Тест-системы "Монолиза" (Monolisa) для in vitro диагностики вирусных гепатитов В и С — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 6 ---
4 . Н Е О Б Х О Д И М Ы Е М А ТЕРИ А Л Ы , НЕ В К Л Ю Ч Е Н Н Ы Е В КО М ПЛ ЕКТ П О С Т А В К И
• Д истиллированная или деионизированная вода
• Гипохлорит натрия (дезинфектант) и бикарбонат натрия.
• Ф и льтровальная бумага.
• О дноразовы е перчатки.
• Защ и тны е очки.
• О дноразовы е пробирки.
• А втом атические или полуавтоматические пипетки на 5 0 ,8 0 , 100, 200 и 1000 мкл.
• М ерная посуда на 10, 200 и 1000 мл.
• В стр яхи вател ь пробирок Вортекс.
• Автоматический*, полуавтоматический* или ручной промыватель для планш етов.
• Водяная баня или сухой термостат* 3 7 °С ± 1 °С.
• Контейнер д ля контаминированных отходов.
• Ф отометр для планшетов* с фильтрами на 490,620,450/620 — 700 нм.
* Для получения подробной информации о пригодности оборудования для выполнения
теста обратитесь в техническую службу представительства компании.
5 . Т Е Х Н И К А Б Е З О П А С Н О С Т И
В се вклю ченные в набор реагенты предназначены для диагностики in vitro.
• При работе с реагентами и пробами пользуйтесь одноразовыми перчатками. П осле
работы тщ ательно мойте руки.
• Для дозирования образцов и реагентов используйте только автоматические
пипетки.
• П оложительный контрольный образец R4 инактивирован ф отохимически.
• С ы воротка человека, которая была использована для создания положительного
контрольного образца (R 4), была исследована, и в ней не было обнаружено
поверхностного антигена гепатита В (H B s A Q , антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Поскольку
не сущ ествуе т исследований, результаты которых способны гарантировать полное
отсутствие возбудителей инфекционных болезней, с реагентами и пробами
сл е д у ет обращ аться как с потенциально инфицированным материалом .
• Лю бое оборудование, находившиеся в непосредственном контакте с пробами и
реагентам и человеческого происхождения, а также промывочные растворы
сл е д у ет считать инфицированными.
• И збегайте пролива биопроб и растворов, содержащих пробы.
• П оверхно сть должна быть промыта от пролитой жидкости 10% раствором
гипохлор 1еда натрия. Если разлита кислота, е е необходимо вначале
нейтрализовать бикарбонатом натрия и вы суш ить промокательной бумагой.
М атериал, использованный для ч и стш следует вы брасы вать в сп е ф1альны й
конейнер д ля контаминированных отходов.
• П робы и реагенты человеческого происхо) 1одения, также как и загрязненный
м атериал должны бы ть утилизированы после деконтаиинации:
--- стр. 7 ---
- либо зам ачиванием в 5 % растворе гипохлорида натрия (1 часть раствора на 10
частей загрязненной жидкости или воды) в течение 30 минут;
- или автоклавированием при 121 °С минимум в течение 2-х часов.
А втоклавирование - лучший метод инактивации ВИЧ и вирусов гепатита В и С.
ВНИ М АН И Е! Н Е ПОМЕЩ АЙТЕ В АВТОКЛАВ РА СТВО РЫ , СОДЕРЖ АЩ ИЕ ГИПОХЛОРИД
Н А ТРИ Я
• Не допускайте попадания на кожу и слизистые оболочки субстратного буф ер а,
хром огена и стоп-раствора.
• Р аство ры , использованные для промывки планш ета или лю бая жидкость,
сод ерж ащ ая элементы биологической пробы, должны попадать в слив только
после нейтрализации и автоклавирования.
• Н екоторы е реагенты содержат азид натрия. Это вещ ество способно
взаим одействовать со свинцовыми или медными трубами, образуя взры воопасны е
азиды м еталлов. Чтобы предотвратить накопление азидов в трубах, перед сливом
этих реагентов в канализацию они должны быть нейтрализованы, а раковина
пром ы та больш им количеством воды.
• Н екоторы е реагенты содержат раздражающее вещ ество ProClin™ 30 0 (0,04; 0,1
или 0 ,5 % ), которое может вызывать раздражение кожи и слизисты х
R 4 3 ; может вызывать раздражение кожи при контакте.
S 2 8 /3 7 : после контакта с кожей промойте участок контакта большим
количеством воды с мылом. При работе используйте защ итные перчатки.
• Т абл и ц а д анны х по безопасности реагентов можно получить по дополнительному
запросу
6. М Е Р Ы П РЕД О С ТО РО Ж Н О С ТИ
К ачество результатов зависит от выполнения следующих правил Хорош ей Лабораторной
Практики (G ood Laboratory Practices):
• Н азвание тест-систем ы и специальный идентификационный номер указан на рамке
каждого микропланшета. Идентификационный номер также указан на каждом
стрипе.
М о н о л и за В Г С А г/А т У Л Ь ТРА : И д ен ти ф и кац и он н ы й (ID ) н о м е р = 5 5
П еред использованием проверьте идентификационные номера на стрипах. Если он
отсутствует или отличается от указанного выш е, стрип для исследования
использовать нельзя.
• Не используйте реагенты с истекшим сроком годности.
• Н е см еш ивайте и не используйте в одном и том ж е исследовании реагенты из
разны х серий;
ПРИМЕЧАНИЕ. Для следующих реагентов: промывочный раствор (R2,
маркировка: 20 х, зеленого цвета), субстратный раствор (R8, маркировка: ТМВ
buf, синего цвета), хромоген (R9, маркировка: ТМВ 11х, пурпурного цвета) и
стоп-реагент (R10, маркировка 1N, красного цвета) при постановке теста
можно использовать серии отличные от тех, которые входят в набор. Тем не
менее, для каждой постановки теста должны использоваться реагенты одной
серии. Данные реагенты допускается использовать с некоторыми другими
продуктами компании. П о д (^ н ы е сведения можно получить в службе
технической поддержки. В дополнение, промывочный раствор (R2, маркировка:
20 X , зеленого цвета) может использоваться в смеси с 2 другими промывочными
--- стр. 8 ---
растворами, которые входят в состав различных диагностических наборов
производства Био-Рад (R2, маркировка: 10 х голубого цвета или маркировка 10 х
оранжевого цвета) в соответствующем разведении, необходимым условием
является ислользование одной такой смеси в одной постановке. Для получения
подробной информации свяжитесь с местным представительством компании.
• П еред использованием все реагенты необходимо выдержать при комнатной
тем пературы в течение 30 минут.
• При приготовлении реагентов избегайте возможности контаминации.
• Не проводите исследования в присутствии паров кислот, щелочей, альдегидов или
при сильном запылении воздуха в лаборатории так, как это может повлиять на
ф ерм ентативную активность конъюгата.
• И спользуйте одноразовую лабораторную посуду, или, в крайнем случае, тщ ательно
промытую и ополоснутую деионизированной водой.
• Не допускайте пересыхания содержимого лунок планш ета между заверш ением
промывки и внесением реагентов.
Ф • Ф ерм ентативная реакция очень чувствительна к металлам и их ионам. Не
допускайте контакта металлических предметов с растворами, содержащ ими
конъю гат или субстрат.
• С м е сь для ф ерментативной реакции (субстратный раствор + хромоген) должна
приобрести розовую окраску. Изменение розовый окраски в течение нескольких
минут после приготовления смеси означает, что реагент не может бы ть
использован и подлежит замене.
• Приготовление раствора для ферментативной реакции должно производится в
пластиковы х одноразовых лотках или в стеклянных контейнерах, которые следует
предварительно промыть 1 Н раствором HCI, тщ ательно прополоскать
дистиллированной водой и высушить. Реагенты следует хранить в темноте.
• И спользуйте новы е наконечники дпя раскапывания каждой сыворотки.
• Т щ ател ьн ая промывка принципиально важна для выполнения анализа.
С облю д айте рекомендованное количество промывок, следите, чтобы все лунки до
краев заполнялись моющим средством и полностью опустош ались. Н есоблю дение
^ правил промывки может привести к получению недостоверных результатов.
• Никогда не используйте одну и ту же емкость для работы с конъюгатом и
раствором д ля ферментативной реакции.
7 . О Б Р А З Ц Ы
И сслед овани е должно быть выполнено на неразведенной сыворотке или плазме
(собранны й с ЭД ТА, гепарином, цитратом, антикоагулянтами на основе A C D ). При
отделении сыворотки или плазмы от сгустка крови или эритроцитов сл ед ует избегать
гем олиза. Выраженный гемолиз может повлиять на результаты теста. Е сли в
исслед уем ы х образц ах присутствуют посторонние включения, пробы следует
отцентриф угировать перед проведением анализа. Присутствующ ие в образце частицы
ф ибрина или сгустки могут давать ложноположительные результаты . О бразцы должны
храниться при +2 °С - +8 °С, если исследование будет выполняться не позднее 7 дней с
м ом ента взятия образца или при - 2 0 °С при более длительном хранении.
И збегайте повторных циклов замораживания/оттаивания. Если необходимо
транспортировать образцы, их следует упаковать в соответсвии с действую щ ими
правилам и т р а н сп о р ти р о в ^ этиолог№Юских агентов. Рекомендуется п е р е в о зш в
зам орож енном состоянии.
7
--- стр. 9 ---
Н Е И С П О Л Ь ЗУ Й Т Е КОНТАМИНИРОВАННЫЕ, ГИПЕРЛИ ПЕМ И ЧЕСКИ Е СЫ ВО РО ТК И С
СИ ЛЬН Ы М ГЕМ ОЛИЗОМ .
ПРИМЕЧАНИЕ. Образцы, содержащие до 90 г/л альбумина, 50 мкг/мп биотина, 100 мг/л
билирубина, липемические образцы с содержание липидов до 36 г/л в эквиваленте
триглицеридов, гемолизированные пробы, содержащие до 87 г/л гемоглобина, могут
быть исследованы с достоверным результатом.
О трицательны е пробы, образцы, содержащие анти-ВГС антитела, и образцы,
полож ительны е по антигену ВГС, тестировались до и после воздействия тем пературы
56 °С с экспозицией 30 минут и после 3 циклов заморозки - оттаивания. Ни одно из
воздействий на определение антител к ВГС не повлияло. Однако было показано, что
тепловое воздействие значительно снижает способность тест-систем ы «М онолиза® ВГС
Аг - А т У Л Ь ТРА » к определению антигенов.
8. П Р И Г О Т О В Л Е Н И Е Р Е А Г Е Н Т О В , С РО К ГО Д НО СТИ , У С Л О В И Я Х Р А Н Е Н И Я
Перед началом использования выдержите реагенты тест-систем ы М онолиза® В ГС Аг -
А т У Л Ь ТРА в течение 30 минут при комнатной температуре.
1 ) Р е а г е н т ы , го т о в ы е к п р им ен ен ию
П л а н ш е т - и м м у н о с о р б е н т (R 1 )
Каждый м икропланш ет состоит из 12 стрипов, установленных в рамке. Он упакован
герметично в пакет, который снабжен замком-кпипсой. Перед вскрытием упаковки
выдержите план ш ет в пакете при комнатной температуре, во избежании появления
конденсата в лунках планш ета. Рассеките пакет ножницами или скальпелем на 0,5-1 см
вы ш е линии клипсы. О тф ойте его и достаньте планш ет. Неиспользованные стрипы
положите в пакет, запечатайте и храните при + 2 - 8 °С.
К о н ъ ю га т 1 : готовый к применению (R6)
П еред использованием гомогенизировать, переворачивая флакон.
К о н ъ ю га т 2 : готовый к применению (R 7 )
П еред использованием гомогенизировать, переворачивая флакон
2 ) П о д го то в к а р а б о ч и х р а с т в о р о в реагентов
П р о м ы в о ч н ы й р а с т в о р R 2 (х2 0 )
Для приготовления рабочей концентрации промывочного раствора концентрат (х 20)
сл ед ует развести в отношении 1 ; 20 дистиллированной водой. Для промывки 12 стрипов
д остаточно 800 мл промывочного раствора в рабочей концентрации.
Р а с т в о р д л я ф е р м е н т н о й реакции (R 8 + R9)
Р азвести хромоген ТМ Б (R 9 ) субстратным раствором (R 8) в соотношении 1 :1 1 . Для
получения о б ъ ем а , достаточного для проведения анализа в 12 стрипах, необходимо
см е ш ать 1 мл хромогена ТМБ и 10 мл субстратного раствора. Гомогенизировать.
К о н т р о л ь н ы й о б р а з е ц ан ти ген а (R 5 a + R 5 b )
Во ф лакон с лиоф илизированны м контрольным образцом антигена КАГ (R 5 a ) добавить
раствор д л я его разведения (R 5b ). Закрыть флакон и д ать жедкости отстояться в течение
10 минут, врем я от времени аккуратно перемешивайте содерким ое, переворачивая
ф лакон и слегка взбалты вая.
3 ) С р о к го д н о сти
Н абор сл е д у ет хранить при +2-8 °С. При соблюдении данного температурного ре>га4ма
лю бой реагент, содержащийся в наборе «М онолиза® A gH B s УЛЬТРА» может быть
--- стр. 19 ---
ш г э
М О Н О Л И З А ® а н т и - Н В с П Л Ю С
M O N O L I S A ® a n t i - H B c P L U S
1 п л а н ш е т - 9 6 т е с т о в
5 п л а н ш е т о в - 4 8 0 т е с т о в
7 2 3 1 5
7 2 3 1 6
И М М У Н О Ф Е Р М Е Н Т Н Ы И Н А Б О Р Д Л Я В Ы Я В Л Е Н И Я
А Н Т И Т Е Л К Н УКЛ ЕО КАП СИ Д Н О М У (ЯДЕРНОМ У) Н В с
А Н Т И Г Е Н У В И Р У С А ГЕ П А ТИ Т А В С Ы В О Р О Т К Е ИЛИ
П Л А З М Е Ч Е Л О В Е К А .
IV D Для использования в диагностике In Vitro
К о н т р о л ь к а ч е с т в а п р о и з в о д и т е л я
Качество всех произведенных и предназначенных для продаж и реагентов находится
под всесторонним контролем качества, начиная с получения сырья, и до продаж и
продукта пользователю.
Каж дая серия проходит контроль качества и поступает на рынок лишь при
соответствии заданным критериям.
Сведения о продукции и контроле каж дой серии хранятся в компании БИО-РАД (BIO
RAD).
ООО «Б ио-Р ад Лаборатории»
1 2 5 1 6 7 М осква, Ленинфадский пр-т,. 37А , корп. 14
Бизнес-центр «Западны й мост»
Т е л .: (4 9 5) 72 1 1 4 0 4 , Факс:(495) 7 2 1 1 4 1 2 , post@ bio-rad.ru
--- стр. 20 ---
1 - КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИ Е................................................................................................ 3
2 - ПРИНЦИП Т Е С Т А МОНОЛИЗА® анти-НВс ПЛЮ С............................................................ 3
3 - С О С Т А В Н А Б О Р А ................................................................................................................. 3
4 - МАТЕРИАЛЫ НЕОБХОДИМЫЕ, НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В КОМПЛЕКТ ПОСТАВКИ ..........4
5 - ТЕХНИКА БЕЗО П АСН О СТИ ................................................................................................ 4
6 - М ЕРЫ П РЕД О СТО РО Ж Н О СТИ .......................................................................................... 5
7 - О Б Р А З Ц Ы .............................................................................................................................. 6
8 - ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ, СРОК ГОДНОСТИ И СТАБИЛЬНОСТЬ ..............................6
9 - МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА................................................................................ 7
10 - Р А С Ч Е Т И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ................................................................ 8
11 - СПЕКТРОФОТОМ ЕТРИЧЕСКАЯ ВЕРИФИКАЦИЯ ДОЗИРОВАНИЯ РЕАГЕНТОВ И
О БРАЗЦ О В.................................................................................................................................. 9
12 - ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТ-СИ СТЕМ Ы ............................................................................ 10
13 - О ГРАНИЧЕНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ТЕС Т А ......................................................................... 11
1 4 -Л И Т Е Р А Т У Р А И
СОДЕРЖАНИЕ
--- стр. 21 ---
1 - К Л И Н И Ч Е СК О Е ЗН А Ч ЕН И Е
При первичном инфицировании вирусом гепатита В, первыми антителами,
появляющ имися после определения в крови HBs и НВе антигенов, являются анти-
Н Вс антитела. 1дМ антитела являются первичным ответом на инфекцию. Уровень
1дМ антител остается определяемым в течении нескольких недель и исчезает по
м ере выздоравления. IgG антитела вырабатываются позднее и остаются в крови в
течении многих лет после выздоровления. Наличие антител к нукпеокапсиду вируса
гепатита В (или ядерному антигену) является главным маркером недавней
(антитела анти-НВс 1дМ) или прошедшей (общие анти-НВс антитела) инфекции.
У пациентов с хронической инфекцией обычно наблюдается высокий титр анти-НВс
антител.
Анти-Н Вс - представляет собой длительно присутствующий маркер, который
указывает на HBV инфекцию. Он может наблюдаться в по крайней мере трех
ситуациях:
ассоциировано с HBs антигеном, ассоциировано с анти-HBs антителами, и, в
некоторых редких случаях, изолированно. Тестирование донорской ф о ви и
продуктов крови на присутствие анти НВс-антител является полезным
инструментом для профилактики распространения вируса гепатита В.
2 - ПРИНЦИ П Т Е С Т А М ОНОЛИЗА® ан ти -Н В с ПЛЮ С.
М ОНОЛИЗА® анти-НВс ПЛЮ С - это иммуноферментный те ст (непрямой ИФА) для
одновременного выявления общих антител к НВс-антигену в сыворотке или плазме.
В М ОНО ЛИ ЗА® анти-НВс ПЛЮС в качестве твердой фазы используются
рекомбинантный НВс антиген. Проведение теста состоит из следующих этапов:
1. Исследуемая и контрольная сыворотки вносятся в лунки. При наличии антител к
Н В с антигену они связываются с антигеном, фиксированным на твердой фазе.
2. А нтитела против IgG и 1дМ человека, меченые пероксидазой, добавляются
после стадии промывки и связываются со специфическими антителами,
связавш имися с твердой фазой.
3. П осле удаления несвязавшегося конъюгата комплекс антиген-антитело
вы является добавлением раствора субстрата.
4. П осле остановки реакции измеряют оптическую плотность с помощью
спекф оф отом етра при 450/620-700 нм. По величине поглощения судат о
наличии или отсутствии антител к НВс антигену. Интенсивность цветной реакции
пропорциональна количеству антител к НВс антигену, связанных на твердой
фазе.
3 - С О С Т А В Н А БО РА
Метка Наименование реагента Количество
1 планшет 5 планшетов
R 1 Микропланшет: 12стрипов по 8 лунок, покрытых очищеным
рекомбинантным антигеном
1 5
R2 Промывочный раствор: 20х концентрат Трис NaCI буфера,
pH 7.4
Консервант: ProClean™ (0.04 %)
1 флакон
70мл
1 флакон
2 3 5 мл
R3 Отрицательно! контрольная сыворотка; Сыворотка
человека, отрицательная по анти-НВс.
