Набор реагентов для выявления фрагмента Y хромосомы плода в крови матери методом ПЦР в режиме реального времени (Пол плода) по ТУ 9398-089-46482062-2015 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 3 --- ; / Лднк-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 3 Пол плода Листов 23 Основным методом пренатального установления пола будущего ребенка сегодня является ультразвуковая диагностика, однако на ранних сроках беременности этот метод не всегда корректен и часто субъективен. Показания к проведению исследования: Наличие у беременных женщин маскулинизирующих эндокринных заболеваний, в том числе врожденной дисфункции коры надпочечников (ВДКН), для коррекции проведения лекарственной терапии. При возможном носительстве женщинами генов гемофилии и других заболеваний, сцепленных с полом (умственная отсталость, связанная с Х-хромосомой; миодистрофия; адренолейкодистрофия; синдром Альпорта; иммунодефицит, связанный с Х-хромосомой; пигментный ретинит; гидроцефалия, связанная с X- хромосомой; синдром Лоу; Х-связанный ихтиоз), особенно если ранее уже родился ребенок, имеющий подобное заболевание. Предполагаемые нарушения детерминации пола плода по результатам УЗИ. --- стр. 4 --- / ^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 4 Пол плода Листов 23 1 НАЗНАЧЕНИЕ 1.1 Настоящая инструкция распространяется на набор реагентов для выявления фрагмента Y хромосомы плода в крови матери методом ПЦР в режиме реального времени Пол плода. 1.2 Набор реагентов для выявления фрагмента Y хромосомы плода в крови матери методом ПЦР в режиме реального времени Пол плода предназначен для обнаружения мультикопийного фрагмента Y хромосомы плода в крови беременной женщины методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. 1.3 В качестве биологического материала используют периферическую кровь. 1.4 Набор может быть использован в клинико-диагностических лабораториях медицинских учреждений и научно-исследовательской практике. 2 ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1 Состав набора реагентов Набор реагентов Пол плода выпускают в стандартной фасовке со смесью для амплификации в стрипах (маркируется - фасовка S, стрипы) или со смесью для амплификации в пробирках (маркируется - фасовка S, пробирки). Наименование компонентов Количество пробирок / Стрипов Номинальный объём компонента Фасовка S, стрипы Смесь для амплификации, запечатанная парафином 12 стрипов по 8 пробирок по 20 мкл Раствор Taq-полимеразы 2 пробирки по 500 мкл Минеральное масло 2 пробирки по 1,0 мл Положительный контрольный образец 1 пробирка 75 мкл Крышки для Стрипов 12 шт. Фасовка S, пробирки Смесь для амплификации, запечатанная парафином 96 пробирок по 20 мкл Раствор Taq-полимеразы 2 пробирки по 500 мкл Минеральное масло 2 пробирки по 1,0 мл Положительный контрольный образец 1 пробирка 75 мкл --- стр. 5 --- / ^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 5 Пол плода Листов 23 2.2 Число анализируемых проб Набор реагентов, включающий 96 пробирок, рассчитан на проведение 48 определений (не более 46 неизвестных образцов в двух повторах каждый, отрицательного контрольного образца (в трёх повторах) и положительного контрольного образца). 2.3 Принцип метода Метод: Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с детекцией результатов в режиме реального времени; качественный мультиплексный анализ. В основе работы наборов реагентов лежит принцип амплификации ДНК методом ПЦР. Процесс амплификации заключается в серии повторяющихся циклов температурной денатурации ДНК, отжига праймеров комплементарных специфическому участку ДНК и последующей достройке полинуклеотидных цепей с этих праймеров Taq-полимеразой. Для повышения чувствительности и специфичности реакции предусмотрено применение «горячего» старта, который обеспечивается методикой приготовления реакционной смеси, состоящей из двух слоёв, разделённых прослойкой из парафина. Смещение слоёв и превращение их в реакционную смесь происходит только после плавления парафина, что исключает неспецифический отжиг праймеров на ДНК- мишени при начальном прогреве пробирки. Набор реагентов Пол