деионизированной воды.
3. Осторожно воспользовавшись мешалкой, добейтесь растворения и полного перемешивания.
4. Дайте отстояться в течение 10-15 минут при 15-30 °С.
5. Укажите на этикетке дату восстановления. Восстановленный праймер стабилен в течение одного дня
при его хранении при температуре 2-8 °С.
6. Допускается использование праймеров разных партий.
К ал и б р ато р ы гем оглобин а А и
Восстановление и хранение калибраторов НЬА^ должно осуществляться в соответствии с инструкциями,
содержащимися во Вкладыше к набору калибраторов/разбавителя.
Э к стр аги р у ем ы е стан д ар ты
В данном методе ВЭЖХ экстрагируемые стандарты не используются.
К он троли
Восстановление и хранение контролей должно осуществляться в соответствии с инструкциями, содержащимися
во вкладыше в упаковку изготовителя.
Контроли сахарного диабета Липочек компании Био-Рад перед анализом следует разбавлять в соотношении
1:300. С помощью пипетки перенесите 1,5 мЛ раствора для промывки/разведения во флакон объемом 1,5 мЛ с
прикрепленной этикеткой, а затем добавьте 5 мкЛ восстановленного контроля.
Закройте каждый флакон с контролем крышкой и тщательно перемешайте его содержимое.
ПРИЗНАКИ Н ЕС ТА БИ Л ЬН О С ТИ И ЛИ УХУДШ ЕНИЯ КАЧЕСТВА РЕАКТИВОВ
В случае замораживания реактивов при транспортировке, перемешивайте содержимое каждой бутылки перед ее
установкой в прибор с помощью плавного переворачивания.
Храните все реактивы при температуре, указанной на этикетке, и не используйте их после истечения срока
годности.
Не используйте восстановленные материалы (калибратор, праймер) после истечения их срока годности.
Ь20012103 Инструкция
--- стр. 35 ---
Наборы реагентов и реагенты для определения гликозилированного гемоглобина на анализаторе 0-10
Не используйте какие-либо реактивы, имеющие какие-либо признаки изменения цвета, помутнения или
выпадения осадка.
Не используйте какие-либо реактивы, имеющие какие-либо признаки протекания из емкости.
Не используйте калибратор или праймер, если гранула имеет коричневый цвет или флакон поврежден. Если
лиофилизированный материал содержит нерастворимое вещество, то этот материал следует выбросить и
осуществить восстановление материала другого флакона.
ПРОЦЕДУРА
Выбор метода
С помощью LOT INFO на дисплее:
Нажмите на “METHOD” на сенсорном экране.
Выберите желаемый метод (НЬА|С ).
• Нажмите на “EXIT”.
• Нажмите на “YES”, чтобы подтвердить изменение метода.
• Нажмите на “EXIT”.
Выбранный метод указан слева от строки состояния.
Если Вы не устанавливаете новую партию реактивов, то необходимость в промывании системы
отсутствует.
Установка нового набора реагентов новой партии (флоппи-диска обновления набора)
• Перейдите к LOT INFO на дисплее.
• Нажмите на кнопку “UPDATE KIT” (“Обновление набора”).
Вставьте флоппи-диск обновления набора в А:\дисковод.
Выполните представленные на экране инструкции по процедуре обновления набора.
• Извлеките флоппи-диск из А:\дисковода после выполнения процедуры.
Процедура подготовки аналитической колонки
• Перенесите пипеткой 1 мЛ восстановленного праймера во флакон с пробой. Поместите флакон с
пробой в адаптер флакона с пробой, к которому прикреплена этикетка со штрих-кодом PRIME,
затем поместите адаптер в положение № 1 штатива проб.
• Запустите прогон. После завершения прогона колонка готова к калиброванию.
Калибрование
Калибрование должно осуществляться один раз после установки и подготовки каждой новой
аналитической колонки.
• Подготовьте пробы так, как описано в разделе “Подготовка пробы”.