Консервант: азид натрия (0,1%)
1 флакон
1,5 мл
1 флакон 3 мл
R4 Положительная контрольная сыворотка: Сыворотка
человека, содержащая анти-НВс антитела. Фотохимичесш
инактивированная. Консервант: азт натрия (0,1%)
1 флакон
1,5 мл
1 флакон 3 мл
R6 Раствор для разведения образцов; PBS буфер, с
о ф аш е н н ы м контролем внесения образца. Консервант:
ProClin™ (0.1% ) и Ципрофлоксацин 10 мкг/мл
1 флакон
30м л
2фшкта
2x6 0 w i
R7 Конъюгат: козьи антитела против IgG и 1дМ челсж аш
(зегюный раствор), меченые перо<а»вдашй. Консервант:
ProClin"* (0,1% ) и Ципрофло 1юа1.и1Н 10 мкг/мл
1 флакон
30м л
2флакона
2х60мл
R8 Субстратный ржтшзр: цитрат и ацетат Harpim, pH 4,0,
содержащий 0,015% HjOa и 4% ДМСО.
1 флакон
60мл
2флаксжа
2х60ш1
--- стр. 22 ---
R9 Х р ом оген: раствор, содержащий тетраметилбензидин
(Ш Б ).
1 флакон 2флакона
5 мл 2x5 мл
RIO С Т О П -р аств о р : 1 N серная кислота 1 флакон 3 флакона
28мл 3 X 28мл
С а м о к л е ю щ а я пленка д л я микропланш етов 4 12
4 - М А Т Е Р И А Л Ы НЕОБХОД ИМ Ы Е, НЕ В К Л Ю Ч ЕН Н Ы Е В КОМ ПЛЕКТ
П О С ТА ВК И
Дистиллированная или деионизованная вода.
Гипохлорит натрия и бикарбонат натрия.
Фильтровальная бумага.
Защ итны е очки.
Одноразовые перчатки.
Одноразовые пробирки.
Автоматические или полуавтоматические пипетки с постоянным и переменным
объемом на 20,100, 200 и 1000 мкл.
Мерные цилиндры на 10, 200 и 1000 мл.
Встряхиватель типа VORTEX.
Контейнер для контаминированных остатков.
Водяная баня на 37±1°С и л и 4 0 °С ± Г С или эквивалентный суховоздушный
инкубатор (*)
Вош ер д ла промывки микропланшет (автоматический, полуавтоматический,
ручной).(*)
Фотометр для микропланшетов (фильтры с длиной волны - 450/620 - 700 нм).(*)
(*) О бращ айтесь в местное представительство компании за информацией о
рекомендуемом оборудовании.
5 - ТЕХ Н И К А Б ЕЗО П А СН О С ТИ
В се реагенты, входящие в набор предназначены для диагностики in vitro.
Наименование теста, а также его идентификационный номер находятся на
рамке каждого микропланшета. Идентификационный номер также нанесен на
каждый стрип.
MONOUSA® anti-HBc PLUS: Specific ID Number = 14.
Проверьте идентификационный номер перед использованием теста. При
отсутствии идентификационного номера, или его несоответствии номеру,
указанному выше, стрип не использовать.
Используйте одноразовые перчатки при работе с реагентами и образцами и
тщ ательно мойте руки после работы.
Н е пипетируйте образцы и реагенты ртом.
В се сыворотки человеческой природы, использованные для приготовления
отрицательного контроля (R3), были протестированы на наличие поверхностного
антигена вируса гепатита В (HBs Аг), анти-НВс антител а также анти-ВИЧ-1, ВИЧ-2 и
анти-ВГС антител и определены как отрицательные по этим маркерам.
В с е сыворотки человека, использованные для приготовления положительного
контроля (R4), были протестированы и определены как положительные по наличию
H bs Аг и анти-НВс антител, и отрицательные по анти-ВИЧ-1 и ВИЧ-2 антителам, а
также по анти-ВГС антителам. Эти сыворотки были фотохимически инаюивированы.
Ни один метод детекции не может гарантировать отсутствие патогенных агентов
(ВИЧ, ВГС, ВГВ и других патогенов) в исследуемых образцах и реагентах
человеческого происхозедения. С л ^ е т рассматривать их как потенциально
инфекционный материал и р ^ о т а т ь с соответствующими мерами предосторшшости;
Считайте лк>бой материал, контактируюи^й с с^разцами, реагенты чеповеческсго
происхождения и промывающий раствор инфекционным м а т^ и а л о и .
Избегайте етнтакга субстратна-о буфера, хротзгеиа и сюп-раствщ >а с потерхностью
кожи и слизистым и (возмсякно отравление, воспаление, с»коги};
Избегайте разлития образ 1^ в или растворш , <хщ щ )ж т т х обраш цм .
--- стр. 23 ---
в случае разлития растворов, не содержащих кислоты, обработайте поверхности
10% раствором гипохлорида натрия. В случае разлития кислотосодержащих
растворов нейтрализуйте их бикарбонатом натрия и обработайте гипохлоридом
натрия. Затем протрите фильтровальной бумагой, которую необходимо выбросить в
контейнер для контаминированных остатков.
Образцы и реагенты человеческого происхождения, как и контаминированные
материалы следует выбрасывать только после дезактивации, произведенной :
- замачиванием в растворе гипохлорида натрия в конечной концентрации не менее
5% в течение 30 минут.
- или автокпавированием при 121°С в течение 2 часов.
ВНИМАНИЕ! НЕ АВТОКЛАВИРУЙТЕ РАСТВОРЫ, СОДЕРЖАЩИЕ ГИПОХЛОРИД
НАТРИЯ.
Избегайте любого контакта субстратного раствора, хромогена и стоп-раствора с
кожей и слизистыми оболочками (возможно отравление, воспаление и о ж о т).
Не забы вайте нейтрализовать и/или автокпавировать промывные остатки или лю бые
жидкости, содержащие биологические образцы, до слива их в раковину.
Некоторые реагенты содержат азцд натрия. Этот компонент может реагировать со
свинцом и медью, образуя взрывоопасные соединения. Сливая в раковину,
разводите остатки большим количеством воды во избежании их накопления в трубах.
Некоторые реагенты содержат раздражающее вещ ество P roClin™ 300 (0,04; 0,1 %),
к о то р ы й м о ж ет в ы з ы в а т ь раздражение кожи и сл и зи сты х
R43: может вызывать раздражение кожи при контакте.
шS28-37; после контакга с кожей промойте участок контакта большим
количеством воды с мылом. При работе используйте защитные перчатки.
Таблица данных по безопасности реагентов можно получить по дополнительному
запросу
6 - М Е Р Ы ПРЕДОСТОРОЖ НСЮ ТИ
Качество результатов зависит от выполнения следующих правил Хорошей
Лабораторной Практики (Good Laboratory Practices):
Н е используйте реагенты по истечении срока их годности.
Н е смеш ивайте и не используйте в одном и том же тесте реагенты из разных серий.
ПРИМ ЕЧАНИЕ. Для следующих реагентов: промывочный раствор (R2, маркировка: 20
X, зеленого цвета), субстратный раствор (R8, маркировка: ТМ В but, синего цвета),
хромоген (R9, маркировка: ТМ В 11х, пурпурного цвета) и стоп-реагент (R10,
маркировка 1N , красного цвета) при постановке теста мож но использовать серии
отличные от тех, которые входят в набор. Тем не менее, для каж дой постановки
теста долж ны использоваться реагенты одной серии. Данные реагенты
допускается использовать с некоторыми другими продуктами компании. Подробные
сведения мож но получить в служ бе технической поддерж ки. В дополнение,
промывочный раствор (R2, маркировка: 20 х, зеленого цвета) мож ет использоваться
в смеси с 2 другими промывочными растворами, которые входят в состав различных
диагностических наборов производства Био-Рад (R2, маркировка: 10 х голубого
цвета или маркировка 10 х оранж евого цвета) в соответствующем разведении,
необходимым условием является использование одной такой смеси в одной
постановке. Для получения подробной информации свяж итесь с местным
представительством компании.
П еред началом использования в ц с ^ ж и т е реагенты при комнатной температуре (в
течение 30 минут).
--- стр. 24 ---
При приготовлении реагентов избегайте возможности контаминации.
Не проводите исследования в присутствии паров кислот, щелочей, альдегидов или
при сильном запылении воздуха в лаборатории так, как это может повлиять на
ферментативную активность конъюгата.
П еред использованием стеклянной посуды тщательно промойте ее и ополосните
деионизованной водой, предпочтительнее использовать одноразовую посуду.
П осле окончания процедуры промывки перед внесением реагентов не позволяйте
пересыхать содержимому лунок.
Р аствор для ферментативной реакции (субстратный раствор + хромоген) должен
быть розового цвета. Изменение розового цвета в течение нескольких минут после
приготовления раствора указывает на то, что его нельзя использовать и следует
заменить. Приготовление раствора для ферментативной реакции должно
производиться в пластиковых одноразовых лотках или в стеклянных контейнерах,
которые следует предварительно промыть 1Н раствором HCI, тщательно
прополоскать дистиллированной водой и высушить. Данный реагент следует хранить
в темноте.
Для раскапывания каждой сыворотки используйте новый наконечник для
микропипеток.
Промывка лунок микропланшета является критической процедурой: рекомендуется
тщ ательно соблюдать количество циклов промывки, внимательно следить за тем,
чтобы заполнение лунок промывочным раствором и его удаление из них было
полным. Несоблюдение требований к процедуре промывки микропланшета может
привести к ошибочным результатам анализа.
Не используйте одну и туже емкость для работы с конъюгатом и раствором для
ферментативной реакции.
Проверьте точность и правильность работы микропипеток, а также другого
оборудования.
Не меняйте протокол проведения исследования, утвержденный фирмой-
производителем набора.
7 - О Б Р А З Ц Ы
О бразцы крови собираются согласно существующим инструкциям. Исследование
должно быть выполнено на сыворотке или плазме (собранной с ЭДТА, гепарином,
цитратом, антикоагулянтами на основе ACD,CPD, CPDA). Во избежании гемолиза
эритроциты следует отделять как можно быстрее. Гемолиз может повлиять на
результаты анализа.
Образцы, содержащие зф егаты следует отцентрифугировать до тестирования.
В звеш енны е фибриновые афегаты или частицы могут быть причиной
ложноположительных результатов.
Е сли тестирование проводится в течение 7 дней после взятия материала, образцы
с л е /^ е т хранить при +2-8°С или их можно заморозить при -20° С дня длительного
хранения. Избегайте повторного замораживания/оттаивания. Если образцы необходимо
транспортировать, их следует упаковать в соответствии с правилами транспортировки
этиологических агентов.
НЕ ИСПОЛЬЗУЙТЕ КОНТАМ ИНИРОВАННЫЕ. ГИПЕРЛИПИМИЧЕСКИЕ И
ГЕМОЛИЗИРОВАННЫЕ СЫВОРОТКИ.
ПРИМ ЕЧАНИЕ: Образцы, содерж ащие альбумин до 30 г/л, билирубин 200 мг/п,
липемические образцы, содерж ащие до 36 г/л эквивалента триглицеридов, и
гемолизированные пробы, содерж ащие гемоглобин до 5 г/л могут быть исследованы
с достоверным результатом.
8 - П О Д ГО ТО ВКА РЕ А ГЕН ТО В , СРО К ГОДНОСТИ И С Т А Б И Л Ь Н О С Т Ь
П еред использованием реагентов набора доведите их до комнатной температуры (в
течение 3 0 минут).
1 ) Р е а ге н т ы , го т о в ы е к и сп о л ь зо в а н и ю
НВс Аг микропланшет (R1)
Каждый микропланшет состоит из 12 стрипов, установленных в рамке. Он упакован
герметично в пакет, который снабжен замком-клипсой. Перед вскрытием упаковю!
выдержите планш ет в пакете при комнатной температуре, во избшкании появления
ко^щенсата в лунках планшета. Рассеките пакет h c s k h h l^ m m или скальпелем на 0,5-1
см вы ш е линии клипсы. О пф отте его и даствньте гоган 1ш т . Н е (юпользованные
--- стр. 27 ---
10 - Р А С Ч Е Т И И Н ТЕРПРЕТАЦ И Я РЕЗУ Л Ь ТА ТО В
Присутствие или отсутствие анти-НВс антител определяется путем сравнения
оптической плотности в исследуемых образцах с величиной критического значения
оптической плотности (ОП крит./cut-off).
1) Вычислите среднее значение оптической плотности положительного контроля:
(ОН R 4) Пример: Положительный контроль R4
Лунки Оптическая плотность
С1 1.796
D1 1.802
Е1 1.852
Сум м арное 5.450
Среднее ОП Н4=Суммарное 00/3=5.450/3=1.817
2) Рассчет контрольного уровня (ОП KpHT7cut-off)
ОП крит. = ОП R4 /5
Пример: O n R 4 =1.817
ОП крит, =1.817/5=0.363
Достоверность анализа:
а) Для отрицательного контрольного образца:
все отдельные величины оптической плотности отрицательных контрольных образцов
должны быть ниже 0.100.
5) Для положительного контрольного образца:
- Величина оптической плотности каждого положительного контрольного образца
должна быть больше или равна 1 .О О О и меньше или равна 2.900.
- Е сл и одно из значений оптической плотности положительного контрольного
образца выходит за эти пределы или отличается от среднего значения больше,
чем на 30%, исключите это значение из расчетов и вновь рж считайте среднее по
двум оставшимся значениям.
Анализ должен быть выполнен повторно, если больше одного значения ОП
положительного контрольного образца не укладываются в указанные фаницы.
Интерпретация результатов:
О бразцы со значением оптической плотности меньше, чем величина критического
значения оптической плотности (ОП крит./си1-о№ ), рассматриваются в тесте
М ОНО ЛИ ЗА® анти-НВс ПЛЮС как отрицательные.
Однако, результаты ниже критического значения оптической плотности менее, чем на
10%
ОП крит. - 10 % < ОП обр. должны быть интерпретированы с особым вниманием
(рекомендуется повторить исследования дублирующих проб соответствующих
образцов).
образцы с оптической плотностью равной или больше контрольного уровня
рассматриваю тся как первично положительные и должны быть тестированы повт^зно в
дубле для окончательной интерпретации.
Первично реактивный образец или образец с сомнительным результатом (0,9 <
коэф ф ициент реактивности < 1, где коэффициент реактивности = ОП обр./ О П ф и т.)
после повторного тестирования рассматривается как полозюггельный в том случае, если
хотя бы один из результатов /^ п и р у ю щ и х проб соответствующего обрсвца имеет
оптическую плотность равную или выше критического зндаения (ОП крит.).
Е сли после повторного тестирования оба результата имеют оптическую плотность ниже
критического значения, образец в тестч:истеме МОНОЛИЗА® анти-НВс ПЛЮ С
рассм атривается как отрицательный.
11 - СП ЕК ТРО Ф О ТО М ЕТР И Ч ЕСК А Я ВЕРИ Ф И КАЦ И Я Д О ЗИ РО ВА НИ Я
Р Е А Г Е Н Т О В И О БРА ЗЦ О В.
С П Е Ю Р О Ф О Т О М Е Т Р И Ч Е С К А Я В ЕР№ 1>И К А Ц И Я ДОЗИРОВАНИЯ 0»>АЗДОВ.
П о сле в н е се н ^ ! образцов цвет p^rreqaa дш< ражедония о брш ц(ж и@<яется с
фиолетового на синий.
NteTOfl 1 : б е з и сп о л ь зо в а н и я ксж трольной л у н п1.
Присутствие образца в лунке выявляется автоматически при измерении оптической
--- стр. 28 ---
плотности ее содержимого на длине волны 620 нм; сопоставляются оптические
плотности в каждой лунке после внесения раствора для разведения образцов (R6) и
после добавления образцов.
Оптическая плотность лунок содержащих раствор для развдения образцов (R6)
должна быть выше 0.500.
При внесении образца, изменение ОП должно быть больше чем на 0.200.
(изменение оптической плотности при внесении образца меньше, чем на 0.200
указывает на ошибку при внесении образца).
М етод 2: и сп о л ь зо в а н и е контрольной лунки.
Присутствие образца в лунке выявляется автоматически при измерении оптической
плотности ее содержимого на длине волны 620 нм с использованием контрольной
лунки, содержащ ей только раствор для разведения образцов (R6): сопоставляются
оптические плотности в каждой лунке после добавления образцов с оптической
плотностью содержимого контрольной лунки.
Оптическая плотность контрольной лунки содержащей R6 должна быть выше 0.500.
Разница оптической плотности лунок, содержащих R6 и образцы, по сравнению с
контрольной лункой, должно быть больше чем 0.200 (изменение оптической
плотности меньше чем на 0.2 указывает на плохое разнесение образца).
СП ЕК ТР О Ф О ТО М ЕТР И Ч ЕСК А Я ВЕРИФИКАЦИЯ ПРИСУТСТВИ Я КОНЬЮГАТА.
Коньюгат (R 7) должен быть окрашен в зеленый цвет.
Присутствие коньюгата (R 7) в лунке может быть проконтролировано автоматически при
измерении оптической плотности содержимого на длине волны 450 нм;
Величина ОП каждой лунки должна быть выше, чем 0.300 (оптическая плотность
меньш е чем 0.300 указывает на ошибку при внесении коньюгата).
В ЕРИ Ф И КАЦ И Я В Н ЕС ЕН И Я РАСТВО РА ДЛЯ ФЕРМ ЕНТАТИВНОЙ РЕАКЦИИ.
Присутствие раствора для ферментативной реакции, окрашенного в розовый цвет в
лунке может быть проконтролировано автоматически при измерении оптической
плотности содержимого на длине волны 490 нм: величина ОП каждой лунки должна
быть выше, чем 0.100 (меньшая оптическая плотность указывает на ошибку при
внесении раствора для ферментативной реакции).
12 - Х А РА К ТЕР И С ТИ К И ТЕС Т-С И С ТЕМ Ы .
ПРИМ ЕЧАНИЕ; учитывая отсутствие подтверждающего теста для анти-НВс антител,
крайне затруднительно определить истинность результатов скринингового теста.
Поэтому при определении представленных ниже характеристик в качестве
референсны х использовались другие тест-системы для выявления анти-НВс.
И сследования чувствительности тест-системы МОНОЛИЗА® анти-НВс ПЛЮ С
проводили на 4 3 0 положительных образцах, полученных от пациентов с
подтвер>еденным диагнозом гепатит В и отслеживаемой клинической картиной, а также
на даух панелях для исследования чувствительности из документированных образцов,
полученных от пациентов, инфицированных вирусом гепатита В. Клиническая
чувствительность, полученная при исследовании 430 положительных образцов,
результаты которых сопоставлялись с результатами референсного теста, составила
99,53 % (428/430). Три образца были определены как отрицательные, но один из них
при исследовании во втором референсном тесте также дал отрицательный результат.