плода включает: смесь для амплификации, специфичную для определения наличия мультикопийного фрагмента Y хромосомы и геномной ДНК человека (КВМ). КВМ используется для анализа качества выделения и позволяет определить, достаточно ли полученного количества ДНК для исследования. Расчёт результатов исследования основан на оценке значений Ср индикаторных циклов исследуемых мишеней. В реакционную смесь для амплификации введены ДНК-зонды, каждый из которых несёт флуоресцентную метку и гаситель флуоресценции. При образовании специфичного продукта ДНК-зонд разрушается, действие гасителя на флуоресцентную метку прекращается, что ведёт к возрастанию уровня флуоресценции. Количество разрушенных зондов (а, следовательно, и уровень 5 --- стр. 6 --- ^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 6 Пол плода Листов 23 флуоресценции) увеличивается пропорционально количеству образовавшихся специфических ампликонов и измеряется на каждом цикле амплификации. В состав ДНК-зондов, использующихся для детекции продукта амплификации мультикопийного фрагмента Y хромосомы, включена флуоресцентная метка Fam. В состав ДНК-зондов, использующихся для детекции продуктов амплификации КВМ, входит флуоресцентный краситель Hex. Использование нескольких флуоресцентных красителей позволяет сократить количество пробирок, поскольку появляется возможность одновременно регистрировать результаты разных реакций амплификации, проходящих в одной пробирке. В таблице 1 приведены каналы детекции продуктов амплификации и ДНК-мишени, определяемые набором. Таблица 1 - Перечень ДНК-мишеней, определяемых набором, и каналов детекции продуктов амплификации Fam Hex Rox Су5 Су5.5 Фрагмент Y хромосомы КВМ - - - Исследование с использованием набора реагентов состоит из следующих этапов: выделение ДНК (пробоподготовка) с использованием комплекта реагентов ПРОБА-НК-ФЕТ и ПЦР-амплификация в режиме реального времени с использованием набора реагентов Пол плода. Для проведения ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени используют амплификаторы детектирующие (ООО «НПО ДНК-Технология») ДТпрайм, ДТлайт и ДТ-96 со специальным программным обеспечением. 2.4 Время проведения анализа (без учета пробоподготовки): от 2 ч. --- стр. 7 --- Лднк-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Пол плода Лист 7 Листов 23 3 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА ЗЛ Специфичность анализа В результате амплификации образца фетальной ДНК, выделенной из крови беременной женщины и не содержащей фрагмент Y хромосомы, должны регистрироваться отрицательный результат по каналу Fam, но положительный по каналу Hex. В этом случае пол плода — женский. В результате амплификации образца фетальной ДНК, содержащей фрагмент Y хромосомы, должны регистрироваться положительные результаты по каналам Fam и Hex. В этом случае пол плода - мужской. Интерпретация результатов анализа проводится автоматически с помощью программного обеспечения к прибору (см. приложение 1). 3.2 Чувствительность анализа Чувствительность набора при использовании комплекта реагентов для выделения фетальной ДНК из крови матери ПРОБА-НК-ФЕТ составляет 150 копий геномной ДНК (суммарной ДНК матери и плода), что соответствует 150 копиям фрагмента Y хромосомы плода в 1,0 мл исследуемого образца плазмы. Количество анализируемой суммарной ДНК матери и плода должно быть не менее 0,1 нг на амплификационную пробирку, что приблизительно соответствует Ср<35,0 на канале детекции КВМ (Hex). При использовании меньшего количества ДНК (Ср>35,0 на канале детекции КВМ) будут получены недостоверные результаты. Примечание - Диагностичеекая чувствительность и специфичность устанавливается в ходе проведения клинических исследований в соответствии с ГОСТ Р 53022.3-2008. --- стр. 8 --- ^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 8 Пол плода Листов 23 4 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно- биологаческие ПЦР исследования клинриеского материала с соблюдением методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация рабсиы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот, при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности», и