• Введите калибраторы и контроли в систему D-10. Используйте адаптеры флаконов с пробами для
флаконов с калибраторами и контролями объемом 1,5 мЛ. Адаптеры должны иметь штрих-коды,
идентифицирующие вид пробы.
Порядок проб с калибраторами:
№ пробы Реактив Адаптер
1 Калибратор HbAjc, Уровень 1 CALI
2 Калибратор HbAic, Уровень 2 CAL2
3 Контроль, Уровень 1 CTRL
4 Контроль, Уровень 2 CTRH
5 - 1 0 Пробы пациентов
П Р И М Е Ч А Н И Е : Величины определяемого компонента, распечат ы ваемы е в калибрационных отчетах - это
величины, назначенные калибраторам. В случае безуспеш ного калибрования, в от чет ах указываю т ся эти
назначенные величины; однако, в конце калибрационного отчета присутствует запись: “Неудачная попытка
калибрования". Если НЕ ВЫ БРАНА предупреж дающ ая уст ановка “О становить в случае безуспешности
калибрования” (см. раздел 2 Руководст ва по эксплуатации 0-10), то прогон будет продолж аться с
L20012103 Инструкция
--- стр. 36 ---
Наборы реагентов и реагенты для определения гликозилированного гемоглобина на анализаторе 0-10
использованием калибровочных коэффициентов из предш ест вую щ его приемлемого прогона калибрования. В
разделе 6 Руководст ва по эксплуат ации D -10 представлены инструкции по поиску и уст ранению нарушений.
Обычный прогон
После процедуры калибрования аналитической колонки следует воспользоваться следующей конфигурацией
прогона. Информация о частоте включения в прогон контрольных проб представлена в разделе “Требования
контроля качества”.
Порядок проб без калибраторов:
№ пробы Реактив
1 Контроль, Уровень 1
2 Контроль, Уровень 2
3 - 1 0 Пробы пациентов
Установка дополнительного набора реагентов
При установке реактивов из Дополнительного набора реагентогв необходимо всегда использовать
взаимосоответствующие Буфер № 1 и Буфер № 2. Ни в коем случае не используйте бутылку с буфером из
набора реагентов для определения гликозилированного гемоглобина: D-10, 400 (D-10 Reoder Pack, 400
Test)
в сочетании с буфером из Дополнительного набра реагентов.
• При установке новых бутылей пользователи должны переустанавливать счет инъекций
буфера. (См. раздел 2, “LOT INFO на дисплее”, в Руководстве по эксплуатации D-I0).
• В систему необходимо вручную вводить информацию о партии буфера и раствора для
промывки/разведения, а также о сроках их годности.
• При установке второй бутыли Буфера № 1 следует переустанавливать счет инъекций
Буфера № 1.
Сертификация/отслеживаемость до эталонного материала и метода
Программа определения гемоглобина А \с D-10 сертифицирована NGSP (Национальной программой по
стандартизации гликогемоглобина (США)) как имеющая документально подтвержденную отслеживаемость до
эталонного метода DCCT (Исследования контроля и осложнений сахарного диабета). Целью NGSP является
стандартизация результатов анализов на гликогемоглобин таким образом, чтобы результаты клинических
лабораторных анализов были сравнимы с результатами, о которых сообщается в исследовании DCCT, в
котором было установлено соотношение среднего уровня глюкозы в крови с риском сосудистых осложнений .8
Для назначения величин IFCC (Международной Федерации Клинической Химии) вторичным эталонным
материалам используется одобренный эталонный метод IFCC. Эти вторичные материалы используются для
назначения величин калибраторам продукта и определения параметров калибрования продукта посредством
использования основного уравнения IFCC/NGSP .9
^¡> Основное уравнение:
(NGSP А,с ) = 0,9148 (IFCC А1 с ) + 2,152
(IFCC А,с ) = 1,093 (NGSP А,с ) - 2,350
Величины NSGP стандартизированы по отношению к исследованию DCCT с помощью сети NGSP и, таким
образом, могут быть отслежены до клинических исходов.