Из двух других образцов оптическая плотность во втором референсном тесте д ля
одного пациента определялась как близкая к фитическому значению (коэффи 1 4иенты
реактивности 1,08 и 1,09). Аналитическая чувствительность определялась с
использованиям IgG и 1дМ стандартов Института Пауля Эрлиха, полученная
минимальная определяемая концентрация составила 0,5 Е д РЕ1/мл и 8 Ед РЕ1/мл для
IgG и 1дМ соответственно.
Специфичность тест-системы, исследованная на 5071 образце, полученных от
случайной выборки донс^юв, составила 99,9 %. Специфичность тестч:истемы,
полученная при исследовании 439 клинических обрг^цов, сюставила 99,5 %.
С реди образцов от 2 2 0 пациентов с физиологическим статусом или пагопогией, не
связанными с ВГВ инфекцией (беременные женщины, пацие)лъ 1 с ревматоидным
фактором, с анти-нукле^ны м и антмтвпами или маркерами доугой вирусной инфеации)
16 образцов определялись как положительные в тесте МОНОЛИЗА® аш и -Н В с ПЛЮ С.
С реди этих 16 образцов, 15 определялись как потожительные в одном из двух даугих
тесто в и один образец (ВГА 1дМ полозюгтельный) был определен iqk отри 1этельны й, но
его объем а не х в а т п о для тестсфования во второй т е а ч ж т ш е .
10
--- стр. 29 ---
1 1
Для исследования воспроизводимости тест-ситемы Монолиза® анти-НВс ПЛЮ С были
использованы 4 образца; 1 отрицательный образец, 2 положительных образца (образец
2 и 3) и 1 образец с высоким содержанием анти-НВс антител.
Воспроизводимость результатов в одном исследовании оценивалась с использованием
указанных 4 образцов, каткдый из которых был повторен в 30 пробах.
Воспроизводимость результатов между сериями исследований определяли с
использованием указанных 4 образцов, которые исследовали 3 раза на 2 планшетах в
течение 5 дней в двух независимых сериях исследований ежедневно. Результаты
представлены в следующих таблицах:
Табл. 1: Воспроизводимость результатов в одном исследовании
N = 30 Образец
№ 1
Образец
№2
Образец
№3
Образец
№4
• Ср еднее значение коэффициента
реактивности
0,20 2,09 2.71 6.44
Стандартное отклонение (SD) 0,02 0,08 0,18 0,27
Ср еднее квадратичное
отклонение C V (% )
7,77 3,72 6.82 4,15
Табл. 2: Воспроизводимость результатов в 40 сериях исследований
N = 30 Образец
№ 1
Образец
№2
Образец
№3
Образец
№4
Среднее значение коэффициента
реактивности
0,22 2,18 2,69 6,41
Стандартное отклонение (SD) 0,05 0,28 0,10 0,20
Ср ед нее квадратичное
отклонение C V (%)
23,42 12,78 3.53 3.17
1 3 - О ГР А Н И Ч ЕН И Е ПРИМ ЕНЕНИЯ Т Е С Т А .
Отрицательный результат свидетельствует, что образец не содержит анти-НВс
антитела в количестве, определяемом тестч:истемой Монолиза® анти-НВс ПЛЮ С.
Однако, такой результат не устараняет возможности наличия ВГВ инфекции.
Колорометрический метод контроля раскапывания с^разцов, конъюгата и
ферм ентативны х растворов не позволяет подтверждать точность дозирования. Данный
метод показывает только присутствие образца, конъюгата и раствора для
ф ерм ентативной реакции в лунке планшета. Процент ошибочных ответов при
использовании данного метода сильно зависит от правильности использования набора
(совокупный коэффициент вариации при внесении образцов и реагентов и при
регистрации результатов, составляющий более 10 %, значительно снижает гачество
полученных результатов).
В случае очень плохой эффективности промывки лунок планшета после инкубации с
конъюгатом, автоматический контроль внесения раствора для 4юрментэтивной
реакции (проверка С П содаржимого лунок планшета л|»| ни ) мш кег дать
неправильный результат ОП более 0,100 в тех лунках, в котф ью pacraqp д ля
ферментативной реакции не вносился. Однако, в течение испытаний тесг-систаиы ни в
одном из 939 исследованных образцов такой эф ф ект не н^лю дагю я.
--- стр. 31 ---
С Е Э
М О Н О Л И З А Н В с 1 д М П Л Ю С
M O N O L I S A Н В с 1 д М P L U S
9 6 т е с т о в 7 2 3 8 2
ИМ1У1УНОФЕРМЕНТНЫИ НАБОР ДЛЯ В Ы Я ВЛ ЕН И Я АНТИТЕЛ 1дМ К
ИУКПЕОКАПСИДНОМУ (ЯДЕРНОМУ) Н Вс АНТИГЕНУ ВИРУСА ГЕПАТИТА В. _________
IVD
Для использования в диагностике In Vitro
К о н т р о л ь к а ч е с т в а п р о и з в о д и т е л я
Качество всех произведенных и предназначенных для продаж и реагентов
находится под всесторонним контролем качества, начиная с получения
сырья, и до продаж и продукта пользователю.
Каж дая серия проходит контроль качества и поступает на рынок лишь при
соответствии заданным критериям.
Сведения о продукции и контроле каж дой серии хранятся в компании БИО-РАД (BIO
RAD).
О О О «Био-Рад Лаборатории»
12516 7 Москва, Ленинфадский пр-т,. 37А, корп. 14
Бизнес-центр «Западный мост»
Тел.: (495) 7211404, Факс:(495) 7211412, post @ bio-rad.ru
--- стр. 32 ---
1 - Н А ЗН А ЧЕН И Е.................................................................................................................................. 3
2 - КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИ Е........................................................................................................... 3
3 - ПРИНЦИП Т Е С Т А МОНОЛИЗА НВс 1дМ ПЛЮ С........................................................................3
4 -С О С Т А В Н А Б О Р А ........................................................................................................................... 4
5 - М ЕРЫ ПРЕД ОСТОРОЖ НОСТИ..................................................................................................... 5
6 - ТЕХНИКА Б ЕЗ О П А С Н О С Т И .......................................................................................................... 7
7 - М АТЕРИАЛЫ НЕОБХОДИМЫЕ, НО НЕ ПОСТАВЛЯЕМ Ы Е С Н А Б О РО М .................................5
8 - ПОДГОТОВКА Р Е А ГЕН ТО В ........................................................................................................... 8
9 - С Р О К ГОДНОСТИ И СТАБИЛЬНО СТЬ..........................................................................................9
10- О Б Р А З Ц Ы ........................................................................................................................................9
11 - МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА........................................................................................ 10
1 2 - СПЕКГРО Ф О ТО М ЕТРИ ЧЕСКАЯ ВЕРИФИКАЦИЯ ДОЗИРОВАНИЯ ОБРАЗЦОВ И
Р Е А Г Е Н Т О В ......................................................................................................................................... 11
13 - Р А С Ч Е Т И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ......................................................................... 11
14 - ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТ-СИ СТЕМ Ы .......................................................................................13
14 - ОГРАНИЧЕНИЯ ПРИМЕНЕНИЯ Т Е С Т А ......................................................................... 14
1 5 -Л И Т Е Р А Т У Р А 14
ОГЛАВЛЕНИЕ
--- стр. 33 ---
1 - Н А З Н А Ч Е Н И Е
М ОНОЛИЗА Н Вс 1дМ ПЛЮС - набор для иммуно-ферментного
ан ализа, основанный на принципе «сэндвича» дня качественного
определения 1дМ антител к ядерному антигену вируса гепатита В.
2 - К Л И Н И Ч ЕС К О Е ЗН АЧ ЕН И Е
Анти Н В с антитела - первые антитела, появляющиеся в ходе
инф ицирования вирусом гепатита В (H BV). Чащ е всего они выявляю тся
в начальной ф а зе инфекции в ассоциации с H Bs антигеном. В начальной
стадии инфекции синтезируются антитела класса 1дМ, затем IgG класса.
1дМ антитела чащ е персистируют в течение периода от нескольких
недель до нескольких месяцев, а затем их титр постепенно снижается
при выздоровлении. IgG антитела могут обнаруживаться в течение
нескольких л е т после выздоровления.
О пределение 1дМ антител к НВс антигену позволяет поставить диагноз
недавно перенесенного гепатита В и этот маркер особенно полезен,
когда прекратилась HBs антигенемия, а анти -H B s антитела ещ е не
появились. В некоторых случаях возможно определение невысокого
уровня Н В с 1дМ при хроническом вирусном гепатите В.
3 - П РИ Н Ц И П Т Е С Т А М ОНОЛ И ЗА Н В с 1дМ ПЛЮ С
M O N O LISA HBclgM PLUS - это двухшаговый иммуноферментный тест
«сэнд вич» типа, основанный на связывании сывороточных 1дМ антител
на твердой ф а зе, с последующим добавлением конъюгата (Н В с антиген -
рекомбинантный белок полученный из дрожжей и связанны й с
пероксидазой ). В качестве твердой ф азы используются полистироловые
лунки (по 8 в 12 стрипах), покрытые козьими антителами против
человечески х 1дМ.
Н Вс-антиген непосредственно связан с пероксидазой.
Методика выполнения теста состоит из следующих ф аз:
1. Инкубация контрольных сывороток и образцов в присутствии козьих
антител против человеческих 1дМ, фиксированных на твердой ф а зе.
2. П ромы вание и инкубация иммобилизованных комплексов с Н Вс-
антигеном, связанны м с пероксидазой.
3 . О тм ы в !» несвязавшегося конъюгата, выявление ф ерментативной
активности твердой ф азы при добавлении субстрата.
4 . О становка реакции, измерение оптической плотности при 450/620-700
нм и интерпретация результатов.
--- стр. 35 ---
Метка Реагент Ф о р м а
в ы п у с к а
R8 С у б с т р а т н ы й р а ств о р
Цитратный буфер, содержащий ацетат
натрия и перекись водорода.
Диметилсульфоксид (DMSO) ________________
1 флакон
60 мл
R9 Х р о м о ген
Раствор, содержащий тетраметилбензидин
(ТМ Б)
1 флакон
5 мл
R 1 0 С Т О П -Р аств о р
Раствор 1N серной кислоты
1 флакон
28 мл
С а м о к л е ю щ а я ся пленка 4 шт.
5 - М А Т Е Р И А Л Ы Н ЕО БХО Д И М Ы Е, НО Н Е П О С Т А В Л Я Е М Ы Е
С Н А Б О Р О М
Д истиллированная или полностью деионизированная вода
Гипохлорит натрия и бикарбонат натрия
Ф ильтровальная бумага
О дноразовые перчатки
О дноразовые полистироловые пробирки (12 х 75 мм)
Контейнер для контаминированных отходов
А втоматические или полуавтоматические пипетки с постоянным и
переменным объемом на 1 0 ,1 0 0 и 1000 мкл.
М ерные цилиндры на 10, 200 и 1000 мл
Вортекс
В ош ер д ла промывки м иф опланш етов (автоматический,
полуавтоматический, ручной).(*)
Водяная баня на 3 7 ° С 1^ 0 или эквивалентный суховоздушный
инкубатор или Инкубатор/шейкер с контролируемым температурным
режимом. (*)
Ф отометр для м иф опланш етов (фильтры с длиной волны - 450/620-
70 0 нм (*)
(*) Обращайтесь в местное представительство компании за
информацией о рекомендуемом оборудовании.
6 - М Е Р Ы П РЕД О СТО РО Ж Н О СТИ
Н адеж ность результатов зависит от правильного выполнения правил
Х орош ей Лабораторной практики (Good Laboratory Practice):
Н аим енование теста, а также его идентификационный номер
находятся на рамке каждого микропланшета. Идентификационный
номер также нанесен на каждый стрип.
M o n o lis a ® Н В с igM P L U S : S p e c ific ID n u m b er = 5 7
П роверьте идентификационный номер перед использованием теста.
При отсутствии идентификационного номера, или его несоответствии
номеру, указанному выш е, сф и п не использовать.
--- стр. 36 ---
Не используйте реагенты по истечении срока их годности;
Не см еш ивайте и не используйте в одном и том же исследовании
реагенты из разных серий;
ПРИМЕЧАНИЕ. Для следующих реагентов: промывочный раствор
(R2, маркировка: 20х, зеленого цвета), субстратный раствор (R8,
маркировка: ТМВ buf, синего цвета), хромоген (R9, маркировка: ТМВ
11X , пурпурного цвета) и стоп-реагент (R10, маркировка 1N ,
красного цвета) при постановке теста можно использовать серии
отличные от тех, которые входят в набор. Тем не менее, для
каждой постановки теста должны использоваться реагенты одной
серии. Данные реагенты допускается использовать с некоторыми
другими продуктами компании. Подробные сведения можно
получить в службе технической поддержки. В дополнение,
промывочный раствор (R2, маркировка: 20 х, зеленого цвета) может
использоваться в смеси с 2 другими промывочными растворами,
которые входят в состав различных диагностических наборов
производства Био-Рад (R2, маркировка: 10 х голубого цвета или
маркировка 10 х оранжевого цвета) в соответствующем
разведении, необходимым условием является использование одной
такой смеси в одной постановке. Для получения подробной
информации свяжитесь с местным представительством компании.
В се реагенты перед использованием должны быть выдержаны при
комнатной температуре в течение 30 минут (18-30°С );
Аккуратно разводите реагенты, избегая любого заф язнения.
Н е проводите исследования вблизи паров кислот, щ елочей,
альдегидов или моющих растворов так, как они могут повлиять на
ф ерм ентативную активность конъюгата;
И спользуйте только чистую лабораторную посуду, стеклянную посуду
сл е д ует тщ ательно мыть и ополаскивать дистиллированной водой;
Промывка; строго соблюдайте режим промывания, это необходимо
для максимальной эффективности теста;
Ф ерментативная реакция очень чувствительна к присутствию каких-
либо м еталлов или их ионов. Следовательно, необходимо исключить
возможность контакта ф ерментативных растворов (субстратны й
б у ф ер , хромоген, раствор для ферментативной реакции и стоп-
ратсвор) с металлами;
Р аство р для ферментативной реакции (субстратный б уф ер +
хром оген) должен быть розового цвета. Изменение розового цвета в
течение нескольких минут после приготовления раствора указы вает
на то, что его нельзя использовать и следует заменить.
Приготовление раствора для ферментативной реакции доляоно
производиться в пластиковых одноразовых лотках или в стеклянных
контейнерах, которые следует предварительно промыть 1Н
раствором HCI, тщательно прополоскать дистиллированной водой и
вы суш ить. Данный реагент следует хранить в темноте.
П ользуйтесь одноразовыми наконечниками для вне<жния етмодого
реагента и образца;
Никогда не используйте одну и ту же посуду для конък>гата (R 6 R 7 ) и
раствор а для ферментативной реакции (R 8+R 9).
--- стр. 37 ---
Используйте для работы только поверенные и точные микропипетки.
Не д елайте изменений в методике проведения анализа.
В каждой серии исследований вместе с исследуемыми образцами
обязательно используйте контрольные сыворотки.
Не допускайте пересыхания лунок микролланшета между этапами
промывки и перед добавлением рабочих реагентов.
Если в ферментативных растворах содержится суспензия частиц,
допускается дождатся их оседания на дно флакона и только после
этого раскапывать раствор (эти частицы не влияют на результаты
теста).
7 - ТЕ Х Н И К А Б ЕЗО П А С Н О С ТИ
В се реагенты предназначены исключительно для диагностики in vitro.
При выполнении теста используйте одноразовые лерчатки.
Никогда не пипетируйте ртом.
Положительный контроль (R 4) фотохимически инактивирован.
В се донорские сыворотки, использованные для приготовления
отрицательного контроля (R 3), были протестированы, и в них не
бы ли обнаружены поверхностный антиген вируса гелатита В (H BsA g),
антитела к вирусу гелатита С (анти-ВГС антитела) и антитела к ВИЧ
(анти-ВИ Ч-1, ВИЧ-2 антитела).
В се донорские сыворотки, использованные для приготовления
положительного контроля (R4), были протестированы, и в них не
обнаружены антитела к вирусу гепатита С (H C V антитела) и антитела
к ВИЧ (H IV -1, HIV-2 антитела).
Ни один метод детекции не может гарантировать отсутствие вирусов
ВИЧ, гепатита В или С или других инфекционных агентов. С лед ует
рассм атривать их как потенциально контаминированные и работать с
соответствую щ ими мерами предосторожности.
О борудование и буф ерны е растворы находящ ееся в прямом контакте
с человеческим биологическим материалом считаю тся
заф язненны м и , следовательно, их необходимо дезинфицировать.
И збегайте р азб р ы зтван и я образцов или растворов содержащих
образцы.
З зф я зн ен н у ю поверхность необходимо промыть 10% хлорной
известью . В случае р азбр ы зтван и я растворов, не содержащих
кислоты, обработайте поверхности 5% раствором шпохлорида
натрия, а затем фильтровальной бумагой, которую необходимо
вы бросить в контейнер для контаминированных остатков.
Биологический материал, заф язнеины е материалы и реагенты
необходимо утилизировать после деконтаминации:
- деконтаминации 5% гипохлорщ ом натрия (1 объем шпохлорида
натрия на 10 объемов контаминированной жидкости или воды) в
течение 3 0 минут
- автоклавирование при 121°С в течение 2 часюв
В Н И М А Н И Е! Н икогда не помещайте р а с т в о р ги п о хл о р и д а натрия в
а в т о к п а в .
--- стр. 42 ---
13 - Р А С Ч Е Т И И Н ТЕРП РЕТА Ц И Я РЕЗУЛ ЬТАТО В
1 ) Р а с ч е т ср ед н его зн ачен и я о п ти ческой п ло тн о сти о тр и ц а тел ь н о го
к о н т р о л я : (ОП R 3 )c p .
Пример; Отрицательный контроль R 3 ОП
1 0 .0 2 0
2 0.015
3 0.045
С ум м а ОП R 3 / 3=0.080/3=0.026= (ОП R 3)cp .
2 ) Р а с ч е т ср е д н его зн ачен и я о п ти ческо й п л о тн о сти п о л о ж и тел ь н о го
к о н т р о л я : (ОП R 4 )cp .
Пример: Положительный контроль R4 ОП
1 0.950
2 0.880
3 0.897
С ум м а ОП R 4 / 3=2 .727/3=0 .9 0 9 = (ОП R4)cp.
В сл уча е , если одно из значений ОП положительного конрольного
образца R 4 отклоняется от среднего значения (ОП R4)cp.бoлee, чем на
25 % , оно может быть исключено из расчетов. В этом случае вычислите
сред нее значение из оставшихся двух.
3 ) В ы ч и с л е н и е критическое зн ачен и е о п ти ч е ско й п л о тн о сти
(О П Крит.):
Критическое значение оптической плотности равно;
(O n R 3 )c p .+ ((O n R 4 )c p . / 7)
П ример: (O n R 3 )cp . = 0.026, (0 H R 4 )cp . = 0.909
ОПкрит. = 0.026+(0.909 / 7 ) = 0.156
4 ) К р и те р и и д о сто в е р н о сти р езул ь тато в
С ред н ее значение ОП положительного контроля (O nR 4)cp. должно быть
бо льш е или равное 0.4 ед. ОП.