с соблюдением санитарно- эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами I1I-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». Исследуемые образцы рассматриваются как потенциально-опасные. К работе с набором реагентов допускается только персонал, обученный методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической лаборатории. Подготовку и проведение исследования с использованием набора реагентов следует проводить в ПЦР-боксах. Дозаторы должны быть соответствующим образом поверены (в аккредитованных лабораториях) и промаркированы. Поверхности рабочих столов, а также помещений, в которых проводится ПЦР, следует обязательно, до и после проведения работ, облучать бактерицидными облучателями в течение одного часа. Использованные одноразовые принадлежности (пробирки, наконечники) должны сбрасываться в специальный контейнер, содержащий дезршфицирующий раствор. При использовании набора в клинико-диагностической лаборатории образуются отходы классов А и Б, которые классифицируются и утилизируются в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно- эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами». Не использовать набор реагентов: - при нарушении условий транспортирования и хранения; - при несоответствии внешнего вида реагентов, указанного в паспорте к набору; - при нарушении внутренней упаковки компонентов набора; - по истечению срока годности набора. --- стр. 9 --- Лднк-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Пол плода Лист 9 Листов 23 Примечание - Набор реагентов не содержа материалов биологического происхождения, веществ, обладающих канцерогенньм, мутагенным действием, а также влияющих на репродуктивную функцию человека. При использовании по назначению и еоблюдении мер предосторожности является безопасным. 5 ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ При работе с набором реагентов требуются следующие оборудование и материалы; • амплификатор детектирующий («ДТпрайм»\ «ДТлайт» или ДТ-96 производства ООО «НПО ДНК-Технология»); • центрифуга для пробирок объёмом 4,5 мл, с RCF не ниже 1150 g, например, центрифуга ЕВА 20 Hettich (346 Ig или 6000 об/мин); . центрифуга для пробирок объёмом 1,5 мл, с RCF не ниже 17000 g, например, центрифуга HERAEUS picol7 (17000 g или 13300 об/мин); • термостат твердотелъный, поддерживающий температуру от 65 °С до 98 °С; • микроцентрифуга-вортекс, например BioSan, Латвия или аналогичная, • холодилъник бытовой Стинол, Россия или аналогичный; • вакуумные пластиковые пробирки типа Vacuette с ЭДТА, • штатив «рабочее место» для пробирок объёмом 0,2 мл или для стрипованных пробирок объемом 0,2 мл, ООО «НПО ДНК-Технология», Россия или аналогичные; • дозаторы механические или электронные переменного объема одноканалъные со сменными наконечниками, позволяющие отбиратъ объемы жидкости от 2 до 20 мкл, от 20 до 200 мкл, от 200 до 1000 мкл, например Eppendorf, Еермания или аналогичные; • одноразовые наконечники с филътром для дозаторов, свободные от РНКаз и ДНКаз, объёмом 20 мкл, 200 мкл, 1000 мкл, например Axygen, США или аналогичные; • одноразовые перчатки медицинские, без талъка, текстурированные, • ёмкостъ с дезинфицирующим раствором для сброса исполъзованных ^ Т О Л Ь К О модели 4М 1^ 4МЗ, 4М 6, 5MI, 5М З , 5М 6, 6М 1, 6МЗ, 6М 6 --- стр. 10 --- Лднк-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Пол плода Лист 10 Листов 23 наконечников, пробирок и других расходных материалов, • комплект реагентов для выделения фетальной ДНК из крови матери (ПРОБА- НК-ФЕТ производства ООО «ДНК-Технология ТС»). Программное обеспечение для детектирующих амплификаторов; • версия ПО не ниже 7.7.5.23 ; • файл с параметрами анализа «Gender.ini». 6 АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ 6.1 Материалы для исследования Для исследования используют цельную периферическую кровь человека. Взятие цельной периферической крови Необходимый объем крови составляет 4,0 - 4,5 мл. Взятие цельной периферической крови проводится в вакуумные пластиковые пробирки типа Vacuette объёмом 4,5 мл с добавленной в качестве антикоагулянта динатриевой солъю этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в конечной концентрации 2,0 мг/мл. Для перемешивания крови с антикоагулянтом после взятия материала необходимо перевернутъ пробирку 2-3 раза. ВНИМАНИЕ! Не допускается исполъзование гепарина в качестве антикоагулянта. 