Для преобразования условных единиц (% от общего гемоглобина) в единицы СИ (доля от общего гемоглобина),
процент гемоглобина А (с умножают на 0,0 1.
Требования контроля качества
В соответствии с требованиями надлежащей лабораторной практики, один раз в 24 часа в прогон следует
включать диабетические и недиабетические контрольные пробы. В случае неполучения ожидаемых
контрольных величин следует выполнить повторный прогон.
И Н СТРУ КЦ ИИ В О ТН О Ш ЕН И И И Н ТЕРП РЕТА Ц И И РЕЗУЛЬТА ТО В
L20012103 Инструкция
--- стр. 37 ---
Для получения приемлемых результатов следует соблюдать следующие требования:
1. Система D-10 прошла калибрование. Для Ваших справок приемлемые диапазоны наклона и отсечения
представлены во Вкладыше к набору калибраторов наборов определения гликозилированного
гемоглобина А 1 с .
2. Общая площадь каждого анализа должна варьировать в пределах диапазона от 1,0 до 4,0 миллиона
мкВ • сек.
Если площадь выходит за пределы этого диапазона, то результаты сообщать не следует.
3. Пики правильно идентифицированы. Для Ваших справок окна времени удерживания определяемого
компонента указаны во Вкладыше к Аналитическому картриджу определения гемоглобина А |С D-10.
4. Величины контроля качества не выходят за пределы установленного диапазона.
5. Диапазон сообщаемых результатов: диапазон сообщаемых уровней НЬА]С при использовании набора
реагентов - от 3,8 до 18,5 %. Этот диапазон был установлен на основании данных, представленных в
разделе “Рабочие характеристики”. В целом, эти данные показывают, что линейный диапазон
применения набора реагентов составляет от 3,8 до 18,5 % HbAtc. Если результат выходит за пределы
диапазона сообщаемых уровней, то величина % гемоглобина А ]с снабжается звездочкой (*) и не должна
сообщаться.
О ГРА Н И ЧЕН И Я М ЕТО ДИ КИ
Разведение пробы
Нормальная концентрация общего гемоглобина соответствует общей площади, равной примерно 2,5 миллиона
мкВ • сек. Было осуществлено разведение проб цельной крови пациентов малого, среднего и большого объемов
с получением общих площадей от 1,0 до 4,0 миллионов мкВ • сек. Эти пробы прогоняли с использованием
набора реагентов для определения гликозилированного гемоглобина, с целью подтверждения того, что общая
площадь не влияет на результат. Рекомендуемый диапазон общих площадей составляет от 1,0 до 4,0 миллионов
мкВ • сек. Если площадь пробы выходит за пределы ожидаемого диапазона, то пробу следует предварительно
разбавить вручную в соответствии с инструкциями, представленными в разделе “Подготовка пробы”.
Если площадь пробы снова оказывается за пределами ожидаемого диапазона, то пробу следует повторно
развести таким образом, чтобы она оказалась в диапазоне общих площадей от 1,0 до 4,0 миллионов, и
осуществить повторный прогон.
ПРИМЕЧАНИЕ: В некот орых случаях при высоких значениях общей площ ади и гемоглобина A¡c пробы
(например, при гемоглобине A ¡c , равном 15% и общей площади, равной 4 М), пик гемоглобина А ¡с мож ет быть
элюирован за пределы уст ановленного окна удерж ивания. В эт их случаях проба долж на быть разведена до
площади, равной примерно 2,5 М, с последующ им осущ ест влением повт орного прогона.
Аномальная продолжительность жизни эритроцита
Пробы пациентов с гемолитической анемией дают пониженные величины гликозилированного гемоглобина в
связи с укороченной продолжительностью жизни эритроцита. Этот эффект зависит от тяжести анемии. Пробы
пациентов с полицитемией или после перенесенной операции удаления селезенки могут давать повышенные
уровни гликозилированного гемоглобина из-за несколько увеличенной продолжительности жизни 10эритроцитов.