(О П R 4 )cp . > 0,400
С ред н ее значение ОП отрицательного контроля (O n R 3)cp . должно быть
м еньш е или равно 0,1 ед. ОП.
(О П R 3 )cp . <0,100
5 ) Р а с ч е т о тн о ш ен и й о б р азц о в
Для каждого образца рассчитывается коэффициент реактивности (КР):
ОП образца
К Р =
------------------------------------
ОП крит.
6) И н тер п р етац и я р езул ь тато в
О бразцы с коэффициентом реактивности м е н ы ш 1.0 считаю тся
отрицательны ми.
О бразцы с коэффициентом реактивности больш е или равным 1.0
считаю тся положительными.
1 2
--- стр. 43 ---
14 - Х А РА К ТЕРИ С ТИ К И ТЕ С Т-С И С ТЕ М Ы
Характеристики МОНОЛИЗА НВс 1дМ ПЛЮС были получены при
рандомизированном исследовании образцов крови доноров, пациентов с
остры м и хроническим гепатитом В или с заболеваниями несвязанны ми
с гепатитом «В», а также коммерческих образцов и сероконверсионных
панелей.
С п е ц и ф и ч н о с т ь
П арам етры специфичности определялись при исследовании 1312
рандомизированных образцов крови доноров. Установлена
специф ичность 99.99% (1311/1312).
П арам етры специфичности определялись так же при исследовании 202
образцов от больных. Установлена специфичность 99.5% (201/202).
О бслед ование 99 больных с различными заболеваниями и
функциональными состояниями не связанными с вирусным гепатитом В
(берем енны е женщины, ревматоидный фактор, другие вирусные
инф екции) установило специфичность 100% (99/99).
А н а л и т и ч е с к а я ч у в с т в и т е л ь н о с ть
Нижний предел чувствительности набора 50 Е/мл установлен при
исследовании стандартной панели PEI (ref IgM НВс 84).
Ч у в с т в и т е л ь н о с т ь
О пределение чувствительности выполнено на 199 положительных
образц ах от больных с острым и хроническим вирусным гепатитом В.
Чувствительность набора 98,5% .
Т а к же проведены исследования 129 образцов, большая часть которых
полученна при острой инфекции 2 7 случаев и трех коммерческих
сероконверсионны е панелей в сравнении с другими доступными
коммерческими ИФА наборами.
В о с п р о и з в о д и м о с т ь
Воспроизводимость тест-ситемы МОНОЛИЗА Н Вс IgM Плюс
устан о влен а при анализе 4 образцов: 1 отрицательный образец, 2 НВс
IgM положительных образца (образец 2 и 3) и 1 образец с высоким
содержанием НВс IgM.
Внутри серийная воспроизводимость оценивалась на указанны х 4
образц ах с использованием 30 повторных проб для каждого образца в
одном исследовании. Воспроизводимость между сериями исследовалась
на указанны х 4 образцах в дублирующих пробах в течение 20 дней
еж едневно на двух независимых сериях исследований. Полученные
результаты представлены в таблицах;
Т а б л . 1 : В н утр и сер и й н ая в о сп р о и зв о д и м о сть
N = 30 Образец
№1
О бразец
№2
О бразец
№ 3
О бразец
№4
С ред н ее значение
отнош ения кК У
0,21 2,32 4.11 5,4 2
С танд артное отклонение
(S D )
0,01 0 ,0 7 0,14 0 ,3 4
С ред н ее квадратичное 5,38 3,21 3,4 4 6,22
1 3
--- стр. 44 ---
отклонение C V (% )
Т а б л . 2: М ежду сер и й н ая в о сп р о и зв о д и м о сть
N = 40 Образец
№1
Образец
№ 2
Образец
№3
О бразец
№4
С ред н ее значение
отнош ения к КУ
0 ,2 2 2,28 3,89 5,37
С танд артное отклонение
1S D )____________________
0,05 0,26 0,51 0,59
С ред нее квадратичное
отклонение С У (% )
22,13 11,27 13,13 1 1 , 0 2
15 - О ГР А Н И Ч ЕН И Я П РИ М ЕН ЕН И Я Т Е С Т А
О трицательный результат указывает на то, что исследованный образец
не содержит anti- Н Вс 1дМ выявляемые набором МОНОЛИЗА НВс 1дМ
ПЛЮ С. Однако такой результат не исключает возможности наличия ВГВ
инфекции.
Спектрофотометрический метод верификации внесения образцов,
конъю гата и субстратного раствора не позволяет проверять точность
дозирования. Этот метод показывает только наличие образца, конъюгата
и субстратного раствора в лунке. Процент неправильных результатов,
полученны х этим методом, зависит от точности работы используемых
устройств (если суммарный коэффициент вариации при дозировании и
регистрации оптической плотности превыш ает 10%, качество
спектофотометрической верификации значительно снижается).
В сл учае низкого качества промывки после инкубации с конъюгатом,
автом атическая верификация правильности внесения субстратного
раствора (считывание значений оптической плотности содержимого
лунок при длине волны 490 нм) может привести к неправильному
результату: оптическая плотность может быть выш е 0.100 даже при
отсутствии субстратного раствора. Однако, при исследовании 939
образцов такой феномен не наблюдался.
16 - Л И ТЕРА ТУР А
С м . ф ранцузскую версию инструкции.
14
--- стр. 45 ---
С Ш Э
М о н о л и з а А н т и - H B s П Л Ю С
M o n o l i s a A n t i - H B s P L U S
192 теста 72666
Тест-система иммуноферментная для определения
наличия и концентрации антител к поверхностному
антигену гепатита В (Анти-HBs) в сыворотке/плазме крови
человека.
I V D Для диагностики in vitro
К о н т р о л ь к а ч е с т в а п р о и з в о д и т е т м
Качество всех гцюизведенных и щюдназначвнных для продаж и реагентов нахо д игт ю я под «хспщюнним
конщюлем качества, начиная с получения сырья и до продаж и гродутт пользовашпю.
К аж дая серия проходит конпцюль качества и поступает иа рынок пшиь !цш соответствии заданным
фитвршм. Документы о производстве и конщюпе каж дой < »рии хранття в компании
Б И О - Р А Д ( В К И Ш ) } .
А д р е с представи тел ьства в России:
125167, М осква, Ленинградский пр-т, 3 7 А „ стр. 14
Т е л .; (4 9 5 ) 721 14 04, Фа1к::(495) 721 14 12, ечтаМ: post@b»o-rad.fw
--- стр. 46 ---
СОДЕРЖАНИЕ:
1. НАЗНАЧЕНИЕ
2. КЛИНИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ
3. ПРИНЦИП ТЕСТА
4. СОСТАВ КОМ ПЛЕКТА
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
6. ИНСТРУКЦИЯ ПО БЕЗОПАСНОСТИ
7. ТРЕБУЕМЫЕ МАТЕРИАЛЫ. НЕ ВКЛЮ ЧЕННЫЕ
В КОМПЛЕКТ ПОСТАВКИ
8. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
9. СРОК ГОДНОСТИ И УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
10. ОБРАЗЦЫ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
11. ПРОЦЕДУРА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА
12. КРИТЕРИИ ПРАВИЛЬНОСТИ ВЫПОЛНЕНИЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО И КАЧЕСТВЕННОГО
АНАЛИЗА
13. РАСЧЕТ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
14. СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКАЯ ВЕРИФИКАЦИЯ
ДОЗИРОВАНИЯ ОБРАЗЦА И КОНЬЮ ГАТА
15. ОГРАНИЧЕНИЯ
1в. ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТА
17. ЛИТЕРАТУРА
--- стр. 47 ---
1 - Н АЗН А ЧЕН И Е:
Монолиза Анти-HBs ПЛЮС - тест-система, предназначенная для качественного и количественного
определения содержания антител против MBs Аг в сыворотке/плазме крови человека методом
иммуноферментного анализа.
2 - КЛ ИНИ ЧЕСКАЯ ЗНАЧИМ ОСТЬ
Наличие антител к HBs Аг является важным фактором для диагностики и прогноза развития
вирусного гепатита В. У больных острым ВГВ антитела к поверхностному антигену вируса гепатита В
(Анти-HBs), обнаруживаются приблизительно в 80% случаев через 1-3 месяца после появления в
крови поверхностного антигена гепатита В (HBs Аг). Определение Анти-HBs используется для
эпидемиологического контроля и выявления возможного контакта с гепатитом В в прошлом у лиц,
подлежащих прививке против гепатита В, мониторинга вакцинации, а также с целью отбора доноров с
высокой концентрацией антител в плазме для получения специфических иммуноглобулинов.
М онолиза Анти-НВз ПЛЮС - прямой иммуноферментный анализ (ИФА) по типу "иммуносэндвич". В
тесте используются полистироловые микропланшеты покрытые нативным поверхностным антигеном
гепатита В (H Bs Аг (подтипов ad и ау) в качестве твердой фазы и коньюгат, содержащий меченый
пероксидазой хрена HBs Аг человека (субтипов ad, ау). Определение уровня Анти-HBs
стандартизировано согласно рекомендациям ВОЗ и выражается в мЕ/мл (mlU/ml). Уровень анти- HBs
антител, равный или превышающий 10 мМЕ/мл, указывает на наличие поствакцинальной иммунной
защиты по отношению к гепатиту В у привитых лиц. Концентрация анти- HBs антител 10 мМ Е/мл
соответствует минимальному пороговому уровню иммунитета к вирусному гепатиту. Наличие
пограничного иммунитета (минимальный титр 10 мМЕ/мл) является решающим фактором для
дальнейших мероприятий в отношении привитых против вирусного гелатита лиц, для которых не
исключен контакт с биологическими жидкостями и материалами, содержащими HBs Аг.
3 - ПРИНЦИП Т Е С Т А :
При выполнении анализа исследуемые и контрольные образцы помещаются в лунки
микропланшетов, покрытых иммобилизованным антигеном и инкубируются. Если антитела против
H Bs присутствуют в образце или в контроле, то они будут связываться с антигеном. Несвязавшиеся
компоненты удаляются промывкой. Затем в лунки добавляется конъюгат, который связывается с
комплексами антиген-антитело в лунках планшета. Излишек коньюгата удаляется промывкой. На
следую щ ем этапе в лунки вносится раствор хромогена/субстрата и вновь проводится инкубация.
Если исследуемый образец содержит антитела к HBs Аг, то коньюгированный ф ерм ент (пероксидаза
хрена) изменяет цвет хромогена тетраметилбензидина (ТМБ) в растворе на голубой. После
добавления блокирующего раствора голубой цвет содержимого лунки меняется на желтый.
Е сли исследуемый образец не содержит антитела против HBs Аг ,то содержимое лунок остается
бесцветным в процессе инкубации су ^ т р а т а и после добавления блокирующего реакцию реактива.
Интенсивность окраски раствора оценивается при помощи спекфоф отометра и прямо
пропорциональна количеству антител против HBs Аг в образце.
Оптическая плотность исследуемого образца сравнивается с пороговым значением (cutoff)
оптической плотности, измеренной посредством калибратора, содержащего 10 мМЕ/мл.
4 - С О С Т А В КОМПЛЕКТА
Н азван и е
на этикетке
С о ст а в и описание реактива К о личество
R1 М икропланш ет: 12 стрипов по 8 лунок, содержащих смесь
поверхностного антигена гепатита В человека (субплпы ad и ау)
2 планшета
R 2 К онцентрат пром ы ваю щ его раствора (20х)
Трис-NaCI раствор pH = 7.4
Консервант: РгоСйп 300 (0.04%)
1 ф л
2 3 5 М П
СО О тр и ц атель н ы й контроль образец
Буферный раствор содержащий фетальную бычью сыворотку и
стабилизаторы протеинов
Консервант: РгоСНп 300 (0.5%)
1 ф л
2,2 мл
С1 10 м М В м л раство р калибратора*
Буферный раствор, содаржащий человеческие антетела против
H B s Аг, 4ютальную бычью cHsqsoTKy, с т а б и л и з а т с ^ протеинов и
и»и9«каторный кргюитель
1 ф л
3 М П
--- стр. 48 ---
Консервант: ProClin 300 (0.5%)
С2 100 мМЕ/мл калибратор - положительный контроль
Буферный раствор, содержащий человеческие антитела против
H Bs Аг, фетальную бычью сыворотку, стабилизаторы протеинов и
индикаторный краситель
Консервант: ProClin 300 (0.5%) ______________________________________
1 фл
2,2 мл
СЗ 400 мМЕ/мл калибратор
Буферный раствор, содержащий человеческие антитела против
H Bs Аг, фетальную бычью сыворотку, стабилизаторы протеинов и
индикаторный краситель
Консервант: ProClin 300 (0.5%)
______________________________________
1 ф л
2,2 мл
04 1000 мМЕ/мл калибратор
Буферный раствор, содержащий человеческие антитела против
HBs Аг, фетальную бычью сыворотку, стабилизаторы протеинов и
индикаторный краситель
Консервант: ProClin 300 (0.5%)______________________________________
1 ф л
2,2 мл
R6 Раствор для разведения образца
Буферный раствор, содержащий фетальную бычью
стабилизаторы протеинов и индикаторный краситель
Консервант: Proclin 300 (0.1%)
__________________________
сыворотку.
1 ф л
27 мл
R7a Концентрат конъюгата (11Х)
Буферный раствор, содержащий меченый пероксидазой HBs Аг
человека (подтипы ad/ ay) и стабилизаторы протеинов
Консервант: Proclin 300 (0.5%)
1 ф л
2,5 мл
R7b Раствор дня разведения конъюгата
Буферный раствор, содержащий фетальную бычью
стабилизаторы протеинов и индикаторный краситель
Консервант: ProClin 300 (0.1%) __________________________
сыворотку,
1 ф л
2 5 мл
R8 Субстратный раствор
лимонная кислота и раствор ацетата натрия pH = 4.0, содержащий
Н2О2 (0.015%) и DMSO (диметил сульфоксид) (4%) ________________
1 ф л
60 мл
R9 Хромоген
Раствор, содержащий тетраметилбензидин (ТМБ)
1 ф л
5 мл
R10 Блокирующий реагент (стоп-раствор)
1 N раствор серной кислоты
1 ф л
28 мл
Самоклеющаяся пленка в 8
*Контрольные реагенты калиброваны в соответствии с внутренними нормативами, которые в свою
очередь соответствуют нормам, рекомендованным IRP ВОЗ от 1977 г.
Хранить комплект при +2-8°С. Перед использованием выдержать все реактивы ф о м е
концентрированного конъюгата до комнатной температуры (+18-30°С). Охладить реактивы до +2-8°С
сразу же после использования. Неиспользованные стрипы/планшеты упаковать и плотно закрыть
пакет. Не удалять десикант. Хранить полоски планшета при +2-8°С.
5 - МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ:
Качество полученных результатов зависит от соблкщения правил надлежащей лабораторной
практики:
• Название теста и порядковый номер находятся на рамке ка)кдси^) планшете, тот же номер
указан на каждом стрипе.
MONOUSA Anti-Hbs PLUS : Идентификационный номер = 63
• Проверьте идентификационный номер перед использованием теста. При отсутствии
идентификационного номера, или его несоответствии номеру, указанному в ы и », стрип не
использовать.
• Н е используюте реа'енты с истекшим сроком годности.
• Н е смеш ивайте реагенты из различных партий при выполнении теста
ПРИМ ЕЧАНИЕ. Для следующих реагентов: промывсмиый раствор (R2, маркировка: 20 х,
зеленого цвета), субстратный раатор (R8, маркировка: ТШ Ш, синего цвета), хромоген
(R9, маркировка: ТМ В Их, пурпурного цвета) и стоп-рвагвнт (R10, матировка 1 N ,
--- стр. 49 ---
красного цвета) при постановке теста мож но использовать серии отличные от тех,
которые входят в набор. Тем не менее, для каж дой постановки теста долж ны
использоваться реагенты одной серии. Данные реагенты допускается использовать с
некоторыми другими продуктами компании. Подробные сведения мож но получить в служ бе
технической поддерж ки. В дополнение, промывочный раствор (R2, маркировка: 20 х,
зеленого цвета) мож ет использоваться в смеси с 2 другими промывочными растворами,
которые входят в состав различных диагностических наборов производства Био-Рад (R2,
маркировка: 10 х голубого цвета или маркировка 10 х оранжевого цвета) в
соответствующем разведении, необходимым условием является использование одной
такой смеси в одной постановке. Для получения подробной информации свяжитесь с
местным представительством компании.
• Для стабилизации реактивы следует выдерживать 30 мин. при комнатной температуре перед
началом анализа.
• Аккуратно разведите реагенты, не допуская их зафязнения.
• Не проводить те ст в присутствии паров кислот, щелочей, альдегида или пыли, что может
изменить ферментативную активность конъюгата.
• Используйте только тщательно промытую и ополоснутую деионизированной водой
стеклянную посуду или (предпочтительно) одноразовую посуду.
• Не допускайте пересыхания стрипов в промежутках между промывкой и добавлением
следующего реактива.
• Ферментативные реакции очень чувствительны к присутствию металлов или ионов металлов.
Ни при каких обстоятельствах не допускайте контакта растворов, содержащих субстрат или конъюгат
с металлами.
• С м е сь субстратного раствора и хромогена должна иметь розовую офзску. Изменение цвета в
течение нескольких минут после приготовления раствора указывает на то, что реагент не может
использоваться и должен быть заменен.
• Приготовление раствора может быть выполнено в чистой одноразовой пластиковой кювете
или стеклянном контейнере, который предварительно был вымыт 1 N HCI, тщательно ополоснут
дистиллированной водой и высушен. Данный реагент должен храниться в темном месте.
• Раствор индикатора можно приготовить в одноразовой пластиковой кювете или стеклянной
• Используйте новый наконечник пипетки для каждого образца.
• Одина из важнейших операций анализа - промывка лунок: следуйте рекомендациям по
количеству промывочных циклов. Лунка должна полностью заполняться раствором, а затем
полностью опорожняться. Несоблюдение правил промывки ведет к искажению результата.
• Используйте разные емкости для конъюгата и индикаторного раствора.
6 - ИНСТРУКЦИЯ по БЕЗОПАСНОСТИ:
Xi - класс химических препаратов вызывающих раздражении кожи, слизистой оболочки глаз,
дыхательных путей.
_____ Некоторые реагенты содержат РгоСПп 300 (0,04%; 0.1% и/или 0,5%) - препарат класса Xi.
R43: может вызвать сенсибилизацию кожных покровов.
S28-37; При попадании на кожные покровы, немедленно промыть места контакта большим
лийшп количеством воды и мыла. Рекомендуется ношение соответствующей защитной одежды.