6.2 Транспортировка и хранение исследуемого материала Рекомендуется начатъ обработку крови в первые два часа после ее взятия. В случае невозможности проведения обработки крови в течение 2 часов допускается её хранение при температуре от 18 °С до 25 °С не более 4-8 часов. 6.3 Получение плазмы крови Центрифугируйте пробирки с кровью при 2000 об/мин в течение 20 мин при комнатной температуре (от 18 °С до 25 °С). Промаркируйте необходимое количество пробирок объёмом 1,5 мл (две для каждого исследуемого образца). Не задевая нижнюю (клеточную) фракцию, отберите автоматическим дозатором по 900 мкл верхней фракции (плазма) и перенесите в две 2 по мере обновления программного обеспечения рекомендуемая версия ПО может измениться. Последнюю рекомендуемую версию ПО можно скачать на сайте компании «ДНК-Технология». http://www.dnatechnologv.ru/po/ --- стр. 11 --- ^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 11 Пол плода Листов 23 промаркированные пробирки. ВНИМАНИЕ! Для выделения ДНК используетея только одна пробирка! Вторая пробирка может быть заморожена при минус 20 °С и, при необходимости, использована для повторного выделения ДНК. До начала выделения пробирки с плазмой могут храниться при температуре от 4 °С до 8 °С в течение 8 часов. При планировании выделения фетДНК на следующий день или позже, пробирки с плазмой необходимо заморозить при минус 20 °С. Замороженная плазма может храниться не более 3 месяцев. Перед началом выделения по одной пробирке каждого образца необходимо разморозить при комнатной температуре. 7 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 7.1 Выделение ДНК из биологического материала Выделение ДНК проводят в соответствии с инструкцией к используемому комплекту реагентов ПРОБА-НК-ФЕТ, производства ООО «ДНК-Технология ТС», Россия. ВНИМАНИЕ! При использовании наборов для выделения фетДНК других производителей, могут быть получены некорректные результаты. Одновременно с выделением ДНК из периферической крови необходимо провести через все этапы пробоподготовки отрицательный контрольный образец, входящий в состав комплекта реагентов для выделения фетальной ДНК из крови матери (ПРОБА-НК-ФЕТ), в объеме согласно инструкции к набору реагентов для выделения ДНК. 7.2 Подготовка и проведение ПЦР ВНИМАНИЕ! Так как фетальная ДНК находится в крови беременной женщины в минимальном количестве, анализ каждого образца ДНК необходимо проводить в дублях. В противном случае могут быть получены некорректные результаты. 11 --- стр. 12 --- w /■ ^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 12 Пол плода Листов 23 7.2.1 Промаркируйте по две пробирки етрипов (или по две отдельные пробирки) со смесями для амплификации для каждого исследуемого образца, одну для положительного контрольного образца (К+), и три для отрицательного контрольного образца (К-). Например, необходимо проанализировать два образца. Нужно промаркировать восемь пробирок - четыре для исследуемых образцов, одну для К+ и три для К- (см. таблицу 2). Таблица 2 - Пример маркировки пробирок для проведения ПЦР Образец 1 Пробирки 1-2 Образец 2 Пробирки 3-4 К+ Пробирка 5 К- Пробирки 6-8 7.2.2 Встряхните пробирку с раствором Taq-полимеразы в течение 3-5 с и центрифугируйте в течение 1 - 3 с на микроцентрифуге-вортексе. 7.2.3 Внесите в промаркированные пробирки, не повреждая слой парафина, по 10 мкл раствора Taq-полимеразы. 7.2.4 Внесите в промаркированные пробирки по одной капле (приблизительно 20 мкл) минерального масла. Закройте крышки етрипов или пробирок. 7.2.5 Для предотвращения контаминации следует перед внесением ДНК открывать крышку только того стрипа (или только той пробирки), в который будет вноситься данный образец, и закрывать её перед внесением следующего. Препараты ДНК следует вносить наконечниками с фильтром. Внесите, не повреждая слой парафина по 5,0 мкл выделенного из образцов препарата ДНК в соответствующие пробирки для исследуемых образцов (2 шт. для каждого образца). В пробирки маркированные К+ и К- ДНК не вносится. 