Варианты гемоглобина
Величины HbAtc, полученные с помощью набора реагентов определения гемоглобина А]С для проб крови
пациентов с признаком HbS и больных диабетом с признаком НЬС, не имели каких-либо клинически значимых
отличий от величин, полученных с помощью боратного аффинного метода, сертифицированного NGSP. При
исследовании образцов крови пациентов с признаком НЬС, не страдающих диабетом, могут быть получены
результаты ниже ожидаемого уровня. Типичные хроматограммы, получаемые у пациентов с признаком HbS и
пациентов с признаком НЬС, представлены на рис. 5 и 6. При редко встречающихся гомозиготных формах (SS
или СС) НЬА отсутствует; в связи с этим, какой-либо величины НЬА|С получить невозможно.
Пробы пациентов с прочими аномальными вариантами гемоглобина, включая HbG, НЬН и гемоглобин Уэйна, с
помощью использования набора реагентов определения гемоглобина А ]с не изучали. Для получения
положительного подтверждения в отношении любого конкретного варианта гемоглобина требуются
альтернативные методы разделения.
ОЖ ИДАЕМ Ы Й ДИАПАЗОН В ЕЛИ ЧИ Н
Диапазоны гемоглобина А1 с п
Наборы реагентов и реагенты для определения гликозилированного гемоглобина на анализаторе D-I0
L20012103 Инструкция
--- стр. 38 ---
Наборы реагентов н реагенты для определения гликозилированного гемоглобина на анализаторе 0-10
С целью интерпретации результатов могут быть использованы диапазоны НЬА]д , указанные ниже; однако, при
оценке степени контроля уровня глюкозы в крови следует также учитывать такие факторы как
продолжительность сахарного диабета, соблюдение схемы терапии и возраст пациента. Приведенные величины
неприменимы к беременным женщинам. Указание “Рекомендуется принятие мер” должно выполняться с
учетом индивидуальных особенностей пациента. Такие меры могут включать в себя интенсивное обучение
пациента методам самостоятельного лечения сахарного диабета, взаимопомощь больных сахарным диабетом
при проведении лечения, направление к эндокринологу, изменение фармакотерапии, переход к более
тщательному самостоятельному контролю уровня глюкозы в крови или учащение контактов с пациентом.
Гемоглобин А ¡с (%) Степень контроля уровня глюкозы
> 8 Рекомендуется принятие мер!
< 7 Целевой уровень^
< 6 Недиабетический уровень
f Высокий риск развит ия ослож нений в отдаленном периоде - т аких как рет инопат ия, нефропатия,
нейропатия и кардиопатия Указание “Рекомендует ся принятие м е р ” долж но выполняться с учет ом
индивидуальных особенност ей пациента.
/ Присутствует некоторая опасность гипогликемической реакции у больны х диабетом I типа. У некоторых
лиц с отсутствием т олерант ност и к глюкозе и больных "субклиническим" диабетом этот диапазон
мож ет соот вет ст воват ь повы ш енному уровню НЬА и-.
Расчет среднего уровня глюкозы в плазме (СУГП)
Расчет среднего уровня глюкозы в плазме (СУГП) за последние 60 дней на основании величины НЬА|С дает
возможность получить дополнительную клиническую информацию. На основании анализа полученных в
исследовании ОССТ ежеквартальных величин НЬА^ и соответствующих профилей глюкозы в капиллярной
крови, построенных по семи точкам, была выведена линейная регрессия, используемая для расчета СУГП .1
Этот расчет не может быть осуществлен на основе величин менее специфичных показателей (общего НЬА| и
общего гликозилированного гемоглобина), поскольку корреляция фракций НЬА1 а и НЬА^ с длительным
контролем уровня глюкозы очень сомнительна. Кроме того, известно, что негликозилированные аддукты,
связанные с почечной недостаточностью, алкоголизмом, и т.д., увеличивают фракции НЬА(а и НЬА|ь, приводя к
завышению данных .13' 15
Для расчета СУГП на основании величины НЬА^ следует использовать следующее уравнение линейной
регрессии:
Расчетная величина СУГП — 35,6 (%>НЬА! с ) - 77,3
НЬА¡с (%) Расчетная величина СУГП (мг/дЛ)
6.0 135
7,0* 170
9.0 240
* Целевой уровень, уст ановленны й Американской ассоциацией диабет а (ADA).