• В состав некоторых реагентов диагностического набора Монолиза Анти-HBs ПЛЮ С входят
компоненты ф о в и человека. Все они были проверены на наличие и не содержат, согласно
результатам теста: поверхностного антигена ВГВ (HBs Аг), антител против вируса гепатита С (ЕГО), и
антител к ВИЧ (ВИЧ-1, ВИЧ-2-антитела). Ни один из существующих методов контроля биологических
материалов не может дать полную гарантию того, что и нерц и он ны й агент отсутствует. Поэтому,
работая с образцами, а^ л ю д ай те требования, предъявляемые к работе с контаминированными
биоматериалами, которые могут служить источником передачи инфекции..
• В се материалы, вступавшие в контакт с образцами плазмы/крови или с реетентами,
содержащими компоненты тканей человека, а также с промываюи^ми растворами следает
расценивать как контаминированные.
• Н е допускайте разлития с^разцов или растворов сод еряаи рх обрш цы.
• Используйте одноразовые перчатки для работы с реагентами и образцами. Тщ ательно MOtn%
руки после окончания теста.
• Н е пипетируйте ртом.
• Образцы, реагенты, содержащие компоненты тш н ей человека и в<% другие потенциально
контаминированные материалы утилизуются только после предвгцзительной /ко н там и н ац и и :
--- стр. 50 ---
- либо замачиванием материалов в 5% растворе гипохлорита натрия (1 объемная часть гипохлорита
натрия на 10 частей контаминированной жидкости или воды) в течение 30 мин.,
- либо обработкой в автоклаве при 121°С в течение как минимум 2 часов.
Обработка в автоклаве при 121°С не менее, чем в течение 1 часа является лучшим способом
дезактивации вирусов гепатита и ВИЧ.
ВНИМ АНИЕ: НЕ ДОПУСКАЙТЕ ПОПАДАНИЯ РАСТВОРОВ. СОДЕРЖ АЩ ИХ ГИПОХЛОРИТ НАТРИЯ
В АВТОКЛАВ
Поверхности, загрязненные образцами обработать 10% раствором гипохлорита натрия. Если
контаминированные жидкости содержат кислоту, то зафязненные ими участки поверхности следует
нейтрализовать бикарбонатом натрия, а затем обработать раствором хлорной извести и просушить
промокательной бумагой. Материалы, использованные при обработке, поместить в емкость для
контаминированных отходов..
• Не забудьте нейтрализовать и/или обработать в автоклаве растворы и лю бые жидкости,
содержащие биологически активные образцы перед тем, как слить их в канализацию
Инструкцию по безопасному применению (MSDS) перечисленных реагентов имеется в наличии у
производителя
- ТРЕБУЕМЫЕ МАТЕРИАЛЫ, НЕ ВКЛЮ ЧЕННЫЕ В КОМ ПЛЕКТ ПОСТАВКИ;
Дистиллированная или деионизованная вода.
Гипохлорит натрия (хлорная известь) и бикарбонат натрия.
Автоматическая/полуавтоматическая многоканальная пипетка с переменным или
фиксированным объемом 10 мкл, 200 мкп, 1 мл, 5 мл, 10 мл.
Мерный цилиндр на 2 5 мл, 100 мл, и 1000 мл.
Контейнер для контаминированных материалов.
Водяная баня или сухой инкубатор с температурным режимом 37°С ± Г С .
Автоматическая, полуавтоматическая или ручная система для промывки микропланшет.
Фотометр для микропланшет с-фильтрами на 490, 450 и 620 - 650 нм.
Промокательная бумага.
Одноразовые перчатки.
Чистый полипропиленовый контейнер для приготовления ТМБ.
8 - ПОДГОТОВКА РЕАГЕН ТОВ:
Перед использованием набор Монолиза Анти-HBs ПЛЮС выдержать при комнатной температуре 30
мин д ля стабилизации реагентов.
1) Реагенты готовые к употреблению
Микропланшеты (R1)
Каждый м иф опланш ет состоит из 12 стрипов, установленных в рамке. Он упакован герметично в
пакет, который снабжен замком-клипсой. Перед вскрытием упаковки выдержите планшет в пакете при
комнатной температуре, во избежании появления конденсата в лунках планшета. Рассеките пакет
ножницами или скальпелем на 0,5-1 см выше линии клипсы. Откройте его и достаньте планшет.
Неиспользованные стрипы положите в пакет, запечатайте и храните при + 2 - 8 °С.
Раствор для разведения образцов (R6)
Отрицательный контрольный образец (С О )
10 мМЕ/мл калибратор (С1)
100 мМЕ/мл калибратор - положительный контрольный образец (С2)
400 мМ ЕДмл калибратор (СЗ)
1000 мМЕ/мл калибратор (С4)
Перед использованием гомогенизировать раствор посредством автоматического встряхивателя, или
осторожно переворачивая флакон.
2) Реагенты, требующие приготовления
Концентрат промывающего раствора (R2)
Разбавить концентрированный раствор для промывки R 2 дистиллированной водай в соотношении
1:20, перемешать. Для промывки 12 стрипов достаточно 800 мл промывочного раствс^а в рг^очей
концентрации.
Рабочий раствор конъюгата (R7a R7b)
Выдержать раствор для разведения коиъкгата (R7b) при комнатной температуре.
--- стр. 55 ---
Интерпретация результатов теста;
Если значение ОП образца больше или равно пороговому значению ОП (ОПкр.), то результат
считается положительным.
Если ОП образца меньше, чем пороговая ОП, то результат считается отрицательным.
Если ОП образца превышет максимальный линейный предел спеюгрофотометра, то результат
считается положительным.
ПРИМ ЕЧАНИЕ: В связи с большим разнообразием антител и антигенов, используемых в
различных методах И Ф А , результаты исследований могут различаться меж ду собой в
зависимости от конкретного метода.
Рекомендации по проведению вакцинаций зависят от области и страны прож ивания.
При изменении метода тестирования в период наблюдения и контроля после вакцинации,
количество Анти-HBs антител у привитых лиц во время переходного периода определяется с
помощью нового и старого метода.
2.Количественный анализ
Для количественного определения концентрации анти-HBs антител в образцах плазмы и сыворотки
крови человека должны быть использованы следующие калибраторы (в скобках указано содержание
анти-HBs); СО (О мМЕ/мл), С1 (10 мМЕ/мл), С 2 (100 мМЕ/мл), СЗ (400 мМЕ/мл) и С 4 (1000 мМЕ/мл).
Калибраторы вносятся непосредственно в лунки микропланшета без предварительной процедуры
промывки, по завершению процедуры анализа (гл. 11 Инструкции) измеряется оптическая плотность
с помощью двулучевого фотометра на длине волн 450/620-700 нм.
Если в результате измерения при 450 нм, оптической плотность (A45Q) в некоторых образцах
превы ш ает или равно значению ОП(СЗ); А450^ ОП(СЗ), для этих образцов измерения производятся
на длине волны 405/620-700 нм.
С помощью метода рефессии полиномом 2-й степени строится ф аф ик зависимости оптической
плотности (А450) четырех калибровочных растворов СО, С 1, 0 2 и СЗ от их концентрации.
Обратите внимание, что значение ОП(С4) (1000 мМЕ/мл) не может быть использовано при
построении этого фафика, так как значение ОП в данном случае выходит за пределы диапазона
спетрофотометра, что требует построения второго фафика. Значения оптической плотности
образцов, меньшие, чем значения ОП(СЗ), интерпретируются с помощью фафика, полученного для
А 450 четырех калибраторов.
Оптическую плотность калибраторов СЗ и С 4 измеряют на длине волны 405/620-700 нм. Значения ОП
(А405) д ля калибраторов С З (400 мМЕ/мл) и С 4 (1000 мМЕ/мл) наносятся на ф аф и к прямо напротив
точек, соответствующих их концентрациям. Затем точки соединяются меяеду собой прямой линией.
Значение концентрации анти-HBs антител (мМЕ/мл) для каждого образца находят на пересечении
значения ОП для данного образца с фафиком. График зависимости ОП от концентрации для длины
волны 4 0 5 нм (А405) используют для определения концентрации антител против ВГВ в образцах
сыворотки или плазмы, если указанная концентрация больше 400 мМЕ/мл и меньше или равна1000
мМЕ/мл. Образцы, содержащие анти ВГВ антитела в концентрации, превышающей 1000 мМЕ/мл,
разводят в предварительно разведенном до рабочей концентрации промывочном растворе
(разведенном R 2) и исследуют повторно.
14 - СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКАЯ ВЕРИФИКАЦИЯ
ДОЗИРОВАНИЯ ОБРА314А И КОНЬЮ ГАТА
Проверка правильности внесения образцов и раствора для разведения (R6).
П осле добавления образца, цвет раствора для разведения изменяется с розового на голубой.
Наличие раствора для разведения образца и образца гшазмы/сыворотки в лунке может быть
проконтролировано с помощью спектро<^тометра на дпине волны 620 нм. Значение О П для к^одой
лунки, содержащей разведенный образец или контроль, должно быть больш е или равно 0,150
(значение меньш е 0,150 указывает на ошибку, допущенную при дозировании образца или контроля).
Проверка правильности внесения раствора конъюгата (R7a +R7b) в р^очей концентрации
Рабочий раствор коньюгата (R 7a +R7b) оф аш ен зеленый tper.
Наличие конъюгата в лунке м ож ю проверить с помощью спектрофотометра на длине ю л н ы 6 20 нм.
Значение ОП д ля каяздой лунки должно быть больше или равно 0.070 (значения ниже 0.070
указывает на ошибку, допущенную при дозировании рабочего раствора конъюгата).
Проверка правильности внесения раствора хром<»гена (R8+R9) в рабочей кон1№итра1ф1и
Разбавленный рабочий раствор хромогена (R8+R9) имеет розовый ip e x
Наличие раствора (R8-I-R9) в лун 1ю иояшо про 1«>нтролировагь при помощи спектрофл'смметра при
длине волны 490 нм. При этом зн»<ение ОП р а стю ^я в лунке должно быть больш е 0.100 (если ОП
ОПкр. = Среднее значение ОП (С1)
--- стр. 56 ---
меньш е 0.100 , то это указывает на ошибку, допущенную при дозировании разбавленного рабочего
раствора хромогена). Перед добавлением рабочего раствора хромогена (R8+R9) пустая лунка
бесцветна. После добавления рабочего субстратного раствора, содержимое лунки розового цвета.
15 - О ГРАНИ ЧЕН И Я
• Необходимо строго соблюдать порядок проведения и интерпретации результатов анализа
плазмы/сыворотки на наличие антител к поверхностному антигену ВГВ. Рекомендуется внимательно
изучить инструкцию перед тем, как приступать к исследованию. Особенно важно точное выполнение
указаний по внесению образцов и реагентов, промывке микропланшет и соблюдении условий
инкубации.
• Ошибки, допущенные при добавлении образцов или реагентов, могут стать причиной ложно
отрицательных результатов.
Если есть сомнения в качестве выполнения теста, рекомендуется повторить анализ.
• Причины, по которым не выполняются условия валидности результатов тестирования, могут
быть следующие: отсутствие образца в лунке, небрежная промывка микропланшета, несоблюдение
времени/температуры инкубации, нарушение порядка внесения реагентов, присутствие металлов в
лунках или при попадании в них брызг раствора хлорной извести.
• К интерпретации слабоположительных результатов необходимо подходить с особенной
осторожностью, принимая во внимание существенные межличностные различия в иммунологических
реакциях, а также изменения иммунитета у пациентов, перенесших ВГВ или привитых против
гепатита, а также у лиц после введения иммуноглобулинов с лечебными целями.
16 - ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕС Т А
При испытаниях теста Монолиза Анти-HBs ПЛЮС были получены следующие результаты. Данные,
полученные в других лабораториях, могут отличаться от нижеприведенных.
1. В о сп р о и зв о д и м о сть результатов в одной постановке: 5 положительных и один
отрицательный образец были протестированы 10 раз в трех экземплярах внут ри одной серии.
О бразец О П (450) Срднеквадратичное
отклонение
С \/% (к о эф ф и ц и е н т
вариации)
О тр и ц а те л ь н ы й 0,023 0,003 3,6
П о ло ж и те л ь н ы й
А н ти -H B s - 20 мМ Е/мл
0,143 0,005 3.4
П о ло ж и те ль н ы й
А н ти -H B s - 50 мМ Е/м л
0,358 0,012 3.3
П о ло ж и те л ь н ы й
А н ти -H B s - 1 0 0 мМ Е/мл
0,715 0,019 2,6
П о ло ж и те ль н ы й
А н ти -H B s - 1 5 0 м М е м л
1,231 0,037 3,0
П о ло ж и тель н ы й
А н ти -H B s - 300 м М В м л
1,982 0,048 2.4
2. В о сп р о и зв о д и м о сть результатов между независим ы м и постановкам и:
Тестировались 1 отрицательный и 3 положительных образца в дублях 2 раза в день на протяжении
20 дней в соответствии с процедурой, рекомендованной Национальным Комитетом по Клиническим
Лабораторным Стандартам ЕР5 - NCCLS).
О б разец ОП(450) Срднем ю щ ратичное
отклонение
С \^% (ко эф ф ициент
вариации)
О тр и ц а т е л ь н ы й к
А н ти -Н В з
0,023 0,004 15,5
П о ло ж и те л ь н ы й к
А н ти -H B s - 2 0 мМЕ/мп
0,146 0,008 5,5
П о л о ж и те л ь н ы й к
А н ти -H B s - 1 5 0 мМ Е/м л
1.284 0,060 4,9
П о л о ж и те л ь н ы й к
А н ти -H B s - 3 0 0 м М е м л
2,015 0,067 3,6
3. Т о ч н о с ть
Результаты шличественного анализа представлены в мМЕ/мл и откалиброваны при собпкздении
нормативов компании-производителя соответствукзщих нормам 1^ IRP V№ K> R ^ r e n c e Standard 1977.
Был проведен сравнительный анализ результатов тестирогания контрольных растворов с
концентрациями О , 10, 100, 400, и 1000 мМЕ/«*л, соответствующих международными ставдартааи
--- стр. 57 ---
в о з и калибровочных растворов данной тест-системы. Коэффициент корреляции составил = 0,99
и коэф ф ициент угла наклона рефессионной линии: а = 0,96.
4. А н а л и ти ч е ска я ч у встви тел ьн о сть данного теста < 2 м М Е/м л со гл а сн о процедуре,
ре ко м ен д о ван н о й N CCLS.
ЗАМЕЧАНИЕ: Аналитическая чувствительность (ниж ний предел детекции) соответствует
минимальной концентрации анализируемого вещества, отличимой от нулевого калибратора,
рассчитанной на основании среднего значения и величины стандартного отклонения (SD ),
полученных при исследовании растворов с концентрациями анализируемого вещества О и 10
мМЕ/мл
5. Л и н е й н о ст ь метода
5 образцов, содержащих антитела к HBs в высокой концентрации ( 924 мМЕ/мл, 330 мМЕ/мл, 326
мМЕ/мл, 544 мМЕ/мл и 857 мМЕ/мл) последовательно разводились до 1/32 и 1/64 (коэффициент
разведения кратный 2). Результат линейной аппроксимации находился в интервале от 92% до 116%.
6. Э ф ф е к т в ы со к о й концентрации антител в образце (Hook effect)
4 неразбавленных образца с высокой концентрацией антител к HBs (200000 мМЕ/мл. 5500 мМЕ/мл,
28000 мМ Е/мл и 9000 мМЕ/мл) прошли тестирование.
К о нцен трация 200000 м М е м л 28000 мМ Е/мл 9000 мМ Е/мл 5500 м М В м л
ф , ОП на 450 Считано на 405 Считано на 405 Считано на 405 Считано на 405
ОП на 4 05 1.342 1.596 1.629 1,310
Р е зу л ь т а т >1000 мМЕ/мл >1000 мМЕ/мл >1000 мМЕ/мл >1000мМ Е/мл
Отображение эф ф ект избытка антител при расчетах.
7. С п е ц и ф и ч н о с т ь
А) Образцы 179 пациентов с различными заболеваниями и патологическими состояниями (ВГА, ВГС,
ВИЧ-1, ВИЧ-2, Т-лимфотропный вирус человека. ЭБВ, ВГЧ, краснуха, токсоплазмоз, миелома (IgG,
IgM), ревмотоидный фактор (РФ), антинуклеарные антитела, цирроз и пациенты, прошедшие
многократное переливание крови) исследовались с помощью теста Монолиза Анти-H B s ПЛЮС.
Для 21 образца были получены положительные результаты при использовании Монолиза Анти-HBs
ПЛЮ С и двух других коммерческих тестов на антитела к HBs (имеющих С Е сертификат) были
получены положительные результаты. 1 образец, содержащий антинуклеарные антитела, был
определен как реактивный только при тестировании с помощью ИФА Монолиза Анти-HBs ПЛЮС.
2 образца, (положительные по ВИЧ-1 и ВИЧ-2) были определены как положительные по анти-HBs
антителам во всех 3-х ИФА тестах.
Б) Специфичность Монолиза Анти-HBs ПЛЮС оценивалась при исследовании донорской крови и
клинических образцов от пациентов с диатозом, отличным от гепатита В.
Кровь д оно ров
и пациентов
Кровь д о н о ро вКровь
пациентов
В сего
Ч и с л о о б р а зц о в 511 300 240 1051
Ч и с л о по ло ж и
т е л ь н ы х о б ра зц о в
3 0 3 6
% с п е ц и ф и ч н о с ти99,4% 100% 98,7% 99,4%
Специфичность 99,4% (от 98,8% до 99,8%, доверительный интервал 95%).
8. Ч у в с т в и т е л ь н о с т ь
654 образца, полученных от вакцинированных или инфицированных ВГВ лиц, исследовались в тесте
Монолиза Анти-HBs ПЛЮС и другой тестч:истемы для выявления анти-H B s антител. Образцы, для
которых имело место несовпадение результатов, полученных псюредством этих двух тестов были
повторно исследованы с помощью третьей ИФА тест-системы (С Е сертификат).
С овп ад ен и е с результатам и М онолиза А н ти -
H B s ПЛКЮ
И н ф о р м ац и я пац иента Количество 1 т е с т (С Е ) 2 т е с т (СЕ)*
В акц ин ац и я 347 98,8% да.1%
И зл е ч е н н ы й Геп.В 71 95.8% 10СЙ &
Х р о н и ч е ски й Геп.В 37 100% hte тестировалиюь
--- стр. 59 ---
С Ш Э
М О Н О Л И З А Н В е А г - А т П Л Ю С 7 2 3 4 6
M O N O L I S A Н В е A g - A b P L U S
96 тестов НВе Аг - 96 тестов НВе Ат
Н а б о р д л я в ы я в л е н и я антигена НВе в и р у са гепатита « В » и а н ти -Н В е а н т и т е л в
с ы в о р о т к е и л и п л а зм е м етод ом и м м ун о ф е р м е н тн о го а н ал и за____________________
IVD Для использования в диагностике In Vitro
К о н т р о л ь к а ч е с т в а п р о и з в о д и т е л я
Все производимые и реализуемые реагенты контролируются полноценной системой контроля
качества от этапа получения сырья до этапа конечной реализации продукта.