7.2.6 Внесите, не повреждая слой парафина по 5,0 мкл положительного контрольного образца в пробирку, маркированную К+. Внесите, не повреждая слой 12 --- стр. 13 --- /■ ^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 13 Пол плода Листов 23 парафина по 5 мкл отрицательного контрольного образца, прошедшего этап выделения ДНК в пробирки, маркированные К- (всего 3 шт.). 7.2.7 Центрифугируйте стрипы (пробирки) в течение 1 - 3 с на микроцентрифуге-вортексе. 7.2.8 Установите все стрипы (пробирки) в блок детектирующего амплификатора. Рекомендуется располагать пробирки по центру термоблока. 7.2.9 Запустите программное обеспечение RealTime PCR, в режиме «Работа с прибором», загрузите файл "Gender.ini", добавьте в протокол тест «Gender», укажите количество и идентификаторы образцов, отметьте расположение пробирок на матрице термоблока в соответствии с их установкой (см. п. 7.2.8) и проведите ПЦР. При выборе теста «Gender» в окне «Запуск программы амплификации» должна отображаться программа, приведённая в таблице 3. ВНИМАНИЕ! При использовании других амплификаторов необходимо уточнить программу амплификации у представителя компании «ДНК-Технология». Таблица 3 - Программа амплификации для детектирующих амплификаторов ДТлайт, ДТпрайм и ДТ-96 № блока Температура, °С мин с Число циклов Режим оптических измерений Тип блока 1 80 0 30 1 Цикл 94 1 30 2 94 0 30 5 Цикл 64 0 15 V 3 94 0 10 45 Цикл 64 0 15 V 4 94 0 5 1 Цикл 5 10 ... хранение хранение Тесты (ini файлы) для приборов ДТпрайм, ДТлайт и ДТ-96 предоставляются производителем набора реагентов. 13 --- стр. 21 --- Лднк-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 21 Пол плода Листов 23 Приложение 1 Принципы вычисления и интерпретации результатов исследования программным обеспечением ВНИМАНИЕ! Анализ проводится программным обеспечением автоматически. Изложенные в данном приложении принципы вычисления результатов носят информативный характер и не предназначены для проведения пользователями самостоятельных расчетов. Расчёт результатов исследования основан на оценке значений Ср индикаторных циклов исследуемых мишеней. Интерпретации результатов исследования Результат по каналу Fam (Fam Ср) Результат по каналу Hex (Hex Ср) Интерпретация результата Ср <35 Ср <35 Пол плода - мужской Ср не указан или >37 Ср<35 Пол плода - женский Примечание - Результаты в дублях для каждого образца должны совпадать качественно (наличие или отсутствие сигнала флюоресценции в интервалах Ср, указанных в таблице). 21 --- стр. 22 --- ( ^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 22 Пол плода Листов 23 Приложение 2 Символы, иепользуемые при маркировке набора | iv d | Только для in vitro диагностики Температурный диапазон V Количество определений Г одей до | l o t| Серия набора ^wT| Дата производства т Содержит инструкцию по применению |r e f] Каталожный номер mJ Адрес производителя Не допускается воздействие солнечного света 22 --- стр. 23 --- г ^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 23 Пол плода Листов 23 По вопросам, касающимся качества набора реагентов Пол плода, следует обращатьея к официальному представителю производителя по адрееу: ООО «ДНК-Технология», 117587, г. Моеква, Варшавское шоеее, д. 125 ж, к.6. тел./факс +7 (495) 980-45-55, www.dna-technology.ru Служба клиентской поддержки: 8 800 200-75-15 (звонок по России бесплатный). E-mail: hotline@dna-teclmologY.ru Анкета для осуществления обратной евязи находитея на еайте компании «ДНК-Технология»: http://www.dna-teehnology.ru/eustomer_support/ Адрес производителя: ООО «ДНК-Технология ТС», Россия, 117246, г. Москва, Научный проезд, д. 20, стр. 4 Место производства: ООО «ДНК-Технология ТС», Роесия, 117246, г. Москва, Научный проезд, д. 20, стр.4 Ведущий научный сотрудник ООО «НПФ ДНК-Технология», Кириллов М.Ю. « /у » 2016 г. СОГЛАСОВАНО Г енеральный директор ООО «ВЫМПЕЛ-МЕД! (ЕНТР»^ П.К. Варнавичуе « 3 / У > 2016 г. 23