Недиабетический (нормальный) диапазон
Недиабетические (нормальные) уровни должны устанавливаться каждой лабораторией исходя из характеристик
исследуемой популяции.
В Третьем национальном исследовании здоровья и питания, проведенном в США, были исследованы 20
испытуемых в возрасте > 20 лет с нормальным уровнем глюкозы в плазме натощак, не имевшие ранее
диагностированного сахарного диабета. Ведичины НЬА1сопределяли с помощью системы Био-Рад ДИАМАТ™.
Взвешенный средний уровень НЬА]с для пациентов с нормальным уровнем глюкозы в плазме натощак (п =
5694) составил 5,17 % (стандартное отклонение - 0,45 %). 95 % доверительный интервал (средняя ± 2
стандартных отклонения) составил от 4,27 % до 6,07 % НЬА]С .
Поскольку набор реагентов для определения гликозилированного гемоглобина сертифицирован NGSP, этот
нормальный диапазон может быть использован в качестве эталона до тех пор, пока лабораторией не будет
L20012103 Инструкция
--- стр. 39 ---
проанализировано достаточное количество проб, позволяющее определить свои собственные нормальный и
диабетический диапазоны, репрезентативные для местной исследуемой популяции.
РА БОЧИ Е Х А РА КТЕРИ СТИ КИ
Точность представления/воспроизведения
Точность представления/воспроизведения, обеспечиваемая набором реагентов, была оценена в одном
исследовании, проведенном в соответствии с руководством >1ССЬ8 ЕР5-Т2 “Оценка точности
представления/воспроизведения, обеспечиваемой приборами, используемыми в клинической химии”,
адаптированным ЫОБР для применения в сертификации методов определения гл и ко гемоглобина. В этом
исследовании двумя анализаторами 0-10 было выполнено 40 прогонов за 20 рабочих дней. При каждом
прогоне осуществлялся двухкратный анализ аликвот нормальных и диабетических проб. Результаты данного
исследования точности представления/воспроизведения приведены в таблице 1 .
Точность как степень приближения к истинной величине
Наборы реагентов и реагенты для определения гликознлированного гемоглобина на анализаторе 0-10
Таблица 1. Результаты исследования т очност и как ст епени приближ ения к истинной величине.
Здоровый пациент Больной сахарным
диабетом
Средняя (% А 1С ) 6,0 10,3
В пределах прогона (вариационный коэффициент, %) 0,81 0,48
Между отдельными днями (вариационный коэффициент, %) 2,66 1,81
Между отдельными прогонами (вариационный коэффициент, %) 2,35 1,65
Общая точность как степень приближения к истинной величине
(вариационный коэффициент, %)
3,64 2,49
Было осуществлено сравнение использования набора реагентов для определения гликознлированного
гемоглобина: D-10, 400 (D-10 Reoder Pack, 400 Test) и набора реагентов для определения гемоглобина А )с
в анализаторе ВАРИАНТ™ И. Одно сравнительное исследование было проведено на пробах 40 пациентов.
См. рис. 1.
наклон - 0,9743
% Hb Au,
D-10
..
« Ш И М И Л Г Н А , ,
;
отсечение = 0,3078 - • > 1
Я2 - 0,9945
f«4 ,
Рис. 1 Корреляция меж ду Программой ‘
определения гемоглобина А !с 0-10 и
Программой определения гемоглобина А ¡ с
ВАРИАНТЫ. % Hb А,с, ВАРИАНТ 1 1 .
Линейность/Извлечение
L20012103 Инструкция