К аж дая партия подвергается контролю качества и выпускается на рынок только после
подтверждения ее соответствия критериям приемки продукции.
В нашей компании хранится вся необходимая документация по производству и контролю качества
каж дой партии продукции.
--- стр. 60 ---
С О Д ЕР Ж А Н И Е:
1 -Н А З Н А Ч Е Н И Е ....................................................................................................................... 3
2 - КЛИ НИ ЧЕСКАЯ ЗНАЧИ М О СТЬ:......................................................................................... 3
3 - ПРИНЦИ П ПРО ВЕДЕНИЯ Т Е С Т А :..................................................................................... 3
4 - С О С Т А В НАБОРА................................................................................................................4
6 - М ЕР Ы П РЕД О СТО РО Ж Н О СТИ ......................................................................................... 5
7 - ТЕХ Н И К А БЕЗО П А СН О С ТИ ..................................................................................................6
8 - П РИ ГО ТО ВЛ ЕН И Е Р Е А ГЕ Н Т О В ........................................................................................ 7
9 - С Р О К ГОДНОСТИ И УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ Р Е А ГЕ Н Т О В.............................................. 8
1 0 - О Б Р А З Ц Ы ..............................................................................................................................9
1 1 - МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА.............................................................................. 9
1 2 - Р А С Ч Е Т И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТО В .........................................12
1 3 - СПЕКТРО Ф О ТО М ЕТРИ ЧЕСКИ Й АНАЛИЗ ПРАВИЛЬНОСТИ В Н Е С Е Н И Я
О БРА ЗЦ О В И РЕА ГЕН ТО В................................................................................................ 13
1 4 - И ССЛ ЕД О ВА Н И Е ХАРАКТЕРИСТИК Т Е С Т -С И С Т Е М Ы .................................................1 4
--- стр. 61 ---
Тест-система «МОНОЛИЗА® НВе Аг-Ат ПЛЮС» предназначена для определения в сыворотке
или плазме крови чел о в е к антигена НВе гепатита В (НВе Аг) или анти-НВе антител с
помощью метода иммуноферментного анализа (ИФА).
2 - КЛ И Н И ЧЕСК А Я ЗНАЧИМ ОСТЬ:
П рисутствие НВе Ад отражает состояние активной репликации вируса и указы вает на
то, что образец крови исследуемого лица обладает инфекционной активностью. НВе
Ад появляю тся на начальной стадии заражения гепатитом В, а их персистенция (более
одного м есяца) - является фактором риска для поражения печени при репликации
вируса. Появление анти-НВе антител вы зы вает угнетение репликации вируса и
я вляется благоприятным прогностическим признаком.
3 - ПРИНЦИП П РО ВЕД ЕНИ Я Т Е С Т А :
a) В ы я в л е н и е а н ти ген о в НВе
Выявление НВе Аг основано на двухэтапном иммуноферл/юнтном анализе в «сэндвич»
формате с использованием человеческих антител против НВе Аг и 2-х типов мышиных
моноклональных антител анти НВе ( т а Ы и т а Ь 2 ), меченных перокащазой, против
различны х эпитопов НВе.
Твердая ф а за представлена 8-ми луночными полистироловыми стрипами, лунки
которых покрыты анти-НВе антителами человеческой природы.
Анализ состоит из следующих этапов:
1. Инкубация контрольных и исследуемых образцов с анти- НВе антителами, в составе
иммуносорбента.
2. Промывка, ин 1^ а ц и я иммобилизованных комплексов с моноклональными
антителами, меченными пероксцдазой.
3. Удаление свободного конъюгата путем промывки, развитие ферментативной
хромогенной реакции при добавлении субстрата.
4. О становка цветной реакции, регистрация оптической плотности при длине волны
4 50 /6 2 0 - 655 нм, интерпретация результатов.
b) В ы я в л е н и е ан ти-Н В е антител
Для выявления анти-НВе антител используется тот же иммунаюрбент, что и для
выявления НВе Аг. Тест использует метод конкурентного ИФА и основан на конкуренции
иммобилизованных антител и антител, прис^ствующ их в исхле/^емом образце. В качестве
нейтрализующего реагента используется офаниченное количество НВе Аг. Детекция
осуществляется путем добавления моноклональных антител, меченных тероксцдазой ( т а Ы
и т а Ь 2 ). Анализ состоит из с п е ;^ ю и ^ этапов:
1. Инкубация контрольных и исследуемых образцов с анти-НВе антителами,
нанесенными на твер^^ю ф а ^ , и нейтрализующим агентом.
2. Промывка, и н (^ а ц и я им м обитш ванны х компгюксов с моноклональными
антителами, мечеными пероксцдазой.
3. Удалению (яободных конъюгатов в процедуре п|юмы8ки, развитие ферментативной
реакции при д с^ в л ен и и субстрата.
4 . О становка цветной реакции, регистрация оптической плотности при 4 50/820 -
6 5 5 нм.
5. Интерпретация результатов.
1- НАЗНАЧЕНИЕ
--- стр. 62 ---
4 - С О С Т А В Н А БО РА
В се реагенты , входящие в состав набора, предназначены для диагностики in vitro.
Реагенты предоставляются в количестве, необходимом для проведения 2 х 96
исследований в 1 - 1 2 независимых постановках в следующих комбинациях;
96 определений НВе Аг и 96 определений анти-НВе антител
2 X 48 Н Ве Ад определений и 2 х 48 анти НВе определений одновременно.
М АРКИРОВКА С О С Т А В РЕАГЕН ТО В ФОРМА ВЫ ПУСКА
R1 Иммуносорбент: разборный планшет, состоящий из 12 стрипов по
8 лунок, фиксированных в рамке. Для сорбции планшета
использованы инактивированные человеческие анти-НВе
антителами (из положительного образца плазмы крови
инактивиоованного по HBs Art
2 планшета
R 2 П р о м ы в о ч н ы й раствор концентрированный(20х)
Трис-NaCI буфер, рН=7,4
Консервант: Proclin 300 (0.04%)
1 флакон
2 3 5 мл
R3 ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ КОНТРОЛЬНЫЙ ОБРАЗЕЦ - общий для тестов
на наличие НВе Ад и анти-НВе антител.
Человеческая сыворотка, отрицательная по анти-HBs, анти-ВИЧ1,
анти-ВИЧ2 и анти-ВГС антителам
Консервант; 0,1 % азид натрия
1 флакон
3 мл
R4 ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ ПО АНТИ-НВе А Т КОНТРОЛЬНЫЙ О БРАЗЕЦ
Дефибринированная положительная на анти-НВе антителам
человеческая плазма, потенциально положительная на HBs Ад и
отрицательная по содержанию антител анти-ВИЧ1, анти-ВИЧ2 и
анти-ВГС, инактивированная. Консервант: 0,1 % азид натрия.
1 флакон
1,5 мл
R 5 п о л о ж и т е л ь н ы й п о НВе А Г КОНТРОЛЬНЫЙ О БРАЗЕЦ
Дефибринированная положительная на НВе Аг и HBs Аг
человеческая плазма, отрицательная по содержанию антител анти-
ВИЧ1, анти-ВИЧ2 и анти-ВГС, инактивированная Консервант; 0,1 %
азш натрия.
1 флакон
1,5 мл
R6 НЕЙТРАЛИЗУЮЩИЙ РЕАГЕНТ (Н Ве АНТИГЕН)
Дефибринированная положительная на НВе Ад и HBs Ад
человеческая плазма, отрицательная по содержанию антител анти-
ВИЧ1, анти-ВИЧ2 и анти-ВГС, инактивированная.
Консервант 0,1 % азид натрия
1 флакон
8 мл
R 7a КОНЪЮ ГАТ ДЛЯ АНТИ-НВе Т Е С Т А КОНЦЕНТРИРОВАННЫ Й (5Х)
Анти-НЬе моноклональные антитела ( т а Ы и ппаЬ2)*, отмеченных
пероксидазой
1 флакон
3 мл
R 7b КО НЪЮ ГАТ ДЛЯ НВе А Г ТЕС ТА (КОНЦЕНТИРОВАНННЫИ 5Х)
Анти-НЬе моноклональные aнтvrтeлa (ш аЫ и ппаЬ2)*, отмеченных
пероксидазой
1 флакон
3 мл
R8 СУ БСТРА ТН Ы Й РА СТВО Р
Лимонная кислота и уксуснокислый натрий pH 4.0, содержащий
Н2О2 (перекись водорода) (0.015 %) и DMSO (4%)
1 флакон
60 мл
R9 ХРОМОПЕН
PacTKjp, содержащий триметилбензол (ТМБ)
1 флакон
5 мл
R IO СТО П -Р ЕА ГЕН Т
1 N Серная ююлота
1 флакон
28 мл
ПУСТОЙ ФЛАКОН ДЛЯ R 2 В РАБОЧЕЙ К О Н Ц Ш Т Р А 1 ^ И 1 флакон 2 5 мл
С ам о кле ю щ аяся пленка д л я микропланш ет 8
^Соот нош ение таЫ и таЬ2 атптается для конъю гат ов R7a и R7b. Н е заменяйте коныогат ы друг другом
--- стр. 63 ---
5 - Н ЕО БХО Д И М Ы Е, НО НЕ П РЕД О СТАВЛ Я ЕМ Ы Е М АТЕРИ АЛЫ
Д истиллированная, либо полностью деионизированная вода.
Гипохлорит натрия и бикарбонат натрия.
П ромокательная бумага.
О дноразовы е перчатки.
О дноразовы е полистироловые пробирки (12 х 7 5 мм).
Ручны е или полуавтоматические пипетки (микродозаторы) с регулируемым или
ф иксированным объемом предназначенные для отбора и распределения жидкостей
объем ом 50 рл, 100 рл, 200 рл и 1 мл.
М ерные цилиндры; 10 мл, 50 мл, 100 мл, 1000 мл.
Л абораторная мешалка вихревого типа (Вортекс).
Контейнеры для опасных биологических отходов.
Ручной, полуавтоматический или автоматический промыватель (вошер)* для
микропланшет.
Водяная баня или термостат* с температурой 40 ± 1°С,
Спектроф отометр, оснащенный фильтрами* на 450 и 620 - 6 55 нм.
С) Всю необходимую информацию о рекомендованном оборудовании Вы можете
узнать в нашем Техническом отделе.
6 - М Е Р Ы ПРЕДОСТОРОЖ НОСТИ
К ачество результатов зависит от выполнения следующих правил Хорош ей
Лабораторной Практики (Good Laboratory Practices):
Не см еш ивайте и не используйте в одном и том же исследовании реагенты из
разн ы х партий;
ПРИМЕЧАНИЕ. Для следующих реагентов: промывочный раствор (R2,
маркировка: 20 х, зеленого цвета), субстратный раствор (R8, маркировка: ТМВ
but, синего цвета), хромоген (R9, маркировка: ТМВ 11 х , пурпурного цвета) и
^ стоп-реагент (R10, маркировка 1N, красного цвета) при постановке теста
можно использовать серии отличные от тех, которые входят в набор. Тем не
менее, для каждой постановки теста должны использоваться реагенты одной
серии. Данные реагенты допускается использовать с некоторыми другими
продуктами компании. Подробные сведения можно получить в службе
технической поддержки. В дополнение, промывочный раствор (R2, маркировка:
20 X , зеленого цвета) может использоваться в смеси с 2 другими
промывочными растворами, которые входят в состав различных
диагностических наборов производства Био-Рад (R2, маркировка: 10 х голубого
цвета или маркировка 10 х оранжевого цвета) в соответствующем
разведении, необходимым условием является использование одной такой смеси
в одной постановке. Для получения подробной информации свяжитесь с
местным представительством компании.
Н азвание тест-системы и специфический идентификационный номер теста
нанесен на рамке ка^кдого микропланшета. С пец иф ичесш й идентификационный
номер также нанесен на ка^кдом стрипе.
« М о н о л и за ® НВе Аг-Ат ПЛКЮ» : С п е ц и ф и ч е ск и й 10 и о м е р » 56.
Перед использованием набора проверьте щ ентиф икационны й номер. Если
идентификациооный номер о т с ^ с т в у е т или н о м ^ на стрипе не со о тш тств у е т
--- стр. 64 ---
идентификационному номеру этот стрип использовать нельзя.
Не используйте реагенты с истекшим сроком годности;
Перед использованием необходимо подождать 30 минут, пока состояние
реагентов не стабилизируется при комнатной температуре, и один час после
разведения концентрата промывочного раствора R2.
При приготовлении реагентов избегайте возможности контаминации:
Не проводите исследования в присутствии паров кислот, щелочей, альдегидов
или при сильном запылении воздуха в лаборатории так, как это может повлиять на
ферментативную активность конъюгата;
перед использованием стеклянной посуды тщательно промойте ее и ополосните
деионизованной водой, предпочтительнее использовать одноразовую посуду.
Не допускайте пересыхания микропланшета во период между завершением
промывки и распределением реагентов.
Используйте новый наконечник пипетки для дозирования каждого образца.
Промывка лунок - важный этап данной процедуры: соблюдайте рекомендуемое
число циклов промывки, убедитесь, что все лунки полностью заполнены, а затем
полностью опустошены. Неправильная промывка может привести к искажению
результатов.
Не используйте одну и туже емкость для работы с конъюгатом и раствором для
ферментативной реакции;
Проверьте состояние пипеток или другого оборудования для обеспечения
точности и правильности их работы.
Не изменяйте процедуру проведения анализа.
Раствор для ферментативной реакции (субстратный раствор + хромоген) должен
быть розового цвета. Изменение розового цвета в течение нескольких минут
после приготовления раствора указывает на то, что его нельзя использовать и
следует заменить. Приготовление раствора для ферментативной реакции должно
производиться в пластиковых одноразовых лотках или в стеклянных контейнерах,
которые следует предварительно промыть 1N раствором HCI, тщательно
прополоскать дистиллированной водой и высушить. Реагенты следует хранить в
темноте;
7- ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ
Все реагенты набора предназначены для диагностики “in vitro”.
Надевайте одноразовые перчатки при работе с реагентами и исследуемыми
пробами и тщательно мойте руки после завершения анализа.
Используйте только автоматические пипетки для дозирования >ю 4Дкостей.
Материалы человеческого происхождения, используемые при подготовке реагента
R3 (отрицательный контрольный образец) были исследованы и не дали
положительную реакцию по отношению к поверхностному антигену гепатита В
(HBs Ад), антителам вирусов иммунного дефицита (анти-ВИЧ1 и анти-ВИЧ2).
Материал человеческого происхождения, используемый при подготовке R 1
(микропланшет), при исследовании не дал положительную реакцию по отношению
к антителам вируса человеческого иммунодефицита (аити-ВИЧ1 и анти-ВИЧ2) и к
антителам против вируса гепатита С (анти-ВГС). Была получена поло)Ю!тельная
реакция по отношению к поверхностному антигену гепатита В (HBs Ад) и материал
был фотохимически инактивирован.
Материал человеческого происхохздения, используемый при подготовке R4
(контроль полсжительного на анти-НВе образца), R5 (контроль положительного на
НВе Аг образца) и R6 (нейтрализующий реагент НВе Аг) при исследовании не дал
--- стр. 67 ---
при +2 - 30 °С. Концентрат промывочного раствора может храниться при + 2 - 30 °С.
R7a: после приготовления коньюгат для исследования анти-НВе, хранящийся при + 2 -8
°С, может быть использован в течение 1 месяца после приготовления. При хранении при
комнатной температуре (18-30 °С) остается стабильным в течение 8 часов.
R7b: после приготовления коньюгат для исследования НВе Аг, хранящийся при +2-8
°С, может быть использован в течение 1 месяца после приготовления. При хранении при
комнатной температуре (18-30 °С) остается стабильным в течение 8 часов.
R8 + R9: После приготовления реагент может быть использован в течение 6 часов при
комнатной температуре (18-30 °С) в темном месте.
10-ЪбРАЗЦЫ
Исследование должно быть выполнено на неразведенной сыворотке или плазме
(собранный с ЭДТА, гепарином, цитратом, антикоагулянтами на основе ACD). При
отделении сыворотки или плазмы от сгустка крови или эритроцитов следует избегать
гемолиза. Выраженный гемолиз может повлиять на результаты теста. Если в
исследуемых образцах присутствуют посторонние включения, пробы следует
отцентрифугировать перед проведением анализа. Присутствующие в образце частицы
фибрина или сгустки могут давать ложноположительные результаты. Образцы должны
храниться при +2 С - +8 ° С , если исследование будет выполняться не позднее 7 дней с
момента взятия образца, или хранить в замороженном состоянии при температуре -
20°С.
Избегайте повторных циклов замораживания/оттаивания.
Если образцы необходимо транспортировать, упакуйте их в соответствии с правилами
для транспортировки агентов, обладающих инфекционной опасностью; перевозите их
предпочтительно в замороженном состоянии.
НЕ ИСПОЛЬЗУЙТЕ ЗАГРЯЗНЕННУЮ, ГИПЕРЛИПЕМИЧЕСКУЮ ИЛИ
ГЕМОЛИЗИРОВАННУЮ СЫВОРОТКУ КРОВИ.
П Р И М Е Ч А Н И Е : О б р а зц ы , со д ер ж а щ и е до 1 0 0 мг/л билирубина, липемические образцы ,
содерж ащ ие липиды д о 36 г/л в т риолеиновом эквивалент е, и гемолизированные
образцы , содерж ащ ие д о 2.5 м г/м л гем оглобина, являют ся пригодны м и для
исследований.С ниж ение показат елей наблю далось для негат ивны х образцов при добавлении 45
мг/мл альбум ина.
11- МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА
В случае одновременного определения анти-НВе и НВе Аг на одном планшете, вносите
образцы и реагенты по следующей схеме:
Анти-НВе тест: используйте ряды 1-6
НВе Аг тест: используйте ряды 7-12
а) Проце/^ра проведения теста на определение анти-НВе антител.
1. Подготовьте рабочую концентрацию промывочного раствора.
2. Извлеките один или несколько стрипов из герметичной упаковки. Полояогге
неиспользуемые полоски назад в упаковку и вновь закройте ее.
3. Добавьте в лунки:
А1, В1, С 1 :100 рл отрицательного контрольного образца (R3)
01 :100 рл положительного контрольного образца (R4)
Е1. F1, G 1 и Т.Д.: по 10011л исследуемых образщ)в
В зависимости от используемой технологии мозюю менять позиции контрольных
--- стр. 68 ---
образцов в соответствии с порядком внесения.
В Н И М А Н И Е : С ущ ест вует чет кое цвет овое различие по цвету м еж д у пуст ой лункой и
лункой с образцом , окраш енной в ж елт ы й цвет . П роверит ь наличие в лунке образца
м о ж н о при п о м о ш ,и спект роф от ом ет рического анализа при длине волны 490 нм (о д н а
длина волны ). О брат ит есь к разделу 1 3 - С П Е К Т Р О Ф О Т О М Е Т Р И Ч Е С К И Й А Н А Л И З
П Р А В И Л Ь Н О С Т И В Н Е С Е Н И Я О Б Р А ЗЦ О В И Р Е А Г Е Н Т О В .
4. Быстро добавьте 50 рл нейтрализующего НВе- антиген раствора R6 в
каждую лунку. Перемешайте содержимое лунок.
Герметизируйте планшет самоклеющейся пленкой и инкубируйте в течение
3 часов ± 10 минут при 37°С ± 1 °С.
В Н И М А Н И Е : Д озирование нейт рализую щ его раст вора (R 6 ), окраш енного
в розовы й цвет , м о ж е т бы т ь проконт ролировано визуально на данном
эт апе т ест а. Н аличие нейт рализую щ его Н В е-ант игена в лунке м о ж н о
проверит ь при пом ощ и спект роф от ом ет рического анализа на одной
длине волны 490 н м . О брат ит есь к разделу 1 3
С П Е К Т Р О Ф О Т О М Е Т Р И Ч Е С К И Й А Н А Л И З П Р А В И Л Ь Н О С Т И В Н Е С Е Н И Я
О Б Р А ЗЦ О В И Р Е А Г Е Н Т О В .
5. До завершения инкубации на этапе 4 протокола подготовьте раствор
конъюгата R7a в рабочей концентрации.
6. Удалите самоклеющуюся пленку. Тщательно удалите содержимое лунок в
контейнер для контаминированных отходов, промойте лунки планшета 4
раза.
7. Быстро внесите 100 рл разбавленного раствора конъюгата R7a (См. раздел
8: ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ) в каждую лунку. Может быть использован
конъюгат R7a в концентрированном виде виде по следующей процедуре;
сначала внесите 80 рл разбавленного промывочного раствора (R2) в
каждую лунку, затем добавьте 20 рл конъюгата Анти-НВе, R7a (5Х).
Гомогенизируйте содержимое.
Накройте клейкой пленкой и выдержите в термостате в течение 30 минут
при 37“0 ± 1°С (минимум 25 минут, максимум 40 минут). Удалите
самоклеющуюся пленку, Тщательно удалите содержимое лунок в контейнер
для контаминированных отходов, промойте лунки планшета 5 раз.
В Н И М А Н И Е : Н аличие в лунке разбавленного раст вора конъю гат а R 7a,
окраш енного в ф иолет овы й цвет , м о ж е т бы т ь проконт ролировано
визуально на данном эт апе т ест а. М о ж н о проверит ь наличие
разбавленного раст вора конъю гат а R 7a в лунке при пом ощ и
спект роф от ом ет рического анализа на одной длине волны 620 н м .
О брат ит есь к разделу 1 3 - С П Е К Т Р О Ф О Т О М Е Т Р И Ч Е С К И Й А Н А Л И З
П Р А В И Л Ь Н О С Т И В Н Е С Е Н И Я О Б Р А ЗЦ О В И Р Е А Г Е Н Т О В .
8. Непосредственно перед использованием подготовьте раствор для
ферментативной реакции (R8 + R9). Смотри раздел 8: ПОДГОТОВКА
РЕАГЕНТОВ.
9. Быстро внесите 80 рл раствор для ферментативной реаюдии {R8 + R9) в
ка^ую лунку. Поместите планшет на 30 минут ± 5 минут в темное место
при температуре (+18-30°С).
В Н И М А Н И Е : Внесение раст вора для ф ермент ат ивной реакции,
окраш енного в розовы й цвет , м о ж е т бы т ь проконт ролировано визуально
на данном эт апе т ест а. С ущ ест вует чет кое различие м еж д у пуст ой
лункой и лункой со д ер ж а щ ей раст вор розового цвет а. О брат ит есь к разделу 1 3 - С П Е К Т Р О Ф О Т О М Е Т Р И Ч Е С К И Й А Н А Л И З П Р А В И Л Ь Н О С Т И
В Н Е С Е Н И Я О Б Р А ЗЦ О В И Р Е А Г Е Н Т О В .
10. Быстро добавьте 100 рл стоп-раствора (R 10) в казцдую лунку.
В Н И М А Н И Е : Внесение бесцвет ного ст оп-раст вора м о ж ет бы т ь
--- стр. 69 ---
проконт ролировано визуально на данном эт апе п п ест а . П осле добавления
ст оп-раст вора в лунки с от рицат ельны м и образцам и, их содерж им ое из
розового цвет а ст ановит ся бесцвет ны м , для полож ит ельны х образцов
голубое со д ер ж и м о е лунки ст ановит ся ж елт ы м .
11.Тщательно протрите дно планшета. Измерьте оптическую плотность при
450/620 - 655 нм, не ранее чем через 4 минуты после добавления
ингибирующего раствора и в течение не более 30 минут после
прекращения реакции.
Ь) Процедура проведения теста для определения НВе Ад:
1. Подготовьте промывочный раствор.
2. Извлеките один или несколько стрипов из герметичной упаковки. Положите
неиспользуемые полоски назад в упаковку и вновь закройте ее
3. Добавьте в лунки;
А1, В1, С 1 :100 рл отрицательного контрольного образца (R3)
D 1 :100 рл положительного контрольного образца (R5)
Е1, F1, G 1 ; 100 рл исследуемого образца
В Н И М А Н И Е : С ущ ест вует чет кое цвет овое различие по цвету м еж д у пуст ой лункой и
лункой с образцом , окраш енной в ж елт ы й цвет . П роверит ь наличие в лунке образца
м о ж н о при пом ощ и спект роф от ом ет рического анализа при длине волны 490 нм (о д н а
длина волны ). О брат ит есь к разделу 1 3 - С П Е К Т Р О Ф О Т О М Е Т Р И Ч Е С К И Й А Н А Л И З
П Р А В И Л Ь Н О С Т И В Н Е С Е Н И Я О Б Р А ЗЦ О В И Р Е А Г Е Н Т О В .
4. Герметизируйте планшет самоклеющейся пленкой и инкубируйте в течение 3
часов ±10 минут при 37°С± ГС.
5. До завершения инкубации на этапе 4 протокола подготовьте раствор конъюгата
R7a в рабочей концентрации.
6. Удалите самоклеющуюся пленку. Тщательно удалите содер>ю1мое лунок в
контейнер для контаминированных отходов, промойте лунки планшета 4 раза.
7. Быстро внесите 100 рл разбавленного раствора конъюгата R7b (См. раздел 8:
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ) в каждую лунку. Может быть использован конъюгат
R7b в концентрированном виде по следующей процедуре; сначала внесите 80 рл
разбавленного промывочного раствора (R2) в каждую лунку, затем добавьте 20 рл
конъюгата НВе Аг, R7b (5Х). Гомогенизируйте содержимое.
В Н И М А Н И Е : В несение разбавленного раст вора конъю гат а R 7b, бирю зового
цвет а, м о ж е т бы т ь проконт ролировано визуально на данном этапе т ест а.
М о ж н о проверит ь наличие разбавленного раст вора конъю гат а R 7b в лунке при
пом ощ и спект роф от ом ет рического анализа на одной длине волны ё20 н м .
О брат ит есь к разделу 1 3 - С П Е К Т Р О Ф О Т О М Е Т Р И Ч Е С К И Й А Н А Л И З
П Р А В И Л Ь Н О С Т И В Н Е С Е Н И Я О Б Р А ЗЦ О В И Р Е А Г Е Н Т О В .
8. Непосредственно перед использованием подготовьте раствор для
ферментативной реакции (R8 + R9).
9. Быстро распределите 80 рл раствора для для ферментативной реакции (R8 + R9)
в каждую лунку. Поместите планшет на 30 минут ± 5 минут в темное место при
комнатной температуре (+18 - 30°С).
В Н И М А Н И Е : Внесение раст вора для ф ерм ент ат ивной реакции, окраш енного в
розовый цвет , м о ж е т бы т ь проконт ролировано визуально на данном этапе
т ест а. С ущ ест вует чет кое различие м еж д у пуст ой лункой и лункой
содерж ащ ей раст вор розового цвет а. О брат ит есь к разделу 1 3 -
С П Е К Т Р О Ф О Т О М Е Т Р И Ч Е С К И Й А Н А Л И З П Р А В И Л Ь Н О С Т И В Н Е С Е Н И Я
О Б Р А ЗЦ О В И Р Е А Г Е Н Т О В .
10. Быстро добавьте 100 рл стоп-раствора (R10) в шзщую лунку.
В Н И М А Н И Е : Внесение бесцвет ного cm oniiacm eopa м о ж ет бы т ь
--- стр. 70 ---
проконт ролировано визуально на данном эт апе т ест а. П осле добавления ст оп-
раст вора в лунки с от рицат ельны м и образцам и, их со д ер ж и м о е из розового
цвета ст ановит ся бесцвет ны м , для полож ит ельны х образцов голубое
содерж им ое лунки ст ановит ся ж елт ы м .
11. Тщательно протрите дно планшета. Измерьте оптическую плотность при 450/620
- 655 нм, не ранее чем через 4 минуты после добавления ингибирующего
раствора и в течение не более 30 минут после прекращения реакции.
с) Одновременное проведение тестов на определение анти-НВе и НВе Ад (на
одном планшете):
Исследование проводится согласно протоколу, который был описан выше. Отличается
только схема распределения образцов:
Тест на определение Анти-НВе: ряды 1-6
Тест на определение НВе Ад: ряды 7 -1 2
12 - РАСЧЕТ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
а) Тест на определение Анти-НВе
1. Расчет среднего значения оптической плотности (СП) отрицательного
контрольного образца: (ОП R3) ср.
П рим ер: R3 Офицательный контроль СП
1 1.607
2 1.410
3 1.552
Сумма ОП= 4.569
Среднее значение (ОП R3) ср. = Сумма ОП / 3 = 4.569 /3=1.523
Если значения ОП R3 отличается от среднего значения (ОП R3) ср. более, чем на 25 %,
оно должно быть исключено из расчета. Из вычисления среднего может быть исключено
не более одного значения ОП R3. Пересчитайте (ОП R3) ср. для двух оставшихся
значений.
2. Расчет критического значения оптической плотности (ОП Крит., Cutoff).
Для каждого планшета критическое значение ОП рассчитывается по формуле:
ОП Крит. = (ОП R3)cp. X 0.4
П рим ер:
(ОП R3)cp. = 1.523
ОП Крит. = 1.523 X 0.4 = 0.609
3. Оценка достоверности результатов анализа анти-НВе
(ОП R3)cp. > 0.900
ОП R4< 0.150
4. Рас^ют коэффициента реактивности (R)
Для каждого образец коэффициент реактивности рассчитывается по следуюиэй
формуле:
R = ОП образца / ОП Крит.
5. Иитер1фетац|» 1 результатов
Результаты исследования интерпретируются следующим образом:
Положительные, если коэффициент реактивности меньше либо рашн 0.9
(R S 0.9)
Отрицательные, если коэффициент реактивности Сюльше 1.1
--- стр. 71 ---
Если результат находится в пределах от 0.9 до 1.1, необходимо сделать повторное
определение анти-НВе в соответствующих образцах.
Рекомендуется осуществить повторное тестирование первично положительных
сывороток в дублирующих образцах. После проведения повторного теста, если, по
крайней мере, один результат будет положительный, сыворотка рассматривается, как
положительная.
Ь) Тест на определение НВе Аг
1. Расчет среднего значения оптической плотности (ОП) отрицательных
контрольных образцов: (ОП R3)cp.
Пример: R3 Отрицательный контроль О П
1 0.023
2 0.022
3 0.026
Сумма 0П= 0.071
(ОП R3)cp. = Сумма ОП / 3 = 0.071 / 3 = 0.024
Если значения ОП R3 отличается от среднего значения (ОП R3) ср. более, чем на 25 %,
оно должно быть исключено из расчета. Из вычисления среднего может быть исключено
не более одного значения ОП R3. Пересчитайте (ОП R3) ср. для двух оставшихся
значений.
2. Расчет критического значения оптической плотности (ОП Крит., Cut-off)-
Для каждого планшета критическое значение ОП рассчитывается по формуле:
ОП Крит. = (ОП R3)cp. + 0.025
Пример:
(ОП R3)cp. = 0.024
ОП Крит. = 0.024 + 0.025 = 0.049
3. Оценка достоверности результатов анализа для НВе Аг
(ОП R3)cp. < 0.060
ОП R5 > 0.800
4. Расчет коэффициента реакшвности (R)
Для каждого образца коэффициент реактивности рассчитывается по следующей
формуле:
R = ОП образца / ОП Крит.
5. Интерпретация результатов
Результаты исследования интерпретируются следующим образом;
Положительный, если коэффициент реактивности больше или равен 1
(R>1)
Отрицательный, если коэффициент значения меньше 1 (R < 1)
Если результат находится в пределах от 0.9 до 1.1, необходимо сделать повтс^ное
определение анти-НВе в соответствующих образцах.
Рекомендуется осуществить повторное тестирование первично положительных
сывороток в дублирующих образсрх. После проведения повторного теста, если, по
файней мере, один результат будет полояотгельный, сыворотка рассматривается, как
положительная.
13- СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПРАВИЛЬНОСТИ ВНЕСЕНИЯ
(R>1.1)
--- стр. 72 ---
ОБРАЗЦОВ И РЕАГЕНТОВ.
1 Определение анти-НВе
Образцы и контроли
Наличие образцов и контролей в лунках может быть проверено при помощи
спектрофотометрии при длине волны 490 нм. Каждая лунка, содержащая контрольный
образец, должна иметь СП больше 0.050.
Нейтрализующий реагент - антигена НВе (R6)
Наличие нейтрализующего антигена НВе в лунке может быть проверено при помощи
спектрофотометрии при 490 нм с вычислением разницы ОП (АОП) до и после внесения
нейтрализующего реагента.
АОП = (ОП490 образца (или контроля) после добавления R6) - (ОП490 образца (или
контроля) до добавления R6)
АОП должна быть больше 0.150.
Конъюгат (R7a)
Наличие разведенного конъюгата R7a в лунке может быть проверено при помощи
спектрофотометрии при длине волны 620 нм. Значение ОП в каждой лунке должно быть
больше или равно 0.070 и меньше или равно 0.200.
Раствор для ферментативной реакции (R8 + R9)
Наличие раствора для ферментативной реакции в лунке может быть проверено при
помощи спектрофотометрии при длине волны 490 нм.
Значение ОП в каждой лунке должно быть больше 0.100.
2 Определение НВе Ад
Образцы и контроли
Наличие образцов и контролей в лунках может быть проверено при помощи
спектрофотометрии при 490 нм. Каждая лунка, содержащая контрольный образец,
должна иметь ОП больше 0.050.
Наличие конценгрированного конъюгата (R7b) при проведении анализа на
определение Ад НВе
Наличие разбавленного конъюгата R7b в лунке может быть проверено при помощи
спеюрофотометрии при 620 нм. Значение ОП в каждой лунке должно быть больше либо
равно 0.210.
Наличие ицдикаторного раствора, (R8 + R9)
Наличие индикаторного раствора в лунке может быть проверено при помощи
спектрофотометрии при 490 нм.
Значение ОП в каждой лунке должно быть больше 0.100.
14- ИССЛЕДОВАНИЕ ХАРАКТЕРИСТИК ТЕСТ-СИСТЕМЫ
Исследования характеристик теста «М О НО ЛИЗА® НВе Аг-Ат ПЛЮ С», результаты которого
кратко изложены ниже, были произведены в двух исследовательских центрах с
использованием в качестве образцов крови доноров, пациентов и сероконверсионных
панелей.
1 - Определение НВе Аг
Специфичность
Специфичность, исследованная на образцах tq > O B H 200 доноров, отобранных случайным
образом, составила 100% [98.51 - 100 % ] . (1С95).
Специфичность, оцененная на образцах пациентов, составила 1(Ю % [99.28 - 1(Ю %]
(IC95. 416/416 образцов).
Анализ 195 пациентов с заболеваниями и патологичесюмии состояниями, не
связанными с гепатитом В (беременность, ревматоидный фактор, выявление
антиядерных антител, а таю№ другие вирусные или бактериальные инфекции), показал
--- стр. 73 ---
специфичность в 99.49% [97.18 - 99.99%] (1 C 95, 194/195 отрицательные образцы).
Аналитическая чувствительность
Предел чувствительности теста был оценен как 0.64 IU/мл [0.49 - 0.84] (1C 95) по
стандарту PEI.
Чувствительность
Чувствительность исследовали на 203 положительных образцах, взятых от пациентов с
хронической инфекцией ВГВ и на коммерческих сероконверсионных панелях.
Чувствительность метода, показанная при исследовании данных образцов, составила
99.51% [97.29 - 99.99%] (1 C 95, 202/203 образцы)
Воспроизводимость анализа
Воспроизводимость теста «М О Н О ЛИЗА® НВе Аг-Ат ПЛЮ С» (анти-НВе Аг) была
определена при анализе 4 образцов: 1 негативного образца, 1 положительного образца
с низким содержанием НВе Аг, 1 положительного образца с высоким содержанием НВе
Аг и 1 положительного образца со средним содержанием НВе Аг.
Воспроизводимость результатов в одной постановке (сходимость) была оценена на 4
образцах в 30 повторах. Межсерийную воспроизводимость оценивали в исследовании
этих 4 образцов в двух повторах в течение 20 дней, с частотой по 2 а независимых
исследованиях в день.
Результаты представлены в нижеследующих таблицах:
Таблица 1: Воспроизводимость в одном исследовании
п = 30 образец 1 обр>азец2ображцЗ образец 4
Среднее значение реактивности (R)3.56 5.29 27.24 45.56
Среднеквадратичное откпонение 0.05 0.35 0.63 2.88
CV (%) 14.20 6.53 2.31 6.33
Таблица 2: Воспроизводимость между исследованиями
п = 80 образец 1образец 2образец 3образец 4
Среднее значение реактивности (R) 0.51 8.19 27.33 46.35
Среднеквадратичное откпонение 0.12 1.17 3.26 4.98
CV (%) 23.86 14.27 11.92 10.74
2 - Тест на определение НВе АЬ
Специфичность
Специфичность, исследованная на образцах крови 200 доноров, отобранных случайным
образом, составила 100% [98.51 -100 %], (IC95).
Специфичность, оцененная на 206 образцах пациентов, составила 98.54% [95.80 - 99.70
%]. IC95 (203/206)..
При анализе 198 пациентов с заболеваниями и патологическими состояниями, не
связанными с гепатитом В (беременность, ревматоидный фактор, выявление
антиядерных антител, а также другие вирусные или баювриальные инфекции) в 3-х
случаях выявились положительные результаты (2 образца с ВГС и 1 - с ревматоидным
фа1аором). Специфичность теста, таким образом, при первичном исследовании
составила 98.48% [95.64 - 99.69%] (1 C 95, 195/198 отрицательные образцы). Данные
образцы были исспедованы повторно, образец, содержаиУ1И Й ревматоидный фактор был
признан повторно реакгивным. Два образца с ВГС при повторном исследовании показали
отрицательный или неопределенный результат.
Чувствительность
--- стр. 78 ---
4 - МАТЕРИАЛЫ НЕОБХОДИМЫЕ, НО НЕ ПОСТАВЛЯЕМЫЕ С НАБОРОМ
• Дистиллированная или деионизованная вода.
• Гипохлорит натрия и бикарбонат натрия.
• Фильтровальная бумага.
• Защитные очки.
• Одноразовые перчатки.
• Одноразовые пробирки.
• Автоматические или полуавтоматические пипетки с постоянным и переменным
объемом на 20, 80,100, 200 и 1000 мкл.
• Мерные цилиндры на 10, 200 и 1000 мл.
• Встряхиватель типа VORTEX.
• Контейнер для контаминированных остатков.
• Водяная баня или суховоздушный инкубатор с контролируемым температурным
режимом. (*) на 37°С±1°С или 40°С+1°С
• Вошер дла промывки микропланшет (автоматический, полуавтоматический,
ручной)_П
• Фотометр для микропланшетов (фильтры с длиной волны - 450/620 - 700 нм ).(')
С) Обращайтесь в местное представительство компании за информацией о
рекомендуемом оборудовании.
- ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ
Все реагенты, входящие в набор, предназначены для диагностики in vitro.
Используйте одноразовые перчатки при работе с реагентами и образцами и
тщательно мойте руки после работы.
Не пипетируйте образцы и реагенты ртом.
Положительные контроли инактивируйте нагреванием.
Все донорские сыворотки, использованные для приготовления отрицательного
контроля (R3) , были протестированы на HBsAg и анти-ВИЧ-1, ВИЧ-2 и анти-ВГС
антитела.
Все донорские сыворотки, использованные для приготовления положительного
контроля (R4), были протестированы на HBsAg и аити-ВИЧ-1 и ВИЧ-2 антитела.
Ни один метод детекции не может гарантировать отсутствие или присутствие
патогенных агентов (ВИЧ, ВГС, ВГВ и т.д.) в исследуемых образцах и реагентах
человеческого происхояадения. Следует рассматривать их как потенциально
контаминированные и работать с соответствующими мерами предосторожности;
Считайте все оборудование, контактирующее с образцами, реагенты человеческого
происхождения и промывающий раствор контаминированныии;
Избегайте контакта субстратного буфера, хромогена и стоп-раствора с
поверхностью кожи и слизистыми (возможно отравление, воспаление, ожоги);
Избегайте разбрызгивания образцов или растворов, содержащих образцы.
В случае разбрызгивания растворов, не содержащих кислоты, обработайте
поверхности 10% раствором гипохлорида натрия, а затем фильтровальной
бумагой, которую необходимо выбросить в контейнер для контаминированных
остатков.
В случае разбрызгивания кислотосодержащих растворов нейтрализуйте их
бикар^на том натрия и обр^отайте раствором гипохлорида натрия и
фильтровальной бумагой, которую необходимо выбросить в контейнер для
контаминированных остатков.
Образцы и реагенты человеческого происхождения, как и кон 1Вминированные
материалы следует выбрасывать после дезактивации;
замачиванием в растворе гипохлорида натрия в конечной концентра1«|1И не
менее 5% в течение 30 минут.
или автокпавированиеи при 121°С в течение 2 чж х».
ВНИМАНИЕ! НЕ АВТОКПАВИРУЙТЕ РАСТВОРЫ , СОДЕРЖАЩИЕ ГИПОХЛОРИД
Н АТРИ Я
Избегайте попадания на кожу и слизистые субстратного буфера, фомотена, стоп-
раствора.
--- стр. 79 ---
Международные сертификаты безопасности можно получить в Российском офисе
Био-Рад по запросу.
Не забывайте нейтрализовать и/или автоклавировать отходы после промывки
микропланшет или любые жидкости, содержащие биологические образцы, до слива
их в раковину.
Некоторые реагенты содержат азид натрия. Этот компонент может реагировать со
свинцом и медью, образуя взрывоопасные соединения. Сливая в раковину,
разводите остатки большим количеством воды во избежании их накопления в
трубах.
Некоторые реагенты содержат раздражающее вещество 0,5 % РгоСПп™ 300:
которы й может вы зы вать раздражение
---------R43: может вызывать раздражение кожи при контакте.
S28/37: после контакта с кожей промойте участок контакта большим
количеством воды с мылом.
При работе используйте защитные перчатки.
6 - МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Достоверность тестирования зависит от правильного выполнения следующих правил
Хрошей Лабораторной Практики (Good Laboratory Practice);
• Не используйте реагенты по истечении срока их годности.
• Не смешивайте и не используйте в одном и том же тесте реагенты из разных
серий.
ПРИМЕЧАНИЕ. Для следующих реагентов: промывочный раствор (R 2 , маркировка:
20 X , зеленого цвета), субстратный раствор (R8, маркировка: ТМВ b u f , синего
цвета), хромоген (R9, маркировка: ТМВ 11х, пурпурного цвета) и стоп-реагент (R10,
маркировка 1N, красного цвета) при постановке теста можно использовать серии
отличные от тех, которые входят в набор. Тем не менее, для каждой постановки
теста должны использоваться реагенты одной серии. Данные реагенты
допускается использовать с некоторыми другими продуктами компании. Подробные
сведения можно получить в службе технической поддержки. В дополнение,
промывочный раствор (R 2 , маркировка: 20 х, зеленого цвета) может использоваться
в смеси с 2 другими промывочными растворами, которые входят в состав
различных диагностических наборов производства Био-Рад (R2, маркировка: 10 х
голубого цвета или маркировка 10 х оранжевого цвета) в соответствующем
разведении, необходимым условием является использование одной такой смеси в
одной постановке. Для получения подробной информации свяжитесь с местным
представительством компании.
• Выдержите реагенты при комнатной температуре в течение 30 минут перед
началом использования.
• Тидательно разводите и перемешивайте реагенты, избегая контаминации.
• Не проводите тесты в присутствии активных испаряющихся веществ (кислот,
щелочей, альдегидов) или пыли, которые могут повлиять на ферментативную
активность конъюгата.
• Используйте хороию промытую посуду, ополоснутую дистиллированной водой,
предпочтительней использовать одноразовую посуду.
• Не позволяйте иикропланшету высыхать в промежуток между промыванием и
внесением реагентов.
• Строго соблюдайте режим промывания и следите, чтобы промывающий раствор
полностью заполнял все лунки и затем был полностью удален.
• Ферментативная реакция чрезвычайно чувствительна ко всем металлам и их
ионам. Следовательно, не допускайте контакта растворов конъюгата и субстрата с
металлами.
• Раствор для ферментативной реакции (субстратный буфер + хромоген) далжен
быть розовой офаски. Иземнения офашивания через несколько минут после
приготовления раствора указывает на то, что реагент использовать нельзя, и его
с л е з е т заменить. Для приготовления раствора для ферментативной реащии
предпочтительнее использовать одноразовую посуду, или ее следует
--- стр. 80 ---
предварительно промыть 1Н раствором HCI, тщательно прополоскать
дистиллированной водой и высушить. Готовый реагент следует хранить в темноте.
• Для каждой сыворотки используйте новые одноразовые наконечники.
• Правильная промывка - критический шаг в данной процедуре: соблюдайте
рекомендуемое число промывочных циклов и удостоверьтесь в том, что все лунки
полностью заполнены и затем полностью опорожнены. Неправильная промывка
может привести к неточностям в результатах.
• Никогда не используйте одну и ту же посуду для конъюгата и раствора для
ферментативной реакции.
7 - ОБРАЗЦЫ
Образцы крови собираются согласно существующим инструкциям. Исследование
должно быть выполнено на неразведенной сыворотке или плазме (собранной с
антикоагулянтами на основе ЭДТА, цитрата, ACD или гепарина). Образцы сыворотки
должны быть собраны с максимальной осторожностью во избежании гемолиза.
Образцы, содержащие афегаты перед исследованием следует отцентрифугировать.
Взвешенные фибриновые афегаты или частицы могут быть причиной
ложноположительных результатов.
Если тестирование проводится менее, чем через 7 дней после взятия материала,
образцы следует хранить при +2 - 8 °С или их можно заморозить при -20° С для
длительного хранения. Избегайте повторного замораживания/оттаивания. Если
образцы необходимо транспортировать, их следует упаковать в соответствии с
правилами транспортировки контаминированного материала. Предпочтительно
транспортировать замороженные образцы.
НЕ ИСПОЛЬЗУЙТЕ КОНТАМИНИРОВАННЫЕ, ГИПЕРПИПИМИЧЕСКИЕ И
ГЕМОЛИЗИРОВАННЫЕ СЫВОРОТКИ.
ПРИМЕЧАНИЕ: Содержание в пробе до 90 г/л альбумина, 200 мг/л билирубина,
липидов до 36 г/л в олеиновом эквиваленте, до 1,25 г/л гемоглобина не влияет на
результаты.
8 - ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ, СРОК ГОДНОСТИ И СТАБИЛЬНОСТЬ
Перед использованием реагентов набора МОНОЛИЗА® анти-ВГС ПЛЮС версии 2
выдержите их при комнатной температуре в течение 30 минут.
1) Реагенты , готовы е к использованию
HCV Ад микропланш ет (R1)
Во избежании конденсации воды в лунках перед тем, как вскрыть упаковку
микропланшета, выдержите его при комнатной температуре. Неиспользованные сфипы
сразу же упакуйте, предварительно удалив воздух из пакета. Тщательно заклейте пакет
липкой пленкой и храните при + 2 - 8 “С.
Раствор для разведения образцов (R6)
Перед использованием переверните флакон вверх дном для гомогенизации раствора.
Конъюгат(Я7)
Перед использованием переверните флакон вверх дном для гомогенизации раствора.
2) Реагенты , требую щ ие приготовления
Моющий раствор R2 (20х)
Разведите моющий раствор R2 дистиллированной водой в сотношении 1 ;20.
Для одного микропланшета из 12 стрипов необходимо 800 мл моющего
раствора.
Раствор для ферментативной реакции (R8+R9)
Разведите реагент R9 в реагенте R8 в соотношении 1:11 (пример: 1 мл реагента R9 +
10 мл реагента R8). 10 мл необходимо и достаточно для 1-12 стрипов. Тщательно
перемешайте.
3) Срок годности и стабильность
--- стр. 83 ---
Л унки Оптическая плотность
С1 1.636
D1 1.704
Е1 1.650
ОБЩ АЯ 4.990
ОПК4=Общая ОП/3=4.990/3=1.663
2) Рассчет контрольного уровня (Ky/cut 4>ff)
КУ/cut-off = (0DR4)/5
Пример: OnR4=1.663
КУ/cut-off =1.663/5=0.332
Д остоверность анализа:
а) Д ля отрицательного контроля: оптическая плотность каждой лунки
отрицательного контроля должны быть меньше 0.150.
б) Д ля положительного контроля:
• Средняя величина оптической плотности должна быть больше или равна 1 .О О О
и меньше или равной 2.400, (т.е. 1.0-2.4).
• Если одно из значений оптической плотности позитивного контроля отличается
от среднего значения более, чем на 30%, исключите это значение из расчетов и
вновь рассчитайте среднее значение по двум оставшимся.
• Если ОП отрицательных контролей или более, чем одного положительного
контроля не укладываются в указанные фаницы, анализ должен быть выполнен
повторно.
И нтерпретация результатов:
Образцы со значением оптической плотности меньше, чем величина контрольного
уровня (КУ/cut-off), рассматриваются в тесте МОНОЛИЗА® анти-ВГС ПЛЮС версии 2
как отрицательные.
Результаты ниже контрольного уровня на 10% (КУ/cut-off - 10% <0п Обр< КУ/cut-off)
должны быть интерпретированы с особым вниманием и соответствующие образцы
рекомендуется перепроверить в дублях.
Образцы с оптической плотностью равной или больше контрольного уровня
рассматриваются как первично положительные и должны быть тестированы повторно в
дубле для окончательной интерпретации.
Если после повторного тестирования оба результата имеют оптическую плотность
равную или выше контрольного уровня, образцы рассматриваются как положительные.
Если после повторного тестирования оба результата имеют оптическую плотность ниже
контрольного уровня, т.е. первичные результаты не воспроизводятся, образцы
рассматриваются ш к отрицательные.
12 - СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКАЯ ВЕРИФИКАЦИЯ РАЗНЕСЕНИЯ РЕАПЕНТОВ И
ОБРАЗЦОВ.
М етод 1: без использования контрольного реагента.
Присутствие образца в лунке верифицируется путём автоматического измерения
оптической плотности при длине волны 620 нм: сравнение оптической плотности после
разнесения раствора для разведения образцов (R6) и после разнесения образцов.
Измерение после разнесения раствора для разведения с^разцов (RS):
Оптическая плотность лунок содержащих R6 должна быть выше 0.2.
Измерение после разнесения о 6 раз1и>в или контролей:
Изменение оптической плотности лунок, ссдерхсащих R6 , посш добавления образцов,
должно быть больше чем 0 .2 . (изменение оптической плотности меньше чем на 0 .2
указывает на ошибку внесения образца). Изменение ОП = ОП (R6 образец) - ОП (R 6 ).
М етод 2: использование контрольного реагента.
Пример; Положительный контроль R4
--- стр. 84 ---
Присутствие образца в лунке верифицируется путём автоматического измерения
оптической плотности при длине волны 620 нм с использованием контрольной лунки,
содержащей только раствор для разведения образцов (R6).
• Оптическая плотность лунки содержащей R6 должна быть выше 0.2.
• Изменение оптической плотности лунок, содержащих R6 и образцы, по сравненикз с
контрольной лункой, должно быть больше чем 0.2. (изменение оптической
плотности меньше чем на 0.2 указывает на ошибку внесения образца). Изменение
ОП = ОП (R6 + образец) - ОП (R6 в контрольной лунке).
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКАЯ ВЕРИФИКАЦИЯ ПРИСУТСТВИЯ КОНЬЮГАТА.
Коньюгат имеет зелёный цвет.
Присутствие коньюгата в лунке может быть проконтролировано путём измерения
оптической плотности при длине волны 620 нм:
• Величина оптической плотности ка>кдой лунки должна быть выше, чем 0.3
(оптическая плотности меньше чем 0.3 указывает на ошибку во внесении
коньюгата)
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКАЯ ВЕРИФИКАЦИЯ ПРИСУТСТВИЯ СУБСТРАТНОГО
РАСТВОРА
Верификация наличия в лунке ферментативного рабочего раствора розового цвета
производится автоматическим считыванием показаний на волне 490 нм. Оптическая
плотность лунки с внесенным ферментативным рабочим раствором должна
превышать 0,100 (меньшая плотность свидетельствует о неудовлетворительном
распределении ферментативного раствора).
После внесения раствора субстрата и хромогена, бесцветная лунка явственно
приобретает розовый цвет.
13 - ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТА
Изменения в наборе МОНОЛИЗА® анти-ВГС ПЛЮС версии 2 по сравнению с
МОНОЛИЗА® анти-ВГС ПЛЮС офзничиваются только субстратным раствором (R8 +
R9) и стоп-раствором (R10).
Исследования чувствительности и специфичности тест-системы МОНОЛИЗА® анти-
ВГС ПЛЮС версии 2 подтверждают полученные ранее характеристики теста
МОНОЛИЗА® анти-ВГС ПЛЮС, приведенные здесь.
Характеристики данного теста были получены на основе анализа следующих типов
образцов;
- образцы сывороток доноров крови, отобранных случайным образом;
- образцы сывороток, взятых от пациентов инфицированных вирусом гепатита С;
- сыворотки пациентов с различными диагнозами, не связанными с вирусом гепатита С.
Чувствительность теста МОНОЛИЗА® анти-ВГС ПЛЮС проверялась на 532
документированных образцах на, из которых 191 образец сывороток, полученных от
хронических носителей вируса гепатита С (факт инфицирования вирусом гепатита С
устанавливался по присутствию антител к ВГС методом иммуноблота или определяли
РНК вируса при помощи метода полимеразной цепной реакции).
Чувствительность теста МОНОЛИЗА® анти-ВГС ПЛЮС в этой работе составила 100%.
Чувствительность теста МОНОЛИЗА® анти-ВГС ПЛЮС также исследовалась на
сероковерсионных образцах от 55 пациентов. По фавнению с тест-системой
МОНОЛИЗА® анти-ВГС Новые антигены МОНОЛИЗА® анти-ВГС ПЛЮС в 6 случаях
определяла раньше.
Специфичность теста при исследовании 5450 образцов сывороток доноров
крови, отобраных случайным образом, составила 99,8%.
Анализ 264 сывороток пациентов с различными патологиями, не связанными с
вирусом гепатита С. показал отсутствие неспецифической реактивности данного теста.
Тестировались образцы с генотипом 1 - 5 вируса. МОНОЛИЗА® анти-ВГС ПЛЮС
версии 2 выявила предварительно генотипированные образцы как реактивные.
Исследование воспроизводимости результатов проводили на 4 образцгк: 1
отрицательный образец (о ^ а зе ц 1) без анти-ВГС атгител, 2 сл^оположительных
образ1^ (образец 2 и образец 3) и 1 сильно положительный образец с анти-ВГС
антителами. Всюлроизво/рмость в одной постановке ос^нивапи по р^ультатам
1 0
--- стр. 85 ---
тестирования этих 4-х образцов в 30 повторах в одной постановке. Межсерийную
воспроизводимость исследовали по следующей схеме; в течение 5 дней тестировали 4
образца в 3-х повторах на 2 микропланшетах в 2-х независимых постановках.
Результаты исследования воспроизводимости представлены в таблицах:
Таблица 1: Воспроизводимость в одной постановке
п=30 образец
1
образец
2
образец
3
образец
4
ОП средн. 0,056 1,188 1,170 1,773
К-т реактивности
ОП СР./ОП кр.
0,13 2 ,86 2,75 4.27
СУ (%) 13.39 6,54 7,27________^ * - 1 . — •__________________ » . - ...........д-------* ......
Таблица 2: Воспроизводимость между постановками
4.69
п=30 образец
1
образец
2
образец
3
образец
4
ОП средн. 0,085 1,164 1,200 1,727
К-т реактивности
ОП ср70П кр.
0,22 2,93 3,02 4.34
CV (% ) 12 6.51 4,04 5,50
14 - ОГРАНИЧЕНИЕ ТЕСТА
Учитывая разнообразие иммунологических реакций больных, инфицированных вирусом
гепатита С, особенно во время сероконверсии, могут наблюдаться некоторые различия
в обнаружении между тестами. Разница результатов обусловлена различиями в
используемых антигенных белках. Отрицательный результат при сфининге не
исключает возможность наличия начального периода вирусного гепатита С.
Колориметрический метод оценки осаждения проб, конъюгата и рабочего
ферментативного раствора не позволяет судить о воспроизводимости дозирования
объемов реагентов. Он позволяет произвести лишь качественную оценку наличия в
лунках пробы, конъюгата, субстратного раствора. Уровень ошибочных заключений в
значительной степени зависит от точности используемой системы (кумулятивный
коэффициент вариации распределения реагентов и регистрации ОП, превышающий
10 % существенно понижает качество верификации).
15 - ЛИТЕРАТУРА - см. французскую версию.